СПОСОБ ПОВЫШЕНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ АНТИБИОТИКОВ Российский патент 2010 года по МПК A61K31/00 C12P7/00 C07C7/20 

Изобретение относится к микробиологии и биотехнологии, в частности к производству антибиотиков, в том числе бета-лактамовых.

Известно, что постоянно увеличивается число бактерий, продуцирующих ферменты бета-лактамозы, расщепляющие антибиотики.

Многолетнее применение противомикробных средств и воздействие физических и химических мутагенов привело к появлению микроорганизмов, устойчивых к антибиотикам. Ферментативное расщепление антибиотика обеспечивает более 80% бактериальной резистентности.

Для повышения эффективности антибиотиков вводят в их химическую структуру фтор, пиперазиновый радикал или комбинируют с другими антибиотиками: суббактам с ампициллином, янтарной, лимонной, фумаровой и другими органическими кислотами и их солями - сукцинатами, пробиотиками (Андреева Н.Л., Войтенко В.Д. Повышение эффективности химиопрепаратов с помощью органических кислот // Международный вестник ветеринарии. - 2004. - №1. - С.55-58.)

Наибольший антибактериальный эффект получен комбинацией антибиотиков с клавулановой кислотой, полученной в 1976 г. из продукта метаболизма гриба Streptomyces clavuligeris. Несмотря на то, что клавулановая кислота сама по себе слабый антибиотик, она оказалась активным ингибитором бета-лактамаз в результате проникновения в структуру бета-лактамазы и блокирования ее активности (Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. / Учебник для вузов. - Спб.: Специальная литература, 1998. - С.135-142).

За прототип взят способ комбинации амоксициллина и клавулановой кислоты (Покровский В.И., Поздеев O.K. Медицинская микробиология. - М.: Изд-во ГЭОТАР, 1999. - С.148-151).

Недостатками указанного способа являются дороговизна и дефицитность препарата, токсичность для печени, почек, способность аллергизировать организм, появление лекарственно-устойчивых микроорганизмов, чувствительность к кислой среде, создание в желудочно-кишечном тракте дисбиоза.

Для устранения указанных недостатков, для повышения эффективности антибиотиков, снижения их токсичности и аллергизации организма, повышения устойчивости к расщепляющему действию бактериальных ферментов, создания стабильной структуры антибиотиков предлагается полимеризация и детоксикация ряда антибиотиков с помощью 0,15±0,05% раствора формалина при 40±2,0°С в течение 5-7 суток.

Правомерность использования формалина для полимеризации и детоксикации антибиотиков - продукта метаболизма и деструкции грибов - обоснована производством и применением анатоксинов, толерогенов (аллергоидов), анатоксин-вакцин, инактивированных вирусных вакцин и т.д. Однако использование формалина для детоксикации, полимеризации структуры и повышения эффективности антибиотиков не проводилось.

Целью предлагаемого изобретения является повышение эффективности антибиотиков в отношении резистентных микроорганизмов, приобретение устойчивости к ферментативному действию бактериальных ферментов, снижение токсичности и аллергенности для организма.

Поставленная цель достигается полимеризацией и детоксикацией антибиотиков 0,15±0,05% раствором формалина при 40,0±2,0°С в течение 5-7 суток. При этом исходная концентрация формалина снижается до 0,05% в жидком растворе, а в лиофилизированном виде - до 0,01% концентрации. Полученные антибиотики приобретают повышенную эффективность в отношении лекарственно-резистентных микроорганизмов, устойчивость к бактериальным ферментам на фоне снижения токсичности и аллергенности для организма.

В патентной и научно-технической литературе не выявлены технические решения, аналогичные заявленному.

Использование 0,15±0,05% раствора формалина позволяет достичь стабильной полноты детоксикации, полимеризации всего комплекса антибиотиков и получения безвредных препаратов, обладающих повышенным бактериостатическим и бактерицидным действием в отношении лекарственно-устойчивых микроорганизмов, т.е. получить технический результат.

Установленная возможность 0,15±0,05% раствора формалина при 40,0±2,0°С в течение 5-7 суток обеспечить полимеризацию, детоксикацию, стабильность структуры, снижение токсичности и аллергенности, и повышение на 50±10% эффективности антибиотиков в отношении лекарственно-устойчивых микроорганизмов позволила предложить рациональную технологию изготовления эффективных безвредных для человека и животных антибиотиков.

Под действием раствора формалина с концентрацией 0,15±0,05% происходит процесс полимеризации структуры антибиотиков, вследствие чего повышается их устойчивость к ферментативному действию бактериальных ферментов. Формалин также обеспечивает полную детоксикацию антибиотиков.

Указанная концентрация 0,15±0,05% формалина и температурный режим обработки являются оптимальными для обеспечения стабильной полимеризации и детоксикации антибиотиков. В результате указанной обработки модифицированные антибиотики проявили повышенную на 50±10% бактерицидную активность по отношению к исследованным микроорганизмам, а также безвредность за счет снижения токсичности антибиотиков. Аналогичное действие формалина на процессы детоксикации токсинов микроорганизмов было положено в основу изготовления модифицированных антибиотиков.

Предлагаемое изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Способ детоксикации и полимеризации антибиотиков 0,15±0,05% раствором формалина.

В работе использовано по 60 флаконов лиофилизированных пенициллина, эритромицина, канамицина, тетрациклина, гентамицина, полимиксина, неомицина, амоксиклава, в которые с помощью шприца внесли по 5,0 мл 0,2% раствора формалина для детоксикации и полимеризации при 42°С в течение 7 суток. По окончании детоксикации и полимеризации половина флаконов каждого антибиотика оставлена для исследований в жидком виде, а вторую часть подвергли лиофилизации.

Пример 2. Определение остаточного содержания формалина в растворах антибиотиков до и после лиофилизации.

Методом титрования с раствором йода, едкого натрия, серной кислоты и гипосульфита установлено, что в жидких растворах антибиотиков произошло снижение содержания формалина с 0,2% до 0,05%, а после лиофилизации содержание формалина составило 0,01% вместо 0,2% («Фармакопейная статья» - Физико-химические и иммунно-биологические методы контроля препаратов. Издание официальное МЗ РФ. - М. 2000 г. - С.51-56).

Пример 3. Определение безвредности модифицированных антибиотиков.

Испытание проведено на 10 белых мышах, 6 морских свинках, 20 телятах и 22 поросятах.

После подкожного введения 5 белым мышам модифицированного пенициллина и 5 мышам - полимиксина по 0,2-0,3 мл препаратов трехкратно, у животных не было отмечено выраженных токсических явлений и гибели при наблюдении в течение 12 суток.

При пятикратном с интервалом в 1 сутки подкожном введении 5 телятам пенициллина, 5 телятам гентамицина, 5 телятам тетрациклина и 5 телятам полимиксина все животные остались живыми, на месте введения препаратов не отмечено гнойно-некротических поражений в течение 20 суток (срок наблюдения).

Подкожное введение 6 морским свинкам модифицированного пенициллина в объеме 2-3 мл трехкратно с интервалом 24 часа также не вызвало образования гнойных абсцессов на месте введения и гибели животных при наблюдении в течение 15 суток.

Пример 4. Определение эффективности полученных антибиотиков определяли методом серийных разведении препаратов. Полученные антибиотики, обозначенные буквой М (модифицированные) сравнивали с соответствующими им коммерческими препаратами.

Бактерицидные свойства антибиотиков определяли в отношении эшерихий, стафилококков, сальмонелл, Вас.Subtilis и протея. Полученные результаты представлены в таблице.

Сравнительная оценка эффективности антибиотиков (ЕД/мл, мкг/мл) в жидкой среде, содержащей 10000 микробных клеток в 1 мл № п/п Препараты Наименование микроорганизмов Е.соli S.aureus S.dublin Вас. Subtilis Proteus Vulgaris 1. Пенициллин 10-12 12-15 12-14 15-16 15-20 2. М-пенициллин 5-7 9-12 8-9 10-12 10-12 3. Гентамицин 10-12 12-13 10-12 13-15 15-16 4. М-гентамицин 4-6 9-10 5-6 9-11 10-12 5. Тетрациклин 20-25 20-22 22-25 25-30 25-27 6. М-тетрациклин 15-17 15-17 17-18 15-16 15-17 7. Амоксиклав 8-9 7-8 10-12 12-15 12-15 8. М-амоксиклав 3-4 4-6 7-8 9-10 9-10 9. Неомицин 20-22 22-25 20-25 25-30 30-35 10. М-неомицин 10-15 15-17 15-17 15-17 15-17 11. Полимиксин 50-60 50-60 50-60 60-65 60-65 12. М-полимксин 30-40 35-40 35-40 35-40 35-40 13. Эритромицин 8-10 10-12 10-12 12-15 13-15 14. М-эритромицин 5-6 7-8 7-8 9-10 9-10 15. Канамицин 10-15 10-12 13-15 13-15 15-17 16. М-канамицин 7-8 6-7 7-8 8-9 9-10 M - модифицированный антибиотик

Из данных, представленных в таблице, следует, что растворы антибиотиков, подвергнутые детоксикации, полимеризации 0,2% раствором формалина при 42°С в течение 7 суток проявили повышенное на 50±10% бактерицидное действие на E.coli, S.aureus, S.dublin, Вас. Subtilis и Pr. Vulgaris в сравнении с контрольными антибиотиками.

Изобретение относится к производству антибиотиков. Способ повышения эффективности антибиотиков включает детоксикацию и полимеризацию антибиотиков 0,15±0,05% раствором формалина при 40,0±2,0°С в течение 5-7 суток с последующим выпуском препаратов в жидком или лиофилизированном виде. Способ по изобретению позволяет повысить эффективность антибиотиков на 50±10% с одновременным снижением их токсичности и аллергенности, что позволяет использовать антибиотические препараты в лечебном диапазоне с более высоким терапевтическим эффектом на фоне снижения противопоказаний. 1 табл.

Способ повышения эффективности антибиотиков, отличающийся тем, что проводят полимеризацию и детоксикацию антибиотиков обработкой 0,15±0,05%-ным раствором формалина при 40,0±2,0°С в течение 5-7 сут и применяют их в жидком или лиофилизированном состоянии.