СПОСОБ ОКРАСКИ МАЗКОВ КРОВИ Российский патент 2007 года по МПК G01N33/48 G01N1/30 

Область техники, к которой относится изобретение.

Изобретение относится к ветеринарии и медицине, в частности к способам окраски мазков крови, и может быть рекомендовано к применению при проведении гематологических исследований, а также при диагностике кровопаразитарных заболеваний.

Уровень техники.

Известен способ окраски мазков крови по Романовскому-Гимза, заключающийся в однократном помещении мазков крови в раствор красителя с дальнейшим промыванием дистиллированной водой и высушиванием на открытом воздухе (Меркулов Г.А. Курс патологогистологической техники. Ленинград: Медгиз, 1961, с.188-189; 191-192).

Недостатки данного способа:

- требуется наличие свежеприготовленной дистиллированной воды;

- рабочий раствор красителя быстро портится и не может быть использован для повторного окрашивания;

- качество и скорость окрашивания существенно зависят от температуры окружающей среды (чем ниже температура, тем продолжительнее окрашивание);

- время окрашивания составляет в среднем 30-60 минут, а при проведении некоторых лабораторных исследований такое промедление недопустимо.

Известен способ окраски мазков крови по Лейшману, заключающийся в нанесении краски Лейшмана на нефиксированный мазок, с дальнейшим приливанием на мазок дистиллированной воды, промыванием мазка под водопроводной водой и высушиванием на открытом воздухе (Сапожников А.Г., Доросевич А.Е. Гистологическая и микроскопическая техника. Смоленск: САУ, 2000, с.190-191).

Недостатки данного способа:

- раствор красителя наносится на нефиксированный мазок, что может служить причиной получения недоброкачественно окрашенных мазков;

- требуется наличие свежеприготовленной дистиллированной воды;

- дистиллированная вода смешивается с красителем непосредственно на самом мазке, что создает определенные затруднения при окрашивании.

Наиболее близким по технической сущности и достигаемому положительному эффекту и принятым авторами за прототип является способ окраски мазков крови по Романовскому-Гимза. Сущность данного способа сводится к следующему. Вначале готовят рабочий раствор краски. Для этого на 1 мл дистиллированной воды добавляют 2-3 капли фабричного раствора краски Романовского-Гимза (азур-эозин). Мазки крови помещают в стеклянные кюветы мазком вниз и наливают под них краску (рабочий раствор). Можно поместить препараты в специальные пластмассовые кюветы вертикально и залить рабочим раствором краски. Окрашивание продолжается 30-60 минут в зависимости от температуры окружающей среды. Чем ниже температура окружающей среды, тем продолжительнее окрашивание. Выбор оптимального режима окраски мазков крови проводят каждый раз. Хорошо окрашенные мазки имеют розово-фиолетовый цвет; недокрашенные - розово-красноватый; перекрашенные - темно-фиолетовый. Окрашенные мазки промывают дистиллированной водой и высушивают на воздухе (Орлов Ф.М. Лабораторные методы исследования в ветеринарии. T.1., - Госиздат. сельхоз. литер., 1953, с.212-215).

Однако следует отметить, что данный способ окраски мазков крови имеет следующие недостатки:

- предполагает наличие свежеприготовленной дистиллированной воды (в случае если вода окажется несвежеприготовленной, краска при разбавлении ее такой водой выпадает в виде хлопьевидного осадка, что приводит раствор в непригодность для дальнейшего использования, а это сопряжено с материальными потерями);

- при понижении температуры окружающей среды время окрашивания увеличивается от 30 до 60 минут, а при проведении некоторых лабораторных исследований такое промедление недопустимо;

- рабочий раствор красителя готовится каждый раз заново, что приводит к затратам временных и материальных ресурсов.

Раскрытие изобретения

Задачей предлагаемого изобретения является разработка быстрого и качественного получения больших и малых партий качественно окрашенных мазков крови при проведении гематологических исследований в медицинской и ветеринарной лабораторной практике.

Технический результат, который может быть получен с помощью предлагаемого изобретения, сводится к получению в лабораторных условиях качественно и относительно быстро окрашенных мазков крови, что позволит сотрудникам ветеринарных и медицинских лабораторий экономить временные и материальные ресурсы, так как рабочие растворы предлагаемых красителей хранятся и не портятся в течение длительного времени (до одного года) и могут быть использованы многократно.

Технический результат достигается с помощью способа окраски мазков крови, включающего приготовление мазков крови, их фиксацию раствором Никифорова с высушиванием на воздухе и последующим окрашиванием. Окрашивание проводят двумя красителями, в качестве которых взяты гематоксилин Эрлиха и эозин-натрий, при этом рабочий раствор гематоксилина Эрлиха выдерживают в герметичной емкости в течение 360 дней, затем производят окрашивание, причем предварительно мазки помещают в раствор гематоксилина Эрлиха на время 2-3 минуты, после чего погружают мазки в емкость с водопроводной водой, время экспозиции в которой составляет 1-2 минуты, до посинения мазков, затем в 1%-ный водный раствор эозина-натрия на время 1-2 минуты, промывают дистиллированной водой в течение 8-10 секунд и высушивают на воздухе.

Сущность способа окраски мазков крови сводится к следующему. Вначале готовят мазки из периферической крови. Время окрашивания составляет 5-7 минут. Приготовленные мазки фиксируют раствором Никифорова (спирт-эфир в соотношении 1:1) по общепринятой методике. Далее мазки помещают в стеклянную емкость с рабочим раствором гематоксилина Эрлиха 360-дневной выдержки (если количество мазков не превышает 10, то краситель можно наносить капельным способом) на 2-3 минуты при комнатной температуре (+25-27°С). После извлечения мазков из раствора красителя их помещают в емкость с водопроводной водой на 1-2 минуты (до посинения мазков). Затем мазки извлекают из емкости с водопроводной водой и после высушивания фильтровальной бумагой помещают в емкость с 1%-ным водным раствором эозина-натрия на 1-2 минуты. После извлечения мазков из раствора эозина их промывают дистиллированной водой в течение 8-10 секунд и высушивают на воздухе.

Осуществление изобретения

Примеры конкретного осуществления предлагаемого способа окраски мазков крови.

Пример 1

С целью окрашивания были взяты 2 партии мазков, по 30 мазков в каждой партии. Первая партия была окрашена по методу Романовского-Гимза и служила контролем. Вторую партию мазков окрашивают следующим образом. Мазки крови подготавливают к окрашиванию согласно принятой методике (Позов С.А., Багамаев Б.М. Лабораторные методы исследования крови и мочи (методические указания), Ставрополь, 1996, с.12-14). Были взяты 2 красителя: 1%-ный раствор эозина на дистиллированной воде и гема-токсилин Эрлиха, который включает в себя гематоксилин (2,0 мл), абсолютный спирт (100 куб. см), глицерин (100 куб. см), дистиллированную воду (100 куб. см) и ледяную уксусную кислоту (10 куб. см). Краска была приготовлена по общепринятой методике (Меркулов Г.А. Курс патологогистологической техники. Ленинград: Медгиз., 1961, с.98). Приготовленный раствор красителя согласно методике помешают в чистую стеклянную емкость, герметично закупоривают и выдерживают два месяца. Мазки вначале помещают в гематоксилин на 10 минут, по истечении которых промывают их в водопроводной воде (10 сек) и помещают в емкость с водопроводной водой до посинения (1 мин). Затем мазки помещают в раствор эозина на 3 минуты, по истечении которых промывают их в дистиллированной воде и высушивают на воздухе.

Анализ полученных данных показал, что первая группа мазков была окрашена удовлетворительно, из 30 стекол были забракованы 9. Во время окрашивания имели место некоторые сложности, так как приходилось вести постоянный контроль за температурой окружающей среды и сопоставлять полученные данные со временем окрашивания. Мазки, окрашенные по предлагаемому методу, были непригодны для исследования вследствие недокрашивания ядер и включений.

Пример 2

Партия стекол (30 шт.) была окрашена аналогично примеру 1(по предложенному способу), но было увеличено время экспозиции в гематоксилине до 20 минут.

Анализ полученных данных показал, что увеличение экспозиции в гематоксилине позволяет получить нормально окрашенные ядра и клеточные включения, но цитоплазма оказалась перекрашенной эозином. Однако часть полученных мазков подлежала оценке.

Пример №3

Следующую партию мазков (30 шт.) окрашивают аналогично примерам 1, 2, но в эозине мазки были выдержаны 2 минуты (на 1 мин. меньше, чем в предыдущем случае).

Анализ полученных данных показал, что мазки, окрашенные данным методом, превосходят по качеству мазки, полученные в предыдущих случаях, но время окрашивания составило 25 минут, что незначительно отличается от времени окрашивания мазков крови по Романовскому-Гимза.

Пример 4

Партию мазков крови в количестве 30 стекол окрашивают аналогично примерам 1, 2, 3, но в данном случае используют гематоксилин, выдержанный в стеклянной герметичной укупоренной емкости в течение 360 дней. Время окрашивания в гематоксилине составило 5 минут, а в эозине - 2 минуты. Мазки оказались перекрашены.

Анализ полученных данных позволил сделать вывод о том, что более выдержанный раствор гематоксилина быстрее и интенсивнее окрашивает мазки крови.

Пример 5

Данную партию мазков крови (30 стекол) окрашивают аналогично примерам 1, 2, 3, 4. Время нахождения мазков в гематоксилине 360-дневной выдержки составляет 2 минуты; в эозине - 2 минуты.

Анализ полученных данных позволил сделать вывод о том, что предложенный способ окраски мазков крови превосходит наиболее часто применяемый (по Романовскому-Гимза) и позволяет получить качественно окрашенные мазки крови за более короткое время (7-10 минут) в зависимости от срока выдержки раствора гематоксилина.

Использование предложенного способа поэтапной окраски мазков крови в гематоксилине и эозине в медицинской и ветеринарной практике лабораторных исследований позволяет получить качественно окрашенные мазки за более короткое время при возможности многократного использования красителей.

Предлагаемое изобретение по сравнению с прототипом и другими известными техническими решениями имеет следующие преимущества:

- сокращает время окрашивания;

- позволяет получить мазки высокого качества окрашивания;

- дает возможность многократного использования рабочих растворов красителей;

- не требует наличия специального лабораторного оборудования;

- позволяет сотрудникам ветеринарных и медицинских лабораторий экономить временные и материальные ресурсы.

Изобретение относится к ветеринарии и медицине, в частности к способам окраски мазков крови. Сущность способа окраски мазков крови заключается в том, что для приготовления мазков крови их фиксируют раствором Никифорова, окрашивание проводят двумя красителями, в качестве которых берут гематоксилин Эрлиха и эозин-натрий, сначала мазки помещают в выдержанный в герметичной емкости в течение 360 дней раствор гематоксилина Эрлиха на 2-3 мин, после чего погружают их в емкость с водопроводной водой на 1-2 мин до посинения мазков, затем мазки высушивают фильтровальной бумагой и помещают в 1%-ный водный раствор эозина-натрия на 1-2 мин, промывают окрашенные мазки дистиллированной водой в течение 8-10 сек и высушивают на воздухе. Использование способа позволяет получить мазки высокого качества окрашивания при сокращении времени окрашивания и при возможности многократного использования рабочих растворов красителей.

Способ окраски мазков крови, включающий приготовление мазков крови, их фиксацию раствором Никифорова (спирт-эфир в соотношении 1:1), окрашивание красителем, включающим эозин, промывку окрашенных мазков дистиллированной водой и высушивание на воздухе, отличающийся тем, что окрашивание проводят двумя красителями, в качестве которых берут гематоксилин Эрлиха и эозин-натрий, сначала мазки помещают в выдержанный в герметичной емкости в течение 360 дней раствор гематоксилина Эрлиха на 2-3 мин, после чего погружают их в емкость с водопроводной водой на 1-2 мин до посинения мазков, затем мазки высушивают фильтровальной бумагой и помещают в 1%-ный водный раствор эозина-натрия на 1-2 мин, после чего промывают дистиллированной водой в течение 8-10 с и высушивают.