ИММУНОМЕТАБОЛИЧЕСКИЙ АНТГЕЛЬМИНТНЫЙ ПРЕПАРАТ Российский патент 2011 года по МПК A61K31/429 A61K33/10 

Изобретение относится к ветеринарии, в частности, к ветеринарной иммунологии, гельминтологии и гепатологии.

В настоящее время приобретенные иммунодефициты и нарушения обменных процессов являются актуальнейшими проблемами ветеринарной и гуманной медицины. Эти патологии тесно связаны между собой и зачастую обусловлены токсикозами алиментарного, инфекционного и инвазионного происхождения.

В последнее время ведется интенсивный поиск средств для стимулирования иммунной системы и метаболических процессов при разного генеза патофизиологических состояниях. Это, как правило, комплексные препараты.

Задачей настоящего изобретения является разработка комплексного препарата, обладающего иммунометаболическим и противонематозным действием, введение которого вызывало бы системный лечебно-профилактический эффект, направленный на нормализацию обменных и иммунных процессов, а также гепатопротекторной и антгельминтной активностью.

В качестве наиболее близкого аналога нами взят комплексный препарат для лечения гепатоза животных (патент РФ № 2200547, 2003 г.). Данный препарат содержит в своем составе аминокислоту L-аргинин, нуклеинат натрия и раствор Хенкса. Препарат оказывает выраженное иммуностимулирующее действие на Т-систему иммунитета и обеспечивает восстановление репаративных процессов в печени при инвазионном гепатозе. Однако препарат не обладает антгельминтной активностью и недостаточно эффективен при токсикозах и гепатозах.

В качестве прототипа взят антгельминтный комплексный препарат против нематодозов животных (патент РФ №2200548, 2003 г.). Данный препарат включает в своем составе антгельминтик нилверм (на основе левамизола), нуклеинат натрия - иммуномодулятор, аминокислоту L-аргинин и в качестве растворителя, раствор Хенкса.

Данный препарат обеспечивает высокую антгельминтную активность. Однако, как свидетельствуют наблюдения, он недостаточно эффективен при токсикозах, гепатозах и обладает побочным действием на организм животных.

Для усиления гепатопротекторной активности в состав заявляемого препарата была включена янтарная кислота.

Янтарная кислота (ЯК) является мощным стимулятором обмена веществ живой клетки. Объектом ее действия являются клетки и ткани, находящиеся в состоянии возбуждения или патологически измененные. Практически при всех патофизиологических состояниях ЯК и ее соли дают нетипично высокий лечебный эффект. Положительное влияние ЯК на организм обнаруживается при относительно низких дозах - 0,5-1 мг/кг массы тела.

В настоящее время ЯК активно используется для получения лекарственных препаратов с улучшенными фармакологическими свойствами, в клинике оперативного лечения токсикозов и гепатитов разного генеза.

В качестве антгельминтика и иммуномодулятора в состав комплексного препарата включен левамизол.

Левамизол - высокоэффективный антгельминтик и иммуномодулятор преимущественно клеточной системы иммунитета. Однако обладает выраженным побочным, преимущественно судорожным, действием на организм, в связи с чем его неохотно используют в клинике лечения больных животных.

Предложенный иммунометаболический противонематозный препарат в качестве антгельминтика и иммуностимулятора содержит левамизол, а в качестве метаболика - янтарную кислоту при рН 4-4,5, при этом компоненты, входящие в его состав, взяты в следующем соотношении, мас.%:

Левамизол - 7,5

Янтарная кислота - 1,0

Вода - Остальное

Получили комплексный препарат путем добавления в стандартный раствор левамизола (75 мг/мл - действующего вещества), порошка янтарной кислоты - 10 мг/ мл. При нагревании до 38-40°С и постоянном перемешивании янтарная кислота растворилась, не изменив физикохимических свойств стандартного раствора. Добавлением 10% раствора гидроокиси натрия довели рН до исходной величины, равной 4-4,5. Полученный препарат расфасовали по флаконам емкостью 50,0 мл и подвергли стерилизации автоклавированием в режиме 1-1,1 атм. в течение 20 минут. Стерилизация автоклавированием не изменила физико-химических и антгельминтных свойств комплексного препарата.

Полученный комплексный иммунометаболический препарат представляет собой прозрачный бесцветный стерильный раствор. Качественный и количественный состав предлагаемого препарата, по сравнению со стандартным раствором левамизола и прототипом, позволяет выраженно снизить токсичность антгельминтика - иммуностимулятора левамизола, обеспечить высокий гепатопротекторный, иммунометаболический и противонематозный эффект. Качественный и количественный состав предлагаемого препарата обеспечивает достижение синергетического эффекта, что иллюстрируется примерами его экспериментального испытания.

Используя стандартный раствор левамизола с активностью 75 мг/мл в его состав ввели янтарную кислоту в количестве 10, 20 и 30 мг/мл. После чего были изготовлены экспериментальные растворы с концентрацией 5, 7,5 и 10,0 предельных терапевтических доз для мышей массой 20 г. Аналогично были приготовлены разведения левамизола без янтарной кислоты (контроль).

Пример 1. Оценка противосудорожного и летального эффекта. Опыты провели на белых мышах массой 19-21 г. В первой серии опытов опытной группе мышей (n=5) внутрибрюшинно в объеме 0,25 мл ввели комплексный состав левамизола с янтарной кислотой, контрольной группе мышей (n=5) аналогично ввели стандартный раствор левамизола в объеме 0, 24 мл. Спустя 2-3 минуты у всех контрольных мышей наблюдали бурно выраженные судороги. Все контрольные мыши погибли в течении 3-5 минут после введения левамизола. Напротив, у мышей опытной группы развитие судорог и гибель мышей наблюдали спустя 10-15 минут.

Практически аналогичные данные были получены на группах мышей, которым вводился раствор левамизола с активностью 7,5 и 5 терапевтических доз. Результаты сравнительного испытания комплексного состава левамизола с янтарной кислотой и стандартного раствора левамизола представлены в таблице 1.

Таким образом, введение в состав стандартного раствора левамизола 1% янтарной кислоты обеспечило выраженное снижение противосудорожной активности. Следует отметить, что в сериях опытов на белых мышах включение в состав стандартного раствора левамизола янтарной кислоты 20 и 30 мг/мл не обеспечивало улучшение фармакологических свойств препарата. Таким образом включение в состав стандартного раствора левамизола ЯК в количестве 1% (10 мг/мл) является наиболее рациональным, позволяющем обеспечить выраженный эффект снижения токсичности левамизола.

Пример 2. Изучение иммуностимулирующего и метаболического действия комплексного препарата провели на поросятах-гипотрофиках 25-30 дневного возраста. Опытной группе поросят (n=5) внутримышечно инъецировали комплексный препарат (левамизол + ЯК) в объеме 1,0 мл. Контрольной группе (n=5) аналогично ввели стандартный раствор левамизола. Спустя 10-15 минут у всех поросят контрольной группы были отмечены выраженные признаки нервного возбуждения, позывы на рвоту и рвота. Признаки возбуждения проявлялись в течение часа. Поросята опытной группы хорошо перенесли инъекции препарата. Побочного действия не отмечено.

Контрольные исследования влияния препаратов на иммунобиохимический статус поросят провели на 5 и 14 сутки. Результаты иммунобиохимических исследований представлены в таблице 2.

Пример 3. Изучение гепатопротекторной активности предлагаемого комплексного препарата провели на коровах в период регистрации у них биохимических нарушений, свойственных заболеванию гепатитом. В качестве сравнения использовали стандартный раствор левамизола и опытной образец препарата, приготовленного согласно описанию в изобретении № 2200547 (препарат для лечения гепатоза животных).

По результатам биохимических и клинических исследований было отобрано 20 коров с симптомокомплексом гепатодистрофии, из которых сформировали 4 подопытных группы, по 5 особей в каждой. Коровам первой группы однократно в объеме 10 мл внутримышечно ввели левамизол + ЯК; животным второй группы - в аналогичном объеме левамизол, коровам третьей группы - препарат для лечения гепатоза (аналог), коровам четвертой группы - физиологический раствор - 10,0 мл.

Таблица 3 Сравнительная оценка влияния комплексного препарата левамизол + янтарная кислота, левамизола и препарата для лечения гепатоза на некоторые биохимические показатели крови коров при гепатозе показатели препараты левамизол + ЯК левамизол препарат для лечения гепатоза физиологический раствор Белок, г/л         до введения 9,75±0,53 9,52±0,84 9,28±1,22 9,27±0,48 через 7 дней 8,12±0,75 9,96±1,12 8,74±0,82 9,15±0,62 через 14 дней 8,10±0,84 9,84±0,64 8,96±1,15 9,28±0,56 Резервная щелочность, мг %         до введения 32,62±7,14 33,63±5,72 32,28±6,14 38,74±6,21 через 7 дней 49,32±5,41 32,92±6,14 39,12±5,38 39,62±7,14 через 14 дней 46,23±4,35 31,78±5,46 36,21±4,68 37,39±5,12 Кетоновые тела, мг %         до введения 15,22±1,75 14,37±2,14 15,63±1,24 14,38±1,76 через 7 дней 7,45±1,52 15,14±1,28 10,46±1,32 14,52±1,84 через 14 дней 8,14±2,37 15,26±1,36 13,64±1,56 14,75±1,82 Кальций, мг %         до введения 7,52±0,36 7,48±0,32 7,22±0,54 7,17±0,22 через 7 дней 9,88±0,14 7,44±0,27 7,36±0,22 7,19±0,17 через 14 дней 9,54±0,28 7,32±0,18 7,26±0,31 7,14±0,36 Фосфор, мг %         до введения 7,46±0,52 7,35±0,68 7,28±0,44 7,52±0,22 через 7 дней 5,34±0,48 7,42±0,36 7,25±0,37 7,49±0,48 через 14 дней 5,32±0,76 7,84±0,22 7,37±0,23 7,48±0,56 Общие липиды, г/л         до введения 2,34±0,12 2,36±0,04 2,52±0,06 2,68±0,08 через 7 дней 4,48±0,10 2,33±0,06 3,88±0,05 2,46±0,07 через 14 дней 4,29±0,08 2,35±0,07 3,62±0,04 2,45±0,04 Холестирин, моль/л         до введения 1,48±0,12 1,52±0,10 1,46±0,15 1,52±0,14 через 7 дней 3,06±0,14 1,44±0,06 2,85±0,22 1,48±0,16 через 14 дней 3,02±0,18 1,45±0,11 2,78±0,18 1,52±0,12 Глюкоза, мг %         до введения 32,36±5,18 32,48±6,02 34,27±5,94 34,26±5,07 через 7 дней 48,54±4,37 31,74±5,96 39,82±5,78 35,18±4,76 через 14 дней 46,28±4,29 32,12±5,48 40,15±4,84 35,22±5,84

Таким образом, применение левамизола + ЯК оказало более выраженное повышение функциональной активности печени, что обусловило: - снижение уровня котоновых тел (устранение кетоза); - повышение резервной щелочности (устранение ацидоза); - нормализацию содержания кальция и фосфора (перевод антагонистического в синергетическое взаимодействие микроэлементов); - нормализацию белкового обмена и стимуляцию углеводного обмена.

Нормализация биохимических показателей оказала позитивное воздействие на клинический статус животных (исчезла болезненность при пальпации печени, значительно улучшился аппетит и повысилась молочная продуктивность).

Пример 4. Изучение антгельминтной активности. Опыт проведен на поросятах 2-2,5 месячного возраста, спонтанно инвазированных аскаридами и трихоцефалюсами. Из подопытных поросят были сформированы три подопытные группы. Животным первой группы внутримышечно инъецировали предложенный препарат в дозе 1 мл на 10 кг массы тела (данная доза рекомендована для стандартного раствора левамизола). Поросятам второй группы инъецировался стандартный раствор левамизола в аналогичной дозе. Животным третьей группы применяли антгельминтный препарат на основе нилверма (левамизола), изготовленного согласно описанию изобретения № 2200548 (прототип).

При клиническом наблюдении за подопытными животными установлено, что в ответ на введение стандартного раствора левамизола, спустя 20-30 минут у всех животных стали проявляться выраженные симптомы нервного возбуждения и рвота. У поросят 3 группы, которым вводился антгельминтный препарат (прототип), также отмечены признаки возбуждения, а у некоторых отмечалась и рвота. У поросят первой группы признаков возбуждения не обнаружено. Это свидетельствовало о том, что включение ЯК в состав препарата позволило выражено снизить токсическое действие левамизола на нервную систему организма животных.

Оценку антгельминтной активности провели по результатам копрологического исследования на 18 сутки после введения препаратов, результаты которых отражены в таблицах 4 и 5.

Таким образом, на основании проведенных экспериментальных исследований следует, что комплексный препарат на основе антгельминтика-иммуномодулятора левамизола и метаболика-янтарной кислоты выражено снижает токсический эффект на организм животных и обеспечивает более высокую иммунометаболическую, гепатопротектную, антгельминтную активность по отношению к стандартному раствору левамизола, аналогу и прототипу. Рекомендовано парентеральное введение в дозе 1 мл на 10 кг массы тела животного.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, в частности к иммунометаболическому антгельминтному препарату. Иммунометаболический антгельминтный препарат, включающий левамизол, янтарную кислоту и воду, взятые в определенном соотношении. Вышеописанный препарат обладает эффективным иммунометаболическим, гепатопротекторным и противонематозным действием, без токсического эффекта. 5 табл.

Иммунометаболический антгельминтный препарат, включающий иммуномодулятор-антгельминтик левамизол, янтарную кислоту и воду при следующем соотношении, мас.%:
левамизол 7,5 янтарная кислота 1,0 вода остальное,