СПОСОБ ПОВЫШЕНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ СТРЕПТОМИЦИНА В ОТНОШЕНИИ СТРЕПТОМИЦИНОУСТОЙЧИВЫХ МИКОБАКТЕРИЙ ТУБЕРКУЛЕЗА Российский патент 2011 года по МПК C12P19/54 A61K31/00 A61P31/06 

Изобретение относится к микробиологии, биотехнологии и фтизиатрии, в частности к производству антибиотиков.

Исследования показали, что многолетнее широкое использование антибиотиков вызвало мутации патогенных микроорганизмов, которые выработали у них способность образовывать ферменты, расщепляющие антибиотики, ускорять выведение антибиотиков из клетки и т.д., что значительно снижает бактерицидную эффективность антибиотиков и приводит к необходимости повышать дозы антибиотиков или разрабатывать более сильные антибиотики с соответственно более сильными побочными эффектами (Коломиец В.М., Евглевский А.А. Диагностика и профилактика антропозоонозного туберкулеза // Курск. - 2005. - 240 с.; Коломиец В.М., Евглевский А.А. Антропозоонозы. М.: Изд-во «Колосс». - 2007).

Для повышения эффективности антибиотиков используют комбинацию определенных групп антибиотиков, введение в их состав фтора, пиперазинового радикала, клавулановой кислоты - антибиотика, выделенного в 1976 году из гриба Streptomyces clavuligerus, или применение ряда органических кислот цикла Кребса (Соколова Г.Б., Краснов В.А. Новый противотуберкулезный препарат Рифалекс // Антибиотики и химиотерапия, 2009. 54. 1-2. С.38-41; Андреева Н.В., Войтенко В.Д. Повышение эффективности химиопрепаратов с помощью органических кислот // Международный вестник ветеринарии. 2004. №1. С.55-58).

Однако на новый антибиотик или их сочетание микроорганизмы отвечают более эффективным ответным действием. Поэтому для повышения эффективности существующих антибиотиков необходимы новые технологии изготовления, т.к. потенциал их активности практически исчерпан.

Известный антибиотик стрептомицин из группы амидогликозидов применяется для лечения туберкулеза (Визель А.А., Гурылева М.Э. Туберкулез. М.: Медицина, 1999. - С.98-102).

Основными недостатками стрептомицина являются нефро- и ототоксичность, нарушения слуха, аллергизация организма, возникновение лекарственноустойчивых микобактерий туберкулеза (Медуницын Н.В. Биопрепараты. - 2006. - №4. - С.2-4).

Для устранения указанных недостатков, снижения токсичности, повышения эффективности антибиотиков и их устойчивости к ферментативному воздействию микроорганизмов предлагается полимеризация, дезаллергизация и детоксикация стрептомицина и канамицина с помощью двух детоксикаторов - вначале 0,2±0,05% раствором формалина при 40,0±2,0°С в течение 3-5 суток, а затем 0,2±0,05% раствором этония для полноты детоксикации и повышения терапевтических свойств препаратов при 40,0±2,0°С в течение 3-5 суток из расчета содержания антибиотика 100-150 мг/мл.

Использование растворов формалина и этония для детоксикации и полимеризации стрептомицина с целью повышения его эффективности в отношении микобактерий туберкулеза, в том числе стрептомициноустойчивых, в научных источниках не обнаружено.

Полученные результаты проиллюстрированы примерами.

Пример 1. Осуществление способа.

Во флаконы, содержащие 1 г лиофилизированного стрептомицина (60 фл.) с помощью шприца внесли 8,0 мл 0,2% раствора формалина для его детоксикации и полимеризации при 42°С в течение 3-5 суток, а затем также с помощью шприца внесли 2,0 мл 2,0% раствора этония, чтобы в общем растворе содержание этония составляло 0,20±0,05% для обеспечения полноты детоксикации и полимеризации в том же температурном и временном режиме.

Пример 2. Исследование модифицированного стрептомицина на безвредность и сохранность.

В исследованиях использовано 10 белых мышей, 8 морских свинок и 7 поросят 2-3-месячного возраста, которым вводили модифицированный стрептомицин. При этом белым мышам ежедневно подкожно вводили по 0,5 мл (50 мг) стрептомицина в течение 5 суток, морским свинкам по 1,0 мл (100 мг) и поросятам по 2,0 мл (200 мг) в течение 10 суток. По истечении 15 суток после последнего введения стрептомицина все животные оставались живыми и без гнойно-некротических изменений на месте введения препаратов.

Растворы модифицированного антибиотика при хранении в холодильнике и при комнатной температуре в течение 1 года оставались прозрачными, а прорастание посторонней микрофлоры отсутствовало.

Пример 3. Определение эффективности модифицированного стрептомицина.

Определение бактерицидной и бактериостатической эффективности модифицированного стрептомицина проводили на плотной питательной среде Левенштейна-Йенсена, в которую перед свертыванием добавляли 1,0;

2,0; 5,0 и 10,0 мкг/мл стрептомицина, и соответственно в указанных концентрациях на жидкой синтетической питательной среде Линниковой (ЛенИВС), и жидкой синтетической питательной среде Курской биофабрики (среда Евглевского №1), используемой для производства ППД-туберкулина с 1967 года в ежегодном объеме 300-500 тысяч литров.

В исследованиях использовали чувствительные и антибиотикоустойчивые микобактерии бычьего вида в отношении обычных производственных партий стрептомицина и модифицированного антибиотика. При этом установлено отсутствие роста лекарственноустойчивых микобактерий бычьего вида при концентрации модифицированного стрептомицина 1-3 мкг/мл как на плотной, так и на жидких синтетических средах. В то же время рост лекарственноустойчивых микобактерий на плотной и жидкой питательных средах происходил при концентрациях производственного стрептомицина в пределах 7-10 мкг/мл.

Полученные результаты подтверждают, что по эффективности в отношении лекарственноустойчивых микобактерий туберкулеза бычьего вида модифицированный стрептомицин превышает коммерческий антибиотик в 2,5-3,0 раза.

Способ повышения эффективности стрептомицина в отношении стрептомициноустойчивых микобактерий туберкулеза заключается в детоксикации и полимеризации стрептомицина последовательной обработкой 0,2±0,05% раствором формалина при 40,0±2,0°С в течение 3-5 суток, а затем 0,2±0,05% раствором этония при 40,0±2,0°С в течение 3-5 суток из расчета содержания антибиотика 100-150 мг/мл. Полученный модифицированный антибиотик обладает пониженной токсичностью, устойчивостью к ферментативному воздействию микроорганизмов, а также повышенной эффективностью в отношении лекарственноустойчивых микобактерий туберкулеза бычьего типа, что приводит к повышению терапевтических свойств стрептомицина.

Способ повышения эффективности стрептомицина в отношении стрептомициноустойчивых микобактерий туберкулеза, заключающийся в том, что проводят детоксикацию и полимеризацию антибиотика обработкой сначала 0,2±0,05%-ным раствором формалина при 40,0±2,0°С в течение 3-5 суток, а затем 0,2±0,05%-ным раствором этония при 40,0±2,0°С в течение 3-5 суток из расчета содержания антибиотика 100-150 мг/мл.