СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ПЕРЕХОДА МИОПИИ В ПРОГРЕССИРУЮЩУЮ ФОРМУ Российский патент 2010 года по МПК A61B10/00 G01N33/68 

Изобретение относится к медицине, в частности к офтальмологии, и может быть использовано в медицинской практике для прогнозирования перехода приобретенной в школьные годы миопии в прогрессирующую форму.

Установлено, что в период прогрессирования близорукости у детей и подростков происходит усиление катаболических процессов соединительной ткани, выражающееся в возрастании активности гиалуронидазы сыворотки крови, увеличении экскреции ГАГ, повышении уровня свободного оксипролина крови (М.И.Винецкая, З.К.Болтаева с соавт., Офтальмологический журнал, 1988, №3, с.155-158). Нарушение обменных процессов наиболее выражено у детей и подростков с прогрессирующей миопией средней степени, в особенности с периферическими витреохориоретинальными дистрофиями.

Способ прогноза прогрессирования близорукости путем определения концентрации антител класса G и М в сыворотке крови (Патент РФ №2079136, 1997 г.) взят за прототип.

Техническим результатом изобретения является повышение точности прогноза прогрессирования.

Указанный технический результат достигается за счет того, что в способе прогнозирования течения миопии у детей школьного возраста, включающем определение содержания маркера в сыворотке крови, согласно изобретению в качестве маркера определяют содержание хрящевого гликопротеина-39 и при его содержании в пределах 34,7-53,4 нг/мл у детей 10-14 лет и 22-56,3 нг/мл у детей 15-17 лет прогнозируют стационарное течение близорукости, а при его содержании 18,5-33,9 нг/мл в 10-14 лет и 53,7-69 нг/мл в 15-17 лет - прогрессирующее.

Хрящевой гликопротеин-39 (YKL-40) в сыворотке крови является одним из показателей состояния хрящевой ткани. Хотя функции YKL-40 в настоящее время до конца не выяснены, характер изменений и наблюдаемые взаимосвязи с развитием некоторых заболеваний позволяют предположить, что он играет большую роль при перестройке тканей. В нем содержатся как гепарин-, так и хитин-связывающие домены. Проведенные клинические исследования позволяют использовать его в качестве маркера катаболизма хрящевой ткани при остеоартритах, в то же время его содержание при прогрессирующей близорукости неизучено.

Подтверждением достоверности предлагаемого способа прогноза является совпадение показателей концентрации исследуемого маркера в сыворотке крови с прогрессирующим течением близорукости в среднем в 100% случаев.

Предлагаемый способ осуществляют следующим образом.

Взятие крови без антикоагулянта для получения сыворотки осуществляют в утренние часы натощак из локтевой вены обследуемых в строго стерильных условиях.

Определение уровня хрящевого гликопротеина-39 (YKL-40) в сыворотке крови больных проводят методом «сэндвич» иммуноферментного анализа с применением щелочной фосфатазы в качестве индикаторного фермента с использованием тест-систем Metra YKL-40 EIA («Quidel Metra», США).

В лунки микропланшета вносят по 20 мкл YKL-40 стандартов, контролей и исследуемых образцов сыворотки крови. Затем в эти лунки добавляют по 100 мкл биотинилированных мышиных моноклональных антител к YKL-40. Планшет инкубируют 1 час при комнатной температуре (18-25°С), затем жидкость из лунок удаляют и планшет 3 раза промывают буфером. Планшет сушат путем постукивания по поверхности лабораторного стола, покрытого фильтровальной бумагой.

В каждую лунку микропланшета вносят по 100 мкл конъюгата кроличьих поликлональных антител с щелочной фосфатазой, разведенного буфером. Планшет инкубируют в течение 1 часа при комнатной температуре. Жидкость из лунок удаляют и 3 раза промывают буфером. Планшет сушат путем постукивания по поверхности лабораторного стола, покрытого фильтровальной бумагой.

Во все лунки планшета вносят по 100 мкл рабочего раствора субстрата. Микропланшет инкубируют в течение 1 часа при комнатной температуре. Реакцию останавливают добавлением 100 мкл стоп-реагента в каждую лунку. Общее время постановки исследования - 3,5-4 часа.

Учет результатов проводят с использованием автоматического фотометра «Multiscan» при длине волны 405 нм. При содержании хрящевого гликопротеина-39 в пределах 34,7-53,4 нг/мл у детей 10-14 лет и 22-56,3 нг/мл у детей 15-17 лет прогнозируют стационарное течение близорукости. При содержании хрящевого гликопротеина-39 в пределах 18,5-33,9 нг/мл в 10-14 лет и 53,7-69 нг/мл - в 15-17 лет прогнозируют прогрессирующее течение заболевания.

У 50 больных с приобретенной в школьные годы близорукостью было изучено содержание хрящевого гликопротеина-39 в сыворотке крови. При этом детей 10-14 лет было 25 человек и 15-17 лет - 25 человек. Взятие крови без антикоагулянта для получения сыворотки осуществляли натощак из локтевой вены обследуемых в строго стерильных условиях.

Определение уровня хрящевого гликопротеина-39 (YKL-40) в сыворотке крови больных проводили методом «сэндвич» иммуноферментного анализа с применением щелочной фосфатазы в качестве индикаторного фермента.

В лунки микропланшета вносили по 20 мкл YKL-40 стандартов, контролей и исследуемых образцов сыворотки крови. Затем в эти лунки добавляли по 100 мкл биотинилированных мышиных моноклональных антител к YKL-40. Планшет инкубировали 1 час при комнатной температуре (18-25°С), затем жидкость из лунок удаляли и планшет 3 раза промывали буфером. Планшет сушили путем постукивания по поверхности лабораторного стола, покрытого фильтровальной бумагой.

В каждую лунку микропланшета вносили по 100 мкл конъюгата кроличьих поликлональных антител с щелочной фосфатазой, разведенного буфером. Планшет инкубировали в течение 1 часа при комнатной температуре. Жидкость из лунок удаляли и 3 раза промывали буфером. Планшет сушили путем постукивания по поверхности лабораторного стола, покрытого фильтровальной бумагой.

Во все лунки планшета вносили по 100 мкл рабочего раствора субстрата. Микропланшет инкубировали в течение 1 часа при комнатной температуре. Реакцию останавливали добавлением 100 мкл стоп-реагента в каждую лунку.

Учет результатов проводили с использованием автоматического фотометра «Multiscan» при длине волны 405 нм. Результаты выражают в нг/мл. Нормальный уровень хрящевого гликопротеина-39 в сыворотке крови у практически здоровых лиц (контрольная группа) был равен 49,7±3,74 нг/мл у детей 10-14 лет и 52,39±6,43 нг/мл у детей 15-17 лет.

У 10 (40%) из 25 больных миопией 10-14 лет наблюдалось прогрессирующее течение заболевания. При этом содержание хрящевого гликопротеина-39 в сыворотке крови было выявлено в пределах 18,5-33,9 нг/мл у 10 (100%) пациентов. У 15 (60%) из 25 больных миопия имела стационарный характер течения. При этом содержание хрящевого гликопротеина-39 в сыворотке крови было выявлено в пределах 34,7-53,4 нг/мл у 12 (80%) пациентов.

У 10 (40%) из 25 больных миопией 15-17 лет наблюдалось прогрессирующее течение заболевания. При этом содержание хрящевого гликопротеина-39 в сыворотке крови было выявлено в пределах 53,7-69 нг/мл у 10 (100%) пациентов. У 15 (60%) из 25 больных миопия имела стационарный характер течения. При этом содержание хрящевого гликопротеина-39 в сыворотке крови было выявлено в пределах 22-50,3 нг/мл у 14 (93,3%) пациентов.

Таким образом, предлагаемый способ прогноза прогрессирующего течения приобретенной близорукости являлся правильным у 10 из 10 больных в обеих возрастных группах, что было достоверно в 100% случаев.

Пример 1. Больная С., 12 лет. Близорукость возникла в возрасте 8 лет. В течение последних 3-х лет наблюдалось прогрессирование миопии на 1,0-1,25 Дптр в год. Определение хрящевого гликопротеина-39 в сыворотке крови проводилось по вышеописанной методике. Содержание хрящевого гликопротеина-39 в сыворотке крови было равно 27,6 нг/мл. Следовательно, содержание хрящевого гликопротеина-39 в сыворотке крови совпало с прогрессирующим течением близорукости.

Пример 2. Больной П., 13 лет. Близорукость возникла в возрасте 9 лет. За последние 3 года наблюдения не отмечалось прогрессирования заболевания. Определение хрящевого гликопротеина-39 в сыворотке крови проводилось по вышеописанной методике. Содержание хрящевого гликопротеина-39 в сыворотке крови было равно 44,2 нг/мл. Это свидетельствует о подтверждении стационарного течения близорукости.

Пример 3. Больной А., 15 лет. Близорукость возникла в возрасте 8 лет. За последние 3 года наблюдения отмечается прогрессирование заболевания на 1 Дптр в год. Определение хрящевого гликопротеина-39 в сыворотке крови проводилось по вышеописанной методике. Содержание хрящевого гликопротеина-39 в сыворотке крови было равно 55,4 нг/мл. Это свидетельствует о подтверждении прогрессирующего характера течения миопии.

Пример 4. Больная Т., 16 лет. Близорукость возникла в возрасте 9 лет. За последние 3 года наблюдения не отмечалось прогрессирования заболевания. Определение хрящевого гликопротеина-39 в сыворотке крови проводилось по вышеописанной методике. Содержание хрящевого гликопротеина-39 в сыворотке крови было равно 42,1 нг/мл. Это свидетельствует о подтверждении стационарного течения близорукости.

Таким образом, предлагаемый способ прогноза перехода приобретенной в школьные годы близорукости в прогрессирующую форму позволяет оценить характер течения этого заболевания по содержанию хрящевого гликопротеина-39 в сыворотке крови пациентов.

При выявлении содержания хрящевого гликопротеина-39 18,5-33,9 нг/мл в 10-14 лет и 53,7-69 в 15-17 лет прогнозируют прогрессирование заболевания.

Изобретение относится к медицине, в частности к офтальмологии, и может быть использовано для прогнозирования прогрессирования приобретенной в школьные годы близорукости у детей 10-14 и 15-17 лет. В сыворотке крови определяют содержание хрящевого гликопротеина-39 с помощью «сэндвич» иммуноферментного анализа. При его содержании в пределах 34,7-53,4 нг/мл у детей 10-14 лет и 22-56,3 нг/мл у детей 15-17 лет прогнозируют стационарное течение близорукости. При его содержании 18,5-33,9 нг/мл в 10-14 лет и 53,7-69 нг/мл в 15-17 лет прогнозируют прогрессирующее течение близорукости. Использование изобретения повышает точность прогноза течения заболевания.

Способ прогнозирования течения миопии у детей школьного возраста, включающий определение содержания маркера в сыворотке крови, отличающийся тем, что в качестве маркера определяют содержание хрящевого гликопротеина-39 и при его содержании в пределах 34,7-53,4 нг/мл у детей 10-14 лет и 22-56,3 нг/мл у детей 15-17 лет прогнозируют стационарное течение близорукости, а при его содержании 18,5-33,9 нг/мл в 10-14 лет и 53,7-69 нг/мл в 15-17 лет - прогрессирующее.