СРЕДСТВО, СНИЖАЮЩЕЕ ГЕМАТОТОКСИЧНОСТЬ ЦИТОСТАТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ Российский патент 2010 года по МПК A61K36/28 A61P43/00 

Изобретение относится к области медицины, конкретно к онкологии, и может быть использовано для снижения гематотоксичности цитостатических препаратов у больных со злокачественными новообразованиями.

Цитостатические препараты обладают повреждающим действием на здоровые, активно обновляющиеся ткани организма, в частности кроветворную. Часто данный побочный эффект химиопрепаратов является лимитирующим фактором для продолжения лечения, приводит к развитию анемии, нейтропении у пациентов, риску развития инфекции, снижению эффективности терапии и качества жизни больных. В настоящее время в клинической онкологической практике для стимуляции эритропоэза применяют рекомбинантные эритропоэтины (эпрекс, рекормон), для стимуляции лейкопоэза используют факторы роста (лейкомакс, нейпоген) [1, 2].

Задачей изобретения является расширение арсенала средств, повышающих эффективность химиотерапии путем снижения гематотоксичности цитостатических препаратов.

Поставленная задача решается применением полисахаридов из листьев мать-и-мачехи обыкновенной (Tussilago farfara L.) в качестве средства, снижающего гематотоксичность цитостатических препаратов.

Известно применение листьев мать-и-мачехи в натуральном виде (измельченное сырье) в качестве отхаркивающего и противовоспалительного средства (отвар) при заболеваниях верхних дыхательных путей [1].

Новым в предлагаемом изобретении является то, что в качестве средства, снижающего гематотоксичность цитостатических препаратов, используют полисахариды из листьев мать-и-мачехи обыкновенной.

Новые свойства полисахаридов из листьев мать-и-мачехи обыкновенной снижать гематотоксичность цитостатических препаратов были выявлены экспериментальным путем. Новые свойства не вытекают явным образом из уровня техники в данной области, неочевидны для специалистов и не обнаружены в патентной и научно-медицинской литературе. Предлагаемое в качестве изобретения средство может быть использовано в клинической онкологии.

Исходя из вышеизложенного, следует считать предлагаемое изобретение соответствующим условиям патентоспособности: «Новизна», «Изобретательский уровень», «Промышленная применимость».

Исследования проведены на трехмесячных мышах-самках линии C57B1/6 массой 19-20 г. В качестве модели злокачественного роста использовали гематогенно метастазируюшую карциному легких Льюис, перевиваемую внутримышечно по 5 млн опухолевых клеток на мышь. Животных делили на следующие группы:

1. «Контроль» (n=5) - мыши, получавшие ежедневно в течение 11 сут по 0,1 мл ампульной воды для инъекций внутрибрюшинно.

2. «Паклитаксел» (n=5) - мыши, получавшие паклитаксел в дозе 20 мг/кг однократно на 9 сут развития опухоли.

3. «Паклитаксел + полисахариды мать-и-мачехи» (n=5) - мыши, получавшие паклитаксел в дозе 20 мг/кг однократно внутрибрюшинно на 9 сут развития опухоли и полисахариды мать-и-мачехи в дозе 10 мг/кг, начиная с 6 сут развития опухоли (11 введений).

На 4 и 7 сут после введения паклитаксела собирали периферическую кровь из хвостовой вены, определяли ее показатели на автоматическом гематологическом анализаторе «Abacus» («Diatron») в ветеринарном режиме. Обработку полученных результатов проводили с помощью непараметрического критерия Вилкоксона-Манна-Уитни. Различия считали достоверными при Р≤0,05 [3].

Однократное введение паклитаксела мышам линии C57B 1/6 с карциномой легких Льюис в дозе 20 мг/кг к 4 сут приводило к следующим сдвигам показателей периферической крови: уменьшалось число количества эритроцитов, концентрация гемоглобина, гематокрит относительно контроля (табл.1). Восстановление этих показателей до контрольного уровня происходило лишь к 7 сут. Выраженная нейтропения (количество нейтрофилов снижалось под действием цитостатика в 5,3 раза относительно контроля) наблюдалась на 4 сут после применения паклитаксела и сохранялась до 7 сут.

Если цитостатик сочетали с введением полисахаридов мать-и-мачехи, то такие показатели как концентрация гемоглобина, количество эритроцитов и гематокрит восстанавливались и достигали уровня контрольных значений уже к 4 сут наблюдения. Нейтропения, вызываемая паклитакселом, на 4 сут после его введения наблюдалась в группах комбинированного лечения, но к 7 сут у мышей, которым кроме цитостатика был проведен курс лечения полисахаридами мать-и-мачехи обыкновенной, количество нейтрофильных гранулоцитов значимо возрастало (в 2,7 раза) и превосходило таковое у леченных только паклитакселом мышей (табл.1).

Эксперименты по изучению корректорных свойств полисахаридов листьев мать-и-мачехи обыкновенной в отношении нейтрофилов по сравнению с известным стимулятором гранулоцитопоэза нейпогеном проводили на мышах-самках линии C57B 1/6 массой 19-20 г возрастом 3 мес. Карциному легких Льюис перевивали внутримышечно по 5 млн опухолевых клеток на мышь. Все мыши с карциномой легких Льюис были распределены на группы:

1. «Контроль» (n=5) - мыши, получавшие ежедневно в течение 12 сут по 0,1 мл ампульной воды для инъекций внутрибрюшинно.

2. «Паклитаксел» (n=5) - мыши, получавшие паклитаксел в дозе 32 мг/кг однократно на 8 сут развития опухоли.

3. «Паклитаксел + полисахариды мать-и-мачехи» (n=5) - мыши, получавшие паклитаксел однократно в дозе 32 мг/кг внутрибрюшинно на 8 сут развития опухоли и полисахариды мать-и-мачехи в дозе 20 мг/кг, начиная с 6 сут развития опухоли (12 введений).

4. «Паклитаксел + Нейпоген» (n=5) - мыши, получавшие паклитаксел в дозе 32 мг/кг однократно внутрибрюшинно на 8 сут развития опухоли и нейпоген в дозе 30 мкг/кг в 5% растворе глюкозы подкожно 5 введений, начиная со следующего дня после введения паклитаксела. На 4 и 7 сутки после введения паклитаксела у мышей из хвостовой вены собирали периферическую кровь и проводили подсчет общего количества лейкоцитов и лейкоцитарной формулы общепринятыми методами [4].

При использовании паклитаксела в дозе 32 мг/кг (табл.2) в однократном режиме у мышей с опухолью на 4 сут после введения цитостатика наблюдалась лейкопения, количество лейкоцитов снижалось 2,0 раза (Р≤0,01) относительно нелеченых мышей. В этот же срок наблюдения у животных с опухолью, получавших паклитаксел, абсолютное количество нейтрофилов падало в 15,5 раз (Р≤0.01) по сравнению с контрольной группой. К 7 сут после введения паклитаксела у мышей наблюдалось восстановление общего числа лейкоцитов до контрольного уровня. Однако в этот срок численность нейтрофильных гранулоцитов не достигла исходных значений и была достоверно ниже контрольного уровня (в 1,3 раза). Если в схему лечения цитостатиком добавляли полисахариды мать-и-мачехи обыкновенной, количество сегментоядерных нейтрофилов уже к 4 сут возрастало в 4,0 раза (Р≤0,01), а к 7 сут превосходило в 1,9 раза (Р≤0,01) таковое в группе леченых только цитостатиком мышей. Хотя эффект нейпогена в отношении лейкоцитов был более выражен, стоит отметить, что полисахариды мать-и-мачехи обыкновенной не вызывали чрезмерного повышения численности клеток белой крови (в отличие от нейпогена), эффект полисахаридов был достаточен, чтобы достичь физиологической нормы и обеспечить защиту организма от развития инфекций и осложнений, связанных с угнетением кроветворения под влиянием паклитаксела.

Таким образом, гематотоксичность паклитаксела в эксперименте на мышах с карциномой легких Льюис снижалась при совместном с ним применении полисахаридов листьев мать-и-мачехи обыкновенной.

Полисахариды из листьев мать-и-мачехи обыкновенной являются перспективными в плане создания на их основе препаратов-корректоров цито-статической терапии.

Литература

1. Машковский М.Д. Лекарственные средства. - 15 изд., М.: РИА «Новая волна», 2008. - 1206 с.

2. Фармакология: учебник. - 10-е издание. - М.: ГЭОТАР - Медиа, 2008. - 752 с.

3. Гублер Е.В. Вычислительные методы анализа и распознавания патологических процессов. - Л.: Медицина, 1978. - 193 с.

4. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Шахов В.П. Методы культуры ткани в гематологии. - Томск: Изд-во Томского Университета, 1992 - 264 с.

Таблица 1 Влияние полисахаридов из листьев мать-и-мачехи обыкновенной на показатели периферической крови у мышей с карциномой легких Льюис на фоне применения паклитаксела Группа Гемоглобин, г/л Эритроциты, 10¹²/л Гематокрит, % Нейтрофилы сегментоядерные, 10⁹/л 4 сут 7 сут 4 сут 7 сут 4 сут 7 сут 4 сут 7 сут 1. Контроль 145,2±14,2 128,0±13,8 8,3±0,8 7,7±0,9 33,9±3,3 32,4±3,6 4,4±0,2 2,9±0,3 2. Паклитаксел 113,4±4,0 163,2±15,2 6,6±0,31 10,2±1,0 27,3±1,5 43,4±4,5 0,8±0,1 2,2±0,3 1-2P≤0,05 1-2P<0,05 1-2P±0.01 1-2P≤0,05 3. Паклитаксел + полисахариды мать-и-мачехи 149,0±12,0 190,6±16,8 8,9±0,9 12,11±1,1 36,6±3,7 50,7±4,6 0,7±0,2 5,9±0,4 2-3P≤0,05 2-3P≤0,05 1-5≤0,05 2-5P≤0,05 1-5P≤0,05 2-3P≤0,01 Примечание. Здесь и далее перед уровнем значимости P указаны номера сравниваемых групп

Таблица 2 Влияние полисахаридов из листьев мать-и-мачехи обыкновенной и нейпогена на количество нейтрофилов периферической крови у мышей с карциномой легких Льюис на фоне применения паклитаксела Группа Общее количество лейкоцитов, 10⁹/л Нейтрофилы сегментоядерные, 10⁹/л 4 сут 7 сут 4 сут 7 сут 1. Контроль 13,0±0,8 15,6±1,1 3,1±0,4 4,8±0,3 2. Паклитаксел 6,4±0,4 15,9±1,4 0,2±0,1 3,7±0,5 1-2P≤0,01 1-2P≤0,01 1-2P≤0,05 3. Паклитаксел + полисахариды мать-и-мачехи 6,5±0,5 17,5±2,19 0,8±0,3 7,1±1,1 2-3P≤0,05 2-3P≤0,05 4. Паклитаксел + нейпоген 121±1,2 30,6±6,9 2,3±0,6 10,6±2,3 2-4P≤0,01 2-4P≤0,01 2-4P≤0,05 2-4P≤0,01

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности, а именно к созданию средства, снижающего гематотоксичность цитостатических препаратов. В качестве данного средства применяют полисахариды из листьев мать-и-мачехи обыкновенной (Tussilago farfara L.). Средство расширяет арсенал средств, повышающих эффективность химиотерапии путем снижения гематотоксичности цитостатических препаратов. 2 табл.

Применение полисахаридов из листьев мать-и-мачехи обыкновенной (Tussilago farfara L.) в качестве средства, снижающего гематотоксичность цитостатических препаратов.