СПОСОБ ОКРАСКИ МАЗКОВ КРОВИ Российский патент 1997 года по МПК G01N1/30 G01N1/28 

Изобретение относится к медицине и ветеринарии и может быть использовано для диагностики протозойных заболеваний человека и животных.

Известны способы окраски мазков периферийной крови по Романовскому-Гимзе и генцианвиолетом для диагностики протозойных заболеваний, включающие приготовление мазков крови, их фиксацию и окрашивание в растворе краски в течение одного часа (см. Б.И. Антонов и др. Лабораторные исследования в ветеринарии. Справочник, М. "Агропромиздат", 1986).

Недостатком является то, что в указанном способе исключено предварительное приготовление смеси красок, способ отнимает много времени и не обеспечивает чистоту мазков, которые содержат осадок частиц красок и другие частицы.

Цель изобретения повышение эффективности диагностики за счет ускорения окраски мазков и повышения качества мазков для микроскопического исследования.

Существо способа заключается в следующем. Для окрашивания мерозоитов саркоцист, анаплазм и пироплазмид мазки готовят из периферийной крови овец и крупного рогатого скота, а для окрашивания цистозоитов саркоцист готовят мазки-отпечатки (кляч-препараты) из содержимого саркоцист. Приготовленные мазки фиксируют. Окрашивание проводят в течение 15.20 с. Приготовленные мазки крови на предметных стеклах опускают поочередно по четыре-пять раз в реагенты: метиловый спирт (фиксатор), 0,5%-ный раствор эозина, 0,5%-ный раствор азура и 0,5% -ный раствор метиленового синего. Затем мазки ополаскивают в дистиллированной воде и обезвоживают. Мазки готовы к микроскопированию.

Необходимым условием является дискретное помещение мазков в растворы и реагенты, то есть не выдержка четыре-пять секунд, а выдержка по одной секунде несколько раз. Дело в том, что авторами взята на вооружение практика окрашивания тканей (в литературе мы источника не нашли возможно это народный прием), когда ткань не выдерживают в красителе, а несколько раз окунают и вынимают с выдержкой некоторого времени на воздухе. Возможно составляющие воздух газы способствуют более интенсивному окрашиванию.

Эффективность окрашивания также повышается за счет того, что применение красителя имеют разную природу: эозин (эозин К, эозин N, эозин ) анионовый краситель, азур (азур АБ, азур А) и метиленовый синий катионовые красители.

Предложенный способ позволяет за короткий промежуток времени (15.20 с против одного часа в известном способе) окрасить мазок и выявить инвазированность животного. Это экономически выгодно при массовых обследованиях и диспансеризации.

При сравнении предложенного способа окраски мазков с ранее известными (по Романовскому-Гимзе и генцианвиолетом) установлено, что новый способ не только сокращает срок диагностики заболеваний, но и повышает качество мазков они не содержат осадка красок и других частиц, выявляемых при известных способах.

Еще одним преимуществом нового способа является то, что, в отличие от известных способов, при которых растворы готовятся перед использованием и не хранятся долго, приготовленные растворы красок не теряют свойства окрашивать мазки в течение 5.6 дней.

Пример 1. Окрашивали мазок крови от больной пироплазмозом лошади. Мазок высушили на воздухе. Зафиксировали в метиловом спирте. Стекло с мазком крови опускали в 0,5%-ный раствор эозина по одной секунде четыре раза. Дали стечь краске и опускали стекло в 0,5%-ный раствор азура также четыре раза по одной секунде. Затем также опускали четыре раза в 0,5%-ный раствор метиленового синего. Мазок ополоскали в дистиллированной воде, просушили фильтровальной бумагой. Под микроскопом мазок выглядит чистым, нет посторонних включений, пироплазмы четко выделяются на розовом фоне.

Пример 2. Использовали для окраски мазков крови сложный краситель, приготовленного тщательным растиранием с глицерином и метиловым спиртом, взятых в количестве по 250 мл, азура 0,8 г и эозина 3 г, смесь выдерживают в термостате 5 дней, фильтруют. Перед использованием в 1 мл дистиллированной воды вносили 3 капли указанного раствора. Окрашивали мазки в течение 1 ч, краску слили, мазок высушили. Включение в мазок частиц краски несколько затрудняет просмотр мазка под микроскопом.

Сравнивая известный и предложенный способы пришли к выводу, что известный способ более трудоемкий в исполнении, качество препарата намного хуже, чем при предложенном способе, время на приготовление краски и окрашивание мазка во много раз больше.

Использование предложенного способа позволяет получать экономический эффект, обусловленный снижением трудоемкости способа, сокращением затрат времени и повышением качества препаратов, что способствует эффективной диагностике и своевременному лечению.

Использование: в области медицины и ветеринарии и может применяться для диагностики протозойных заболеваний. Сущность изобретения: мазки фиксируют и окрашивают опусканием их по 4-5 раз в течение одной секунды в растворы анионового красителя - 0,5%-ного раствора эозина, а затем в катионовые красители - 0,5%-ный раствор азура и отдельно в 0,5%-ный раствор метиленового синего. Способ позволяет ускорить окраску мазков и повысить качество мазков для микроскопического исследования.

Способ окраски мазков крови, включающий фиксацию мазка метиловым спиртом и окраску с растворах эозина, азура и метиленового синего, отличающийся тем, что мазки опускают по 4 5 раз по одной секунде вначале в анионовый краситель 0,5% -ный раствор эозина, а затем в катионовые красители 0,5%-ный раствор азура и отдельно в 0,5%-ный раствор метиленового синего также по 4 5 раз по одной секунде.