СПОСОБ ПОВЫШЕНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ КАНАМИЦИНА В ОТНОШЕНИИ КАНАМИЦИНОУСТОЙЧИВЫХ МИКОБАКТЕРИЙ ТУБЕРКУЛЕЗА Российский патент 2011 года по МПК C12P1/00 A61K31/00 A61P31/06 

Изобретение относится к микробиологии, биотехнологии и фтизиатрии, в частности к производству антибиотиков.

Исследования показали, что многолетнее широкое использование антибиотиков вызвало мутации патогенных микроорганизмов, которые выработали у них способность образовывать ферменты, расщепляющие антибиотики, ускорять выведение антибиотиков из клетки и т.д., что значительно снижает бактерицидную эффективность антибиотиков и приводит к необходимости повышать дозы антибиотиков или разрабатывать более сильные антибиотики с соответственно более сильными побочными эффектами (Коломиец В.М., Евглевский А.А. Диагностика и профилактика антропозоонозного туберкулеза. - Курск. - 2005. - 240 с.).

Для повышения эффективности антибиотиков используют комбинацию определенных групп антибиотиков, введение в их состав фтора, пиперазинового радикала, клавулановой кислоты - антибиотика, выделенного в 1976 году из гриба Streptomyces clavuligerus, или применение ряда органических кислот цикла Кребса (Соколова Г.Б., Краснов В.А. Новый противотуберкулезный препарат Рифалекс // Антибиотики и химиотерапия, 2009. 54. 1-2. С.38-41; Андреева Н.В., Войтенко В.Д. Повышение эффективности химиопрепаратов с помощью органических кислот // Международный вестник ветеринарии. 2004. №1. С.55-58).

Однако на новый антибиотик или их сочетание микроорганизмы отвечают более эффективным защитным действием. Поэтому для повышения эффективности существующих антибиотиков необходимы новые технологии изготовления, т.к. потенциал активности существующих препаратов практически исчерпан.

Известный антибиотик канамицин из группы амидогликозидов применяется для лечения туберкулеза (Визель А.А., Гурылева М.Э. Туберкулез. - М.: Медицина, 1999. - С.98-102).

Основными недостатками канамицина являются нефро- и ототоксичность, нарушения слуха, аллергизация организма, возникновение лекарственно-устойчивых микобактерий туберкулеза (Медуницын Н.В. Биопрепараты. - 2006. - №4. - С.2-4).

Для устранения указанных недостатков, снижения токсичности, повышения эффективности канамицина и его устойчивости к ферментативному воздействию микроорганизмов предлагается полимеризация, дезаллергизация и детоксикация канамицина с помощью двух детоксикаторов - вначале 0,2±0,05% раствором формалина при 40,0±2,0°С в течение 3-5 суток, а затем 0,2±0,05% раствором этония для полноты детоксикации и повышения терапевтических свойств препаратов при 40,0±2,0°С в течение 3-5 суток из расчета содержания антибиотика 100-150 мг/мл.

Использование растворов формалина и этония для детоксикации и полимеризации канамицина с целью повышения его эффективности в отношении микобактерий туберкулеза, в том числе и канамициноустойчивых, в научных источниках не обнаружено.

Полученные результаты проиллюстрированы примерами.

Пример 1. Осуществление способа

Во флаконы, содержащие 1 г лиофилизированного канамицина (50 фл.) с помощью шприца внесли 8,0 мл 0,2% раствора формалина для детоксикации и полимеризации при 42°С в течение 3-5 суток, а затем также с помощью шприца внесли 2,0 мл 2,0% раствора этония, чтобы в общем растворе содержание этония составляло 0,20±0,05% для обеспечения полноты детоксикации и полимеризации в том же температурном и временном режиме.

Пример 2. Исследование модифицированного канамицина на безвредность и сохранность

В исследованиях использовано 10 белых мышей, 8 морских свинок и 7 поросят 2-3-х месячного возраста, которым вводили модифицированный канамицин. При этом белым мышам ежедневно подкожно вводили по 0,5 мл (50 мг) канамицина в течение 5 суток, морским свинкам по 1,0 мл (100 мг) и поросятам по 2,0 мл (200 мг) в течение 10 суток. По истечении 15 суток после последнего введения канамицина все животные оставались живыми и без гнойно-некротических изменений на месте введения препаратов.

Растворы модифицированного канамицина при хранении в холодильнике и при комнатной температуре в течение 1 года оставались прозрачными, а прорастание посторонней микрофлоры отсутствовало.

Пример 3. Определение эффективности модифицированного канамицина

Определение бактерицидной и бактериостатической эффективности модифицированного канамицина проводили на плотной питательной среде Левенштейна-Йенсена, в которую перед свертыванием добавляли 5,0; 10,0; 20,0; 30,0 и 40,0 мкг/мл канамицина, и соответственно в указанных концентрациях на жидкой синтетической питательной среде Линниковой (ЛенИВС), и жидкой синтетической питательной среде Курской биофабрики (среда Евглевского №1), используемой для производства ППД-туберкулина с 1967 года в ежегодном объеме 300-500 тысяч литров.

В исследованиях использовали чувствительные и антибиотикоустойчивые микобактерии бычьего вида в отношении обычных производственных серий канамицина и модифицированного антибиотика. При этом установлено отсутствие роста лекарственно-устойчивых микобактерий бычьего вида при концентрации 10-15 мкг/мл модифицированного канамицина как на плотной, так и на жидких синтетических средах.

В то же время рост лекарственно-устойчивых микобактерий на плотной и жидкой питательных средах происходил при концентрациях производственного канамицина 40-45 мкг/мл.

Полученные результаты подтверждают, что по эффективности в отношении лекарственно-устойчивых микобактерий туберкулеза бычьего вида модифицированный канамицин превышает производственный антибиотик в 2,5-3,0 раза.

Способ повышения эффективности канамицина в отношении канамициноустойчивых микобактерий туберкулеза заключается в детоксикации и полимеризации канамицина последовательной обработкой 0,2±0,05% раствором формалина при 40,0±2,0°С в течение 3-5 суток, а затем 0,2±0,05% раствором этония при 40,0±2,0°С в течение 3-5 суток из расчета содержания антибиотика 100-150 мг/мл. Использование способа позволяет снизить токсичность канамицина, повысить его антибактериальную активность и его устойчивость к ферментативному воздействию микроорганизмов, что в целом повышает терапевтическую эффективность канамицина в отношении микобактерий туберкулеза, в том числе и канамициноустойчивых микобактерий.

Способ повышения эффективности канамицина в отношении канамициноустойчивых микобактерий туберкулеза, заключающийся в том, что проводят детоксикацию и полимеризацию канамицина обработкой сначала 0,2±0,05%-ным раствором формалина при 40,0±2,0°С в течение 3-5 суток, а затем 0,2±0,05%-ный раствором этония при 40,0±2,0°С в течение 3-5 суток из расчета содержания антибиотика 100-150 мг/мл.