СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТЫ Российский патент 2010 года по МПК C12P13/04 C12N1/21 

Текст описания приведен в факсимильном виде.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ получения L-аминокислоты. Способ включает выращивание микроорганизма, принадлежащего к семейству Enterobacteriaceae и способного к продукции L-аминокислоты, в питательной среде, и выделение указанной L-аминокислоты из культуральной жидкости. При этом указанный микроорганизм модифицирован путем введения фрагмента ДНК, включающего промотор регулона pho и структурный ген, кодирующий фермент биосинтеза L-аминокислоты, лигированный за промотором таким образом, что ген экспрессируется под контролем данного промотора. А активность фермента биосинтеза L-аминокислоты увеличивается при экспрессии гена под промотором, и при этом содержание фосфора в среде таково, что происходит индукция указанного промотора. Изобретение позволяет получать L-аминокислоты с высокой степенью эффективности. 11 з.п. ф-лы, 4 ил., 7 табл.

1. Способ получения L-аминокислоты, включающий:
А) выращивание микроорганизма, принадлежащего к семейству Enterobacteriaceae и способного к продукции L-аминокислоты, в питательной среде и
Б) выделение указанной L-аминокислоты из культуральной жидкости, при этом указанный микроорганизм модифицирован путем введения фрагмента ДНК, включающего:
i) промотор регулона pho и
ii) структурный ген, кодирующий фермент биосинтеза L-аминокислоты, легированный за промотором таким образом, что ген экспрессируется под контролем данного промотора; и активность фермента биосинтеза L-аминокислоты увеличивается при экспрессии гена под промотором, и при этом содержание фосфора в среде таково, что происходит индукция указанного промотора.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что промотором регулона pho является промотор гена, выбранного из группы, состоящей из генов phoA, phoB, phoE, phoH, asr, argP, ugpB, pstS, psiE и phnC.

3. Способ по п.1, отличающийся тем, что промотор регулона pho содержит pho бокс.

4. Способ по п.1, отличающийся тем, что значение концентрации фосфора в среде поддерживается на уровне 200 мкМ/л или ниже.

5. Способ по п.1, отличающийся тем, что уровень экспрессии фермента биосинтеза L-аминокислоты в микроорганизме до его модификации снижается в условиях истощения фосфора.

6. Способ по п.1, отличающийся тем, что фрагмент ДНК присутствует в составе многокопийного вектора или введен в хромосому микроорганизма.

7. Способ по п.1, отличающийся тем, что микроорганизм, принадлежащий к семейству Enterobacteriaceae, - это микроорганизм, выбранный из группы, состоящей из бактерий Escherichia, бактерий Enterobacter, бактерий Pantoea, бактерий Klebsiella и бактерий Serratia.

8. Способ по п.1, отличающийся тем, что L-аминокислота выбрана из группы, состоящей из L-лизина, L-треонина, L-триптофана, L-фенилаланина и L-глутаминовой кислоты и их комбинации.

9. Способ по п.8, отличающийся тем, что L-аминокислотой является L-лизин, а фермент биосинтеза L-аминокислоты выбран из группы, состоящей из дигидродипиколинатредуктазы, диаминопимелатдекарбоксилазы, диаминопимелатдегидрогеназы, фосфоенолпируваткарбоксилазыаспартатамино-трансферазы, диаминопимелатэпимеразы, аспартатполуальдегиддегидрогеназы, тетрагидродипиколинатсукцинилазы и сукцинилдиаминопимелатдеацилазы и их комбинации.

10. Способ по п.8, отличающийся тем, что L-аминокислотой является L-треонин, а фермент биосинтеза L-аминокислоты выбран из группы, состоящей из аспартокиназы III, аспартатполуальдегиддегидрогеназы, аспартокиназы I, гомосеринкиназы и треонинсинтазы, кодируемых thr опероном и их комбинации.

11. Способ по п.8, отличающийся тем, что L-аминокислотой является L-глутаминовая кислота, а фермент биосинтеза L-аминокислоты выбран из группы, состоящей из глутаматдегидрогеназы, глутаминсинтетазы, глутаматсинтазы, изоцитратдегидрогеназы, аконитатгидратазы, цитратсинтазы, фосфоенолпируваткарбоксилазы, пируваткарбоксилазы, пируватдегидрогеназы, пируваткиназы, фосфоенолпируватсинтазы, 6-фосфоглюконатдегидратазы и 2-кето-3-дезокси-6-фосфоглюконатальдолазы и их комбинации.

12. Способ по п.8, отличающийся тем, что L-аминокислотой является ароматическая L-аминокислота, а фермент биосинтеза L-аминокислоты выбран из группы, состоящей из 3-дезокси-В-арабиногептулонат-7-фосфатсинтаза, 3-дегидрохинатсинтазы, шикиматдегидратазы, шикиматкиназы, 5-енолпирувилшикимат-3-фосфатсинтазы, хоризматсинтазы, префенатдегидратазы и хоризматмутазы и их комбинации.