СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ РОСТА ЛЕЙОМИОМЫ МАТКИ Российский патент 2004 года по МПК G01N33/577 G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования роста миомы матки.

Актуальность изобретения определяется высокой частотой встречаемости лейомиомы (в дальнейшем - миомы матки) у женщин старше 30 лет (15-17%). До 80% всех случаев заболевания наблюдается у женщин репродуктивного возраста [4]. У 50% больных имеет место быстрый рост миомы матки, что является показанием к операции. Радикальное вмешательство с удалением матки приводит к потере репродуктивной и менструальной функции. Разработка достоверных критериев прогнозирования темпов роста миомы матки позволит врачу выбрать оптимальную тактику ведения больной и в конечном счете сохранить детородную функцию женщины.

Известен метод неинвазивной диагностики морфологического типа миомы матки путем проведения цветного допплеровского картирования (ЦДК), заключающегося в том, что саркома миоматозного узла в отличие от других форм имеет интенсивный характер неоваскуляризации с центральным и периферическим, хаотичным расположением сосудов, низким уровнем резистентности кровотока, что способствует быстрому росту миомы [2].

Недостатки способа:

1) способ основан на дифференциальном диагнозе саркомы матки, тогда как частота малигнизации миомы матки составляет не более 0,8% [6];

2) способ неспецифичен, т.к. характер внутриопухолевого кровотока при саркомах и пролиферирующей миоме идентичен;

3) данный способ не позволяет прогнозировать темп роста миомы;

4) отсутствуют данные о точности способа.

Наиболее близким по техническому решению к заявляемому способу является способ прогнозирования роста миомы матки, заключающийся в том, что в тканях миоматозных узлов, получаемых методом трансцервикальной пункционной биопсии, иммуногистохимическим методом предлагается определять плотность и интенсивность окрашивания рецепторов к прогестерону, и при увеличении этих показателей прогнозируется рост миомы в течение 12 месяцев [9].

Данный способ был выбран нами в качестве ближайшего аналога. Однако он имеет ряд недостатков:

1) плохая воспроизводимость результатов в связи с погрешностями при приготовлении срезов, неоднородным по интенсивности окрашиванием тканей, особенностями микроскопии [1];

2) высокая инвазивность и травматичность;

3) высокая трудоемкость;

4) авторы не указывают точность, чувствительность и специфичность способа.

Указанные недостатки предлагается устранить в заявляемом способе.

Заявляемый технический результат достигается тем, что в периферической крови женщин с миомой матки определяют относительное количество CD38+ лимфоцитов и при значениях этого показателя, равном 23% и более, прогнозируют быстрый рост миомы с точностью 75,8% в течение года.

Новизна заявляемого способа заключается в том, что впервые предлагается прогнозировать темп роста миомы матки по определению относительного содержания CD38+ лимфоцитов в периферической крови.

Ранее показатель содержания CD38+ лимфоцитов определяли в периферической крови часто и длительно болеющих лиц, при этом отмечалось повышение числа лимфоцитов, несущих на своей поверхности данную молекулу [5]. В острый период нейрожелезистой формы паротитной инфекции у больных также было выявлено повышенное содержание CD38+ лимфоцитов в периферической крови [3]. Для прогнозирования темпов роста миомы матки этот показатель ранее не применяли.

Известно, что CD38 молекула экспрессируется лимфоцитами на разных этапах их развития. Сначала CD38 молекула появляется на незрелых клетках, потом в процессе созревания и дифференцировки клеток она перестает экспресироваться, но вновь появляется на поверхности лимфоцитов на самых поздних этапах активации [7]. Мы предполагаем, что высокое содержание CD38+ лимфоцитов у женщин с миомой матки связано с увеличением в периферической крови пула незрелых клеток, что может являться следствием нарушения процессов дифференцировки иммунокомпетентных клеток и служить одним из факторов, провоцирующих рост ткани.

Способ осуществляется по стандартной методике следующим образом:

1 мл крови из локтевой вены забирают в пробирку, содержащую 25 ЕД гепарина, добавляют 1 мл Среды 199 и подслаивают 1 мл фиколлверографина с плотностью 1,078. Клеточную фракцию лимфоцитов получают стандартным методом скоростного центрифугирования при 1500 об/мин в течение 20 минут [1]. Лимфоциты собирают в интерфазе Среда 199 - фиколлверографин и отмывают 2 раза Средой 199 центрифугированием при 1500 об/мин в течение 10 минут [8].

Далее в соответствии с инструкцией фирмы-разработчика моноклональных антител (Мед-Биоспектр, г. Москва, регистрационный №29/240/70700/2013-01 от 14.0.6.01) 100 мкл клеток в концентрации 1х10⁶ кл/мл инкубируют с 20 мкл моноклональных анти-CD38 антител, меченных FITC, в течение 30 минут при комнатной температуре в темноте, после чего клетки отмывают 1 раз 1 мл физиологического раствора центрифугированием при 1500 об/мин в течение 2 минут. Клетки ресуспендируют в 500 мкл физиологического раствора. Учет реакции проводят на проточном цитометре, определяя относительное содержание CD38+ клеток в лимфоцитарном гейте.

Использование предлагаемого способа позволяет с высокой точностью (75,8%) прогнозировать темп роста миомы матки в течение года.

Отличительными признаками способа являются: установлен прогностический параметр относительного содержания CD38+ лимфоцитов в периферической крови, при количественных значениях которого 23% и более прогнозируется быстрый рост миомы.

Сущность заявляемого способа поясняется следующими примерами.

Пример 1. Больная А., 40 лет. Наблюдается в женской консультации по поводу миомы матки небольших размеров (8 недель) в течение 5 лет. Предъявляет жалобы на обильные длительные менструации, слабость. В анамнезе 2 своевременных родов, 2 мед. аборта без осложнений, ВМС в течение 6 лет, удалена 5 лет назад. Контрацепция в настоящее время барьерными методами.

При влагалищном исследовании: шейка матки без дефектов слизистой, матка увеличена до 8 недель беременности, с неровной поверхностью, плотная, подвижная, безболезненная, придатки не определяются, своды свободны.

По данным ультразвукового сканирования (УЗС): тело матки с неровной поверхностью, неоднородной структуры, размерами 76×84×77 мм. На передней стенке межмышечный узел 20 мм, на задней стенке и в дне 17 мм. М-эхо 10 мм. Правый яичник - 37×29 мм, левый яичник - 30×26 мм, нормальной структуры.

Анализ крови: Нb - 104 г/л, эритроциты - 3,34 т/л, цветной показатель - 0,81, лейкоциты - 6,4 г/л, эозинофилы - 2, сегментоядерные нейтрофилы - 63, моноциты - 3, лимфоциты - 32, СОЭ - 16 мм/ч.

Клинический диагноз: межмышечно-подбрюшинная миома матки, гиперполименоррея, анемия 1 степени.

По данным иммунологического обследования по заявляемому способу показатель относительного содержания CD38+ лимфоцитов в периферической крови составил 11,5%, что ниже заявляемого параметра (23%).

Заключение: прогнозируется отсутствие роста миомы в течение года.

При повторном осмотре через 1 год гинекологический статус больной тот же (подтвержден данными УЗИ).

Пример 2. Больная Л., 41 год. Обратилась в женскую консультацию с жалобами на обильные менструации. В анамнезе 1 своевременные роды, 3 медицинских аборта без осложнений, ВМС 5 лет, удалена 1 год назад.

При осмотре: шейка матки без дефектов слизистой, тело матки увеличено до 5 недель беременности, плотное, подвижное, безболезненное, придатки не определяются.

Данные УЗС: тело матки неоднородной структуры, размерами 58×44×64 мм. На задней стенке межмышечный узел 16 мм. М-эхо 8 мм. Правый яичник - 36×18 мм. Левый яичник - 33×11 мм. Оба яичника нормальной структуры.

Анализ крови: Нb - 114 г/л, эритроциты - 3,8 т/л, цветной показатель - 0,9, лейкоциты - 5 г/л, палочкоядерные нейтрофилы - 2, сегментоядерные нейтрофилы - 66, моноциты - 5, лимфоциты - 27, СОЭ - 10 мм/ч.

Клинический диагноз: межмышечная миома матки, гиперполименоррея.

Обследование по заявляемому способу показало, что содержание CD38+ лимфоцитов в периферической крови составило 38%, что выше заявляемого параметра (23%).

Заключение: прогнозируется быстрый рост опухоли в течение 1 года.

Больная поставлена на диспансерный учет, рекомендован осмотр гинеколога 1 раз в 3 месяца, контроль гемоглобина до и после менструации, УЗИ.

При обращении через 1 год больная предъявляла жалобы на слабость, обильные менструации, боль внизу живота, учащенное мочеиспускание.

При осмотре: шейка матки без дефектов слизистой. Тело матки до 12 недель беременности, с неровной поверхностью, плотное, подвижное, безболезненное. Придатки не определяются.

Данные УЗИ: тело матки 94×67×124 мм, с несколькими межмышечно-подбрюшинными узлами, наибольшие: по передней стенке - 43 мм, по задней стенке - 35 мм, в дне - 28 мм. Правый яичник - 36×20 мм. Левый яичник - 35×13 мм. Оба яичника нормальной структуры.

Анализ крови: Hb - 99 г/л.

Клинический диагноз: межмышечно-подбрюшинная миома матки, быстрый рост, гиперполименоррея, анемия 1 степени, дизурические явления.

Больная направлена на обследование в гинекологический стационар для оперативного лечения. Таким образом, прогноз быстрого роста миомы по заявляемому способу подтвердился.

Пример 3. Больная С., 43 года. Наблюдается в женской консультации по поводу миомы матки небольших размеров (8 недель) в течение 3 лет. Предъявляет жалобы на обильные длительные менструации, слабость. В анамнезе 2 своевременных родов, 3 мед. аборта без осложнений, ВМС в течение 6 лет, удалена 3 года назад. Контрацепция в настоящее время барьерными методами.

При влагалищном исследовании: шейка матки без дефектов слизистой, матка увеличена до 7 недель беременности, с неровной поверхностью, плотная, подвижная, безболезненная, придатки не определяются, своды свободны.

По данным УЗС: тело матки с неровной поверхностью, неоднородной структуры, размерами 76×64×77 мм. На передней стенке межмышечный узел 25 мм. М-эхо 7 мм. Правый яичник - 36×28 мм, левый яичник - 33×29 мм, нормальной структуры.

Анализ крови: Нb - 108 г/л, эритроциты - 3,2 т/л, цветной показатель - 0,85, лейкоциты - 6,6 г/л, эозинофилы - 1, палочкоядерные нейтрофилы - 3, сегментоядерные нейтрофилы - 52, моноциты - 3, лимфоциты - 41, СОЭ - 6 мм/ч.

Клинический диагноз: межмышечная миома матки, гиперполименоррея, анемия 1 степени.

По данным иммунологического обследования по заявляемому способу показатель относительного содержания CD38+ лимфоцитов в периферической крови 23,5%.

Заключение: прогнозируется рост миомы матки в течение года.

При обращении больной через 1 год жалобы те же. При осмотре: шейка матки без дефектов слизистой, матка увеличена до 12 недель беременности, с неровной поверхностью, плотная, подвижная, безболезненная, придатки не определяются.

Данные УЗИ: матка размерами 110×74×117 мм неоднородной структуры с несколькими межмышечно-подбрюшинными узлами. Наибольшие - на передней стенке - 64 мм и 48 мм, на задней стенке - 55 мм. М-эхо - 9 мм. Правый яичник - 38×30 мм, левый яичник - 35×27 мм, нормальной структуры.

В анализе крови Hb - 95 г/л.

Клинический диагноз: межмышечно-подбрюшинная миома матки, быстрый рост, гиперполименоррея, анемия 1 степени.

Больная направлена в гинекологический стационар для оперативного лечения. Таким образом, прогноз быстрого роста миомы по заявляемому способу подтвердился.

Указанным способом на базе гинекологической клиники Ивановского НИИ материнства и детства им. В.Н.Городкова МЗ РФ обследованы 33 пациентки, данные исследований приведены в таблице. Наблюдение за больными осуществлялось в течение 1 года. У всех оперированных женщин при гистологическом исследовании подтвержден диагноз “лейомиома матки”.

Преимущества заявляемого способа:

1) высокая точность - 75,8%, чувствительность - 71%, специфичность - 81%;

2) нетравматичность способа;

3) обследование женщин возможно в амбулаторных условиях, не требует привлечения многочисленного персонала и не приводит к временной утрате трудоспособности женщины;

4) прогноз состоятелен в течение года.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Иммунологические методы (под редакцией Х.Фримеля).// М.: Мир, - 1979, - 518 с.

2. Капустина И.Н., Сидорова И.С. Значение цветного допплеровского картирования в оценке типа миомы матки.// Российский вестник акушера-гинеколога. - 2001, - №1, - с.27-32.

3. Кашуба Э.А., Ханипова Л.В., Дроздова Т.Г., Малышкин А.А., Чебышева Е.В., Черемных Л.Г. Иммунология острого периода паротитной инфекции //Сб. 47 Конгресса РААКИ "Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии".// - М., - 2001, - с.70.

4. Сидорова И.С., Караулов А.В., Курашвили Ю.Б. К вопросу о патогенезе “ложного роста” миомы матки у женщин репродуктивного возраста. // Вестник Российской ассоциации акушеров-гинекологов. - 1998, - №4, - с.86-88.

5. Суховей Ю.Г., Унгер И.Г., Аргунова Г.А., Береснева Л.А., Петров С.А. Общие иммунологические характеристики групп часто и длительно болеющих в ремиссию у коренного и пришлого населения Тюменской области.// Russia Journal of Immunology, - 199, - v.4, - Supplement 1, - p.191.

6. Тихомиров А.Л., Лубнин Д.М. Роль микрососудистых изменений в механизме маточных кровотечений у больных лейомиомой матки.// АГ-инфо. - 2000, - №1, - с.5-7.

7. Ярилин А.А. Основы иммунологии./М.: Медицина, - 1999, - 608 с.

8. Boyum A. Isolation of mononuclear cell fnd granulocytes from human blood and bone marrow// Scand. J. Clin. Lab. Invest. - 1968, - v.21, - №97, - p.77.

9. Ichimura Т., Kawamura N., Ito F., Shibata S., Minakuchi K., Tsujimura A., Umesaki N., Ogita S. Correlation between the growth of uterine leiomyomata and estrigen and progesterone receptors in needle biopsy speciments // Fertil. Steril. - 1998, - v.70, - p.967-971.

Изобретение относится к области медицины, а именно к гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования роста миомы матки. Сущность изобретения состоит в том, что в периферической крови определяют относительное содержание CD38+ лимфоцитов и при их значениях, равных или больших 23%, прогнозируют быстрый рост миомы матки в течение года. Техническим результатом является создание точного, чувствительного и специфического способа прогнозирования быстрого роста миомы матки. 1 табл.

Способ прогнозирования роста лейомиомы матки путем исследования периферической крови, отличающийся тем, что определяют относительное содержание CD38+ лимфоцитов и при их значениях, равных или больших 23%, прогнозируют быстрый рост миомы матки в течение года.