АНТИГИПОКСИЧЕСКОЕ СРЕДСТВО ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ОТДАЛЕННЫХ ПОСЛЕДСТВИЙ ОТРАВЛЕНИЙ МЕТГЕМОГЛОБИНООБРАЗОВАТЕЛЯМИ Российский патент 2010 года по МПК A61K36/57 A61P43/00 

Изобретение относится к области медицины, в частности к новым антигипоксическим средствам, предназначенным для лечения отравлений метгемоглобинобразователями (МГО).

Известно, что средства для коррекции гипоксии достаточно широко применяются для профилактики и лечения интоксикаций различного генеза [1, 4]. Однако отсутствуют данные о возможности применения антигипоксантов в условиях интоксикации МГО, в первую очередь, для профилактики и лечения формирующихся отдаленных последствий (синдромокомплексов) в условиях субхронического отравления. Известно, что МГО вызывают разнообразное количество патологических синдромов. Ведущим является образование метгемоглобина (MetHb), которое происходит как при остром токсическом воздействии, так и при хронической экспозиции вследствие контакта с образующими его веществами. Основной путь образования MetHb - окисление Fe⁺⁺ гемоглобина крови в Fe⁺⁺⁺, вследствие чего гемоглобин становится неспособным выполнять транспортную функцию переноса кислорода тканями [5, 6]. Это приводит к развитию гипоксии тканей, выраженность и глубина которой зависит от времени экспозиции МГО, и, как следствие, «оксидативному» стрессу, характеризующемуся активацией свободнорадикального окисления и снижением активности антиоксидантной системы клетки [7]. Таким образом, центральным звеном, формирующим последствия острых и хронических интоксикаций МГО, является гипоксия тканей и образование активных форм кислорода.

Целью настоящего изобретения является применение лимонника семян настойки в качестве антигипоксического средства, что позволяет использовать его в комплексной терапии интоксикации МГО и расширяет ассортимент лекарственных средств указанных назначений.

Заявляемый препарат выпускается в промышленных масштабах и широко используется в качестве общетонизирующего средства растительного происхождения, оказывающего стимулирующее действие на ЦНС, сердечно-сосудистую и дыхательную системы, умственную и физическую работоспособность [8].

Непременным условием для реализации лечебных свойств препаратов, предназначенных для купирования синдромокомплекса, развивающегося вследствие отравлений МГО, в первую очередь, является наличие у них собственно антигипоксических свойств. Для скрининга антигипоксического действия были выбраны модели, воспроизводящие патологические процессы при основных типах гипоксии [2, 3]: острой гипоксической гипоксии, острой тканевой гипоксии (нитропруссид натрия), острой гемической гипоксии (нитрит натрия) [2, 3].

Оценку влияния препарата на формирование отдаленных последствий (синдромокомплексов) проводили в условиях субхронической интоксикации МГО.

Применение лимонника семян настойки в качестве антигипоксического средства для лечения отдаленных последствий отравлений МГО предложено впервые. Заявляемое решение широко применимо, так как лимонника семян настойка выпускается в промышленных масштабах.

Примеры, подтверждающие антигипоксическое действие лимонника семян настойки при основных типах гипоксии, приведены ниже (примеры 1-3).

Пример 1. Эффективность применения лимонника семян настойки при острой гипоксической гипоксии

Для исключения неблагоприятного действия спирта (растворитель, содержащийся в настойке) ее деалкоголизировали путем продувания сухого воздуха до удаления запаха спирта. Сухой масляный остаток растворяли в воде очищенной и получали настой, доведенный водой очищенной до первоначального объема.

Исследование проводили на белых мышах самцах массой 18-20 г, разделенных на опытные и контрольную группы по 15 животных. Изучаемый препарат вводили ежедневно в течение 14 дней атравматичным зондом внутрижелудочно в эффективной дозе 0.10 мл/кг. Контрольным животным вводили воду. На 14-й день опыта через 60 мин после последнего введения осуществляли «подъем» животных в барокамере на предельную «высоту» 11000 м над уровнем моря. Регистрировали продолжительность жизни и выживаемость животных. При профилактическом введении лимонника семян настоя наблюдалось как достоверное увеличение выживаемости животных, так и увеличение продолжительности жизни (таблица 1).

Пример 2. Эффективность применения лимонника семян настойки при острой тканевой гипоксии

Исследование проводили на белых мышах самцах массой 18-20 г, разделенных на опытные и контрольную группы по 15 животных. Условия введения препарата соответствовали описанным в примере 1. На 14-й день опыта через 30 мин после последнего введения препарата животным внутрибрюшинно вводили раствор нитропруссида натрия в дозе 20 мг/кг. Фиксировали продолжительность жизни животных. Лимонника семян настой статистически достоверно повышал продолжительность жизни животных на 95% (таблица 2).

Пример 3. Эффективность применения лимонника семян настойки при острой гемической гипоксии

Исследование проводили на белых мышах самцах массой 18-20 г, разделенных на опытные и контрольную группы по 15 животных. Условия введения препарата соответствовали описанным в примере 1. На 14-й день опыта через 30 мин после последнего введения изучаемого препарата животным внутрибрюшинно вводили раствор нитрита натрия в дозе 300 мг/кг. Фиксировали продолжительность жизни животных. Лимонника семян настой статистически достоверно повышал продолжительность жизни животных на 84% (таблица 3).

Таким образом, лимонника семян настой оказал антигипоксическое действие на всех типовых моделях гипоксии.

Примеры, подтверждающие позитивное влияние лимонника семян настойки на специфические симптомы отравления и показатели, характеризующие функциональное состояние печени, почек и окислительно-восстановительные процессы при субхроническом отравлении анилином, нитритом натрия и нитроглицерином у мышей самцов и субхроническом отравлении анилином у крыс самцов, приведены ниже (примеры 4-5).

Пример 4. Эффективность применения лимонника семян настойки при субхронической интоксикации анилином, нитритом натрия и нитроглицерином в дозах, равных 1/10 ЛД₅₀

Каждая экспериментальная группа содержала по 12 мышей-самцов. Анилин сульфат вводили в дозе 100 мг/кг, нитрит натрия - 15 мг/кг и нитроглицерин - 6 мг/кг (дозы, не вызывающие летальных эффектов при остром введении) внутрижелудочно ежедневно в течение 10 дней. Изучаемый препарат вводили внутрижелудочно ежедневно в течение 7 дней после последнего введения МГО. Группа №1- интактные животные; №2 - животные, получавшие анилин без лечения, №3 - животные, получавшие анилин и настой семян лимонника в дозе 0,10 мл/кг, №4 - животные, получавшие нитрит натрия без лечения, №5 - животные, получавшие нитрит натрия и настой семян лимонника, №6 - животные, получавшие нитроглицерин без лечения, №7 - животные, получавшие нитроглицерин и настой семян лимонника. Полученные данные представлены в таблице 4. Данные приведены только в отношении показателей, измененных вследствие действия токсикантов.

Из представленных в таблице 4 данных следует, что субхроническое введение различных МГО привело к развитию у животных отчетливых признаков патологии со стороны системы крови, основного обмена и окислительно-восстановительных процессов: увеличивалось содержание метгемоглобина крови, наблюдалась лейкопения, снижение количества лимфоцитов и повышение содержания сегментоядерных нейтрофилов; отмечалась гипогликемия, увеличение активности печеночных трансаминаз, в особенности аланинаминотрансаминазы, и содержания сульфгидрильных групп, МДА и гидроперекисей липидов, наряду с падением активности каталазы.

В картине крови наблюдалась выраженная полихромазия, патологические включения в эритроцитах (тельца Гейнца), анизоцитоз (2+; 50%). Данные изменения свидетельствуют о развитии гематотоксических реакций в виде метгемоглобинемии, нарушении углеводного обмена, развитии поражения печени с выходом в кровь трансаминаз, компенсаторном увеличении сульфгидрильной антиоксидантной защиты организма наряду со снижением активности каталазы и усилением процессов ПОЛ.

Введение изучаемого препарата положительно и достоверно влияло на показатели, характеризующие развитие патологических процессов при воздействии различными МГО.

Пример, подтверждающий позитивное влияние лимонника семян настоя на течение субхронической интоксикации анилином, как модельным МГО, у крыс самцов, приведен ниже (пример 5).

Пример 5. Эффективность применяемого препарата оценивали по его влиянию на систему крови, функциональное состояние печени и почек, показатели, характеризующие состояние процессов перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты. Исходя из полученных в предварительном остром эксперименте данных анилин сульфат вводили в дозе 150 мг/кг (доза, не вызывающая летальных эффектов при остром введении и равная 1/10 ЛД₅₀) внутрижелудочно ежедневно в течение 10 дней. Изучаемый препарат вводили внутрижелудочно ежедневно в течение 7 дней после последнего введения анилина. Каждая экспериментальная группа содержала по 10 крыс-самцов. Группа №1 - интактные животные; №2 - животные, получавшие анилин без лечения, №3 - животные, получавшие анилин и настой семян лимонника в дозе 0,10 мл/кг.

Полученные данные представлены в таблице 5. Данные приведены только в отношении показателей, измененных вследствие действия токсикантов. Введение анилина сульфата привело к развитию у животных отчетливых признаков патологии, аналогичных таковым у мышей (пример 4).

Введение семян лимонника настойки положительно и достоверно влияло на изученные показатели и способствовало снижению патобиохимических процессов, лежащих в основе развития отдаленных последствий при субхронической интоксикации анилином, оказывая антиоксидантное, антигипоксическое, гепатопротективное и нефропротективное действие.

Таблица 1 Влияние лимонника семян настоя на переносимость острой гипобарической гипоксии мышами-самцами Экспериментальная группа Доза, мл/кг Время жизни на предельной высоте (М±m, мин) Прирост времени жизни по отношению к контролю, % Выживаемость, % Контроль   3.4±0.7   0 Лимонник семена, настой 0.10 мл/кг 16.9±1.2* +397* 80* * Р≤0.05 по отношению к контролю

Таблица 2 Влияние лимонника семян настоя на переносимость острой тканевой гипоксии мышами-самцами Препарат Доза, мл/кг Длительность жизни, мин (М±m) Прирост времени жизни по отношению к контролю, % Контроль   6.3±0.3   Лимонник семена, настой 0.10 мл/кг 12.3±0.6* +95 * Р≤0.05 по отношению к контролю

Таблица 3 Влияние лимонника семян настоя на переносимость острой гемической гипоксии мышами-самцами Препарат Доза, мл/кг Длительность жизни, мин (М±m) Прирост времени жизни по отношению к контролю, % Контроль   10.1±0.3   Лимонник семена, настой 0.10 мл/кг 18.6±0.8* +84 * Р≤0.05 по отношению к контролю

Таблица 4 Влияние лимонника семян настоя на некоторые гематологические показатели и показатели основного обмена у мышей в условиях субхронической интоксикации метгемоглобинобразователями Изучаемые показатели (М±m) Экспериментальные группы №1 №2 №3 №4 №5 №6 №7 Hb, г/л 144±3 116±4* 135±5^∧ 112±6* 130±6^∧ 108±10* 122±14^∧ MetHb, % 0.20±0.05 5.30±0.90* 0.50±0.11^∧ 8.54±1.25* 0.82±0.16^∧ 7.49±1.13* 0.76±0.12^∧ Лейкоциты, 10⁹/л 8.5±0.1 3.1±0.3* 5.0±0.1*^∧ 4.2±0.3* 5.5±0.3*^∧ 3.9±0.5* 6.0±0.8*^∧ Сегментоядерные нейтрофилы, % 35.0±1.7 50.0±2.6* 39.0±2.2^∧ 54.0±3.2* 36.8±2.6^∧ 47.0±2.9* 41.2±3.4^∧ Лимфоциты, % 63.0±1.7 32.3±3.4* 52.0±8.6^∧ 37.8±2.4* 56.0±5.8^∧ 35.3±9.1* 59.5±7.2^∧ Глюкоза, мМ/л 9.25±0.53 6.51±1.10* 8.75±0.90^∧ 5.94±1.32* 8.90±1.04^∧ 5.76±0.84* 9.05±0.62^∧ Холестерин, мМ/л 3.27±0.12 6.60±0.20* 3.62±0.18^∧ 4.89±0.31* 3.98±0.24^∧ 4.15±0.17* 3.66±0.14^∧ Мочевина, мМ/л 4.5±0.2 7.8±0.6* 4.8±0.4^∧ 5.6±0.3* 5.0±0.2 6.0±0.5* 4.9±0.5 ЩФ, нМ/с·л 390±37 952±64* 359±62^∧ 673±37* 435±28 ^∧ 518±28* 420±16^∧ АсАТ,нМ/с·л 538±34 914±85* 670±56^∧ 696±24* 550±25^∧ 723±38* 594±43^∧ АлАТ, нМ/с·л 755±48 1554±101* 872±89^∧ 1233±77* 936±65^∧ 1018±53* 850±58^∧ Примечание: * - Р≤0.05 по отношению к группе интактных животных, ^∧ - Р≤0.05 по отношению к группе животных, не получавших лечения

Таблица 5 Влияние лимонника семян настоя на некоторые гематологические и биохимические показатели крови крыс в условиях субхронической интоксикации анилином Изучаемые показатели (М±m) Экспериментальные группы №1 №2 №3 Hb, г/л 162±4 115±4* 146±3*^∧ MetHb, % от Hb 1.16±0.33 4.11±0.42* 2.87±0.37*^∧ Лейкоциты, 10⁹/л 8.1±0.3 3.5±0.1* 8.2±0.2^∧ Сегментоядерные нейтрофилы, % 15±2 39±5* 12±3^∧ Лимфоциты, % 82±4 65±3* 79±3^∧ Глюкоза, мМ/л 5.25±0.53 2.51±1.10* 4.14±1.21^∧ Холестерин, мМ/л 0.86±0.12 1.69±0.23* 1.23±0.26 АсАТ, нМ/с·л 256±51 426±38* 336±34^∧ АлAT, нМ/с·л 376±44 785±52* 255±51*^∧ Мочевина, мМ/л 4.5±0.2 7.8±0.6* 4.8±0.4^∧ ЩФ, нМ/с·л 390±37 952±64* 359±62^∧ МДА, мкМ/л 2.45±0.13 15.90±0.77* 3.90±0.34*^∧ Гидроперекиси липидов, ед. опт. плотности при 480 нм 0.11±0.02 0.38±0.02* 0.23±0.04*^∧ Каталаза, мкМ
Н₂О₂/мг·мин 9.38±0.58 3.34±0.50* 7.98±0.42*^∧ SH-группы, мкМ/л 190±69 344±50* 208±36^∧ Примечание: * - Р≤0.05 по отношению к группе интактных животных, ∧ - Р≤0.05 по отношению к группе животных, не получавших лечение

Список использованных источников

1. Копцов С.В., Вахрушев А.Е., Павлов Ю.В. Современные аспекты применения антигипоксантов в медицине критических состояний // Новые Санкт-Петербургские врачебные ведомости. - 2002. - №2. - С.54-56.

2. Лукьянова Л.Д., Гацура В.В., Пастушенков Л.В. и др. Методические рекомендации по экспериментальному изучению препаратов, предлагаемых для клинического изучения в качестве антигипоксических веществ. - М.: МЗ СССР, Одобрены Фармакологическим комитетом 11.04.1990 (протокол №7).

3. Пастушенков Л.В., Лесиовская Е.Е. Основные методы оценки протекторного действия антигипоксантов в эксперименте // Фармакологическая коррекция гипоксических состояний. - М. - 1989. - С.98-109.

4. Пастушенков Л.В., Лесиовская Е.Е. Растения-антигипоксанты (фитотерапия). - СПб. - 1991. - С.96.

5. Hall А.Н., Kulig K.W., Rumack В.Н. Drug- and chemical-induced methaemoglobinaemia: clinical features and management. - Med. Toxicol. - 1986. - №1. - pp.253-260.

6. Harris J.C., Rumack B.H., Peterson R.G. Methaemoglobinaemia resulting from absorption of nitrates. - JAMA. - 1979. - pp.242-2869.

7. Harvey J.W., Keitt A.S. Studies of the efficacy and potential hazards of methylene blue therapy in aniline-induced methemoglobinemia. - Br. J. Haematology. - 1983. - №54. - pp.29-41.

8. Машковский М.Д. Лекарственные средства. Изд. 14-е. - М.: Новая волна. - 2000. - т.1. - стр.134.

Изобретение относится к области медицины, в частности фармакологии, а именно к средствам для лечения отдаленных последствий отравления метгемоглобинобразователями, обладающими антигипоксическим, антиоксидантным, гепотопротекторным и нефропротекторным действием. В качестве такого средства предлагается настойка семян лимонника. 5 табл.

Применение настойки семян лимонника в качестве средства для лечения отдаленных последствий отравлений метгемоглобинообразователями.