КОМБИНАЦИИ, ВКЛЮЧАЮЩИЕ АГОНИСТ РЕЦЕПТОРА S1P И ИНГИБИТОР КИНАЗЫ JAK3 Российский патент 2011 года по МПК A61K45/06 A61K31/519 A61K31/135 A61P37/06 

Настоящее изобретение относится к фармацевтической комбинации, включающей по крайней мере один агонист рецептора сфингозин-1-фосфата (S1P) и по крайней мере один ингибитор киназы JAK3, а также к применению такой композиции для лечения аутоиммунных заболеваний, например для лечения или профилактики сахарного диабета I типа и связанных с ним заболеваний, или при пересадке органов.

Несмотря на наличие широкого круга возможностей в области пересадки органов и лечения пациентов с аутоиммунными заболеваниями, все еще существует необходимость в эффективных и безопасных иммунодепрессантах, а также необходимость их преимущественного использования в комбинированной терапии.

Было установлено, что комбинация, включающая по крайней мере один агонист или модулятор рецептора S1P и ингибитор киназы Janus 3 (JAK3) киназы, например как указано ниже, оказывает благоприятное воздействие при лечении аутоиммунных заболеваний, например диабета I типа и связанных с ним заболеваний или отторжения трансплантата.

Агонисты или модуляторы рецептора S1P - это соединения, которые передают сигнал при проявлении агонистической активности в отношении одного или более рецепторов сфингозин-1-фосфата, например, S1P1 - S1P8. Связывание агониста с рецептором S1P может приводить, например, к диссоциации внутриклеточных гетеротримерных G-белков на субъединицах Gα-ГТФ и Gβ-ГТФ и/или к повышению уровня фосфорилирования связанного с агонистом рецептора и активации с понижением активности сигнальных путей/киназ.

Связывающая активность агонистов или модуляторов рецептора S1P с конкретным рецептором S1P человека определяют по следующей методике.

Агонистическую или модулирующую активность соединений определяют с использованием рецепторов S1P человека: S1P₁, S1P₃, S1P₂, S1P₄ и S1P₅. Функциональную активацию рецептора оценивают, измеряя количество ГТФ [γ-³⁵S], связанного с мембранным белком, полученным из трансфектированных клеток СНО или RH7777, которые устойчиво экспрессируют соответствующий рецептор S1P человека, причем указанное связывание опосредуется соединением. Для анализа используют сцинцилляционные гранулы. Готовят серийные разведения соединений из растворов в ДМСО и добавляют к гранулам SPA (Amersham-Pharmacia) с иммобилизованным рецептором S1P, экспрессирующим мембранный белок (10-20 мкг в лунке) в присутствии 50 мМ Hepes, 100 мМ NaCl, 10 мМ MgCl₂ 10 мкМ ГДФ, 0,1% БСА и 0,2 нМ ГТФ [γ-³⁵S] (1200 Ки/ммоль). После инкубации в 96-луночном микропланшете при КТ в течение 120 мин несвязанный ГТФ [γ-³⁵S] отделяют центрифугированием. Люминесценцию гранул SPA, индуцированную связанным с мембраной ГТФ [γ-³⁵S], измеряют на ридере TOPcount plate reader (Packard). Величины ЕС₅₀ рассчитывают с использованием стандартного программного обеспечения для аппроксимации кривых. По данным указанного анализа аффинность агонистов рецептора S1P при связывании с рецептором S1P предпочтительно составляет <50 нМ.

Предпочтительными агонистами или модуляторами рецептора S1P являются, например, соединения, которые кроме связывания с рецептором S1P также ускоряют доставку лимфоцитов к мишени (homing), например, соединения, вызывающие лимфопению, в результате перераспределения, предпочтительно обратимого, лимфоцитов из кровотока во вторичные лимфотические ткани, и не вызывающие при этом генерализованного иммунодепрессантного действия. Наивные клетки связываются и стимулируется миграция CD4 и CD8 Т-клеток и В-клеток из кровотока в лимфатические узлы (LN) и пееровые бляшки (РР).

Доставку лимфоцитов в мишень оценивают по истощению уменьшения лимфоцитов крови:

Агонист или модулятор рецептора S1P или носитель вводят крысам перорально через желудочный зонд. Кровь для анализа отбирают из хвостовой вены в день - 1 для определения индивидуальной базовой линии, а также через 2, 6, 24, 48 и 72 ч после введения лекарственного средства. Согласно данному анализу агонист или модулятор рецептора S1P приводит к истощению периферических лимфоцитов крови, например, на 50% при введении дозы, например, <20 мг/кг.

Примеры пригодных агонистов или модуляторов рецептора S1P включают, например:

- соединения, описанные в заявке ЕР 627406 А1, например соединение формулы I

где R₁ означает прямую или разветвленную (C₁₂-C₂₂) цепь,

- соединение, содержащее в цепи связь или гетероатом, выбранные из группы, включающей двойную связь, тройную связь, О, S, NR₆, где R₆ означает Н, С₁-С₄алкил, арил(С₁-С₄)алкил, ацил или (С₁-С₄алкокси)карбонил и карбонил и/или

- соединение, содержащее в качестве заместителя С₁-С₄алкокси, С₂-С₄алкенилокси, С₂-C₄алкинилокси, арил(С₁-С₄)алкилоксиацил, C₁-С₄алкиламино, С₁-С₄алкилтио, ациламино, (С₁-С₄алкилокси)карбонил, (С₁-С₄алкокси)карбониламино, ацилокси, (С₁-С₄алкил)карбамоил, нитро, галоген, амино, гидроксиимино, гидрокси или карбокси или

R₁ означает

- фенилалкил, где алкил означает прямую или разветвленную углеводородную цепь (С₆-С₂₀) или

- фенилалкил, где алкил означает прямую или разветвленную углеводородную цепь (C₁-С₃₀), причем указанный фенилалкил содержит в качестве заместителя

- прямую или разветвленную углеводородную цепь (С₆-₂₀), необязательно замещенную галогеном,

- прямую или разветвленную цепь (С₆-С₂₀)алкокси, необязательно замещенную галогеном,

- прямой или разветвленный (С₆-С₂₀)алкенилокси,

- фенил(С₁-С₁₄)алкокси, галогенфенил(С₁-С₄)алкокси, фенил(С₁-С₁₄)алкокси(С₁-С₁₄)алкил, фенокси(С₁-С₄)алкокси или фенокси(С₁-С₄)алкил,

- циклоалкилалкил, замещенный С₆-С₂₀алкилом,

- гетероарилалкил, замещенный С₆-С₂₀алкилом,

- гетероциклический С₆-С₂₀алкил или

- гетероциклический алкил, замещенный С₂-С₂₀алкилом,

и где

алкильный остаток содержит

- в углеводородной цепи связь или гетероатом, выбранные из группы, включающей двойную связь, тройную связь, атом О, S, сульфинил, сульфонил или NR₆, где R₆ определен выше и

- в качестве заместителя С₁-С₄алкокси, С₂-C₄алкенилокси, С₂-С₄алкинилокси, арил(С₁-С₄)алкилокси, ацил, С₁-С₄алкиламино, С₁-С₄алкилтио, ациламино, (С₁-С₄алкокси)карбонил, (С₁-С₄алкокси)карбониламино, ацилокси, (С₁-С₄алкил)карбамоил, нитро, галоген, амино, гидрокси или карбокси, и каждый R₂, R₃, R₄ и R₅ независимо означает Н, С₁-С₄алкил или ацил, или их фармацевтически приемлемую соль или гидрат,

- соединения, описанные в заявке ЕР 1002792 А1, например, соединение формулы II

где m равно 1-9 и каждый из радикалов R'₂, R'₃, R'₄ и R'₅ независимо означает Н, C₁-С₆алкил или ацил или их фармацевтически приемлемые соль или гидрат,

- соединения, описанные в заявке ЕР 0778263 А1, например, соединение формулы III

где W означает Н, C₁-С₆алкил, С₂-С₆алкенил или С₂-С₆алкинил, незамещенный или замещенный ОН-группой фенил, R"₄O(CH₂)_n или С₁-С₆алкил, содержащий от 1 до 3 заместителей, выбранных из группы, включающей галоген, С₃-С₈циклоалкил, фенил и фенил, замещенный ОН-группой,

Х означает Н или незамещенную или замещенную прямую алкильную группу, содержащую р атомов углерода, или незамещенную или замещенную прямую алкоксигруппу, содержащую (р-1) атомов углерода, например, содержащую от 1 до 3 заместителей, выбранных из группы, включающей C₁-С₆алкил, ОН, C₁-С₆алкокси, ацилокси, амино, C₁-С₆алкиламино, ациламино, оксо, галогенС₁-С₆алкил, галоген, незамещенный фенил или фенил, содержащий от 1 до 3 заместителей, выбранных из группы, включающей C₁-С₆алкил, ОН, C₁-С₆алкокси, ацил, ацилокси, амино, C₁-С₆алкиламино, ациламино, галогенС₁-С₆алалкил и галоген, Y означает Н, C₁-С₆алкил, ОН, C₁-С₆алкокси, ацил, ацилокси, амино, C₁-С₆алкиламино, ациламино, галогенС₁-С₆алкил или галоген, Z₂ означает простую связь или прямую алкиленовую группу, содержащую q атомов углерода,

р и q независимо равны целому числу от 1 до 20, при условии, что 6≤p+q≤23, m' равно 1, 2 или 3, n равно 2 или 3,

каждый из радикалов R"₁, R"₂, R"₃ и R"₄ независимо означает Н, C₁-С₄алкил или ацил,

или их фармацевтически приемлемые соль или гидрат,

- соединения, описанные в заявке WO 02/18395, например, соединение формулы IVa или IVb

или

где Х_а означает О, S, NR_1s или группу -(СН₂)_na-, незамещенную или содержащую в качестве заместителя от 1 до 4 атомов галогена, n_a равно 1 или 2, R_1s означает Н или (С₁-С₄)алкил, незамещенный или замещенный галогеном, R_1a означает Н, ОН, (С₁-С₄)алкил или O(С₁-С₄)алкил, причем алкил является незамещенным или содержит в качестве заместителей от 1 до 3 атомов галогена, R_1b означает Н, ОН или

(С₁-С₄)алкил, причем алкил является незамещенным или замещенным галогеном, каждый из радикалов R_2a независимо выбирают из группы, включающей Н или (С₁-С₄)алкил, причем алкил является незамещенным или замещенным галогеном, R_3a означает Н, ОН, галоген или O(С₁-С₄)алкил, причем алкил является незамещенным или замещенным галогеном, R_3b означает Н, ОН, галоген, (С₁-С₄)алкил, причем алкил является незамещенным или замещенным группами гидрокси или O(С₁-С₄)алкил, причем алкил является незамещенным или содержит в качестве заместителя атом галогена, Y_a означает -СН₂-, -С(O)-, -CH(OH)-, -C(=NOH)-, О или S, а R_4a означает (С₄-С₁₄)алкил или (С₄-С₁₄)алкенил,

или их фармацевтически приемлемые соли или гидраты,

- соединения, описанные в заявке WO 02/076995, например, соединение формулы V

где m_c рано 1, 2 или 3,

Х_с означает О или простую связь;

R_1c означает Н, C₁-С₆алкил, необязательно содержащий в качестве заместителя группы ОН, ацил, галоген, С₃-С₃₀циклоалкил, фенил или гидроксифенилен, или означает С₂-С₆алкенил, С₂-С₆алкинил или фенил, необязательно замещенный группой ОН,

R_2c означает

где R_5c означает Н или C₁-С₄алкил, необязательно замещенный 1, 2 или 3 атомами галогена, a R_6c означает Н или С₁-С₄алкил, необязательно замещенный атомом галогена,

каждый из радикалов R_3c и R_4c независимо означает Н, С₁-С₄алкил, необязательно замещенный галогеном, или ацил,

R_c означает С₁₃-С₂₀алкил, необязательно содержащий в цепи атом кислорода и необязательно замещенный группами нитро, галоген, амино, гидрокси или карбокси, или означает остаток формулы (а)

где R_7c означает Н, С₁-С₄алкил или С₁-С₄алкокси, a R_8c замещенный C₁-С₂₀алканоил, фенилС₁-С₁₄алкил, причем С₁-С₁₄алкил необязательно замещен галогеном или ОН группой, циклоалкилС₁-С₁₄алкокси или фенилС₁-С₁₄алкокси, причем циклоалкильное или фенильное кольцо необязательно замещено галогеном, группами С₁-С₄алкил и/или С₁-С₄алкокси, фенил(С₁-С₁₄)алкокси(С₁-С₁₄)алкил, фенокси(С₁-С₁₄)алкокси или фенокси(С₁-С₁₄)алкил,

R_c также означает остаток формулы (а), где R_8c означает С₁-С₁₄алкокси, причем R_1c означает С₁-С₄алкил, С₂-С₆алкенил или С₂-С₆алкинил,

или соединение формулы VI

где n_x равно 2, 3 или4,

R_1x означает Н, C₁-С₆алкил, необязательно замещенный группами ОН, ацил, галоген, циклоалкил, фенил или гидрокси-фенилен, и означает С₂-С₆алкенил, С₂-С₆алкинил или фенил, необязательно замещенный ОН группой,

R_2x означает Н, С₁-С₄алкил или ацил,

каждый из радикалов R_3x и R_4x независимо означает Н, С₁-С₄алкил, необязательно замещенный группами галоген или ацил,

R_5x означает Н, С₁-С₄алкил или С₁-С₄алкокси, а

R_6x означает С₁-С₂₀алканоил, замещенный циклоалкилом и означает циклоалкил(С₁-С₄)алкокси, причем циклоалкильное кольцо необязательно замещено группами галоген, С₁-С₄алкил и/или С₁-С₄алкокси, и означает фенил(С₁-С₄)алкокси, причем фенильное кольцо необязательно замещено группами галоген, С₁-С₄алкил и/или С₁-С₄алкокси,

R_6x также означает С₄-С₁₄алкокси, если R_1x означает С₂-С₄алкил, замещенный ОН группой, или означает пентилокси или гексилокси, если R_1x означает С₁-С₄алкил,

при условии, что R_6x не означает фенилбутиленокси, если R_5x означает Н или R_1x означает метил,

или их фармацевтически приемлемые соли или гидраты,

- соединения, описанные в заявке WO 02/06268 A1, например, соединение формулы VII

где каждый из радикалов R_1d и R_2d независимо означает Н или аминозащитную группу,

R_3d означает водород, гидроксизащитную группу или остаток формулы

R_4d равно С₁-С₄алкил,

n_d равно целому числу от 1 до 6,

X_d означает этилен, винилен, этинилен, группу формулы -D-СН₂- (причем D означает карбонил, -СН(ОН)-, О, S или N), арил или арил, содержащий вплоть до трех заместителей, выбранных из группы, как описано в данном контексте,

Y_d означает простую связь, С₁-С₄алкилен, C₁-С₁₀алкилен, содержащий вплоть до трех заместителей, выбранных из групп а и b, C₁-С₁₀алкилен, содержащий атомы О или S в центральном или в концевом фрагменте углеводородной цепи, или С₁-С₁₀алкилен, содержащий атомы О или S в центральном или в концевом фрагменте углеводородной цепи, которая, в свою очередь, содержит вплоть до трех заместителей, выбранных из групп а и b,

R_5d означает водород, С₃-С₆циклоалкил, арил, гетероциклическую группу, С₃-С₆циклоалкил, содержащую вплоть до трех заместителей, выбранных из групп а и b, арил, содержащий вплоть до трех заместителей, выбранных из групп а и b, или гетероциклическую группу, содержащую вплоть до трех заместителей, выбранных из групп а или b,

каждый из радикалов R_6d и R_7d независимо означает H или заместитель, выбранный из группы а,

каждый из радикалов R_8d и R_9d независимо означает Н или С₁-С₄алкил, необязательно замещенный атомом галогена;

<группа а> означает галоген, (низш.)алкил, галоген(низш.)алкил, (низш.)алкокси, (низш.)алкилтио, карбоксил, (низш.)алкоксикарбонил, гидрокси, (низш.)алифатический ацил, амино, моно(низш.)алкиламино, ди(С₁-С₄)алкиламино, ациламино, циано или нитро,

<группа b> означает С₃-С₆циклоалкил, арил или гетероциклическую группу, каждый из которых необязательно содержит вплоть до трех заместителей, выбранных из группы а,

при условии, что если R_5d означает водород, то Y_d означает простую связь или линейный C₁-С₁₀алкилен или фармакологически приемлемые соль, сложный эфир или гидрат указанного соединения,

- соединения, описанные в патенте JP-14316985 (JP 2002316985), например, соединение формулы VIII

где R_1e, R_2e, R_3e, R_4e, R_5e, R_6e, R_7e, n_e, Х_е и Y_e описаны в патенте JP-14316985

или его фармакологически приемлемые соль, сложный эфир или гидрат указанных соединенеий,

- соединения, описанные в заявках WO 03/29184 и WO 03/29205, например, соединения формулы IX

где X_f означает О, S, SO или SO₂,

R_1f означает галоген, тригалогенметил, ОН, С₁-С₇алкил, С₁-С₄алкокси, трифторметокси, фенокси, циклогексилметилокси, пиридилметокси, циннамилокси, нафтилметокси, феноксиметил, CH₂-OH, СН₂-СН₂-ОН, C₁-С₄алкилтио, С₁-С₄алкилсульфинил, С₁-С₄алкилсульфонил, бензилтио, ацетил, нитро или циано, или фенил, фенил(С₁-С₄)алкил или фенил(С₁-С₄)алкокси, причем каждая фенильная группа необязательно замещена группами галоген, CF₃, С₁-С₄алкил или С₁-С₄алкокси,

R_2f означает Н, галоген, тригалогенметил, С₁-С₄алкокси, С₁-С₇алкил, фенетил или бензилокси,

R_3f означает Н, галоген, CF₃, ОН, С₁-С₇алкил, С₁-С₄алкокси, бензилокси или С₁-С₄алкоксиметил,

каждый из радикалов R_4f и R_5f независимо означает Н или остаток формулы

где каждый из радикалов R_8f и R_9f независимо означает Н или С₁-С₄алкил, необязательно замещенный атомом галогена и

n_f равно целому числу от 1 до 4,

например, 2-амино-2-[4-(3-бензилоксифенокси)-2-хлорфенил]пропил-1,3-пропандиол, 2-амино-2-[4-(3-бензилоксифенилтио)-2-хлорфенил]пропил-1,3-пропандиол или его фармакологически приемлемые соль или гидрат,

- соединения, описанные в заявке WO 03/062252 A1, например, соединение формулы Х

где Ar означает фенил или нафтил, m_g и n_g независимо равны 0 или 1, А выбирают из группы, включающей СООН, РО₃Н₂, РО₂Н, SO₃H, PO(C₁-С₃алкил)ОН и 1Н-тетразол-5-ил, каждый из радикалов R_1g и R_2g независимо означает Н, галоген, ОН, СООН или С₁-С₄алкил, необязательно замещенный атомом галогена, R_3g означает Н или С₁-С₄алкил, необязательно замещенный атомом галогена или группой ОН; каждый радикал R_4g независимо означает галоген или необязательно замещенный атомом галогена С₁-С₄алкил или C₁-С₃алкокси, каждый из радикалов R_g и М имеет значение, как указано для В и С, соответственно, в заявке WO 03/062252 A1,

- соединения, описанные в заявке WO 03/062248 A2, например, соединение формулы XI

где Ar означает фенил или нафтил, n равно 2, 3 или 4, А означает СООН, 1H-тетразол-5-ил, РО₃Н₂, PO₂H₂, -SO₃H или PO(R_5h)OH, где R_5h выбирают из группы, включающей С₁-С₄алкил, гидроксиС₁-С₄алкил, фенил, -CO(C₁-С₃)алкокси и -СН(ОН)фенил, причем указанный фенил или фенильный остаток необязательно замещен, каждый из радикалов R_1h и R_2h независимо означает Н, галоген, ОН, СООН или необязательно замещенный галогеном С₁-С₆алкил или фенил, R_3h означает Н или С₁-С₄алкил, необязательно замещенный галогеном и/или ОН группой, каждый радикал R_4h независимо означает галоген, ОН, СООН, С₁-С₄алкил, S(O)_0,1 или 2(С₁-С₃)алкил, C₁-С₃алкокси, С₃-С₆циклоалкокси, арил или аралкокси, причем алкильный фрагмент необязательно замещен 1-3 атомами галогена, и каждый из радикалов R_h и М имеет одно из значений, указанных для В и С, соответственно, в заявке WO 03/062248 A2.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения агонистом или модулятором рецептора S1P, используемым в комбинации по настоящему изобретению, является селективный рецептор S1P1, например, соединение, характеризующееся селективностью в отношении рецептора S1P1, которая по сравнению с рецептором S1P3 по крайней мере в 20 раз выше, например, в 100, 500, 1000 или 2000 раз, причем указанную селективность оценивают по соотношению ЕС₅₀ для рецептора S1P1 к ЕС₅₀ для рецептора S1P3, которые рассчитывали по данным анализа связывания с ³⁵S-ГTФγS, при этом указанное соединение характеризуется значением EC₅₀ при связывании с рецептором S1P1, равным 100 нМ или менее, по данным анализа связывания с ³⁵S-ГTФγS. Типичными примерами агонистов или модуляторов рецептора S1P1 являются, например, соединения, перечисленные в заявке WO 03/061567, включенной в данное описание в качестве ссылки, например, соединение формулы

или

Если в молекуле формул I-XIII содержится один или более ассиметрических центров, то настоящее изобретение включает различные оптические изомеры, а также рацематы, диастереоизомеры и их смеси. Соединения формулы III-IVb, при условии, что атом углерода, связанный с аминогруппой является ассиметричным, предпочтительно имеют R-конфигурацию указанного атома углерода.

Соединения формул I-XIII существуют в свободной форме или в форме соли. Примеры фармацевтически приемлемых солей соединений формул I-XIII включают соли неорганических кислот, такие как гидрохлорид, гидробромид и сульфат, соли органических кислот, такие как ацетат, фумарат, малеат, бензоат, цитрат, малат, метансульфонат и бензолсульфонат, или, соответственно, соли, с металлом, таким как натрий, калий, кальций или алюминий, соли аминов, таких как триэтиламин, и соли двухосновных аминокислот, таких как лизин. Соединения и соли в составе комбинаций по настоящему изобретению включают гидраты и сольваты.

Ацил, описанный выше, означает остаток R_y-CO-, где R_y означает С₁-С₆алкил, С₃-С₆циклоалкил, фенил или фенил(С₁-С₄)алкил. Если не указано иное, алкил, алкокси, алкенил или алкинил являются прямыми или разветвленными.

Арил означает фенил или нафтил, предпочтительно фенил.

Если в соединении формулы I углеводородная цепь R₁ содержит заместители, то предпочтительными заместителями являются галоген, нитро, амино, гидрокси или карбокси. Если углеводородная цепь содержит необязательно замещенный фенилен, то углеводородная цепь предпочтительно является незамещенной. Если остаток фенилена содержит заместитель, предпочтительными заместителями являются галоген, нитро, амино, метокси, гидрокси или карбокси.

Предпочтительными соединениями формулы I являются соединения, в которых R₁ означает С₁₃-С₂₀алкил, необязательно замещенный группами нитро, галоген, амино, гидрокси или карбоксил, и, более предпочтительно соединения, в которых R₁ означает фенилалкил, замещенный группой С₆-С₁₄алкил, необязательно замещенный галогеном, а алкильный остаток означает С₁-С₆алкил, необязательно замещенный гидроксигруппой. Более предпочтительно, R₁ означает фенил(С₁-С₆)алкил, замещенный в фенильном остатке прямой или разветвленной, предпочтительно прямой цепью С₆-С₁₄алкил. Остаток С₆-С₁₄алкил находится в орто-, мета- или пара-положении, предпочтительно в пара-положении.

Предпочтительно каждый из радикалов R₂-R₅ означает Н.

В приведенной выше формуле VII «гетероциклическая группа» означает 5-7-членный гетероцикл, содержащий от 1 до 3 гетероатомов, выбранных из S, О и N. Примеры таких гетероциклических групп включают гетероарильные группы, описанные выше, и гетероциклические соединения, соответствующие частично или полностью гидрированным гетероарильным группам, например фурил, тиенил, пирролил, азепинил, пиразолил, имидазолил, оксазолил, изоксазолил, тиазолил, изотиазолил, 1,2,3-оксадиазолил, триазолил, тетразолил, тиадиазолил, пиранил, пиридил, пиридазинил, пиримидинил, пиразинил, тетрагидропиранил, морфолинил, тиоморфолинил, пирролидинил, пирролил, имидазолидинил, пиразолидинил, пиперидинил, пиперазинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, тиазолидинил или пиразолидинил. Предпочтительными гетероциклическими группами являются 5-6-членные гетероарильные группы, наиболее предпочтительными гетероциклическими группами являются морфолинил, тиоморфолинил или пиперидинил.

Предпочтительным соединением формулы I является 2-амино-2-тетрадецил-1,3-пропандиол. Наиболее предпочтительным агонистом рецептора S1P формулы I является FTY720, т.е. 2-амино-2-[2-(4-октилфенил)этил]пропан-1,3-диол в свободной форме или в виде фармацевтически приемлемой соли (в данном контексте соединение А), например, гидрохлорид, как показано ниже:

Предпочтительным соединением формулы II является соединение, в котором каждый из радикалов R'₂-R'₅ означает Н, a m равно 4, т.е. 2-амино-2-{2-[4-(1-оксо-5-фенилпентил)фенил]этил}пропан-1,3-диол в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли (в данном контексте соединение В), например гидрохлорид.

Предпочтительным соединением формулы III является соединение, в котором W означает СН₃, каждый из радикалов R"₁-R"₃ означает Н, Z₂ означает этилен, Х означает гептилокси, a Y означает H, т.е. 2-амино-4-(4-гептилоксифенил)-2-метилбутанол в свободной форме или в виде фармацевтически приемлемой соли (в данном контексте соединение С), например гидрохлорид. Наиболее предпочтительным является R-энантиомер.

Предпочтительным соединением формулы IVa является фосфат FTY720 (R_2a означает Н, R_3a означает ОН, Х_а означает О, R_1a и R_1b означают ОН). Предпочтительным соединением формулы IVb является фосфат соединения С (R_2a означает Н, R_3b означает ОН, Х_а означает О, R_1a и R_1b означают ОН, Y_a означает О, a R_4a означает гептил). Предпочтительным соединением формулы V является фосфат соединения В.

Предпочтительным соединением формулы V является моно-[(R)-2-амино-2-метил-4-(4-пентилоксифенил)бутиловый]эфир фосфорной кислоты.

Предпочтительным соединением формулы VII является (2R)-2-амино-4-[3-(4-циклогексилоксибутил)бензо[b]тиен-6-ил]-2-метилбутан-1-ол.

JAK3 означает фермент, экспрессия которого главным образом происходит в Т- и В-клетках. Этот фермент играет ключевую роль в росте и функционировании Т-клеток. Ингибиторами киназы JAK3 являются, например, соединения, значение IC₅₀ которых составляет <5 мкМ, предпочтительно <1 мкМ, более предпочтительно <0,1 мкМ, причем IC₅₀ определяют по следующим методикам:

Зависимая от интерлейкина-2 (IL-2) пролиферация клеток CTL/L и НТ-2

Зависимые от IL-2 Т-клетки мыши линий CTL/L и НТ-2 культивировали в среде RPMI 1640 (Gibco 52400-025) в смеси, содержащей 10% Fetal Clone I (HyClone), 50 мкМ 2-меркаптоэтанола (31350-010), гентамицин 50 мкг/мл (Gibco 15750-037), 1 мМ пируват натрия (Gibco 11360-039), аминокислоты (Gibco 11140-035, 100х) и IL-2 мыши 250 Ед./мл (супернатант трансфектированных клеток X63-Ag8, содержащий 50000 Ед./мл IL-2 мыши по стандарту Genzyme). Культуры расщепляли два раза в неделю 1:40.

Перед использованием клетки дважды промывали клеточной средой, не содержащей IL-2 мыши. Уровень пролиферации определяли при плотности 4000 CTL/L клеток в лунке или 2500 НТ-2 клеток в лунке в 96-луночном планшете с плоским дном для культур тканей, содержащем исследуемые соединения в соответствующем разбавлении в клеточной среде при концентрации 50 Ед./мл IL-2 мыши. Культуры клеток CTL/L инкубировали при 37°С в течение 24 ч, а культуры клеток НТ-2 в течение 48 ч. Затем добавляли 1 мкКи мкК ³Н-тимидина, выдерживали в течение ночи, клетки собирали на волоконном фильтре и измеряли радиоактивность.

Зависимая от интерлейкина-2 пролифереация моноядерных клеток периферической крови человека

Моноядерные клетки периферической крови человека выделяли в градиенте плотности фикала из лейкоцитной пленки неизвестного типа HLA (Blutspendezentrum, Kantonsspital, Базель, Швейцария). Клетки до использования хранили при плотности 2×10⁷ клеток/мл (90% ФСТ, 10% ДМСО) в криопробирках (Nunc) в жидком азоте.

Клетки выдерживали в течение четырех сут при 37°С в инкубаторе с увлажненным СО₂ (7%) во флаконах (Costar) при плотности 7×10⁵ клеток/мл в клеточной среде, содежащей RPMI 1640 (Gibco, Pacely, Англия) и пируват Na (1 мМ, Gibco), заменимые аминокислоты MEM и витамины (Gibco), 2-мекаптоэтанол (50 мкМ), L-глутамин (2 мМ), гентамицин и пенициллин/стрептомицин (100 мкг/мл, Gibco), бактоаспарагин (20 мкг/мл, Difco), инсулин человека (5 мкг/мл, Sigma), трансферин человека (40 мкг/мл, Sigma), эмбриональную телячью сыворотку (ЭТС) (10%, Hyclone Laboratories, Logan, UT) и фитогемагглутинин 100 мкг/мл. Клетки дважды промывали в среде RPMI 1640, содержащей 10% ФСТ и выдерживали в течение 2 ч. После центрифугирования клетки помещали в описанную выше клеточную среду (не содержащую фитогемагглутинин), содержащую интерлейкин-2 (Chiron, 200 Ед./мл), добавленную в 96-луночные планшеты для культур тканей с плоским дном (Costar, №3596) в трех повторах при плотности 5×10⁴ клеток/0,2 мл в присутствии исследуемых соединений в соответствующей концентрации и выдерживали при 37°С в течение 72 ч. В последние 16 ч добавляли ³Н-тимидин (1 мкКи/0,2 мл). Затем клетки собирали и измеряли радиоактивность на сцинцилляционном счетчике радиоактивности.

Пригодные ингибиторы киназ JAK3 включают, например,

- соединения, описанные в заявке USP 2003/0073719 А1, например соединения формулы XIV

где каждый из радикалов R_2j и R_3j независимо выбирают из группы, включающей Н, амино, галоген, ОН, нитро, карбокси, С₂-С₆алкенил, C₂-С₆алкинил, CF₃, трифторметокси, C₁-С₆алкил, C₁-С₆алкокси, С₃-С₆циклоалкил, причем алкил, алкокси или циклоалкил необязательно содержат в качестве заместителя от одной до трех групп, выбранных из группы, включающей галоген, ОН, карбокси, амино, С₁-С₆алкилтио, C₁-С₆алкиламино, (C₁-С₆алкил)₂амино, С₅-С₉гетероарил, С₂-С₉ гетероциклоалкил, С₃-С₉циклоалкил или С₆-С₁₀арил, или каждый из радикалов R_2j и R_3j независимо означает С₃-С₁₀диклоалкил, С₃-С₁₀циклоалкокси, C₁-С₆алкиламино, (С₁-С₆алкил)₂амино, С₆-С₁₀ариламино, C₁-С₆алкилтио, С₆-С₁₀арилтио, C₁-С₆алкилсульфинил, С₆-С₁₀арилсульфинил, C₁-С₆алкилсульфонил, С₆-С₁₀арилсульфонил, C₁-С₆ацил, C₁-С₆алкокси-CO-NH-, C₁-С₆алкиламино-СО-, С₅-С₉гетероарил, С₂-С₉гетероциклоалкил или С₆-С₁₀арил, причем гетероарил, гетероциклоалкил и арил независимо содержат от одного до трех заместителей, выбранных из группы, включающей галоген, С₁-С₆алкил, С₁-С₆алкил-СО-NH-, C₁-С₆алкокси-CO-NH-, С₁-С₆алкил-СО-NH-(С₁-С₆)алкил, С₁-С₆алкокси-СО-NH-(С₁-С₆)алкил, С₁-С₆алкокси-СО-NH-(С₁-С₆)алкокси, карбокси, карбокси(С₁-С₆)алкил, карбокси(С₁-С₆)алкокси, бензилоксикарбонил(С₁-С₆)алкокси, C₁-С₆алкоксикарбонил(С₁-С₆)алкокси, С₆-С₁₀арил, амино, амино(С₁-С₆)алкил, С₂-С₇алкоксикарбониламино, С₆-С₁₀арил(С₂-С₇)алкоксикарбониламино, C₁-С₆алкиламино, (С₁-С₆алкил)₂амино, С₁-С₆алкиламино(С₁-С₆)алкил, (C₁-С₆алкил)₂амино(С₁-С₆)алкил, гидрокси, C₁-С₆алкокси, карбокси, карбокси(С₁-С₆)алкил, С₂-С₇алкоксикарбонил, С₂-С₇алкоксикарбонил(С₁-С₆)алкил, C₁-С₆алкокси-CO-NH-, С₁-С₆алкил-СО-NH-, циано, С₅-С₉ гетероциклоалкил, амино-CO-NH-, С₁-С₆алкиламино-СО-NH-, (С₁-С₆алкил)₂амино-СО-NH-, С₆-С₁₀ариламино-CO-NH-, С₅-С₉гетероариламино-СО-NH-, C₁-С₆алкиламино-СО-NH-(С₁-С₆)алкил, (С₁-С₆алкил)₂амино-СО-NH-(С₁-С₆)алкил, C₆-C₁₀ариламино-CO-NH-(C₁-С₆)алкил, С₅-С₉гетероариламино-СО-NH-(С₁-С₆)алкил, С₁-С₆алкилсульфонил, C₁-С₆алкилсульфониламино, C₁-С₆алкилсульфониламино(С₁-С₆)алкил, С₆-С₁₀арилсульфонил, С₆-С₁₀арилсульфониламино, С₆-С₁₀арилсульфониламино(С₁-С₆)алкил, С₁-C₆алкилсульфониламино, С₁-С₆алкилсульфониламино(С₁-С₆)алкил, C₅-С₉гетероарил или С₂-С₉гетероциклоалкил, например, метил-[(3R,4R)-4-метил-1-(пропан-1-сульфонил)-пиперидин-3-ил]-(7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)амин, метиловый эфир (3R,4R)-4-метил-3-[метил-(7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)амино]пиперидин-1-карбоновой кислоты, 3,3,3-трифтор-1-{(3R,4R)-4-метил-3-[метил-(7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)амино]пиперидин-1-ил}пропан-1-он, диметиламид (3R,4R)-4-метил-3-[метил-(7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)амино]пиперидин-1-карбоновой кислоты, этиловый эфир {(3R,4R)-4-метил-3-[метил-(7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)амино]пиперидин-1-карбонил}амино)уксусной кислоты, 3-{(3R,4R)-4-метил-3-[метил-(7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)амино]пиперидин-1-ил}-3-оксопропионитрил, 3,3,3-трифтор-1-{(3R,4R)-4-метил-3-[-метил-(5-метил-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)амино]пиперидин-1-ил}пропан-1-он, 1-{(3R,4R)-4-метил-3-[метил-(7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)амино]пиперидин-1-ил}бут-3-ин-1-он, 1-{(3R,4R)-3-[(5-[хлор-7Н-пирроло-[2,3-d]пиримидин-4-ил)метиламино]-4-метилпиперидин-1-ил}пропан-1-он, 1-{(3R,4R)-3-[(5-фтор-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)метиламино]-4-метилпиперидин-1-ил}пропан-1-он, (3R,4R)-N-циано-4-метил-3-[метил-(7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)амино]-N'-пропилпиперидин-1-карбоксамидин или (3R,4R)-N-циано-4-N,N-триметил-3-[метил-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)амино]пиперидин-1-карбоксамидин,

- соединения, описанные в заявке WO 02/092571, например, соединение формулы XV

где

Ar₁ выбирают из группы, включающей фенил, тетрагидронафтенил, индолил, пиразолил, дигидроинденил, 1-оксо-2,3-дигидроинденил или индазолил, каждый из которых необязательно замещен одной или более групп, выбранных из группы, включающей галоген, гидрокси, циано, С₁-С₈алкокси, CO₂R_8k, CONR_9kR_10k, С₁-С₈алкил-O-(С₁-С₈)алкил, С₁-C₈алкил-NR_8k(C₁-С₈алкил, С₁-C₈aлкил-CONR₈-(C₁-C₈)алкил, С₁-C₈алкил-CONR_9kR_10k NR_8kCO(C₁-C₈)алкил, C₁-C₈тиоалкил, C₁-C₈алкил (каждый радикал необязательно замещен одной или более группами ОН или циано или фтор) или C₁-C₈алкокси,

X_k означает NR_3k или О, n_k равно 0 или 1,

каждая группа R_k независимо означает водород или C₁-C₈aлкокси,

каждый из радикалов R_1k и R_2k независимо выбирают из группы, включающей Н, галоген, нитро, циано, C₁-C₈aлкил, C₁-C₈aлкокси, ОН, арил, Y_k(CR_11k2)_pkNR_4kR_5k, Y_k(CR_11k2)_pkCONR_4kR_5kY_k(CR_11k2)_pkCO₂R_6k, Y_k(CR_11k2)_pkOR₆k, Y_k(CR_11k2)_pkR_6k или R_1k и R_1k вместе образуют -ОСНО- или -OCH₂CH₂O-,

каждый из радикалов R_11k независимо означает Н, С₁-С₈алкил, гидрокси или галоген, p_k равно 0, 1, 2, 3, 4 или 5,

R_3k означает Н или C₁-C₈aлкил,

Y_k означает кислород, СН₂ или NR_7kR_3k означает водород или C₁-C₈aлкил,

каждый из радикалов R_4k и R_5k независимо означает Н, C₁-C₈aлкил, или R_4k и R_5k вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 4-7-членную насыщенную или ароматическую гетероциклическую кольцевую систему, необязательно содержащую дополнительный атом или группу О, S, NR_6k, или один из радикалов R_4k и R_5k означает Н или С₁-С₈алкип, а другой означает 5- или 6-членную гетероциклическую кольцевую систему, необязательно содержащую дополнительный атом О, S или N,

R_6k означает Н, С₁-С₈алкил, фенил или бензил,

R_7k означает Н или С₁-С₈алкил,

R_8k означает Н или С₁-С₈алкил, каждый из радикалов R_9k и R₁₀ независимо означает водород или С₁-С₈алкил,

- соединения, описанные в заявке US 2002/0055514 А1, например, соединение формулы XVI

где X_o означает NH, NR_11o, S, О, СН₂ или R_11oCH,

R_11o означает Н, С₁-С₄алкил или С₁-С₄алканоил,

каждый из радикалов R_1o-R_8o независимо означает Н, галоген, ОН, меркапто, амино, нитро, С₁-С₄алкил, С₁-С₄алкокси или С₁-С₄алкилтио, причем два радикала из R_1o-R_5o вместе с фенильным кольцом, к которому они присоединены, необязательно образуют конденсированное кольцо, например, нафтил или тетрагидронафтил, и причем кольцо, образованное двумя соседними группами R_1o-R_5o необязательно замещено 1, 2, 3 или 4 атомами галогена, группами гидрокси, меркапто, амино, нитро, С₁-С₄алкил, С₁-С₄алкокси или С₁-С₄алкилтио, при условии, что по крайней мере один из радикалов R_2o-R_5o означает ОН и

каждый из радикалов R_9o и R_10o независимо означает Н, галоген, С_1-4алкил, С_1-С₄алкокси или С₁-С₄алканоил, или R_9o и R_10o вместе образуют метилендиокси,

- соединения, описанные в заявке WO 04/052359, например соединение формулы XVII

где n_p равно 1, 2, 3, 4 или 5,

R_1p означает Н, СН₃ или CH₂N(СН₃)₂, а

R_3p означает CH₂N(СН₃)₂,

в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли.

Соединения формул XIV-XVII существуют в свободной форме или в форме соли. Примеры фармацевтически приемлемых солей соединений формулы XIV-XVI включают соли неорганических кислот, такие как гидрохлорид, соли органических кислот, таких как уксусная или лимонная, или, соответственно, соли металла, такого как натрий или калий, соли аминов, таких как триэтиламин, и соли двухосновных аминокислот, таких как лизин.

Если соединения формулы XIV-XVII содержат в молекуле один или более ассиметрических центров, настоящая заявка включает различные оптические изомеры, а также рацематы, диастереоизомеры и их смеси. Если соединения формулы XIV-XVII содержат в молекуле двойную связь, соединение находится в цис- или транс-конформации или образует смесь указанных изомеров.

В формуле XIV С₆-С₁₀арил означает фенил или нафтил. С₂-С₉ гетероциклоалкил означает пирролидинил, тетрагидрофуранил, дигидрофуранил, тетрагидропиранил, пиранил, тиопиранил, азиридинил, оксиранил, метилендиокси, изоксазолидинил, 1,3-оксазолидин-3-ил, изотиазолидинил, 1,3-тиазолидин-3-ил, 1,2-пиразолидин-2-ил, 1,3-пиразолидин-1-ил, пиперидинил, морфолинил, пиперазинил и т.п. Указанные группы присоединены через атом С или N. С₂-С₉ гетероарил означает, например фурил, тиенил, тиазолил, пиразолил, изотизолил, оксазолил, изоксазолил, пирролил, триазолил, тетразолил, имидазолил, оксадиазолил, тиадиазолил, пиридил, пиримидил, пиразинил, пиридазинил, триазинил, пиразоло[3,4-b]пиридинил, циннолинил, птеридинил, пуринил, бензоксазолил, бензотиазолил, бензофуранил, изоиндолил, индолил, индолизинил, индазолил, изохинолил, хинолил, фталазинил, хиноксалинил, хиназолинил, бензоксазинил и т.п. Эти группы присоединены через атом С или N.

Предпочтительные ингибиторы киназы JAK3 включают, например, N-бензил-3,4-дигидроксибензилиденцианоацетамид α-циано-(3,4-дигидрокси)-]N-бензилциннамамид (Tyrphostin AG 490), продигиозин 25-С (PNU 156804), [4-(4'-гидроксифенил)амино-6,7-диметоксихиназолин] (WHI-P131), [4-(3'-бром-4'-гидроксилфенил)амино-6,7-диметоксихиназолин] (WHI-P-154), [4-(3',5'-дибром-4'-гидроксилфенил)амино-6,7-диметоксихиназолин] WHI-P97 и 3-{(3R,4R)-4-метил-3-[метил-(7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)амино]пиперидин-1-ил}-3-оксопропионитрил, в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли, например моноцитрат (соединение СР-690550) или соединение формулы XVII.

Все публикации, цитированные в данном описании, включены в настоящее изобретение в качестве ссылок. В настоящее изобретение также включены фармацевтически приемлемые соли указанных соединений, соответствующие рацематы, диастереоизомеры, энантиомеры, таутомеры, а также соответствующие кристаллические модификации указанных выше соединений, например сольваты, гидраты и полиморфные формы, описанные в настоящей заявке. Соединения, используемые в качестве активных ингредиентов в составе комбинации по настоящему изобретению, получают и вводят, как описано в цитированных документах, соответственно. В настоящее изобретение также включены комбинации более двух различных активных ингредиентов, т.е. фармацевтические комбинации по настоящему изобретению включают три активных ингредиента или более.

В настоящее изобретение включены

1. Фармацевтическая комбинация, включающая:

а) по крайней мере один агонист или модулятор рецептора S1P и

б) по крайней мере один ингибитор киназы JAK3.

2. Способ лечения или профилактики аутоиммунных заболеваний и состояний или отторжения трансплантатов клеток, тканей или органов, у субъекта, нуждающегося в таком лечении, причем указанный способ включает совместное введение указанному субъекту, например, одновременно или последовательно, терапевтически эффективного количества по крайней мере одного агониста или модулятора рецептора S1P и по крайней мере одного ингибитора киназы JAK3, например, как описано выше.

Примеры аутоиммунных заболеваний включают, например саркоидоз, пневмофиброз, идиопатическую интерстициальную пневмонию, обструктивное заболевание дыхательных путей, включая астму, врожденную астму, приобретенную астму, аллергическую астму на пыль, хроническую или застарелую астму (например, позднюю астму или гиперчувствительность дыхательных путей), бронхит, включая бронхиальную астму, детскую астму, аллергический ревматоидный артрит, системную красную волчанку, нефротический синдром красной волчанки, хронический лимфатозный тереоидит Хасимото, рассеянный склероз, бульбоспинальный паралич, сахарный диабет тип I и связанные с ним осложнения, сахарный диабет типа II у взрослых, увеит, нефротический синдром, стероидзависимый и стероидустойчивый нефроз, ладонно-подошвенный пустулез, аллергический энцефаломиелит, гломерулонефрит, псориаз, псориатический артрит, атопическая экзема (диффузный нейродерматит), контактные дерматиты и другие экзематозные дерматиты, себорейный дерматит, пемфигоидный плоский лишай, пемфигус, буллезный пемфигоид, буллезный эпидермолиз, крапивница, отек Квинке, васкулиты, эритемы, кожный ацидоцитоз, угри, очаговая аллопеция, эозинофильный фасцит, атеросклероз, конъюнктивит, кератоконъюнктивит, кератит, весенний конъюнктивит, увеит, связанный с болезнью Бехчета, герпетический кератит, коническая роговица, эпителиальная дистрофия роговицы, помутнение роговицы, буллезный мукосинехиальный атрофический дерматит, разъедающая язва роговицы, склерит, офтальмопатия Грейвса, тяжелое внутриглазное воспаление, воспаление слизистой оболочки или кровеносных сосудов, такие как заболевания, опосредованные лейкотриеном В4, язва желудка, повреждения сосудов, в результате ишемии и тромбоза, ишемическое заболевание кишечника, воспаление кишечника (например, заболевание Крона и язвенный колит), некротизирующий энтероколит, заболевания почек, включая интерстициальный нефрит, синдром Гудпасчера, гемолитическо-уремический синдром и диабетическая нефропатия, заболевания ЦНС, включая множественный миозит, инфекционный полиневрит, болезнь Меньера и радикулопатию, диффузные болезни соединительной ткани, включая склеродермию, глаукому Вегенера и синдром Шегрена, хронические аутоиммунные заболевания печени, включая аутоиммунный гепатит, билиарный первичный цирроз печени и склерозирующий холангит), частичная резекция печени, острый некроз печени (например, некроз, вызванный токсинами, вирусный гепатит, шок или аноксия), вирусный гепатит типа В, гепатиты, не относящиеся к типам А и В, и цирроз печени, фульминантный гепатит, пустулезный псориаз, болезнь Бехчета, активный хронический гепатит, синдром Эванса, сенная лихорадка, идиопатический гипопаратиреоидизм, Адиссонова болезнь, аутоиммунный атрофический гастрит, люпоидный гепатит, тубулоинтерстициальный нефрит, мембранный нефрит, боковой амиотрофический склероз или ревматизм.

Отторжение трансплантата означает острое или хроническое отторжение клеток, тканей или органов алло- или ксенотрансплантатов, например островков Лангерганса, стволовых клеток, костного мозга, кожи, мышц, ткани роговицы, нейронной ткани, сердца, легких, совместного трансплантата сердце-легкие, почек, печени, кишечника, поджелудочной железы, трахеи или пищевода, или заболевание трансплантат против хозяина. Хроническое отторжение также называется отторжением трансплантатов сосудов или васкулопатией.

3. Фармацевтическая комбинация, как определено выше в пункте 1), например, в форме набора, который включает инструкции по применению, например, для использования согласно способу, как определено в пункте 2) выше.

4. Фармацевтическая комбинация, как определено выше в пункте 1) для применения при получении лекарственного средства, предназначенного для применения согласно способу, как описано выше в пункте 2).

Применение комбинации по настоящему изобретению в способе, как определено выше, описано в методиках испытаний на моделях животных, а также в ходе клинических испытаний, например, по описанным ниже методикам.

А1. Трансплантация сердца крысы

Для испытаний использовали комбинации штаммов: Male Lewis (RT¹ гаплотип) и BN (RT¹ гаплотип). Животных анастезировали ингаляцией изофлуорана. После гепаринизации крысы-донора через нижнюю полую брюшную вену с одновременным обескровливанием через аорту, грудную клетку вскрывали и быстро охлаждали сердце. Аорту перевязывали и отделяли до первого ответвления, плечеголовной ствол отделяли до первого разветвления. Левую легочную артерию перевязывали и отделяли, правую сторону отделяли, а левую открывали. Все остальные сосуды иссекали, перевязывали и отделяли, а донорское сердце помещали на лед в физиологическом растворе.

Рецепиента готовили, иссекая и пережимая нижнюю брюшную подпочечную аорту и полую вену. Трансплантат имплантировали анастомозом «конец в бок», с использованием хирургической мононити 10/0, между плечеголовым стволом донора, аортой реципиента и правой легочной артерией донора к полой вене реципиента. Зажимы удаляли, трансплантат закрепляли в брюшной полости, брюшную полость промывали теплым физиологическим раствором, животное зашивали и оставляли для восстановления под нагревательной лампой. Приживаемость трансплантата регистрировали ежедневной пальпацией бьющегося донорского сердца через брюшную стенку. Отторжение признавали полным, если сердцебиение прекращалось. Улучшение приживаемости трансплантата наблюдали у животных, которым вводили комбинацию по настоящему изобретению, например, комбинацию соединения А в форме гидрохлорида и соединения СР-690550 в форме моноцитрата, причем каждый компонент комбинации вводили перорально, в суточной дозе от 0,1 до 50 мг/кг. Таким образом, при введении соединения А в форме гидрохлорида, в суточной дозе от 0,3 до 3 мг/кг и моноцитрата соединения СР-690550 при ЕС₅₀ (концентрация лекарственного средства в крови, при которой у 50% животных наблюдается функционирование трансплантата в течение >28 сут) 60 мг/мл, наблюдается значительное увеличение приживаемости трансплантата.

А2. Трансплантат островковых клеток

Островковые клетки мышей BALB/C (H-2d) трансплантировали под (почечную капсулу STZ-индуцированных диабетических мышей СВА (Н-2^k).

Реципиентам в течение 50 сут после трансплантации островковых клеток перорально вводили комбинацию по настоящему изобретению, причем каждый компонент предпочтительно вводили в суточной дозе от 0,1 до 40 мг/кг. Функционирование трансплантата регистрировали, измеряя уровень глюкозы в крови один раз в сутки. Например, нормальная гликемия сохранялась у животных в течение 80±5 и в течение >115 сут у леченных животных, а у нелеченных животных в течение 10±2 сут, например, при лечении гидрохлоридом соединения А в дозе от 1 до 3 мг/сут и моноцитратом СР 690550 в дозе от 0,5 до 75 мг/кг/сут.

В. Комбинированное лечение

Пригодными клиническими испытаниями являются, например, испытания с открытой этикеткой и с увеличением дозы для пациентов, страдающих от псориаза или рассеянного склероза. Такие испытания подтверждают синергетическое действие активных ингредиентов в составе комбинации по настоящему изобретению. Благоприятное действие при лечении псориаза или рассеянного склероза определяли напрямую по результатам указанных испытаний, как известно специалистам в данной области знаний. Такие испытания прежде всего пригодны для сравнения действия монотерапии при использовании активных ингредиентов и комбинации по настоящему изобретению. Предпочтительно дозу агента (а) увеличивают до достижения максимально переносимой допустимой дозы, а агент (b) применяют в фиксированной дозе. В другом варианте агент (а) применяют в фиксированной дозе, а дозу агента (b) увеличивают. Каждый пациент получает дозы агента (а) ежедневно или через определенные промежутки времени. Эффективность лечения определяют в таких испытаниях, например, через 12, 18 или 24 недели, оценивая интенсивность симптомов каждые 6 недель.

В еще одном варианте для оценки преимуществ комбинации по настоящему изобретению используют плацебо-контролируемые двойные, слепые испытания, например, при трансплантации органа, ткани или клеток, например островковых клеток Лангерганса.

Введение фармацевтической комбинации по настоящему изобретению обеспечивает не только благоприятный эффект, например синергетический терапевтический эффект, приводящий, например, к облегчению, приостановке развития или подавлению симптомов заболевания, но также и проявление других неожиданных благоприятных эффектов, например уменьшение побочных действий, улучшение качества жизни пациента или снижение заболеваемости по сравнению с монотерапией с использованием только одного из фармацевтически активных ингредиентов, использованных в комбинации по настоящему изобретению.

Следующим преимуществом является возможность использования меньших доз активного ингредиента в комбинации по настоящему изобретению, например, дозировка не только уменьшается, но также снижается частота введения, что уменьшает число и тяжесть побочных эффектов. Такие преимущества удовлетворяют требованиям пациентов, нуждающихся в лечении.

Термины «совместное введение», «комбинированное введение» или т.п., используемые в данном контексте, означают введение выбранных терапевтических агентов одному пациенту, при этом используют схему лечения, при которой агенты не обязательно вводить одним и тем же способом или одновременно.

Один объект настоящего изобретения относится к фармацевтической композиции, включающей такое количество лекарственного средства, которое оказывает совместное терапевтически эффективное действие против отторжения трансплантата, аутоиммунных заболеваний или нарушений и связанных с ними заболеваний, причем указанная композиция включает комбинацию по настоящему изобретению. При испытании данной композиции агенты (а) и (b) вводят совместно, последовательно друг за другом или в отдельности в виде одной объединенной лекарственной формы или в виде двух отдельных лекарственных форм. Стандартная лекарственная форма может представлять собой фиксированную комбинацию.

Фармацевтические композиции для отдельного введения агента (а) и агента (b) или для введения в виде фиксированной комбинации, т.е. в виде отдельной галеновой композиции, включающей по крайней мере два компонента а) и b) по настоящему изобретению, получают по известным методикам, и указанные композиции пригодны для энтерального, например перорального или ректального введения и парентального введения млекопитающим (теплокровным животным), включая человека. Такие композиции включают терапевтически эффективное количество по крайней мере одного фармацевтически активного компонента комбинации, например указанного выше, или в комбинации с одним или более фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем, прежде всего, предназначенного для энтерального или парентального введения.

Пригодные фармацевтические композиции включают, например, от приблизительно 0,1% до приблизительно 99,9%, предпочтительно от приблизительно 1% до приблизительно 60% активного ингредиента(ов). Фармацевтические композиции, предназначенные для комбинированной терапии и энтерального или парентального введения, включают, например, композиции, в виде стандартной лекарственной формы, такие как таблетки с сахарным покрытием, таблетки, капсулы, суппозитории или ампулы. Если не указано иное, эти композиции получают по известным методикам, например при стандартном смешивании и гранулировании, нанесении сахарного покрытия, растворении или лиофилизации. Следует отметить, что содержание каждого компонента в индивидуальной лекарственной форме не обязательно составляет эффективное количество, так как необходимое эффективное количество достигается при введении множества лекарственных форм.

Прежде всего, терапевтически эффективное количество каждого компонента комбинации по настоящему изобретению вводят одновременно или последовательно в любом порядке, и компоненты также вводят в отдельности или в виде фиксированной комбинации. Например, способ предотвращения или лечения отторжения трансплантатов или аутоиммунных заболеваний по настоящему изобретению включает (1) введение первого агента а) в свободной форме или в виде фармацевтически приемлемой соли и (2) введение агента b) в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли, одновременно или последовательно в любом порядке, в терапевтически эффективных количествах, предпочтительно в синергетически эффективных количествах, например, в виде суточных доз или доз, введенных попеременно, в соответствии с указанными в данном контексте количествами. Отдельные компоненты комбинации по настоящему изобретению вводят в отдельности в различное время в течение курса лечения или одновременно в виде нескольких или одной формы комбинации. Более того, термин «введение» означает применение активного компонента комбинации в виде пролекарства, которое превращается in vivo в активный компонент. Настоящее изобретение включает все режимы одновременного или попеременного лечения, также как и термин «введение».

Эффективная доза каждого компонента в комбинации по настоящему изобретению изменяется в зависимости от конкретного соединения или применяемой фармацевтической композиции, способа введения, состояния, подлежащего лечению, и тяжести заболевания. Таким образом, режим лечения с использованием комбинации по настоящему изобретению выбирают с учетом множества различных факторов, включая способ введения и состояние почек и печени пациента. Терапевт, клиницист или ветеринар может определить и назначить эффективную дозу каждого из активных ингредиентов, необходимую для облегчения интенсивности симптомов, лечения или приостановки прогрессирования заболевания. Оптимальную точность при определении концентрации активного ингредиента в интервале проявления эффективности в отсутствии токсичности рассчитывают с учетом кинетики доставки активных ингредиентов в участки-мишени.

Суточные дозы агентов а) или b) зависят от множества факторов, например, от конкретного соединения, состояния, подлежащего лечению, и требуемого эффекта. В общем случае, однако, удовлетворительные результаты достигаются при введении агента а) в дозе приблизительно от 0,03 до 5 мг/кг в сутки, прежде всего от 0,1 до 5 мг/кг в сутки, например, от 0,1 до 2,5 мг/кг в сутки, в виде единой дозы или в виде нескольких раздельных доз. Агонист или модулятор рецептора S1P, например, соединение формулы I-XIII, например, соединение А или В, вводят любым пригодным способом, прежде всего энтерально, например перорально, например, в форме таблеток, капсул, питьевых растворов или парентально, например в форме растворов или суспензий для инъекций. Пригодные стандартные лекарственные формы для перорального введения включают приблизительно от 0,02 до 50 мг активного ингредиента, обычно от 0,1 до 30 мг, например, соединения А или В, в смеси с одним или более фармацевтически приемлемых разбавителей или носителей.

Агент b), например соединение СР-690550 или соединение формулы XVII, вводят человеку в суточной дозе от 0,5 до 1000 мг. Пригодные стандартные лекарства для перорального введения включают от приблизительно 0,1 до 500 мг активного ингредиента в смеси с одним или более фармацевтически приемлемым разбавителем или носителем.

Введение фармацевтической комбинации по настоящему изобретению обеспечивает не только благоприятный эффект, например синергетический терапевтический эффект, например, при подавлении отторжения трансплантатов у пациентов, а также при замедлении или приостановке развития аутоиммунных заболеваний, но также обеспечивает другие неожиданные благоприятные эффекты, например снижение побочных действий, улучшение качества жизни или снижение заболеваемости, по сравнению с монотерапией при введении только одного из фармацевтически активных ингредиентов, которые используются в комбинации по настоящему изобретению. Другое преимущество настоящего изобретения заключается в том, что можно использовать более низкие дозы активного ингредиента, входящего в состав комбинации, например, требуется вводить не только более низкие дозы, но и вводить их более редко, что в свою очередь позволяет снизить побочные действия. Такие характеристики находятся в соответствии с требованиями и пожеланиями пациентов, нуждающихся в лечении.

Предпочтительной является комбинация гидрохлорида FTY720 и моноцитрата СР-690555.

Изобретение относится к лекарственным средствам и касается фармацевтической комбинации, предназначенной для использования в способе лечения или профилактики аутоиммунных заболеваний или нарушений, или отторжения трансплантатов, включающей 2-амино-2-[2-(4-октилфенил)этил]пропан-1,3-диол (FTY720), фосфат или фармацевтически приемлемую соль указанного соединения и ингибитор киназы JAK3, представляющий собой моноцитрат 3-{(3R-,4R)-4-метил-3-[метил-(7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)амино]пиперидин-1-ил}-3-оксопропионитрила (СР-690555), в эффективных количествах. Также раскрыт способ лечения или профилактики аутоиммунных заболеваний или отторжения трансплантатов клеток, тканей или органов с использованием указанной комбинации. Задачей изобретения является обеспечение эффективных и безопасных агентов для лечения или профилактики аутоиммунных заболеваний и состояний или отторжения трансплантатов. 2 н. и 7 з.п. ф-лы.

1. Фармацевтическая комбинация, предназначенная для использования в способе лечения или профилактики аутоиммунных заболеваний или нарушений или отторжения трансплантатов, включающая 2-амино-2-[2-(4-октилфенил)этил]пропан-1,3-диол (FTY720), фосфат или фармацевтически приемлемую соль указанного соединения и ингибитор киназы JAK3, представляющий собой моноцитрат 3-{(3R,4R)-4-метил-3-[метил-(7Н-пирроло[2,3-с1]пиримидин-4-ил)амино]пиперидин-1-ил}-3-оксопропионитрила (СР-690555), в эффективных количествах.

2. Фармацевтическая комбинация по п.1, включающая фосфат FTY720.

3. Фармацевтическая комбинация по п.1, включающая гидрохлоридную соль FTY720.

4. Фармацевтическая комбинация по любому из пп.1-3, в которой ингибитор киназы JAK3 обладает значением IC₅₀<0,1 мкМ по данным анализа IL-2-зависимой пролиферации клеток CTL/L и НТ-2 и по данным анализа IL-2-зависимой пролиферации моноядерных клеток периферической крови человека.

5. Фармацевтическая комбинация по любому из пп.1-4, предназначенная для использования в способе лечения или профилактики аутоиммунного заболевания или нарушения.

6. Фармацевтическая комбинация по любому из пп.1-5, где комбинация представляет собой набор.

7. Способ лечения или профилактики аутоиммунных заболеваний или нарушений или отторжения трансплантатов у субъекта, нуждающегося в таком лечении, включающий совместное введение указанному субъекту, например, одновременно или последовательно терапевтически эффективных количеств 2-амино-2-[2-(4-октилфенил)этил]пропан-1,3-диола, фосфата или фармацевтически приемлемой соли указанного соединения и ингибитора киназы JAK3, представляющего собой моноцитрат 3-{(3R,4R)-4-метил-3-[метил-(7Н-пирроло[2,3-с1]пиримидин-4-ил)амино]пиперидин-1-ил}-3-оксопропионитрила (СР-690555).

8. Способ по п.7, в котором используют фосфат FTY720.

9. Способ по п.7, в котором используют гидрохлоридную соль FTY720.