СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ МИКОТИЧЕСКИХ ИНФЕКЦИЙ И ПРЕПАРАТ ДЛЯ ЕГО ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ Российский патент 2010 года по МПК A61K35/66 A61P43/00 

Изобретение относится к медицине, а именно к лечению микотических инфекций, и может быть использовано в частности в гинекологической практике.

Среди микотических оппортунистических инфекций кандидоз играет ведущую роль. Около 75% женщин за всю жизнь имеет хотя бы один эпизод вагинального кандидоза (далее ВК), доминирующим возбудителем которого является Candida albicans. Очень часто ВК протекает как рецидивирующая инфекция и трудно поддается лечению. Существенную проблему представляют рецидивы кандидоза слизистых оболочек у отдельных категорий пациентов. У некоторых из них причина высокой частоты рецидивов определена (рецидивы кандидоза у больных СПИДом), в других случаях она остается неясной (рецидивы кандидозного вагинита у женщин с нормальным иммунитетом) (см., например, Практическое руководство по антиинфекционной химиотерапии, п/р Л.С.Страчунского, Ю.С.Белоусова, С.Н.Козлова. - М., 2002). Применение антимикотических препаратов не всегда оказывается успешным, поскольку хронизация инфекции может сопровождаться формированием лекарственной устойчивости возбудителя. Это обстоятельство определяет актуальность поиска альтернативных средств терапии ВК. Одним из возможных подходов к решению этой задачи является изучение терапевтического эффекта ферментов микробного происхождения, воздействующих на специфические для клетки гриба морфофункциональные структуры.

Известен способ коррекции микрофлоры вагины (RU 2131258, Смирнов и др., 10.06.1999). Способ заключается в интравагинальном введении препарата Биоспорин (в свечах или тампонах). Изобретение позволяет корректировать микрофлору вагины при ее нарушениях, вызываемых патогенными и условно-патогенными микроорганизмами различных таксономических групп. Однако действие этого препарата является опосредованным и при любом нарушении микробиоты возможен рецидив кандидоза.

Известна фармкомпозиция (RU 2007105476, Диковский и др., 10.09.2008) для лечения кандидозных вульвовагинитов, включающая в качестве активного компонента пребиотик лактулозу в виде вагинальных суппозиториев, в качестве активного компонента антимикотик (азолы: интраконазол, терконазол, эконазол; нифуратель и натамицин) в количестве 100 мг или 500 мг, а пребиотик - в количестве 200 мг. Однако известно, что при назначении антимикотиков из группы азолов у 20% пациенток в течение шести месяцев наблюдается рецидивы.

Описан способ комплексного лечения ВК (RU 2254857, Коломойцева и др., 27.06.2005) вагинальными суппозиториями Гексикон; препаратами Мультитабс, Рекицен-РД, которые могут значительно улучшить состояние больных в острый период, однако не являются специфической антимикотической терапией, и не гарантируют отсутствие рецидивов в течение шести месяцев после лечения.

Известен препарат - вагинальные суппозитории (RU 2257197, Дулькис и др., 12.05.2004), содержащие в частности бензалкония хлорид, бензойную кислоту, витеспол при определенном содержании ингредиентов. Бензалкония хлорид бактерицидно влияет на целую гамму бактерий, однако он менее активен в отношении патогенных грибов, в частности Candida albicans, а бензойная кислота является регулятором рН, препятствует росту патогенных грибов, не являясь средством прямого воздействия на грибы, и не приводит полной эмилинации кандид из влагалища.

Известен способ лечения вагинальных кандидозов (NZ 539019 (A), HUTMAN, 27.10.2006) с использованием антифунгальных и антибактериальных препаратов, таких как метронидазол и миконазол нитрат, а также пробиотиков и антивирусных добавок. Однако известно, что для указанных препаратов возможно развитие резистентности возбудителей, а повышение дозы может вызвать токсический эффект. С другой стороны, добавки не обладают специфической активностью к кандидам.

Известен также способ лечения хронического рецидивирующего вульвовагинального кандидоза (RU 2309761, Хамадьянов и др., 10.11.2007), в котором в три этапа интравагинально и перорально вводят энтеросорбент, интраназально - тимоген и, дополнительно, вакцину «СолкоТриховак», линимент циклоферона интравагинально, эуфлорин В перорально и эуфлорин L интравагинально. Однако при положительном воздействии иммуномодулирующих компонентов на неспецифическую резистентность не оказывается специфическое воздействие на возбудителей кандидоза, что не гарантирует полной защиты от рецидивов.

Известен способ лечения микотических инфекций, использующих энзимы с литическим действием на клетки (US 4062941, Davies, 13.12.1977 - ближайший аналог). Комплекс литических экзоферментов экстрагировался из штаммов Corpinus comatus, Licoperdon depressum или Licoperdon pyriforme. Энзимы идентифицировали по ламинариназе (хитиназе, хитобиазе). Однако указанные ферменты разрушают компонент клеточной стенки гриба - хитин, но не воздействуют на маннановый слой, который определяет основную структуру стенки гриба.

Задачей настоящего изобретения является способ лечения микотических инфекций и препарат для его осуществления, которые позволяют оказывать специфическое воздействие непосредственно на Candida albicans без угнетения нормальной микрофлоры, т.к. точкой приложения препарата являются маннановый и фибриллярный слои клеточной стенки грибов. Этим самым достигается необратимость потери кандидами вирулентных свойств и жизнеспособности, что обуславливает отсутствие рецидивов.

Патентуемый способ лечения микотических инфекций с использованием в качестве активного вещества литического экзофермента в форме средства для местного применения характеризуется тем, что используют литический экзофермент штамма Cellulomonas cellulans ВКПМ АС-870, имеющий молекулярную массу в интервале от 100 до 30 кДа и удельную активность не менее 48,3 ЕД/мг белка.

Способ может характеризоваться тем, что упомянутый экзофермент представляет собой литиказу, а также тем, что при интравагинальном и ректальном применении упомянутый экзофермент используют в дозе 10-50 ЕД один раз в сутки в течение 5-7 дней.

Способ может характеризоваться и тем, что при местном применении упомянутый экзофермент используют в количестве 2-10 ЕД на 1 г биологически приемлемого носителя, преимущественно в форме мази или геля, 1 раз в сутки в течение 5-7 дней.

Способ может характеризоваться также тем, что дополнительно назначают ингибитор протеиназ контрикал, который вводят совместно с упомянутым экзоферментом в количестве 500-1000 АТрЕ на одну дозу последнего.

Препарат для лечения микотических инфекций с использованием в качестве активного вещества литического экзофермента в форме средства для местного применения характеризуется тем, что используют литический экзофермент штамма Cellulomonas cellulans ВКПМ АС-870, имеющий молекулярную массу в интервале от 100 до 30 кДа и удельную активность не менее 48,3 ЕД/мг белка, а также тем, что упомянутый экзофермент представляет собой литиказу.

Препарат для местного, интравагинального и ректального применения содержит 10-50 ЕД упомянутого экзофермента на единичную фармацевтическую форму, преимущественно суппозиторий, тампон или гигиеническую прокладку.

Препарат может характеризоваться тем, что содержит упомянутый экзофермент в количестве 2,0-10,0 ЕД на 1,0 г биологически приемлемого носителя, и выполнен в форме мази или геля, а также тем, что содержит ингибитор протеиназ контрикал в количестве 500-1000 АТрЕ на одну дозу упомянутого упомянутого литического экзофермента.

Технический результат - снижение рецидивов при лечении микотических инфекций, повышение антимикотической активности без угнетения нормальной микрофлоры. Это обеспечивается за счет воздействия упомянутого экзофермента как на маннановый слой клеточной стенки Candida albicans, так и на фибриллярный слой с последующим его отщеплением. Дополнительный технический результат - синергетический эффект при совместном использовании упомянутого литического экзофермента и контрикала: у грибов рода Candida образуется развитая поверхность, однако не проявляющая патогенных свойств.

Существо изобретения поясняется на графиках, где на фиг.1 - представлена динамика роста культуры-продуцента и изменения протеолитической активности культуральной жидкости (КЖ); на фиг.2 - изменение активности литиказы в динамике культивирования Cellulomonas cellulans; на фиг.3, 4 - клиренс влагалища по отношению к дрожжеподобным грибам под действием литиказы в дозе 2 ЕД/мл и 10 ЕД/мл, соответственно.

В качестве активного вещества используют литический экзофермент - литиказу штамма Cellulomonas cellulans ВКПМ АС-870. Перед засевом на матрасы культура С.cellulans стабилизируется путем создания холодового шока (экспозиция инокулята 20 минут при температуре +4°С). Далее штамм культивируют при постоянном шуттели-ровании в течение 2,5-3 суток при температуре 37°С на модифицированном сердечно-мозговом бульоне (СМБ) с добавкой убитых пекарских дрожжей в количестве 9,5-10,5 г на 1 л среды в качестве индуктора литиказы. Динамика роста контролировалась по оптической плотности (ОП). Установлено, что активность литиказы увеличивалась в период экспоненциального роста культуры и достигала максимума в стационарной фазе, после чего снижалась. Оптимальным периодом эффективного культивирования является 65-72 час, так как в течение этого периода происходит наибольшее накопление искомого продукта (фиг.1, 2).

По окончании культивирования КЖ в объеме 1,5 литра центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 мин и пропускали через стерилизующий фильтр с диаметром пор 0,02 мкм. Далее, КЖ подвергали диафильтрации на ячейках фирмы «AMICON» с использованием мембран ХМ-300, ХМ-100 и РМ-20. Каждая из фракций была сконцентрирована до объема 20 мл, после чего определяли активность литиказы. Установлено, что активность фермента отсутствовала во фракциях, содержащих биополимеры с молекулярной массой более 100 кДа и 300 кДа, но полностью проявлялась в интервале от 100 до 30 кДа. Полученные параметры согласуются с характеристиками, описанными в литературе. После промывки и концентрирования данной фракции удельная активность конечного продукта составляет не менее 48,3 ЕД/мг белка, что более чем в 2 раза превышает удельную активность коммерческого препарата «Lyticase» фирмы Sigma (20 ЕД/мг белка), принятого нами как стандарт.

На животных была оценена острая токсичность препарата, для чего по 0,4 мл раствора, содержащего 117 мг белка, вводили 10-ти мышам в дорсальную вену хвоста. Животные в течение 10 дней оставались здоровыми, из чего был сделан вывод о том, что препарат не токсичен в дозах, которые в сотни раз превышают лечебные.

Действие полученного экзофермента - литиказы проявляется в виде лизиса клеток грибов. Литический эффект выражается в снижении количества жизнеспособных грибов и зависит от дозы фермента, использованного в опыте. При обработке суспензии С.albicans литиказой с активностью 10 ЕД наблюдается снижение оптической плотности взвеси до 53% относительно контроля в течение 1 часа. Дозозависимый эффект наблюдается при оценке результатов высева оставшихся жизнеспособных клеток. Оба процесса описываются двумя уравнениями регрессии, отражающими зависимость литического эффекта от дозы фермента:

у(х)=-10,5497856·ln(х)+67,1981181, при стандартном отклонении, равном 5,128; где: у - величина снижения оптической плотности взвеси грибов под воздействием литиказы, по сравнению с контролем; х - доза литиказы;

У(х)=-11.6411733·ln(х)+83.5368459, при стандартном отклонении, равном 5,945; где: У - процент жизнеспособных клеток относительно контроля; х - доза литиказы.

Уравнения дают возможность рассчитать 50%-ный эффект действия литиказы: 5,0 ЕД - по показателю лизиса культуры, 7,8 ЕД - по цитостатическому эффекту.

Исследования показали, что оставшиеся после воздействия литиказы жизнеспособные грибы теряют свою вирулентность, которая обеспечивает развитие инфекционного процесса. Это обусловлено снижением адгезивности грибов к вагинальным эпителиоцитам влагалища и, в связи с этим, уменьшением их колонизирующей способности. Воздействие литиказы на поверхностные структуры клеточной стенки грибов путем разрушения маннанового и фибриллярного слоев усиливает примерно в 1,5 раза захват их фагоцитами и способствует активизации внутриклеточного переваривания. Так, в результате исследований установлено, что после контакта нативных грибов с макрофагами переваривалось 41,0±0,4% клеток. В результате обработки литиказой этот показатель увеличился до 48,0±1,0%. Полученные данные указывают на то, что переваривающая фаза фагоцитоза проходит более эффективно в случае повреждающего клеточную стенку действия литического экзофермента литиказы. Эксперименты с изолированными макрофагами позволили установить, что эффективность фагоцитарного процесса проявляется в развитии завершенного фагоцитоза. Снижение вирулентности кандид под действием литиказы вследствие отщепления фибриллярного слоя и разрушения мананового слоя клеточных стенок грибов приводит к потере их адгезивности и увеличению эффективности фагоцитоза макрофагами. Кроме того, установлено, что антимикотическое действие литиказы можно усилить путем введения препарата «Контрикал». Препарат «Контрикал» (Апротинин/APROTININ) - ингибитор протеолитических ферментов и протеаз плазмы крови обычно используется для купирования приступов и лечения панкреатита (производитель AWD pharma GmbH & Со, Германия). Заявителем впервые установлено неизвестное ранее свойство контрикала ингибировать продукцию ферментов агрессии аспартил-протеиназ у кандид. Ингибирование контрикалом аспартил-протеиназ препятствует реализации инвазивных свойств возбудителя, блокирует переход в патогенную мицелиальную форму, сохраняя в дрожжевой форме, и способствует элиминации возбудителя. Контрикал вводят в количестве 500-1000 АТрЕ совместно с литиказой, на одну дозу последней. Патентуемый препарат содержит в единой композиции литиказу и контрикал. Доказательством синергетического антимикотического эффекта двух препаратов является механизм, обнаруженный в эксперименте in vitro. Литиказа обеспечивает лизирующее воздействие на грибы, а контрикал - блокирует ферменты агрессии аспартил-протеиназы у кандид, сохранивших жизнеспособность.

Исследование терапевтического действия литиказы проведено на модели вагинального кандидоза (ВК) с использованием клинического штамма Candida albicans №40, который был выделен из влагалища беременной женщины с диагнозом вагинальный кандидоз. Указанный штамм вводили по 20 мкл интравагинально в дозе 10⁸ КОЕ/мл, на фоне дисбиоза, вызванного антибиотиками и искусственно индуцированной течки посредством гормона Месалина. После элиминации возбудителя из влагалища провоцировали рецидив инфекции путем повторной обработки животных антибиотиками и гормоном без введения культуры возбудителя. Контроль течения инфекции производили по двум показателям обсемененности: по числу КОЕ в 1 мкл влагалищного отделяемого и клиренсу, рассчитанному по формуле: К=(С₀-C_t)/С₀·100%; где: К - клиренс (очищение), С₀ - число грибов в 1 мкл влагалищного отделяемого мышей в начальный момент времени после заражения; C_t - число грибов в 1 мкл влагалищного отделяемого через известный промежуток времени.

На высоте манифестации рецидива животным опытной группы с интервалом в 2 дня интравагинально вводили литиказу. Контроль санации в опытной и контрольной группах осуществляли по высеву грибов. Две серии опытов были проведены с использованием разных доз фермента: 2 и 10 ЕД/мл (на фиг.3, 4). Провокация отмечена литерами А (антибиотик) и М (гормон месалин).

Из данных опытов, приведенных на фиг.3 (1-5 дни - антибиотик; 5 день - заражение С.albicans; 36-40 дни - антибиотик; 43-72 дни - литиказа), следует, что уже после первого введения литиказы происходит значительное снижение обсемененности влагалища кандидами по сравнению с контролем.

При использовании литиказы в дозе 10 ЕД/мл (фиг.4) санация завершается на 8 дней раньше, чем при дозе 2 ЕД/мл. На фиг.4 данные опытов: 1-5 дни - антибиотик и гормон; 5 день - заражение С.albicans; 38-42 дни - антибиотик и гормон (месалин); 47-73 дни - литиказа; 76-80 дни - антибиотик и гормон. При провокации кандидоза антибиотиками и гормонами повторных рецидивов не развивалось, что является доказательством полной санации влагалища под влиянием литиказы.

При определении дозы исходили из экспериментальной модели вагинального кандидоза. Проведен расчет, позволяющий экстраполировать экспериментальные данные, полученные in vitro и in vivo на животных, на терапевтические дозы лечения для человека. Исходили из следующего. Объем влагалища мыши - 25 мкл (25.10^-6 л). Лечебная терапевтическая доза, выведенная в эксперименте, составляла 2-10 ЕД/мл в течение 7 дней. Объем влагалища женщины 0,05 л. Соответственно, экстраполируя дозу на объем влагалища женщины получаем указанный диапазон значений 10-50 ЕД (п.3 формулы), и 2-10 ЕД на грамм носителя.

Необходимо отметить, что штамм С.albicans №40 является клиническим штаммом, выделен от беременной женщины больной вагинальным кандидозом. Поэтому эксперименты с литиказой и штаммом С.albicans №40 in vitro и in vivo на модели вагинального кандидоза можно рассматривать как экспериментально обоснованные доказательства применимости препарата для лечения микотических инфекций.

Исследования посредством электронной микроскопии позволили зафиксировать какие именно изменения претерпевает клеточная клетка штамма C.albicans под действием литиказы. По химическому составу клеточная стенка представлена: хитином, глюканом и маннаном, при этом четко обозначен фибриллярный слой. Выяснено, что если даже разрушения мананового слоя не происходит, наблюдается заметное его истончение, а также происходит разрушение поверхности фибриллярного слоя и его отщепление. Вокруг кандиды видна зона просветления, в некоторых местах происходит разрыв клеточной стенки, при этом глюкановый и хитиновый слои остаются без изменений.

Результатом такой деструкции является изменение адгезивных свойств грибов рода кандида: снижается их адгезия на поверхности клеток-мишеней (вагинального эпителия), но не изменяется адгезивная активность в отношении представителей нормальной микрофлоры влагалища (лактобактерий). Рекомендуемая доза литиказы гораздо ниже, чем необходимо для лизиса клеток. Это позволяет снизить лекарственную нагрузку с сохранением терапевтического эффекта.

В предлагаемом препарате используется литиказа, исходная активность которой составляет не менее 48,3 ЕД/мг белка. Указанный литический экзофермент можно вводить в различных количествах в состав разных фармацевтических форм препарата для достижения активности 10-50 ЕД на одну дозу.

Препарат литиказа может быть использован для местного, вагинального или ректального применения в виде водного раствора, полученного при стационарной или промышленной технологии. В качестве растворителя может быть использован забуфе-ренный физиологический раствор, рН 7,2.

Препарат литиказа может также дополнительно содержать наполнитель, обычно применяемый при изготовлении соответствующих рецептурных форм. При изготовлении суппозиториев или свечей в качестве наполнителя применяется, например, кондитерский жир, ланолин, масло какао, гель гидроокиси алюминия, парафин и т.п. При получении мази или геля - вазелин, ланолин, витепсол, альгинат натрия, метилцеллюлоза, метоцель, гиспагель, ГПМЦ и т.п. Препарат может быть также лиофилизирован.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Получение жидкого препарата литиказы. При промышленной технологии культивирование штамма Cellulomonas cellulans ВКПМ АС-870 проводят в реакторе/ферментере с питательной средой для культивирования при температуре 35-37°С в течение 10-24 час до выхода культуры на стационарную фазу роста. По окончании инкубации культуральную жидкость сепарируют и путем фракционирования на картриджах выделяют и концентрируют экстрацеллюлярный биополимер с молекулярной массой в интервале от 100 до 30 кДа. Активность литиказы определяют по лизису дрожжевых грибов рода Sacharomyces, и полученный препарат при значении удельной активности не менее 48,3 ЕД/мг белка считают пригодным для последующего использования и разливают по флаконам с введением известных стабилизирующих добавок.

При лечении жидкий препарат в количестве, содержащем разовую дозу (например, 5 мл забуференного физиологического раствора, рН 7,2, содержащего 50 ЕД литиказы) наносят на тампон или прокладку. Применяют местно, ректально или интравагинально.

Пример 2. Получение препарата в форме суппозитория. Полученный в примере 1 жидкий препарат обезвоживают на распылительной или вакуум-сушильной установке, соединяют с наполнителями (кондитерским жиром, ланолином, парафином, витепсолом и т.п.) в количестве, обеспечивающем не менее 10-50 ЕД активности литиказы на один суппозиторий. Так, для приготовления 100 суппозиториев массой по 5 г каждый, необходимо ввести на 500 г наполнителя 103,5 мг литиказы (с исходной активностью 48,3 ЕД/мг белка). Если суппозитории содержат контрикал, то его вводят одновременно с литиказой в соответствии с расчетом: на один суппозиторий - 500-1000 АТрЕ. Далее суппозитории формируют на специальной установке.

Изучена стабильность 8-ми экспериментально-производственных серий препарата. Как показывают полученные результаты, непосредственно после формирования суппозиториев активность литиказы составляет не менее 40 ЕД, а по истечении 12 мес хранения - не регистрировалась активность менее 10 ЕД на один суппозиторий.

Пример 3. Получение препарата в форме мази или геля. Полученный в примере 1 жидкий препарат обезвоживают на распылительной или вакуум-сушильной установке, соединяют с мазевой (вазелин, ланолин, т.п.) или гелевой основой (метилцеллюлозой, альгинатом натрия и т.п.) в количестве, обеспечивающем не менее 2-10 ЕД активности литиказы на один грамм основы. Так, для приготовления мази (геля) необходимо на 100 г основы ввести 20,7 мг литиказы (при исходной активности не менее 48,3 ЕД/мг белка). Если мазь (гель) содержит контрикал, то его вводят одновременно с литиказой в соответствии с расчетом: на один грамм мази (геля) 100-200 АТрЕ. Далее мазь (гель) фасуют по тубам или склянкам.

Изучена стабильность 6 экспериментально-производственных серий препарата. Как показывают полученные результаты, непосредственно после приготовления активность литиказы составляет не менее 10 ЕД на 1 грамм основы, а по истечении 12 мес хранения - не оказалось серий препарата с активностью менее 2 ЕД на 1 грамм основы.

Препараты, полученные по вышеописанным примерам, характеризуются безвредностью. Для определения безвредности мышам вводят интравагинально препарат в объеме 20 мкл. Для каждого варианта опыта используют не меньше 10 мышей массой 15-16 г. Препарат считают безвредным, если все мыши остаются живыми в течение 5 суток наблюдения и ни у одной из них не выявлено заболевания.

Препарат Литиказа характеризуется фунгицидной активностью относительно тест-штамма C.albicans №40, который является внутренним стандартом для определения антимикотического действия заявленного препарата.

Фунгицидное действие литиказы определяли методом серийных разведений в жидкой питательной среде (по Лабинской). Из культуры C.albicans приготовляли взвесь, содержащую 10⁵ микробных тел в 1 мл бульона, пользуясь бактерийным оптическим стандартом. Затем осуществляли ряд разведений литиказы (содержащих от 10 до 5120 ЕД) в мясо-пептонном бульоне по 2 мл, во все пробирки добавляли по 0,2 мл культуры C.albicans. Проведено два контроля: контроль жизнеспособности культуры C.albicans без введения литиказы и контроль микробиологической чистоты фермента, содержащего 5120 ЕД литиказы без внесения культуры. Через 48 часов инкубирования в термостате учитывали результаты по наличию или отсутствию роста. Из всех пробирок делали высев газоном по 0,1 мл на плотную среду Сабуро. Через 24 часа инкубации в термостате подсчитывали число КОЕ на чашках. Установлено, что минимальная концентрация литиказы, полностью ингибирующая рост и размножение C.albicans, составила 1280 ЕД, что было подтверждено при высевах на плотную среду. При активности свыше 640 ЕД ни в одном случае проведенного опыта не было отмечено роста C.albicans №40.

Фунгистатическое и фунгицидное действие фермента по отношению к С.albicans определяли также в опыте на плотной среде АГВ. 10 образцов по 1 мл раствора литиказы в забуференном физиологическом растворе (ЗФР) с исходной удельной активностью 10, 20, 40, 80, 160, 320, 640, 1280, 2560, 5120 ЕД наслаивали на среду АГВ и выдерживали 5 часов при температуре 37°С для впитывания жидкости. В контрольный образец вводили ЗФР. После этого засевали 10 мкл суспензии С.albicans, обеспечивающей рост около 50 КОЕ в контроле. Учет результатов проводили через 24 часа инкубации в термостате по проценту сохранивших жизнеспособность С.albicans после обработки ферментом. Опыт повторяли десять раз. Полное подавление роста кандид наблюдалось при действии литиказы свыше 640 ЕД в отношении взвеси кандиды. Фунгистатическое действие литиказы начинало проявляться со значений, соответствующих 10 ЕД активности. При 40 ЕД подавлялся рост более чем у 50% клеток С.albicans, при 640 ЕД - более, чем у 98% и при 1280 ЕД в 100% случаев регистрировалось полное бактерицидное действие литиказы.

Таким образом, проведенные исследования позволяют заключить, что патентуемый способ лечения микотических инфекций с использованием литиказы - литического экзофермента штамма Cellulomonas cellulans ВКПМ АС-870, имеющего удельную активность не менее 48,3 ЕД/мг белка, содержащегося в экстрацеллюлярной фракции биополимера с молекулярной массой в интервале от 100 до 30 кДа и избирательно разрушающего основную структуру клеточной стенки грибов, способствует полной санации инфекционного очага. При этом элиминация возбудителя из влагалища настолько эффективна, что провокация рецидива инфекции становится невозможной.

Изобретение относится к области медицины. Способ лечения заключается в том, что используют литический экзофермент штамма Cellulomonas cellulans ВКПМ АС-870, имеющий молекулярную массу в интервале от 100 до 30 кДа и удельную активность не менее 48,3 ЕД/мг белка. Препарат для лечения микотических инфекций содержит литический экзофермент штамма Cellulomonas cellulans ВКПМ АС-870, имеющий молекулярную массу в интервале от 100 до 30 кДа и удельную активность не менее ЕД/мг белка и выполнен в форме средства для местного применения. Группа изобретений позволяет снизить вероятность возникновения рецидивов при лечении микотических инфекций без угнетения нормальной микрофлоры. 2 н. и 8 з.п. ф-лы, 4 ил.

1. Способ лечения микотических инфекций с использованием в качестве активного вещества литического экзофермента в форме средства для местного применения, отличающийся тем, что используют литический экзофермент штамма Cellulomonas cellulans ВКПМ АС-870, имеющий молекулярную массу в интервале от 100 до 30 кДа и удельную активность не менее 48,3 ЕД/мг белка.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что упомянутый литический экзофермент штамма Cellulomonas cellulans представляет собой литиказу.

3. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что при интравагинальном и ректальном применении упомянутый литический экзофермент используют в дозе 10-50 ЕД один раз в сут в течение 5-7 дней.

4. Способ по любому из пп.1 или 2, отличающийся тем, что при местном применении упомянутый литический экзофермент используют в количестве 2-10 ЕД на 1 г биологически приемлемого носителя, преимущественно в форме мази или геля, 1 раз в сут в течение 5-7 дней.

5. Способ по любому из пп.1 или 2, отличающийся тем, что дополнительно назначают ингибитор протеиназ контрикал, который вводят совместно с упомянутым литическим экзоферментом в количестве 500-1000 АТрЕ на одну дозу последнего.

6. Препарат для лечения микотических инфекций в форме средства для местного применения, содержащий в качестве активного вещества литический экзофермент, отличающийся тем, что содержит литический экзофермент штамма Cellulomonas cellulans ВКПМ АС-870, имеющий молекулярную массу в интервале от 100 до 30 кДа и удельную активность не менее 48,3 ЕД/мг белка.

7. Препарат по п.6, отличающийся тем, что упомянутый литический экзофермент штамма Cellulomonas cellulans представляет собой литиказу.

8. Препарат по любому из пп.6 или 7, отличающийся тем, что для интравагинального и ректального применения содержит 10-50 ЕД упомянутого литического экзофермента штамма Cellulomonas cellulans на единичную фармацевтическую форму, преимущественно суппозиторий, тампон или гигиеническую прокладку.

9. Препарат по любому из пп.6 или 7, отличающийся тем, что содержит упомянутый литический экзофермент штамма Cellulomonas cellulans в количестве 2,0-10,0 ЕД на 1,0 г биологически приемлемого носителя и выполнен в форме мази или геля.

10. Препарат по любому из пп.6-9, отличающийся тем, что дополнительно содержит ингибитор протеиназ контрикал в количестве 500-1000 АТрЕ на одну дозу упомянутого литического экзофермента штамма Cellulomonas cellulans.