ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ГРИБКОВЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ Российский патент 2011 года по МПК A61K31/7048 A61K31/721 A61K47/24 A61K47/40 A61P31/10 

Настоящее изобретение относится к медицине и фармакологии, в частности к микологии, и может быть использовано при разработке лекарственных антигрибковых средств на основе амфотерицина B, обладающих низкой нефро- и гепатотоксичностью.

В последние годы значительно возросла частота тяжелых диссеминированных грибковых инфекций, особенно у иммунокомпрометированных больных, которые составляют 70-80% пациентов с оппортунистическими системными микозами. Диссеминированные микозы стали важной причиной ухудшения состояния больных и летальных исходов и в настоящее время считаются одним из наиболее тяжелых осложнений в клинической медицине. Основной препарат выбора при системной грибковой инфекции - амфотерицин B, обладающий самым широким противогрибковым спектром действия. Это первый коммерческий противогрибковый препарат. Он используется более 40 лет и до сих пор остается надежным лекарством, поскольку к нему практически нет резистентности (1).

Недостатки амфотерицина B хорошо известны. Препарат токсичен, часто наблюдаются повреждение почечных канальцев, снижение клубочковой фильтрации, гипертермия и гипотензия, повреждение клеток печени. Нефротоксичность и гепатотоксичнрсть как вариант общего цитотоксического действия амфотерицина В является главным ограничением его клинического применения.

Известно антигрибковое средство, включающее N-метилглюкаминовую соль амфотерицина B, которая известна как фармакопейный препарат амфоглюкамин. Указанное средство обладает меньшей токсичностью, чем амфотерицин B, но разница по токсичности невелика, хотя лечебная эффективность амфоглюкамина сопоставима с амфотерицином B (2).

Известно средство для лечения грибковых заболеваний, включающее амфотерицин B, заключенный в липосомы (1). Липосомальная форма амфотерицина B позволяет снизить системные проявления токсичности амфотерицина B, в то же время его цитотоксичность практически остается неизменной, и общее проявление токсичности липосомальной формы амфотерицина В зависит от скорости высвобождения действующего вещества в ходе биодеструкции липосом.

Известно средство с антигрибковым действием, представляющее собой структурированную эмульсию амфотерицина B для парэнтерального введения (3). Средство включает амфотерицин B (0,05-1 мас./об.% состава), масляную фазу (до 30 мас./об.% состава), выбранную из группы растительных масел (соевое, сезамовое, сафлоровое), воду водной фазы; модифицирующие тоничность агенты, выбранные из группы таких соединений, как глицерин, манит, декстроза, растворенные в водной фазе; эмульгатор, такой как натуральные фосфатиды (до 3 мас./об.% состава), диспергированный в водной фазе. Недостатком известного способа является его меньшая лечебная эффективность в сравнении с липосомальным амфотерицином B, кроме того применение масляных растворов и масляных эмульсий лекарственных препаратов в медицинской практике, особенно при внутривенном способе введения весьма часто сопровождается тромбоэмболическими осложнениями, резко ограничивающими сферу их клинического применения.

Известно средство с антигрибковым действием, включающее амфотерицин B или липосомальный амфотерицин В и производные алкилфосфолипидов в виде фармацевтического набора (4). Недостатком известного средства является присутствие в фармацевтической композиции эмульгатора - алкилфосфолипида, который в зависимости от длины алкильного остатка может существенно повлиять на фармакологические и токсикологические свойства амфотерицина B, значительно их ухудшая, особенно при длительном применении в виде внутривенных инфузий. К тому же алкилфосфолипиды, выделенные из природного сырья, обладают собственной высокой физиологической активностью, например они стимулируют агрегацию тромбоцитов, что в результате может снизить лечебные свойства амфотерицина B за счет микротромбозов.

Известна фармацевтическая композиция для лечения грибковых заболеваний, принятая в качестве прототипа, включающая амфотерицин В, окисленный декстран с мол. массой 30-60 кДа, полученный путем облучения декстрана ионизирующим излучением, в виде 1,0-10,0% водного раствора в соотношении амфотерицин B: окисленный декстран равном 1:800 (5).

Недостатком известной фармацевтической композиции является недостаточная лечебная эффективность, токсичность антигрибкового средства. Токсичность композиции обусловлена наличием в окисленном декстране перекисных продуктов, образующихся в ходе радиационного окисления. Другим недостатком является низкая стабильность амфотерицина B в составе известного средства, что снижает его лечебную эффективность.

Задачей, на решение которой направлено заявленное изобретение, является повышение лечебной эффективности, снижение токсичности фармацевтической композиции, повышение стабильности амфотерицина B в ее составе.

Решение поставленной задачи достигается тем, что заявленная композиция включает окисленный декстран, полученный путем окисления декстрана перманганатом калия в кислой среде, она дополнительно включает липосомообразующий агент, в соотношении компонентов амфотерицин B: окисленный декстран: липосомообразующий агент: фармацевтически приемлемый растворитель равном соответственно 0,0005:1-10:0,1-1,0:растворитель до 100 масс.%.; в качестве липосомообразующего агента она включает фосфатидилхолин.

Описание сущности изобретения

Фармацевтическая композиция для лечения грибковых заболеваний включает амфотерицин B, 1-10 раствор декстрана молекулярной массы 30-60 кДа, предварительно окисленного с помощью перманганата калия в кислой среде, липосомообразующий агент в соотношении (масс.%) 89,0-98.9:1-10:0,1-1,0.

Окисленный декстран получают в соответствии со способом, описанным в евразийском патенте на изобретение №011718 (6), путем окисления декстрана перманганатом калия в кислой среде при нагревании (80-100°C), после чего примеси удаляют путем отделения жидкости от осадка, выпавшего на стадии окисления декстрана и содержащего двуокись марганца, осаждают этанолом окисленный декстран из указанного раствора. В качестве исходного продукта используют декстран с молекулярной массой 35-60 кДа в виде водного или водно-солевого раствора концентрации 1-10%.

В качестве липосомообразующего агента может быть использован фосфатидилхолин.

Существенным отличием заявляемой фармацевтической композиции от композиции по прототипу является то, что в качестве ингредиента, снижающего токсичность амфотерицина B и повышающего его лечебную эффективность используют декстран, окисленный с помощью перманганата калия в кислой среде, полученный по способу (6). Декстран, окисленный с помощью перманганата калия, в отличие от декстрана, окисленного путем облучения ионизирующим излучением, не содержит токсичных перекисных продуктов. Установлено, что декстран, окисленный перманганатом калия в кислой среде, в сочетании с липосомообразующим агентом обеспечивает более высокую стабильность амфотерицина B в составе композиции (меньший процент инактивации амфотерицина B за счет его разрушения), что наряду с меньшей токсичностью указанного производного декстрана позволяет повысить лечебную эффективность фармацевтической композиции.

Сравнительная оценка фармацевтической композиции по прототипу и заявляемому техническому решению представлена в таблице 1. Указанные средства испытаны на мышах с экспериментальным кандидозом, вызванным патогенным штаммом Candida albicans. В качестве средства по прототипу использовали фармацевтическую композицию следующего состава: амфотерицин В, 5% водный раствор декстрана с м.м. 60 кДа, окисленного радиационным методом при дозе ионизирующего излучения 2,0 Мрад, в соотношении лекартсвенное средство: полимер равном 1:800. В качестве заявленного средства использовали фармацевтическую композицию следующего состава: амфотерицин B 0,0005 масс.%, декстран с м.м. 60 кДа, окисленный перманганатом калия по патенту (6) 5 масс.%, фосфатидилхолин 0,5 масс.%, вода для инъекций - до 100 масс.%.

Мышам с экспериментальной кандидозной инфекцией вводили внутривенно заявленную фармацевтическую композицию или фармацевтическую композицию по прототипу в дозах, содержащих терапевтические значимые дозы амфотерицина B. Лечебную эффективность оценивали по летальности у мышей (в %). Определяли индекс снижения токсичности фармацевтической композиции в процессе ее хранения в течение 3-х месяцев при температуре 4-8°C. Индекс снижения токсичности фармацевтической композиции равен кратности снижения площадей зон некроза и дистрофий в почках животных с экспериментальным кандидозом, в сравнении с немодифицированным, свободным амфотерицином B. Присутствие перекисных продуктов в составе фармацевтической композиции определяли по методу (7). Процент инактивированного амфотерицина В определяли методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (снижение площади пика амфотерицина B).

Из таблицы 1 следует, что заявленная фармацевтическая композиция обладает меньшей токсичностью, обусловленной наличием в ее составе амфотерицина B, о чем свидетельствует более низкий в сравнении с прототипом индекс снижения токсичности. Значительно более низкий процент летальности мышей в случае применения заявленной фармацевтической композиции свидетельствует также о ее большей терапевтической эффективности. Заявленная композиция не содержит цитотоксичных перекисных соединений и инактивированного амфотерицина B, о чем свидетельствуют результаты хроматографического анализа и что согласуется с меньшей летальностью мышей при ее применении. На этом основании можно сделать заключение, что заявленная фармацевтическая композиция в отличие от фармацевтической композиции по прототипу обладает более высокой лечебной эффективностью, меньшей токсичностью, амфотерицин B в ее составе стабилен и не теряет своей активности.

Примеры конкретного выполнения

Заявляемое изобретение иллюстрируется следующими примерами конкретного выполнения.

Пример 1

Состав фармацевтической композиции:

Амфотерицин B - 0,0005 масс.%

Фосфатидилхолин - 0,1 масс.%

Окисленный декстран с м.М. 35 кДа - 1 масс.%

Вода для инъекций до 100 масс.%

Фармацевтическую композицию получали следующим образом. 1,0 г декстрана с м.М. 35 кДа, окисленного перманганатом калия по способу (6), и 0,1 г фосфатидилхолина растворяли в 98,9 мл воды для инъекций. Затем в полученный раствор вносили амфотерицин B до конечной терапевтической концентрации 50 мкг в 1 мл. Полученную фармацевтическую композицию фильтровали через микропористые фильтры с диаметром пор 0,2 мкм и хранили при 4-8°C. Выход целевого продукта составлял 98%.

После введения указанной фармацевтической композиции мышам с экспериментальным кандидозом получены следующие результаты. Индекс снижения токсичности (в сравнении с немодифицированным амфотерицином) - 2,5, летальность мышей при экспериментальном кандидозе - менее 2%, перекисные соединения, определяемые по методу (7), отсутствуют.

Пример 2

Состав фармацевтической композиции:

Амфотерицин B - 0,0005 масс.%

Фосфатидилхолин - 0,5 масс.%

Окисленный декстран с м.М. 35 кДа - 10 масс.%

Физиологический раствор до 100 масс.%

Фармацевтическую композицию получали следующим образом. 10,0 г декстрана с м.М. 35 кДа, окисленного перманганатом калия в кислой среде по способу (6), и 0,5 г фосфатидилхолина растворяли в 89,5 мл стерильного физиологического раствора. Затем в полученный раствор вносили амфотерицин B до конечной терапевтической концентрации 50 мкг в 1 мл. Полученную фармацевтическую композицию фильтровали через микропористые фильтры с диаметром пор 0,2 мкм и хранили при 4-8°C. Выход целевого продукта составлял 99%.

После введения указанной фармацевтической композиции мышам с экспериментальным кандидозом получены следующие результаты. Индекс снижения токсичности (в сравнении с немодифицированным амфотерицином) - 2,4, летальность мышей при экспериментальном кандидозе - менее 2%, перекисные соединения, определяемые по методу (7), - отсутствуют.

Пример 3

Состав фармацевтической композиции:

Амфотерицин B - 0,0005 масс.%

Фосфатидилхолин - 1,0 масс.%

Окисленный декстран с м.М. 60 кДа - 1 масс.%

Вода для инъекций до 100 масс.%

Фармацевтическую композицию получали следующим образом. 1,0 г декстрана с м.М. 60 кДа, окисленного перманганатом калия в кислой среде по способу (6), и 1,0 г фосфатидилхолина растворяли в 98 мл воды для инъекций. Затем в полученный раствор вносили амфотерицин B до конечной терапевтической концентрации 50 мкг в 1 мл. Полученную фармацевтическую композицию фильтровали через микропористые фильтры с диаметром пор 0,2 мкм и хранили при 4-8°C. Выход целевого продукта составлял 98%.

После введения указанной фармацевтической композиции мышам с экспериментальным кандидозом получены следующие результаты. Индекс снижения токсичности (в сравнении с немодифицированным амфотерицином B) - 2,7, летальность мышей при экспериментальном кандидозе - менее 2%, перекисные соединения, определяемые по методу (7) отсутствуют.

Источники информации

1. Moen M.D., Lyseng-Williamson K.A., Scott L.J. Liposomal amphotericin B: a review of its use as empirical therapy in febrile neutropenia and in the treatment of invasive fungal infections // Drugs. 2009. Vol.69. N.3. P.361-392.

2. М.Д.Машковский. Лекарственные средства. Пособие по фармакотерапии для врачей. Издание 10-е, стереотипное. М.: Медицина, 1987, Т.2, с.271-272.

3. Патент на изобретение РФ №2275899 «Структурированная эмульсия амфотерицина B с низкой токсичностью для парентерального введения и способ ее получения», МПК⁶ A61K 9/113, A61K 47/26, A61K 47/44, A61K 31/7048, дата публ. 10.05.2006.

4. Заявка на изобретение РФ №2008129597 «Способ лечения или профилактики заболеваний и/или патофизиологических состояний, вызванных микроорганизмами, посредством производных алкилфосфолипидов», МПК A61K 31/661, дата публ. 27.01.2010.

5. Патент на изобретение РФ №2297246 «Способ снижения токсичности амфотерицина B», МПК⁶ A61K 47/48, A61K 47/36, A61K 31/7048, дата публ. 20.04.2007.

6. Евразийский патент на изобретение №011718 «Способ получения диальдегиддекстрана», МПК, дата опубл. 28.04.2009.

7. С.Сиггиа, Дж.Г. Ханна «Количественный органический анализ по функциональным группам», Москва, «Химия», 1983 г., с 270-275).

Таблица 1 Сравнительный анализ токсичности, лечебной эффективности и присутствия перекисных примесей в заявленном антигрибковом средстве и средстве по прототипу Наименование фармацевтической композиции для лечения грибковых заболеваний Индекс снижения токсичности фармацевтической композиции в процессе хранения* Доля летальности мышей с экспериментальным кандидозом, получавших фармацевтическую композицию, % Присутствие (+) или отсутствие (-) перекисных соединений в антигрибковом средстве (доля инактивированного амфотерицина B, %) в процессе хранения Средство, полученное ex tempore Средство после 3-х месяцев хранения при 4-8°C Средство, полученное ex tempore Средство после 3-х месяцев хранения при 4-8°C Средство, полученное ex tempore Средство после 3-х месяцев хранения при 4-8°C Фармацевтическая композиция по прототипу (амфотерицин В, декстран с м.М. 60 кДа, 5 мас.%, окисленный радиационным методом при дозе ионизирующего излучения 2,0 Мрад, в соотношении соответственно 1:800) 1,2 1,3 10,8±1,6 23,5±2,4 +(5) +(10) Заявленная фармацевтическая композиция (амфотерицин B 0,0005% масс.%, декстран с м.М. 60 кДа, 5 мас.%, окисленный перманганатом калия в кислой среде, фосфатидилхолин 0,5 мас.%, вода для инъекций - до 100 масс.%) 2,6 2,7 1,4±0,2 1,3±0,2 -(0) -(0) Примечание: доля летальности мышей с экспериментальным кандидозом является показателем лечебной эффективности антигрибковых средств.

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности, медицине и фармакологии, в частности к микологии, и может быть использовано при разработке лекарственных антигрибковых средств на основе амфотерицина В, обладающих низкой нефро- и гепатотоксичностью. С целью повышения лечебной эффективности, снижения токсичности фармацевтической композиции, повышения стабильности амфотерицина В ее составе она включает окисленный декстран, полученный путем окисления декстрана перманганатом калия в кислой среде. Она дополнительно включает липосомообразующий агент, представляющий собой фосфатидилхолин. Сотношение компонентов фармацевтической композиции: амфотерицин В: окисленный декстран: липосомообразующий агент: фармацевтические приемлемый растворитель равно соответственно 0,0005:1-10:0,1-1,0:растворитель до 100 масс.%. Композиция обладает высокой эффективностью. 1 з.п. ф-лы, 1 табл.

1. Фармацевтическая композиция для лечения грибковых заболеваний, включающая амфотерицин В в фармацевтически приемлемой концентрации, окисленный декстран молекулярной массы 35-60 кДа 1-10 мас.%, фармацевтически приемлемый водный или водно-солевой растворитель, отличающаяся тем, что она включает окисленный декстран, полученный путем окисления декстрана перманганатом калия в кислой среде, она дополнительно включает липосомообразующий агент в соотношении компонентов амфотерицин В: окисленный декстран: липосомообразующий агент: фармацевтические приемлемый растворитель, равном соответственно 0,0005:1-10:0,1-1,0:растворитель до 100 мас.%.

2. Фармацевтическая композиция по п.1, отличающаяся тем, что в качестве липосомообразующего агента она включает фосфатидилхолин.