СРЕДСТВО, ОБЛАДАЮЩЕЕ АНОРЕКСИЧЕСКИМ, ГИПОГЛИКЕМИЧЕСКИМ И ГИПОЛИПИДЕМИЧЕСКИМ ДЕЙСТВИЕМ Российский патент 2011 года по МПК A61K36/185 A61P3/04 A61P3/10 

Изобретение относится к области фармации, а именно к созданию средства на основе растительного компонента, обладающего анорексическим, гипогликемическим и гиполипидемическим действием.

Для лечения нарушений углеводного и липидного обмена чаще всего используют синтетические лекарственные препараты. Так, гипогликемической и гиполипидемической активностью обладают производные тиазолидина и тиазолидиндиона (патенты EP 013942, опубл. 05.02.1985; EP 0177353, опубл. 09.04.1986; EP 0306228, опубл. 08.03.1989). Для снижения в крови содержания холестерина и липопротеидов используются такие препараты, как пармидин, клофибрат, полиспонин и др. (Соколов С.Л., Замотаев И.П. Справочник по лекарственным растениям (Фитотерапия). 2-е изд. - М.: Медицина, 1988. - 464 с.).

В качестве анорексигенных средств используют синтетические соединения негормональной природы, например 3,4-дифенилхроманы (патент RU 97113700, опубл. 20.07.99), производные 1,5-бензодиазепина (патент RU 2135486, опубл. 27.08.99).

Однако при использовании вышеперечисленных препаратов часто наблюдается появление побочных эффектов. Длительное применение полиспонина может вызывать потерю аппетита, потливость, кожный зуд. Прием препаратов клофибрат и пармидин вызывает расстройства пищеварения: тошнота, рвота, поносы, кожная сыпь (Машковский М.Д. Лекарственные средства, 12-е изд., перераб. и доп. - М.: Медицина, 1998. Ч.2).

Бадан толстолистый (Bergenia crassifolia L.) обладает широким спектром биологической активности. В листьях бадана выявлено высокое содержание дубильных веществ, значительное количество арбутина, витамина C, фитонциды, а также значительное количество марганца, железа и меди. Бадан обладает церебропротекторным действием, антигипоксической и антирадикальной активностью (патент RU 214330, опубл. 20.11.1999; патент RU 214331, опубл. 20.11.1999), стимулирует образование интерферона (патент UA 7600, опубл. 15.06.2006), обладает адаптогенной активностью (патент RU 2076727, опубл. 10.04.1997). Листья бадана входят в рецептуру бальзама «Панта» с тонизирующим эффектом (патент RU 2111236, опубл. 20.05.1998) и «Витаген» (патент RU 2085579, опубл. 27.07.1997) с лечебно-профилактическим действием. Черные листья бадана В. crassifolia в сочетании с цветками Matricaria chamomilia L., травой Achillea millefolum L. и листьями Mentha piperita L. используются для получения экстракта с противовоспалительной активностью (Лубсанджоржиева П.Б., Ажунова Т.А., Цыбанов К.Ц. Получение экстракта сухого из 4-компонентного сбора и содержание в нем биологически активных веществ // Химия растительного сырья. - 2008, №1. С.107-110). Кроме индивидуального использования черные перезимовавшие листья В. crassifolia входят в состав фиточая для получения профилактического напитка с гинекологическим профилем (патент RU 2169481, опубл. 27.06.2001), средства, обладающего радиозащитной активностью и применяющегося при лечении и профилактике лучевой болезни (патент RU 203558, опубл. 10.05.1995).

Задачей настоящего изобретения является создание растительного средства, обладающего гипогликемическим, гиполипидемическим действием и способностью подавлять аппетит при отсутствии побочных эффектов.

Поставленная задача решается созданием средства, обладающего анорексическим, гипогликемическим, гиполипидемическим действием, которое представляет собой водный экстракт черных и бурых листьев бадана Bergenia crassifolia, собранных после 1-2-х зимовок, которые перед экстрагированием сушат при температуре 35-45°C до постоянной массы с последующим измельчением листьев.

Способ приготовления экстракта.

Черные и бурые листья собраны после 1-2-х зимовок, их сушили при температуре 35-45°C до постоянной массы в течение 24 часов. После сушки образец дополнительно измельчали. Затем получали водные экстракты в соответствии с требованиями Государственной фармакопеи XI (вып.2).

Содержание основных идентифицированных биологически активных веществ (БАВ) в экстракте бадана определяли методом ВЭТСХ в системе растворителей толуол/этил ацетат/муравьиная кислота/метанол (3:3:0.8:0.2, по объему) методом прямой денситометрии при 280 нм (Pozharitskaya O.N., Ivanova S.A., Shikov A.N. et al. Separation and evaluation of free radical-scavenging activity of phenol components of green, brown and black leaves of Bergenia crassifolia by using HPTLC-DPPH method // J Sep Sci. - 2007. - Vol.30, N 15. - P.2447-2451).

Содержание основных биологически активных веществ, идентифицированных в водном сухом экстракте листьев бадана, представлено в таблице 1.

Таблица 1 БАВ Содержание, % Выход (с учетом механических потерь) 17,6 Арбутин 0,3 Бергенин 2,0 Эллаговая кислота 0,15 Галловая кислота 1,6 Протокатеховая кислота 0,2 Гидрохинон 0,2

Влияние экстракта бадана на аппетит.

Эксперименты проведены на крысах-самках линии Wistar, вес к началу исследования 320-370 г, возраст 6-8 месяцев.

1. Животных размещали в клетках по 3 особи. Кормушки наполняли стандартным кормом. Обеспечивали достаточное количество жидкости.

2. Спустя две недели животных взвешивали и наполняли кормушки стандартным кормом и «диетой кафетерия». Регистрировали потребление пищи и вес на протяжении 23 дней.

3. Через 14 дней от начала «диеты кафетерия» начали введение исследуемого образца экстракта бадана. Экстракт вводили ежедневно однократно в одно и то же время суток в течение 8-ми дней. Разовая доза составляла 50 мг/кг.

4. На 9-й день после начала введения экстракта бадана животных лишали пищи на период 18 часов.

5. Через 18 часов еще раз вводили исследуемый экстракт и плацебо. Сразу после этого предварительно взвешенный корм помещали в клетку. Оставшуюся пищу взвешивали через 30, 90 минут, 3, 6 часов после помещения кормушки в клетку.

Рацион вивария представлял собой сухой гранулированный корм по 33,2 г на 1 животное с общей калорийностью на 1 животное 102,8 ккал. «Диета кафетерия» содержала 25-35% жиров и 25-30% легкоусвояемых углеводов в дополнение к стандартному рациону грызунов.

Калорийность питания групп, получавших «диету кафетерия», по сравнению с интактной группой была выше на 23%.

Динамика потребления пищи на фоне «диеты кафетерия» и применения исследуемого препарата в граммах представлена в таблице 2.

Таблица 2 День эксперимента Интактные Контроль Экстракт бадана 1 22,6±0,2 23,0±1,8 20,9±1,2 2 26,4±1,2 26,2±1,2 17,8±2,1 3 27,3±0,6 21,2±1,1 27,3±0,4 4 19,3±0,6 26,0±0,6 22,8±1,0 5 23,0±0,6 24,6±1,3 21,9±1,3 6 26,9±0,1 24,0±0,8 22,2±1,3 7 27,1±0,7 28,3±1,0 24,6±1,4 8 21,0±0,8 29,2±0,6 27,3±1,5 9 23,4±1,1 29,9±0,5 28,4±0,7 10 23,7±0,8 31,2±0,6 28,6±1,1 11 28,0±1,2 31,5±0,8 31,6±1,5 12 19,7±0,3 30,1±0,9 27,2±1,5 13 23,6±0,3 28,2±1,2 20,6±1,2 14 24,8±1,1 26,5±1,9 17,5±0,7 15 22,5±0,8 25,4±1,5 16,5±0,9 16 19,4±0,8 27,0±0,8 13,9±1,2 17 27,8±0,7 24,5±1,5 15,3±0,6 18 28,1±1,4 25,7±1,5 13,7±0,4 19 21,9±0,7 29,9±1,8 17,4±0,3 20 27,8±1,5 27,3±1,5 16,2±0,5 21 31,6±1,1 27,8±1,9 21,4±0,6 22 27,8±1,5 27,3±1,5 16,2±0,5 23 31,6±1,1 27,8±1,9 21,4±0,6 Среднее потребление с 8 по 14 дни 23,2 30,0 27,3 Среднее потребление с 16 по 23 дни 25,5 26,8 16,5 Δ между средними -2,3 +3,2 +10,8

Из представленных данных следует, что на фоне применения «диеты кафетерия» отмечалось увеличение потребления пищи животными, которое носило устойчивый характер: начиная с 8-х суток потребления «диеты кафетерия» во всех группах по сравнению с животными, находящимися на стандартной диете (интактная группа), в 1,2-1,4 раза.

Введение экстракта приводило к снижению аппетита у животных: экстракт способствовал уменьшению потребления пищи через 23 дня на 38%.

Следующим этапом исследования было изучение влияния экстракта бадана на аппетит после голодания.

После 18-часового голодания животным был возвращен корм, массу потребленного корма регистрировали через 30, 90 минут, 3 и 6 часов.

Динамика потребления пищи на фоне «диеты кафетерия» после 18-часового голодания и применения исследуемых препаратов в граммах (М±м) представлена в таблице 3.

Таблица 3 Группы 30 мин 90 мин 3 часа 6 часов Интактные 2,6±0,1 2,3±0,2 2,1±0,0 3,0±0,3 Контроль 4,8±0,9 3,5±0,3 3,1±0,5 2,5±0,5 Экстракт бадана 5,1±1,1 3,9±0,1 2,9±0,4 2,1±0,2

Между интактной и контрольной группами животных была установлена существенная разница в потреблении корма (таблица 3). Контрольные животные через полчаса после возвращения корма в кормовое углубление клетки потребляли корма на 85% больше, чем интактные животные. Через 90 минут разрыв между контрольной и интактной группами сократился до 52%, через 3 часа - до 48%, через 6 часов обе группы потребляли уже практически одинаковое количество пищи.

На фоне применения экстракта бадана в течение первых 90 минут наблюдалось увеличение аппетита по сравнению с контрольной и интактной группами, тенденция к снижению этого показателя наблюдалась через 3 часа (7%), а через 6 часов аппетит у животных был ниже, чем у интактной группы на 16%.

Таким образом, экстракт бадана обладает способностью снижать аппетит, эффект наступает через 3-6 часов после его введения.

Влияние экстракта на углеводный обмен.

Кровь для определения уровня глюкозы забирали пять раз: до начала «диеты кафетерия», на 9 и 15 день «диеты кафетерия» (до начала введения препарата), до и после голодания. Каждый забор крови включал в себя построение сахарной кривой (кровь забиралась натощак, после этого внутрижелудочно вводили раствор глюкозы из расчета 1 г/кг, после чего кровь отбирали через 1 и 2 часа).

Был исследован уровень глюкозы «натощак» и после сахарной нагрузки глюкозо-толерантный тест. Данные по концентрации глюкозы в крови животных, ммоль/л, на фоне «диеты кафетерия» и применения экстракта бадана представлены в таблице 4.

Таблица 4 Дни эксперимента Часы Интактные Контроль Экстракт 1 день 0 2,7±0,2 3,4±0,3 2,5±0,4 1 2,8±0,4 2,8±0,4 5,2±0,9 2 2,9±0,2 3,8±0,4 5,2±0,8 9 день 0 1,9±0,2 2,6±0,2 3,0±0,4 1 2,4±0,3 2,8±0,1 3,0±0,2 2 0,2±0,1_** ^* 0,7±0,3_** ^* 1,2±0,4_** ^* 15 день 0 3,2±0,3 2,9±0,3 3,3±0,1 1 4,3±0,3 6,0±0,9 3,4±0,1 2 3,1±0,8 8,1±1,0 4,6±1,3 23 день 0 2,2±0,3 2,4±0,3 3,5±0,3 1 3,5±0,3 6,6±0,6 3,9±0,3 2 3,1±0,2 10,3±1,4_** ^* 8,7±1,1_** ^* 24 день 0 1,7±0,2 2,1±0,6 0,8±0,1 1 3,5±0,2 6,8±0,5 4,2±0,1 2 3,0±0,4 12,1±0,8_** ^* 6,4±0,9* Примечание: * - здесь и далее различия статистически значимы по сравнению с 0 часом регистрации глюкозы (натощак); ** - здесь и далее различия статистически значимы по сравнению с 1 часом регистрации глюкозы (натощак).

Изменение уровня глюкозы у группы интактных животных, ммоль/л, приведено на фиг.1. У интактных животных уровень глюкозы изменялся в пределах физиологической нормы: в ответ на сахарную нагрузку почечный порог (10 ммоль/л) не был превышен.

Изменение уровня глюкозы у группы контрольных животных, ммоль/л, приведено на фиг.2. К 15 дню пребывания на «диете кафетерия» у животных было отмечено повышение уровня глюкозы в плазме крови через 1 и 2 часа после сахарной нагрузки, что характеризует нарушенную толерантность к глюкозе и является фактором риска для развития сахарного диабета II типа. К концу исследования у животных контрольной группы наблюдалось устойчивое нарушение толерантности к глюкозе с повышением уровня глюкозы через 2 часа после сахарной нагрузки выше почечного порога.

Изменение уровня глюкозы у животных, получавших экстракт бадана, ммоль/л, приведено на фиг.3. В группах животных, получавших сухой экстракт бадана на фоне «диеты кафетерия», в первые пятнадцать дней пребывания на диете сахарная кривая практически не отличалась от уровня интактных животных. При проведении сахарной нагрузки на вторые сутки наблюдали снижение содержания глюкозы в крови через 1 час - 41%, через 2 часа - 16%.

К 15 дню пребывания на «диете кафетерия» у животных этой группы было отмечено незначительное повышение уровня глюкозы в плазме крови через 2 часа после сахарной нагрузки в группе. К концу эксперимента у животных, получавших экстракт листьев бадана, уровень глюкозы через 2 часа после сахарной нагрузки не превышал почечного порога.

Влияние экстракта на липидный обмен.

Результаты исследования состояния липидного обмена у животных на фоне «диеты кафетерия» и применения исследуемых препаратов представлены в таблице 5.

Таблица 5 Группы Триглицериды, ммоль/л Холестерин, ммоль/л Интактные 0,63±0,11 1,87±0,08 Контроль 2,84±0,57* 2,80±0,17* Экстракт бадана 1,28±0,20_** ^* 2,45±0,24* Нормальные значения 0-1,70 (до 2,26) 0-5,7 (до 6,70) Примечание: * - здесь и далее различия статистически значимы по сравнению с группой интактных животных; ** - здесь и далее различия статистически значимы по сравнению с группой контрольных животных, при p<0,05 (по критерию Стьюдента).

Уровень триглицеридов у животных на фоне применения «диеты кафетерия» увеличивался в 4,5 раза и превышал физиологический уровень, тогда как уровень холестерина оставался в пределах нормы (таблица 5). На фоне применения экстракта наблюдалось достоверное снижение (на 55%) уровня триглицеридов. На уровень холестерина животных экстракт не оказал существенного влияния.

Таким образом, сухой экстракт бадана обладает выраженным гипогликемическим, гиполидимическим действием и способен подавлять аппетит.

Изобретение относится к области фармации, а именно к созданию средства на основе растительного компонента, обладающего анорексическим, гипогликемическим и гиполипидемическим действием. Задачей настоящего изобретения является создание растительного средства, обладающего гипогликемическим, гиполипидемическим действием и способностью подавлять аппетит при отсутствии побочных эффектов. Поставленная задача решается созданием средства, обладающего анорексическим, гипогликемическим, гиполипидемическим действием, которое представляет собой водный экстракт черных и бурых листьев бадана Bergenia crassifolia, собранных после 1-2-х зимовок, которые перед экстрагированием сушат при температуре 35-45°С до постоянной массы с последующим измельчением листьев. 5 табл., 3 ил.

Средство, обладающее анорексическим, гипогликемическим и гиполипидемическим действием, характеризующееся тем, что оно представляет собой водный экстракт черных и бурых листьев бадана Bergenia crassifolia, собранных после 1-2-х зимовок, которые перед экстрагированием сушат при температуре 35-45°С до постоянной массы с последующим измельчением листьев.