КОМПОЗИЦИИ ДЛЯ ОКРАСКИ МАЗКОВ КРОВИ, КОСТНОГО МОЗГА, ПУНКТАТОВ И ОТПЕЧАТКОВ РАЗЛИЧНЫХ ОРГАНОВ Российский патент 2011 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине и биологии и может быть использовано при микроскопическом исследовании мазков крови, костного мозга, пунктатов и отпечатков различных органов в клинических лабораториях различных лечебных учреждений, а также при проведении научных морфологических исследований в ВУЗах и НИИ медицинского и биологического профиля.

Наиболее распространенным красителем для окраски гематологических и цитологических препаратов, использующимся в настоящее время, является краситель Романовского-Гимзы. Этот краситель был изобретен русским врачем Д.Л. Романовским в 1891 году и усовершенствован немецким химиком Giemsa в 1905 году (Тодоров Й. Клинические лабораторные исследования в педиатрии. София: Медицина, 1963. - 874 с.). Знакомство с ТУ производства красителя Романовского показало, что за последние 60 лет они не изменились. Нами обнаружено, что за весь этот период времени в документе ТУ 6-09-349-75 производства красителя Романовского постоянно повторяется одна и та же ошибка: наряду с указанием дозировки сухого красителя Романовского, метанола и глицерина отсутствует дозировка сухого красителя азура 2. Поэтому на различных заводах количество азура 2 добавляют по своему усмотрению. Только эта ошибка в ТУ объясняет резкие различия красящих свойств разных партий красителя Романовского.

Краситель Романовского имеет массу существенных недостатков. К каждой партии красителя необходимо подбирать pH буфера для приготовления рабочего раствора красителя. Рабочий раствор красителя является нестойким, поэтому его необходимо готовить ежедневно. Часто краситель Романовского неудовлетворительно окрашивает различные структуры клеток: эритроцитов, зернистости трех типов гранулоцитов, тромбоцитов, эухроматина и гетерохроматина ядер клеток. Время окраски препаратов рабочим раствором красителя длительное - 20-30 минут. Для приготовления 100 мл рабочего раствора красителя требуется много концентрированного красителя Романовского - 10 или 5 мл.

Задачи предлагаемого изобретения - повысить качество окраски цитоплазматических и ядерных структур все типов клеток, обеспечить многократное использование рабочего раствора красителя в течение не менее 1 недели после его приготовления, повысить экономичность использования красителя (увеличить в 30-50 раз количество окрашенных препаратов единицей красителя по сравнению с аналогами).

Поставленные задачи достигаются увеличением концентрации ингредиентов в композиции, дополнительным введением буферных компонентов. Выпускаемый различными фирмами краситель Романовского готовится по рецептам, созданным более 100 лет назад, и включает азур-эозин по Романовскому (сухой), азур 2, метанол и глицерин. Конечная концентрация азур-эозина по Романовскому в стандартном красителе составляет 0,76%. Композиции предлагаемого изобретения включают следующие ингредиенты: метанол, глицерин, азур 2, эозин-калий, гидрооксид калия, лимонная кислота. Количественные соотношения ингредиентов композиции следующие: метанол - 1 литр, глицерин - 100 мл, азур 2 - 12,5-15 г, эозин-калий - 8,3-10,0 г, гидрооксид калия - 0,15-0,23 г, лимонная кислота - 0,18-0,26 г. Конечная концентрация красителей в композициях колеблется от 2,08% до 2,5%, т.е. в 2,5-3 раза выше по сравнению с аналогом.

Осуществление изобретения.

Для приготовления композиции №1 в стеклянную или пластиковую емкость наливают 1 литр метанола, добавляют 100 мл глицерина и перемешивают. Всыпают навеску 12,5 г азура 2 и тщательно перемешивают. Затем в эту же емкость добавляют 8,3 эозина калия и перемешивают. Емкость с растворами красителей помещают в термостат с температурой 50-52 градуса на 18-24 часа. В нагретые растворы красителей всыпают последовательно 0,15 г гидрооксида калия и 0,18 г лимонной кислоты, каждый раз перемешивая. После охлаждения композиции до комнатной температуры она готова к употреблению.

Приготовление композиции №2 проводится аналогичным способом, только отличается концентрацией ингредиентов. Количественные соотношения ингредиентов: метанол - 1 литр, глицерин - 100 мл, азур 2 - 15 г, эозин-калий - 10,0 г, гидрооксид калия - 0,23 г, лимонная кислота - 0,26 г.

Для окраски мазков крови и цитологических препаратов из предлагаемой композиции готовят рабочий раствор красителя №1 следующего состава из расчета на 100 мл дистиллированной воды:

а) дистиллированная вода - 100 мл;

б) композиция №1 - 2,5 мл.

Состав рабочего раствора красителя №2:

а) дистиллированная вода - 100 мл;

б) композиция №2 - 2 мл.

Схема проведения окраски:

а) фиксация мазков путем погружения в раствор фиксатора, налитого в контейнер, на 3-5 минут;

б) из фиксатора мазки быстро удадяют и тут же погружают в рабочий раствор красителя (без промывки);

в) промывают 2-4 с в смеси, состоящей из 100 мл дистиллированной воды и 3 мл охлажденной воды из горячего водопроводного крана, и высушивают. По ГОСТУ горячая вода имеет щелочную реакцию, а дистиллированная вода имеет pH 5,4-5,7 и непригодна для промывки. Добавление горячей воды делает дистиллированную воду нейтральной.

Рабочие растворы предлагаемых композиций можно использовать с имеющимися в продаже фиксаторами: эозин-метиленовым синим по Май-Грюнвальду и эозин-метиленовым синим типа Лейшмана. Но наилучшие результаты композиции для окраски гематологических и цитологических препаратов дают с предложенными нами ранее «Композициями для фиксации гематологических и цитологических препаратов». Это объясняется тем, что в композициях для фиксации и окраски препаратов подобрано оптимальное молярное соотношение основных тиазиновых красителей и эозина, а также поддерживается pH на определенном уровне.

Преимущества предлагаемых композиций для окраски гематологических и цитологических препаратов по сравнению с существующими аналогами:

а) высокое качество окраски цитоплазматических и ядерных структур всех типов клеток, гранул базофильных лейкоцитов и тучных клеток, гранул нейтрофилов, азурофильной зернистости различных клеток;

б) для приготовления рабочего раствора красителя не требуется буфер, отпадает необходимость в подборе pH буфера;

в) нет необходимости ежедневно готовить рабочий раствор красителя, т.к. он сохраняет красящие свойства до 1-2 недель;

г) экономное расходование предлагаемой композиции, т.к. на 100 мл дистиллированной воды требуется всего 2-2,5 мл по сравнению с 10 и 5 мл во всех аналогах;

д) предлагаемые композиции обеспечивают окраску одной единицей объема гораздо большего количества препаратов (в 30-50 раз) по сравнению с аналогами.

Изобретение относится к медицине и биологии и может быть использовано при микроскопическом исследовании мазков крови, костного мозга, пунктатов и отпечатков различных органов в клинических лабораториях различных лечебных учреждений. Композиции для окраски мазков крови, костного мозга, пунктатов и отпечатков различных органов включают следующие ингредиенты: метанол - 1 литр, глицерин - 100 мл, азур 2 - 12,5-15 г, эозин калий - 8,3-10 г, гидрооксид калия - 0,15-0,23 г, лимонная кислота - 0,18-0,26 г. Использование композиции обеспечивает высокое качество окраски цитоплазматических и ядерных структур всех типов клеток, гранул базофильных лейкоцитов и тучных клеток, гранул нейтрофилов, азурофильной зернистости различных клеток, обеспечивает многократное использование рабочего раствора красителя в течение не менее 1 недели после его приготовления, повышает экономичность использования красителя.

Композиция для окраски мазков крови, костного мозга, пунктатов и отпечатков различных органов содержит следующие ингредиенты: метанол - 1 л, глицерин - 100 мл, азур 2 - 12,5-15 г, эозин калий - 8,3-10 г, гидрооксид калия - 0,15-0,23 г, лимонная кислота - 0,18-0,26 г.