Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и может быть использовано при производстве сыворотки для лечения и профилактики вирусных кишечных и респираторных болезней телят.
Известны способы получения сыворотки для лечения и профилактики вирусных кишечных и респираторных болезней телят путем получения антигена, гипериммунизации антигеном продуцента, определения титров антител в сыворотке крови продуцента, с последующим взятием крови у продуцента и консервированием целевого продукта /Ветеринарные препараты. Справочник под редакцией Д.Ф.Осидзе. М.: Колос, 1981, с.49-55, 115, 136-138 (1), Цветков П., Харламбиев X. Ветеринарно-мед. Науки, 1974, 11, №6, 66-71. Получение и испытание 3-валентной гипериммунной сыворотки против вируса парагриппа-3, аденовируса и вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота (2)/.
Недостатками известных способов являются низкая активность гипериммунной сыворотки за счет содержания в ней антител против узкого круга возбудителей и дополнительной нагрузки на иммунную систему продуцентов балластных белков неочищенного антигена.
Задачей предлагаемого технического решения является повышение качества целевого продукта за счет очистки и концентрирования антигенов, повышение специфической активности и расширение состава входящих в него вируснейтрализующих компонентов (специфических антител).
Поставленная задача решается в способе получения сыворотки для лечения и профилактики вирусных кишечных и респираторных болезней телят путем отдельного выращивания возбудителей вирусных кишечных и респираторных болезней телят, получения антигенов из вирусов, вызывающих кишечные и респираторные болезни телят путем очистки, гипериммунизацией антигенами продуцентов, определением титров антител в сыворотке крови продуцентов с последующим взятием крови у продуцентов и консервированием целевого продукта тем, что для получения антигенов используют вирус инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота штамм МВА (1)80 №15 с инфекционной активностью 7,0-8,0 lg ТЦД50/см3, вирус парагриппа-3 крупного рогатого скота штамм МВА (1)77 №14 с инфекционной активностью 6,0-7,0 lg ТЦД50/см3, вирус диареи-болезни слизистых крупного рогатого скота штамм ВК1-В1 генотип 1 с инфекционной активностью 4,5-5,5 lg ТЦД50/см3, ротавирус крупного рогатого скота штамм РП-82 с инфекционной активностью 5,5-6,5 lg ТЦД50/см3, коронавирус крупного рогатого скота штамм КП-83 с инфекционной активностью 5,0-6,5 lg ТЦД50/см3, аденовирус крупного рогатого скота штамм В-10 серотип 1 с инфекционной активностью 5,0-6,5 lg ТЦД50/см3, очистку и концентрирование вирусов проводят добавлением сульфата бария в конечной концентрации 5-10%, при постоянном перемешивании на шуттель-аппарате с частотой колебания 40-60 ходов/мин при 36,5-37,5°С в течение 30-35 мин, осадок сорбента отделяют центрифугированием при 1500-2000 об/мин в течение 15-20 мин при 4-6°С, элюцию вируса с сорбента проводят добавлением 0,2-0,25 М раствора лимоннокислого натрия при 4-6°С при постоянном перемешивании на шуттель-аппарате с частотой колебания 40-60 ходов/мин при 4-6°С в течение 30-35 мин, полученные антигены вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота штамм МВА (1)80 №15, вируса парагриппа-3 крупного рогатого скота штамм МВА (1)77 №14, вируса диареи-болезни слизистых крупного рогатого скота штамм ВК1-В1 генотип 1, ротавируса крупного рогатого скота штамм РП-82, коронавируса крупного рогатого скота штамм КП-83 смешивают в объемных соотношениях 1:(0,8-1,2):(0,8-1,2):(0,8-1,2):(0,8-1,2), а к аденовирусу крупного рогатого скота штамм В-10 серотип 1 добавляют формалин в конечной концентрации 2,5-3,0% и инкубируют в течение 24-30 часов при 36,5-37,5°С, с последующим добавлением гидроокиси алюминия, взятого в конечной концентрации 8-25%, получая антиген к аденовирусу крупного рогатого скота штамм В-10 серотип 1, продуцентов гипериммунизируют отдельно - смесью антигенов вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота штамм МВА (1)80 №15, вируса парагриппа-3 крупного рогатого скота штамм МВА (1)77 №14, вируса диареи-болезни слизистых крупного рогатого скота штамм ВК1-В1 генотип 1, ротавируса крупного рогатого скота штамм РП-82, коронавируса крупного рогатого скота штамм КП-83 и антигеном аденовируса крупного рогатого скота штамм В-10 серотип 1 в две точки трехкратно - через 21-30 дней после первичного введения и через 15-17 дней после вторичного введения, на 7-10 день после гипериммунизации определяют титры антител в сыворотке крови продуцентов и взятие крови у продуцентов осуществляют при следующих значениях титров антител к вирусу инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота штамм МВА (1)80 №15, вирусу парагриппа-3 крупного рогатого скота штамм МВА (1)77 №14, вирусу диареи-болезни слизистых крупного рогатого скота штамм ВК1-В1 генотип 1, ротавирусу крупного рогатого скота штамм РП-82, коронавирусу крупного рогатого скота штамм КП-83 - 1:8-32, 1:256-2048, 1:16-64, 1:128-512, 1:64-1024 соответственно и к аденовирусу крупного рогатого скота штамм В-10 серотип 1 - 1:64-512, сыворотки продуцентов, полученные к смеси антигенов вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота штамм МВА (1)80 №15, вируса парагриппа-3 крупного рогатого скота штамм МВА (1)77 №14, вируса диареи-болезни слизистых крупного рогатого скота штамм ВК1-В1 генотип 1, ротавируса крупного рогатого скота штамм РП-82, коронавируса крупного рогатого скота штамм КП-83 объединяют с сывороткой, полученной на антиген аденовируса крупного рогатого скота штамм В-10 серотип 1, из расчета 1:(0,8-1,2) соответственно, а консервируют целевой продукт путем добавления мертиолята в конечной концентрации 0,01-0,02%.
В патентной и научно-технической литературе не известны технические решения, содержащие режимы получения сыворотки для лечения и профилактики вирусных кишечных и респираторных болезней телят, аналогичные заявляемому, т.е. предложение соответствует критерию «новизна».
Все режимы способа осуществимы в лабораторных и промышленных условиях, направлены на решение реальной технической задачи, т.е. предложение «промышленно применимо».
В задачу создания изобретения входила разработка способа технического процесса промышленного производства сыворотки для лечения и профилактики вирусных кишечных и респираторных болезней телят с учетом современных факторов. Нами впервые установлено, что гипериммунизацию животных - продуцентов (волов) следует прекращать при определенном накоплении в сыворотке крови титров антител к вирусам кишечных и респираторных болезней телят. Также впервые установлено, что по достижении определенного количества вводимого антигена в процессе иммунизации животных - продуцентов дальнейшего увеличения титров антител к антигенам вирусов кишечных и респираторных болезней телят не происходило. Впервые предложен способ получения гипериммунной лечебной и профилактической сыворотки против вирусных кишечных и респираторных болезней телят, в котором для гипериммунизации вместо культуральной вируссодержащей жидкости, включающей, помимо вируса, балластные белки клеток культуральной среды и сыворотки крови крупного рогатого скота, создающие дополнительную антигенную нагрузку на иммунную систему доноров, применяют антигены, состоящие из суспензии вирусов, очищенной от белковых балластных структур и сконцентрированной в несколько раз.
Применение таких антигенов обеспечивает выработку донорами высокоактивной и специфичной лечебной и профилактической сыворотки и позволяет получить неочевидный положительный эффект в виде высокого терапевтического и профилактического действия, обеспечивающего повышение выживаемости телят и ускорение сроков их лечения, т.е. предложение соответствует критериям «новизна» и «изобретательский уровень».
Способ иллюстрируется на следующих примерах.
Пример 1. Отобраны производственные штаммы вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота штамм МВА (1) 80 №15 с инфекционной активностью 7,0 lg ТЦД50/см3, вируса парагриппа-3 крупного рогатого скота штамм МВА (1) 77№14 с инфекционной активностью 6,0 lg ТЦД50/см3, вируса диареи-болезни слизистых крупного рогатого скота штамм ВК1-В1 генотипа 1 с инфекционной активностью 4,5 lg ТЦД50/см3, ротавируса крупного рогатого скота штамм РП-82 с инфекционной активностью 5,5 lg ТЦД50/см3, коронавируса крупного рогатого скота штамм КП-83 с инфекционной активностью 5,0 lg ТЦД50/см3. Каждый штамм выращивают отдельно и получают антигены вирусов кишечных и респираторных болезней телят известным способом (1).
Очистку и концентрирование антигенов проводят добавлением сульфата бария в конечной концентрации 5% при постоянном перемешивании на шуттель-аппарате с частотой колебания 40 ходов/мин при 36,5°С в течение 30 мин, осадок сорбента отделяют центрифугированием при 1500 об/мин в течение 15 мин при 4°С, элюцию вируса с сорбента проводят добавлением 0,2 М лимоннокислого натрия при 4°С при постоянном перемешивании на шуттель-аппарате с частотой колебания 40 ходов/мин в течение 30 мин, взятого в объеме, в 2 раза меньшем, чем объем вируссодержащей жидкости, взятой для очистки и концентрирования. Полученный элюат проверяют на инфекционную активность и используют в качестве антигена при гипериммунизации продуцентов. К аденовирусу крупного рогатого скота штамм В-10 с инфекционной активностью 5,0 lg ТЦД50/см3 добавляют формалин в конечной концентрации 2,5% и инкубируют 24 часа при 36,5°С, добавляют гидроокись алюминия, взятого в конечной концентрации 8%, и получают смесь 2. Полученные антигены вируса ринотрахеита крупного рогатого скота штамм МВА (1) 80 №15, вируса парагриппа-3 крупного рогатого скота штамм МВА (1) 77 №14, вируса диареи-болезни слизистых крупного рогатого скота штамм ВК1-В1, ротавируса крупного рогатого скота штамм РП-82, коронавируса крупного рогатого скота штамм КП-83 смешивают в объемных соотношениях 1:0,8:0,8:0,8:0,8, соответственно и получают смесь 1. Смесью 1 и смесью 2 гипериммунизируют продуцента в две точки трехкратно: вторично через 21 день после первичного введения и третий раз - через 15 дней известным способом (2), на 7 день после гипериммунизации определяют титры антител в сыворотке крови продуцента и взятие крови у продуцента осуществляют при следующих значениях титров антител к вирусу ринотрахеита крупного рогатого скота штамм МВА (1) 80 №15, вирусу парагриппа-3 крупного рогатого скота штамм МВА (1) 77 №14, вирусу диареи-болезни слизистых крупного рогатого скота штамм ВК1-В1, аденовирусу крупного рогатого скота штамм В-10, ротавирусу крупного рогатого скота штамм РП-82, коронавирусу крупного рогатого скота штамм КП-83 1:8, 1:256, 1:16, 1:64, 1:128, 1:64 соответственно. Сыворотки продуцентов, полученные к смеси антигенов вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота штамм МВА (1)80 №15, вируса парагриппа-3 крупного рогатого скота штамм МВА (1)77 №14, вируса диареи-болезни слизистых крупного рогатого скота штамм ВК1-В1 генотип 1, ротавируса крупного рогатого скота штамм РП-82, коронавируса крупного рогатого скота штамм КП-83 объединяют с сывороткой, полученной на антиген аденовируса крупного рогатого скота штамм В-10 серотип 1, из расчета 1:0,8 соответственно, а консервируют целевой продукт путем добавления мертиолята в конечной концентрации 0,01%. Взятие крови у продуцента и консервирование целевого продукта проводят известным способом.
Пример 2. Отобраны производственные штаммы вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота штамм МВА (1) 80 №15 с инфекционной активностью 8,0 lg ТЦД50/см3, вируса парагриппа-3 крупного рогатого скота штамм МВА (1) 77 №14 с инфекционной активностью 7,0 lg ТЦД50/см3, вируса диареи-болезни слизистых крупного рогатого скота штамм ВК1-В1 генотипа 1 с инфекционной активностью 5,5 lg ТЦД50/см3, ротавируса крупного рогатого скота штамм РП-82 с инфекционной активностью 6,5 lg ТЦД50/см3, коронавируса крупного рогатого скота штамм КП-83 с инфекционной активностью 6,5 lg ТЦД50/см3. Каждый штамм выращивают отдельно и получают антигены вирусов кишечных и респираторных болезней телят известным способом (1).
Очистку и концентрирование антигенов проводят добавлением сульфата бария в конечной концентрации 10% при постоянном перемешивании на шуттель-аппарате с частотой колебания 60 ходов/мин при 37,5°С в течение 35 мин, осадок сорбента отделяют центрифугированием при 2000 об/мин в течение 20 мин при 6°С, элюцию вируса с сорбента проводят добавлением 0,25 М лимоннокислого натрия при 6°С при постоянном перемешивании на шуттель-аппарате с частотой колебания 60 ходов/мин в течение 35 мин, взятого в объеме, в 5 раз меньшем, чем объем вируссодержащей жидкости, взятой для очистки и концентрирования. Полученный элюат проверяют на инфекционную активность и используют в качестве антигена при гипериммунизации продуцентов. К аденовирусу крупного рогатого скота штамм В-10 с инфекционной активностью 6,5 lg ТЦД50/см3 добавляют формалин в конечной концентрации 3,0% и инкубируют 30 часов при 37,5°С, добавляют гидроокись алюминия, взятого в конечной концентрации 25%, и получают смесь 2. Полученные антигены вируса ринотрахеита крупного рогатого скота штамм МВА (1) 80 №15, вируса парагриппа-3 крупного рогатого скота штамм МВА (1) 77 №14, вируса диареи-болезни слизистых крупного рогатого скота штамм ВК1-В1, ротавируса крупного рогатого скота штамм РП-82, коронавируса крупного рогатого скота штамм КП-83 смешивают в объемных соотношениях 1:1,0:1,0:1,0:1,0 соответственно и получают смесь 1. Смесью 1 и смесью 2 гипериммунизируют продуцента в две точки трехкратно: вторично через 30 дней после первичного введения и третий раз - через 17 дней известным способом (2), на 10 день после гипериммунизации определяют титры антител в сыворотке крови продуцента и взятие крови у продуцента осуществляют при следующих значениях титров антител к вирусу ринотрахеита крупного рогатого скота штамм МВА (1) 80 №15, вирусу парагриппа-3 крупного рогатого скота штамм МВА (1) 77 №14, вирусу диареи-болезни слизистых крупного рогатого скота штамм ВК1-В1, аденовирусу крупного рогатого скота штамм В-10, ротавирусу крупного рогатого скота штамм РП-82, коронавирусу крупного рогатого скота штамм КП-83 1:32, 1:2048, 1:64, 1:256, 1:512, 1:1024 соответственно. Сыворотки продуцентов, полученные к смеси антигенов вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота штамм МВА (1)80 №15, вируса парагриппа-3 крупного рогатого скота штамм МВА (1)77 №14, вируса диареи-болезни слизистых крупного рогатого скота штамм ВК1-В1 генотип 1, ротавируса крупного рогатого скота штамм РП-82, коронавируса крупного рогатого скота штамм КП-83 объединяют с сывороткой, полученной на антиген аденовируса крупного рогатого скота штамм В-10 серотип 1, из расчета 1:0,8 соответственно, а консервируют целевой продукт путем добавления мертиолята в конечной концентрации 0,02%. Взятие крови у продуцента и консервирование целевого продукта проводят известным способом.
Пример 3. Отобраны производственные штаммы вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота штамм МВА (1) 80 №15 с инфекционной активностью 7,5 lg ТЦП50/см3, вируса парагриппа-3 крупного рогатого скота штамм МВА (1) 77 №14 с инфекционной активностью 6,5 lg ТЦД50/см3, вируса диареи-болезни слизистых крупного рогатого скота штамм ВК1-В1 генотипа 1 с инфекционной активностью 5,0 lg ТЦД50/см3, ротавируса крупного рогатого скота штамм РП-82 с инфекционной активностью 6,0 lg ТЦД50/см3, коронавируса крупного рогатого скота штамм КП-83 с инфекционной активностью 5,75 lg ТЦД50/см3. Каждый штамм выращивают отдельно и получают антигены вирусов кишечных и респираторных болезней телят известным способом (1).
Очистку и концентрирование антигенов проводят добавлением сульфата бария в конечной концентрации 7,5% при постоянном перемешивании на шуттель-аппарате с частотой колебания 50 ходов/мин при 37,0°С в течение 32,5 мин, осадок сорбента отделяют центрифугированием при 1750 об/мин в течение 17,5 мин при 5°С, элюцию вируса с сорбента проводят добавлением 0,25 М лимоннокислого натрия при 5°С при постоянном перемешивании на шуттель-аппарате с частотой колебания 50 ходов/мин в течение 32,5 мин, взятого в объеме, в 3,5 раза меньшем, чем объем вируссодержащей жидкости, взятой для очистки и концентрирования. Полученный элюат проверяют на инфекционную активность и используют в качестве антигена при гипериммунизации продуцентов. К аденовирусу крупного рогатого скота штамм В-10 с инфекционной активностью 5,75 lg ТЦД50/см3 добавляют формалин в конечной концентрации 2,75% и инкубируют 27 часов при 37,0°С, добавляют гидроокись алюминия, взятого в конечной концентрации 16,5%, и получают смесь 2. Полученные антигены вируса ринотрахеита крупного рогатого скота штамм МВА (1) 80 №15, вируса парагриппа-3 крупного рогатого скота штамм МВА (1) 77 №14, вируса диареи-болезни слизистых крупного рогатого скота штамм ВК1-В1, ротавируса крупного рогатого скота штамм РП-82, коронавируса крупного рогатого скота штамм КП-83 смешивают в объемных соотношениях 1:1:1:1:1 соответственно и получают смесь 1. Смесью 1 и смесью 2 гипериммунизируют продуцента в две точки трехкратно: вторично через 26 дней после первичного введения и третий раз - через 16 дней известным способом (2), на 10 день после гипериммунизации определяют титры антител в сыворотке крови продуцента и взятие крови у продуцента осуществляют при следующих значениях титров антител к вирусу ринотрахеита крупного рогатого скота штамм МВА (1) 80 №15, вирусу парагриппа-3 крупного рогатого скота штамм МВА (1) 77 №14, вирусу диареи-болезни слизистых крупного рогатого скота штамм ВК1-В1, аденовирусу крупного рогатого скота штамм В-10, ротавирусу крупного рогатого скота штамм РП-82, коронавирусу крупного рогатого скота штамм КП-83 1:32, 1:2048, 1:64, 1:512, 1:512, 1:1024 соответственно. Сыворотки продуцентов, полученные к смеси антигенов вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота штамм МВА (1)80 №15, вируса парагриппа-3 крупного рогатого скота штамм МВА (1)77 №14, вируса диареи-болезни слизистых крупного рогатого скота штамм ВК1-В1 генотип 1, ротавируса крупного рогатого скота штамм РП-82, коронавируса крупного рогатого скота штамм КП-83 объединяют с сывороткой, полученной на антиген аденовируса крупного рогатого скота штамм В-10 серотип 1, из расчета 1:0,95 соответственно, а консервируют целевой продукт путем добавления мертиолята в конечной концентрации 0,015%. Взятие крови у продуцента и консервирование целевого продукта проводят известным способом.
Пример 4. Изучение профилактической активности против энтеритов телят, вызванных вирусами диареи-болезни слизистых, аденовирусом, ротавирусом и коронавирусом крупного рогатого скота, составов 1-3, полученных согласно примерам 1-3.
По принципу аналогов подобрали 4 группы по 8 новорожденных телят. На 1-3 группах (опытные) испытывали соответственно составы 1-3. На 4-й (контрольной) группе испытывали известный состав - прототип. Телятам вводили сыворотку подкожно или внутримышечно по 15 см3 через 2 часа после рождения и повторно дважды - через 1 и 3 суток в той же дозе. Также испытуемые составы добавляли в молозиво в дозе 25 см3 в те же сроки.
Группа I - проводили испытание состава 1.
Группа II - проводили испытание состава 2.
Группа III - проводили испытание состава 3.
Группа IV - проводили испытание известного состава - прототипа.
В данных опытах были получены следующие результаты: в группах I-III все телята не заболели энтеритом, ни одно животное не погибло. В контрольной группе IV заболело энтеритом 5 телят, из которых 3 погибли.
Пример 5. Изучение профилактической активности против респираторных заболеваний телят, вызванных вирусами ринотрахеита, парагриппа-3 и диареи-болезни слизистых крупного рогатого скота, составов 1-3, полученных согласно примерам 1-3.
По принципу аналогов подобрали 4 группы по 8 новорожденных телят. На 1-3 группах (опытные) испытывали соответственно составы 1-3. На 4-й (контрольной) группе испытывали известный состав - прототип. Телятам вводили сыворотку подкожно или внутримышечно по 20 см3 через 2 часа после рождения и повторно дважды - через 1 и 3 суток в той же дозе. Также испытуемые составы добавляли в молозиво в дозе 30 см3 в те же сроки.
Группа I - проводили испытание состава 1.
Группа II - проводили испытание состава 2.
Группа III - проводили испытание состава 3.
Группа IV - проводили испытание известного состава - прототипа.
В данных опытах были получены следующие результаты: в опытных группах I-III все телята не заболели вирусными респираторными заболеваниями, ни одно животное не погибло. В контрольной группе IV заболело парагриппом-3 - 2 теленка, инфекционным ринотрахеитом - 2 теленка, из которых 2 теленка погибли.
Пример 6. Изучение лечебного эффекта против энтеритов телят, вызванных вирусами диареи-болезни слизистых, аденовирусом, ротавирусом и коронавирусом крупного рогатого скота, составов 1-3, полученных согласно примерам 1-3.
По принципу аналогов подобрали 4 группы по 8 новорожденных телят, больных вирусной диареей. На 1-3 группах (опытные) испытывали соответственно составы 1-3. На 4-й (контрольной) группе испытывали известный состав - прототип. Телятам вводили сыворотку внутримышечно по 25 см3 дважды в сутки в течение 3-4 дней или внутривенно в той же дозе после 2-3-кратного разведения сыворотки стерильным физиологическим раствором 2-3 раза с интервалом в один день. Также испытуемые составы добавляли в молозиво в дозе 25 см3 в те же сроки.
Группа I - проводили испытание состава 1.
Группа II - проводили испытание состава 2.
Группа III - проводили испытание состава 3.
Группа IV - проводили испытание известного состава - прототипа.
В данных опытах были получены следующие результаты: в группах I-III все телята выздоровели к 5-6 дню испытаний, ни одно животное не погибло. В контрольной группе IV в течение 8-ми дней испытаний выздоровело 5 телят, и 3 теленка погибли.
Пример 7. Изучение лечебного эффекта против респираторных заболеваний телят, вызванных вирусами ринотрахеита, парагриппа-3 и диареи-болезни слизистых крупного рогатого скота, составов 1-3, полученных согласно примерам 1-3.
По принципу аналогов подобрали 4 группы по 8 новорожденных телят, больных вирусными респираторными заболеваниями. На 1-3 группах (опытные) испытывали соответственно составы 1-3. На 4-й (контрольной) группе испытывали известный состав - прототип. Телятам вводили сыворотку внутримышечно из расчета 1,0-1,5 см3 на 1 кг массы животного один раз в сутки 3-5 дней подряд или внутривенно в той же дозе после 2-3-кратного разведения сыворотки стерильным физиологическим раствором 2-3 раза с интервалом в два дня.
Группа I - проводили испытание состава 1.
Группа II - проводили испытание состава 2.
Группа III - проводили испытание состава 3.
Группа IV - проводили испытание известного состава - прототипа.
В данных опытах были получены следующие результаты: в опытных группах I-III все телята выздоровели к 6-7 дню испытаний, ни одно животное не погибло. В контрольной группе IV в течение 9 дней испытаний выздоровело 6 телят, 2 теленка погибли.
Таким образом, предлагаемый способ позволяет на 25-30% повысить выживаемость телят при вирусных кишечных и респираторных болезнях, а также ускорить в 1,2-1,4 раза процесс лечения и профилактики вирусных кишечных и респираторных болезней телят (или с 8-9 дней до 3-7 суток).
Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии. Способ заключается в том, что для получения антигенов используют вирус инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота штамм МВА (1)80 №15 с инфекционной активностью 7,0-8,0 lg ТЦД50/см3, вирус парагриппа-3 крупного рогатого скота штамм МВА (1)77 №14 с инфекционной активностью 6,0-7,0 lg ТЦД50/см3, вирус диареи-болезни слизистых крупного рогатого скота штамм ВК1-В1 генотип 1 с инфекционной активностью 4,5-5,5 lg ТЦД50/см3, ротавирус крупного рогатого скота штамм РП-82 с инфекционной активностью 5,5-6,5 lg ТЦД50/см3, коронавирус крупного рогатого скота штамм КП-83 с инфекционной активностью 5,0-6,5 lg ТЦД50/см3. Очистку и концентрирование вирусов проводят добавлением сульфата бария в конечной концентрации 5-10%. Осадок сорбента отделяют центрифугированием. Элюцию вируса с сорбента проводят добавлением 0,2-0,25 М раствора лимоннокислого натрия. Полученные антигены смешивают в объемных соотношениях 1:(0,8-1,2):(0,8-1,2):(0,8-1,2):(0,8-1,2)):(0,8-1,2). К аденовирусу крупного рогатого скота штамм В-10 серотип 1 с инфекционной активностью 5,0-6,5 lg ТЦД50/см3 добавляют формалин в конечной концентрации 2,5-3,0% и инкубируют в течение 24-30 часов при 36,5-37,5°С. Затем добавляют гидроокись алюминия и получают антиген к аденовирусу крупного рогатого скота штамм В-10 серотип 1. После чего продуцентов гипериммунизируют отдельно - смесью антигенов и антигеном аденовируса крупного рогатого скота штамм В-10 серотип 1 в две точки трехкратно. На 7-10 день после гипериммунизации определяют титры антител в сыворотке крови продуцентов. Взятие крови у продуцентов осуществляют при определенных значениях титров антител. После чего сыворотки продуцентов, полученные к смеси антигенов вирусов, объединяют с сывороткой, полученной на антиген аденовируса крупного рогатого скота штамм В-10 серотип 1, из расчета 1:(0,8-1,2) соответственно. Консервируют целевой продукт путем добавления мертиолята в конечной концентрации 0,01-0,02%. Способ позволяет успешно профилактировать заражение телят вирусными кишечными и респираторными болезнями, сократить сроки лечения заболевших телят и на 25-30% повысить их выживаемость.
Способ получения сыворотки для лечения и профилактики вирусных кишечных и респираторных болезней телят путем отдельного выращивания возбудителей вирусных кишечных и респираторных болезней телят, получения антигенов из вирусов, вызывающих кишечные и респираторные болезни телят путем очистки, гипериммунизацию антигенами продуцентов, определение титров антител в сыворотке крови продуцентов с последующим взятием крови у продуцентов и консервированием целевого продукта, отличающийся тем, что для получения антигенов используют вирус инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота штамм МВА (1)80 №15 с инфекционной активностью 7,0-8,0 lg ТЦД50/см3, вирус парагриппа-3 крупного рогатого скота штамм МВА (1)77 №14 с инфекционной активностью 6,0-7,0 lg ТЦД50/см3, вирус диареи-болезни слизистых крупного рогатого скота штамм ВК1-В1 генотип 1 с инфекционной активностью 4,5-5,5 lg ТЦД50/см3, ротавирус крупного рогатого скота штамм РП-82 с инфекционной активностью 5,5-6,5 lg ТЦД50/см3, коронавирус крупного рогатого скота штамм КП-83 с инфекционной активностью 5,0-6,5 lg ТЦД50/см3, аденовирус крупного рогатого скота штамм В-10 серотип 1 с инфекционной активностью 5,0-6,5 lg ТЦД50/см3, очистку и концентрированно вирусов проводят добавлением сульфата бария в конечной концентрации 5-10% при постоянном перемешивании на шуттель-аппарате с частотой колебания 40-60 ходов/мин при 36,5-37,5°С в течение 30-35 мин, осадок сорбента отделяют центрифугированием при 1500-2000 об/мин в течение 15-20 мин при 4-6°С, элюцию вируса с сорбента проводят добавлением 0,2-0,25 М раствора лимоннокислого натрия при 4-6°С при постоянном перемешивании на шуттель-аппарате с частотой колебания 40-60 ходов/мин при 4-6°С в течение 30-35 мин, полученные антигены вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота штамм МВА (1)80 №15, вируса парагриппа-3 крупного рогатого скота штамм МВА (1)77 №14, вируса диареи-болезни слизистых крупного рогатого скота штамм ВК1-В1 генотип 1, ротавируса крупного рогатого скота штамм РП-82, коронавируса крупного рогатого скота штамм КП-83 смешивают в объемных соотношениях 1:(0,8-1,2):(0,8-1,2):(0,8-1,2):(0,8-1,2)):(0,8-1,2), а к аденовирусу крупного рогатого скота штамм В-10 серотип 1 добавляют формалин в конечной концентрации 2,5-3,0% и инкубируют в течение 24-30 ч при 36,5-37,5°С, с последующим добавлением гидроокиси алюминия, взятой в конечной концентрации 8-25%, получают антиген к аденовирусу крупного рогатого скота штамм В-10 серотип 1, после чего продуцентов гипериммунизируют отдельно - смесью антигенов вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота штамм МВА (1)80 №15, вируса парагриппа-3 крупного рогатого скота штамм MB A (1)77 №14, вируса диареи-болезни слизистых крупного рогатого скота штамм ВК1-В1 генотип 1, ротавируса крупного рогатого скота штамм РП-82, коронавируса крупного рогатого скота штамм КП-83 и антигеном аденовируса крупного рогатого скота штамм В-10 серотип 1 в две точки трехкратно - через 21-30 дней после первичного введения и через 15-17 дней после вторичного введения, на 7-10 день после гипериммунизации определяют титры антител в сыворотке крови продуцентов, и взятие крови у продуцентов осуществляют при следующих значениях титров антител к вирусу инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота штамм МВА (1)80 №15, вирусу парагриппа-3 крупного рогатого скота штамм МВА (1)77 №14, вирусу диареи-болезни слизистых крупного рогатого скота штамм ВК1-В1 генотип 1, ротавирусу крупного рогатого скота штамм РП-82, коронавирусу крупного рогатого скота штамм КП-83 - 1:8-32, 1:256-2048, 1:16-64, 1:128-512, 1:64-1024, соответственно, и к аденовирусу крупного рогатого скота штамм В-10 серотип 1 - 1:64-512, после чего сыворотки продуцентов, полученные к смеси антигенов вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота штамм МВА (1)80 №15, вируса парагриппа-3 крупного рогатого скота штамм МВА (1)77 №14, вируса диареи-болезни слизистых крупного рогатого скота штамм ВК1-В1 генотип 1, ротавируса крупного рогатого скота штамм РП-82, коронавируса крупного рогатого скота штамм КП-83 объединяют с сывороткой, полученной на антиген аденовируса крупного рогатого скота штамм В-10 серотип 1, из расчета 1:(0,8-1,2), соответственно, а консервируют целевой продукт путем добавления мертиолята в конечной концентрации 0,01-0,02%.
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА НА ОСНОВЕ ВИРУСНО-БАКТЕРИАЛЬНЫХ ШТАММОВ ИЗ МЕСТНОГО ОЧАГА ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ АССОЦИИРОВАННОЙ ВАКЦИНЫ ИЛИ ПОЛИВАЛЕНТНОЙ ГИПЕРИММУННОЙ СЫВОРОТКИ ПРОТИВ ЗАБОЛЕВАНИЙ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА | 1998 |
|
RU2147892C1 |
| ПОЛИСПЕЦИФИЧЕСКАЯ ГИПЕРИММУННАЯ СЫВОРОТКА ПРОТИВ РОТА-, КОРОНА-, ГЕРПЕСВИРУСОВ И E.coli (K 99, A 20) ДЛЯ ЛОКАЛЬНОЙ ЗАЩИТЫ И ИММУНОТЕРАПИИ СМЕШАННЫХ ФОРМ ДИАРЕИ НОВОРОЖДЕННЫХ ТЕЛЯТ | 1999 |
|
RU2145504C1 |
| СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ РЕСПИРАТОРНЫХ БОЛЕЗНЕЙ ТЕЛЯТ | 2000 |
|
RU2189811C2 |
| ГАФФАРОВ Х.З | |||
| и др | |||
| Полиспецифическая сыворотка как средство экстренной профилактики и лечения рота-, коронавирусной и эшерихиозной диареи новорожденных телят | |||
| Научные основы технологии промышленного производства ветеринарных биологических препаратов | |||
| Тезисы докладов V Всероссийской конференции, 14-17 мая 1996 | |||
| Предохранительное устройство для паровых котлов, работающих на нефти | 1922 |
|
SU1996A1 |
