ИНЪЕКЦИОННАЯ ЛЕКАРСТВЕННАЯ ФОРМА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ОСТРОГО ИШЕМИЧЕСКОГО ИНСУЛЬТА И ЧЕРЕПНО-МОЗГОВОЙ ТРАВМЫ, СПОСОБ ЕЕ ИЗГОТОВЛЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЕ Российский патент 2011 года по МПК A61K38/08 A61P9/10 

Изобретение относится к области медицины, а именно к лечению нарушений функций центральной нервной системы (ЦНС), вызванных ишемическими и травматическими поражениями, а также области фармакологии, а именно к разработке и изготовлению новой инъекционной лекарственной формы ранее известной субстанции - гептапептида последовательности Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro.

Лечение нарушений функции ЦНС, вызванных ишемическими и травматическими поражениями мозга, является сложной комплексной задачей. Одним из перспективных современных подходов является нейропротекторная терапия, направленная на улучшение выживания нейронов в пораженной области и нормализацию нейропластических процессов в мозге в целом. Среди нейропротекторных препаратов известны различные классы веществ и различные лекарственные формы. Так, например, ряд препаратов, обладающих нейропротекторными свойствами (пирацетам, ноопепт, глиатилин), представлены в таблетированной форме. Однако использование таблетированных нейропротекторных средств малоэффективно при острых состояниях, связанных с потерей сознания (инсульт, тяжелая черепно-мозговая травма) и у детей раннего возраста.

Известен пептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro в качестве стимулятора памяти пролонгированного действия (Патент СССР 939440, кл. С07С 103/52, 1981). Описана возможность применения этого гептапептида в качестве средства лечения ишемического инсульта при интраназальном введении (патент РФ №2124365, 1997/1999). Интраназальное введение нейропротекторых агентов, в том числе пептидной природы, является перспективным направлением (препараты Семакс - гептапептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, Селанк). Этот способ введения имеет ряд положительных сторон таких, как высокая биодоступность, низкая дозировка и безболезненность для пациента при введении. Тем не менее, одним из ограничений этого способа введения является необходимость частого (до 7 и более раз в сутки) введения препарата, технические сложности при введении больших доз, что, в целом, делает проблематичным использование интраназального введения при лечении острых тяжелых поражений ЦНС.

Наиболее широкое распространение в медицинской практике получили инъекционные пептидные нейропротекторные препараты, такие как кортексин, церебролизин, известна инъекционная форма препарата ноопепт (патент РФ №2330680, 09.12.2005). Инъекционное введение наибольшим образом соответствует целям и условиям проведения экстренной терапии при острых тяжелых поражениях ЦНС таких, как инсульт и черепно-мозговая травма (ЧМТ), и практике ренимационных мероприятий. Таким образом, применение гептапептида последовательности Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro в составе препарата Семакс для интраназального введения при острых тяжелых поражениях ЦНС таких, как ишемический инсульт и ЧМТ, обладает рядом существенных отличий и недостатков:

- при применении интраназального введения необходимо частое (до 7 и более раз в сутки) введение препарата пациенту;

- имеются технические сложности при одновременном введении рекомендованных терапевтических доз интраназальным способом;

- эффективность интраназального введения и биодоступность препарата во многом определяется состоянием слизистой носоглотки пациента, при этом интраназальное введение существующей лекарственной формы не оправдано при простудном, травматическом или ином поражении таковой;

- хранение пептидного препарата в растворе для интраназального применения приводит к пониженной стабильности действующего вещества, что обеспечивает срок использования два года и требует специального температурного режима +8-10°С.

Известно применение пептида Семакса формулы Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro в качестве антитромболитического, антикоагулянтного, фибринодеполимеризационного и фибринолитического средства для внутривенного введения (патент РФ №2286168). В этом случае 1 мг препарата Семакс - Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro предложено растворять в 1,5 мл физиологического раствора и вводить внутривенно лабораторным крысам по 0,5 мл (200 мкг) на 200 г массы тела. Однако использование подобного раствора пептида имеет ряд недостатков, связанных с нестабильностью пептидов в растворе вообще и Семакса в частности в растворах, в отсутствии стабилизирующих и буферных компонентов. Кроме того, в настоящее время отсутствует лекарственная форма, позволяющая осуществить предложенную процедуру в клинике. Поэтому представленные в патенте РФ 2286168 результаты имеют экспериментальную ценность, но не могут быть применены в практической медицине.

Задачей настоящего изобретения является создание инъекционной лекарственной формы препарата Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, который пригоден для лечения острого ишемического инсульта и черепно-мозговой травмы и может длительное время храниться в виде раствора и эмульсии для непосредственного введения, а также в лиофилизированном виде и в виде сухой рассыпки.

Другая задача состоит в повышении эффективности действия гептапептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro для лечения острого ишемического инсульта и черепно-мозговой травмы.

Поставленные задачи решены тем, что предложена инъекционная лекарственная форма на основе гептапептида последовательности Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro для лечения острого ишемического инсульта и черепно-мозговой травмы, которая согласно изобретению содержит в качестве действующего вещества терапевтически эффективное количество гептапептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro и, по меньшей мере, одно вещество, выбранное из группы антиоксидантов, включающих β-каротин, ретинола ацетат, α-токоферола ацетат, аскорбиновую кислоту, лютеин, кверцетин, рутин (витамин Р), дигидрокверцетин, бутилгидрокситолуол, α-липоевую кислоту, L-карнитин, янтарную кислоту, а также необязательно, по меньшей мере, одно вспомогательное вещество, выбранное из группы, включающей стабилизаторы, пролонгаторы, буферирующие добавки, эмульгаторы - солюбилизаторы, растворители, наполнители, консерванты и другие вспомогательные вещества, разрешенные к медицинскому применению.

Предложенная композиция содержит преимущественно следующее соотношение компонентов, мас.%:

гептапептид 0,0002-99,99998, антиоксидант 0,00002-99,9998, вспомогательные вещества до 100.

При этом в качестве стабилизатора композиция содержит, по меньшей мере, одно вещество, выбранное из группы, включающей трилон Б, натрия метабисульфит, натрия тиосульфат, глицин, аргинин, гистидин, лизин или их физиологически приемлемые соли, например, такие как гидрохлорид, сульфат, ацетат, глутамат, аспартат и малеат;

в качестве пролонгатора - по меньшей мере, одно вещество, выбранное из группы, включающей поливинилпирролидон с молекулярной массой 10-60 кДа, декстран с молекулярной массой 10-100 кДа, например, полиглюкин или реополиглюкин, поливиниловый спирт, натрий карбоксиметилцеллюлозу;

в качестве буферирующей добавки - по меньшей мере, одно вещество, выбранное из группы, включающей натрия хлорид, натрия/калия гидро- и/или дигидрофосфат, натрия или аммония ацетат;

в качестве эмульгатора - солюбилизатора - по меньшей мере, одно вещество, выбранное из группы, включающей соевый лецитин для инъекций, полисорбат-20, полисорбат-60, полисорбат-80, спан-20, спан-40, спан-60, спан-85, додецилсульфат натрия;

в качестве растворителя - по меньшей мере, одно вещество, выбранное из группы, включающей воду для инъекций, масло оливковое, масло персиковое, масло подсолнечное;

в качестве наполнителя - по меньшей мере, одно вещество, выбранное из группы, включающей сорбит, маннит, ксилит, лактозу, сахарозу, декстрозу, сополимер D,L-молочной и гликолевых кислот;

в качестве консерванта - по меньшей мере, одно вещество, выбранное из группы, включающей хлорбутанолгидрат, спирт этиловый, спирт бензиловый, фенол, хлоркрезол, кислоту бензойную, кислоту сорбиновую, мертиолат, нипагин; нипазол, бензалкония хлорид, бензэтония хлорид, цетилпиридиния хлорид, диметилдодецилбензиламмония хлорид.

Предлагаемая инъекционная лекарственная форма может быть выполнена в виде лиофилизированного порошка, сухой рассыпки, эмульсии, раствора для внутримышечного или внутривенного введения, или раствора для инфузии.

Сущность изобретения заключается в том, что, как было экспериментально установлено, добавление к пептиду Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro хотя бы одного из перечисленных выше антиоксидантов значительно потенцирует фармакологическую активность этого пептида, что позволяет снизить концентрацию пептида в лекарственной форме и получить более выраженный фармакологический результат.

Таким образом, предложенная инъекционная форма обладает свойствами, способствующими повышению эффективности терапии (выраженность нейропротекторного эффекта) острых тяжелых поражений ЦНС, таких как ишемический инсульт и черепно-мозговая травма, за счет увеличения биодоступности пептида, снижения кратности введения препарата в течение суток, облегчении введения необходимой терапевтической дозы и обеспечении точности дозирования необходимой терапевтической дозы.

Помимо перечисленных выше терапевтических преимуществ предлагаемая инъекционная форма обладает стабильностью при комнатной температуре, более длительным сроком хранения (по меньшей мере, 3 года) по сравнению с лекарственной формой для интраназального введения, и не требует специальных температурных условий хранения и транспортировки.

Предложены следующие возможные составы инъекционной формы пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, разработанные экспериментально.

В виде сухой рассыпки на одну ампулу или флакон:

гептапептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro 0,001-0,02 г, рутин 0,0005-0,025 г, глицин 0,00-0,025 г, лактозу 0,005-0,50 г; или   гептапептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro 0,001-0,020 г, аскорбиновую кислоту 0,0005-0,050 г, натрия хлорид 0,0001-0,01 г, натрия гидрофосфат 0,0001-0,005 г, натрия дигидрофосфат 0,0001-0,0025 г, маннит 0,005-0,5 г; или   гептапептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro 0,001-0,020 г, аскорбиновую кислоту 0,0005-0,050 г, α-липоевую кислоту 0,0005-0,025 г, глицин 0,005-0,050 г.

В виде раствора на одну ампулу или флакон:

гептапептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro 0,001-0,020 г, кверцетин 0,0005-0,010 г, поливинилпирролидон 0,0005-0,050 г, трилон-Б 0,00-0,010 г, глицин 0,0001-0,050 г, вода для инъекций до 1 мл.  

В виде раствора для инфузии на один флакон:

гептапептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro 0,001-0,020 г, аскорбиновую кислоту 0,0001-0,500 г, янтарную кислоту 0,0001-0,300 г, лизин 0,00-0,03 г, декстран с молекулярной массой 10-100 кДа 0,00-12,0 г, раствор натрия хлорида 0,9% изотонический или   раствор глюкозы 5-10% 100,0-500,0 мл.

В качестве флаконов или контейнеров для инфузии могут быть использованы флаконы или контейнеры из полипропилена.

В виде эмульсии на одну ампулу или флакон:

Гептапептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro 0,001-0,02 г, α-токоферола ацетат 0,0005-0,050 г, Полисорбат-80 0,0001-0,010 г, Нипазол 0,0005-0,0001 г, Воду для инъекций 0,1-0,5 мл, Масло оливковое 1,5-1,9 мл.

Предложен способ приготовления лекарственной формы для инъекционного введения путем смешивания гептапептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro с антиоксидантом и, по меньшей мере, одним соответствующим вспомогательным веществом, и при необходимости стерилизация инъекционной лекарственной формы; розлив раствора в ампулы, флаконы или контейнеры для инфузионных растворов; сушка растворов в сублимационной установке; запайка ампул или укупорку флаконов с готовой продукцией.

Широкий интервал концентраций вспомогательных веществ обусловлен тем, что вещества, обладающие антиоксидантной активностью, способствуют проявлению синергетического эффекта при включении их в состав инъекционного препарата в широком диапазоне концентраций. В частности добавки антиоксидантов даже в самых минимальных дозах значительно стабилизируют молекулу гептапептида последовательности Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro и потенцируют его фармакологическую активность. При увеличении концентрации антиоксиданта в составе препарата антиоксидант не только потенцирует фармакологический эффект пептида, но и проявляет свое терапевтическое действие, чем еще больше потенцирует фармакологический эффект препарата. Концентрация вспомогательных веществ других групп, например - пролонгаторов (поливинилпирролидон 0,05 - 50,0 мг, декстран от 1,0 до 12,0 грамм) подобрана в соответствии со способом применения и дозировками в клинической практике.

Предложенный состав лекарственного средства позволяет использовать его для внутримышечных и внутривенных инъекций, а также в составе инфузионных растворов, что позволяет использовать новые лекарственные формы в тех случаях, когда применение интраназальной формы не эффективно. Таким образом, использование лекарственного средства в терапии создает удобства при проведении экстренных реанимационных мероприятий.

Представлены чертежи, подтверждающие получение технического результата, где на фиг.1 изображены кривые динамики неврологического статуса у крыс с неполной глобальной ишемией при экспериментальной терапии предлагаемыми лекарственными формами на основе Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro (n=15, * - р≤0,05 в сравнении с группой контроля (физраствор) и 1% раствором Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro) к примеру 9;

на фиг.2 изображены кривые смертности крыс в группах с неполной глобальной ишемией при экспериментальной терапии новыми лекарственными формами на основе субстанции Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro (n=15, * - P₁=0,002; P₂=0,010; Р₃=0,012; Р₄=0,009; Р₅=0,05 по отношению к контрольной группе соответственно) к примеру 11.

Далее представлены примеры получения лекарственных форм гептапептида последовательности Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro для инъекционного введения: жидкие формы (растворы и эмульсии для инъекций), твердые формы (сухие стерильные рассыпки, лиофилизированные порошки для приготовления растворов для инъекций), приведены возможные составы каждого вида инъекционной лекарственной формы и описание свойств полученного препарата.

Пример 1. Получение сухой стерильной рассыпки для инъекций.

Для получения стабильной инъекционной лекарственной формы гептапептида последовательности Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro методом сухой рассыпки в асептических условиях готовят тритурации из стерильных гептапептида и вспомогательных веществ. В качестве наполнителя в композиции для получения сухой рассыпки могут быть использованы вышеперечисленные сорбит, маннит, ксилит, лактоза, сахароза, декстроза, сополимер D, L-молочной и гликолевых кислот; вещества, оказывающие стабилизирующий эффект на молекулу гептапептида (глицин, аргинин, гистидин, лизин или их физиологически приемлемые соли) и другие вспомогательные вещества, разрешенные к медицинскому применению.

Конкретная фармацевтическая композиция была выполнена в твердой стерильной форме, в виде сухой рассыпки. Препарат по внешнему виду представляет собой аморфный порошок или пористую массу белого с желтоватым оттенком или желтого цвета в ампуле или флаконе. В ампуле или флаконе содержится

гептапептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro 0,0015 г, рутин 0,0075 г, глицин 0,01 г, лактоза 0,30 г.

При употреблении содержимое ампулы или флакона растворяют в 1-2 мл воды для инъекций или изотонического 0,9% раствора натрия хлорида или в 0,5-1% раствора прокаина непосредственно перед инъекцией.

Пример 2. Получение сухой стерильной рассыпки для инъекций.

Для получения стабильной инъекционной лекарственной формы гептапептида последовательности Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro методом сухой рассыпки в асептических условиях готовят раздельно два порошка следующих составов:

А) смешивая стерильные гептапептид последовательности Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro и наполнитель из перечисленных выше.

Б) смешивая вспомогательное вещество из группы антиоксидантов с буферирующими добавками. В качестве антиоксидантов в композиции для получения сухой рассыпки могут быть использованы аскорбиновая кислота, рутин (витамин Р), лютеин, кверцетин, дигидрокверцетин, α-каротин, бутилгидрокситолуол, α-липоевая кислота, L-карнитин, янтарная кислота. В качестве буферирующей добавки в композиции для получения сухой рассыпки могут быть использованы натрия хлорид, натрия/калия гидро- и/или дигидрофосфаты, натрия или аммония ацетаты и другие вспомогательные вещества, разрешенные к медицинскому применению.

Полученные порошки А и Б объединяют и фасуют в ампулы или флаконы в асептических условиях.

Конкретная фармацевтическая композиция была выполнена в твердой стерильной форме, в виде сухой рассыпки и по внешнему виду представляет собой аморфный порошок или пористую массу белого или белого с желтоватым оттенком цвета в ампуле или флаконе.

В ампуле или флаконе содержится

гептапептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro 0,0025 г, аскорбиновая кислота 0,0050 г, натрия хлорид 0,003 г, натрия гидрофосфат 0,003 г, натрия дигидрофосфат 0,0015 г, маннит 0,2 г.

При употреблении содержимое ампулы или флакона растворяют в 1-2 мл воды для инъекций или изотонического 0,9% раствора натрия хлорида или в 0,5-1% раствора прокаина непосредственно перед инъекцией.

Пример 3. Получение инъекционного водного раствора.

Для приготовления стабильного инъекционного раствора в воде для инъекций сначала растворяют вспомогательные вещества из групп антиоксидантов, пролонгаторов, стабилизаторов и др. В качестве антиоксидантов в композиции для инъекционного водного раствора могут быть использованы аскорбиновая кислота, рутин (витамин Р), кверцетин, дигидрокверцетин, β-каротин, α-липоевая кислота, L-карнитин, янтарная кислота. В качестве пролонгаторов в композиции для инъекционного водного раствора могут быть использованы поливинилпирролидон с молекулярной массой 10-60 кДа, декстран с молекулярной массой 10-100 кДа (полиглюкин или реополиглюкин), поливиниловый спирт, натрий карбоксиметилцеллюлоза. В качестве стабилизаторов в композиции для инъекционного водного раствора могут быть использованы трилон Б, натрия метабисульфит, натрия тиосульфат, глицин, аргинин, гистидин, лизин или их физиологически приемлемые соли (гидрохлорид, сульфат, ацетат, глутамат, аспартат и малеат). Затем в полученном растворе вспомогательных веществ растворяют гептапептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro. Полученный раствор стерилизуют методом мембранной фильтрации в асептических условиях, пропуская через фильтр с диаметром пор 0,22 мкм, разливают в ампулы или флаконы в атмосфере инертного газа, осуществляют запайку ампул или укупорку и обкатку флаконов с готовой продукцией.

Конкретная фармацевтическая композиция выполнена в жидкой форме, по внешнему виду представляет собой прозрачную жидкость, расфасованную в ампулы или флаконы. В одной ампуле/ флаконе содержится

гептапептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro 0,0035 г, кверцетин 0,0010 г, поливинилпирролидон 0,0015 г, трилон-Б 0,0010 г, глицин 0,0050 г, вода для инъекций до 1 мл.

Полученный препарат готов для непосредственных инъекций.

Пример 4. Получение инъекционного раствора для инфузий.

Для приготовления стабильного инъекционного раствора для инфузий в воде для инъекций растворяют поочередно вспомогательные вещества из групп пролонгаторов, стабилизаторов, антиоксидантов. В полученном растворе вспомогательных веществ растворяют гептапептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro.

Раствор, содержащий все компоненты, стерилизуют методом мембранной фильтрации в асептических условиях на фильтрационной установке, осуществляя предварительную фильтрацию через кассеты с диаметром пор 0,45 мкм и стерилизующую фильтрацию через мембраны с диаметром пор 0,22 мкм. Стерильный инъекционный раствор для инфузий разливают во флаконы или контейнеры из полипропилена для инфузионных растворов, осуществляют укупорку и обкатку флаконов, запайку контейнеров с готовой продукцией.

Фармацевтическая композиция выполнена в жидкой форме, по внешнему виду представляет собой прозрачную жидкость, во флаконе или контейнере из полипропилена для инфузионных растворов. Во флаконе содержится

гептапептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro 0,020 г, аскорбиновая кислота 0,350 г, янтарная кислота 0,250 г, лизин 0,020 г, декстран (с молекулярной массой 10-100 кДа) 12,0 г, раствор натрия хлорида 0,9% изотонический 200 мл.

Препарат готов для непосредственного употребления.

Пример 5. Получение инъекционного раствора для инфузий «ex tempore».

В отличие от способа приготовления инъекционного раствора для инфузий, описанного в ПРИМЕРЕ 4, для получения стабильного инъекционного раствора для инфузий может быть использован технологический прием, позволяющий готовить раствор для внутривенного введения в отделениях интенсивной терапии и реанимации, а также при оказании скорой медицинской помощи «ex tempore». Для этого используют изотонический раствор натрия хлорида для инфузий как базисный раствор, к которому добавляют основной раствор, содержащий вспомогательные вещества из групп антиоксидантов или стабилизаторов и гептапептид последовательности Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro. В качестве базисного раствора в композиции для инъекционного раствора для инфузий могут быть использованы препараты Полиглюкин (6%-ный изотонический раствор декстрана со средней молекулярной массой около 70 кДа) или Реополиглюкин (10%-ный изотонический раствор декстрана с молекулярной массой 30-40 кДа), по меньшей мере, один из вышеперечисленных антиоксидантов.

Для приготовления стабильного инъекционного раствора для инфузий стерильный порошок гептапептида последовательности Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro растворяют во флаконе в 1-2 мл 10%-ного раствора кислоты аскорбиновой для инъекций. Приготовленный основной раствор шприцем вводят во флакон базисного раствора или контейнер полимерный для инфузионных растворов, соблюдая правила асептики. Готовый инфузионный раствор вводят внутривенно капельно.

Приготовленная «ex tempore» фармацевтическая композиция выполнена в жидкой форме, по внешнему виду представляет собой прозрачную жидкость, во флаконе или контейнере полимерном из полипропилена для инфузионных растворов. Во флаконе/ контейнере содержится

гептапептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro 0,020 г, раствор кислоты аскорбиновой 10% 2 мл, раствор Полиглюкин (6%-ный раствор   декстрана с молекулярной массой 10-100 кДа в изотоническом растворе натрия хлорида) 200 мл.

Пример 6. Получение инъекционного раствора в виде эмульсии.

Для уменьшения гидролитических процессов при контакте гептапептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro с водой и для включения в состав препарата антиоксидантов, проявляющих гидрофобную активность, в качестве растворителя для получения инъекционного раствора могут быть использованы неводные растворители, в частности жирные масла (масло оливковое, масло персиковое, масло подсолнечное), и вещества, позволяющие получить однородные дифильные системы из группы эмульгаторов (солюбилизаторов). В качестве эмульгаторов в композиции для инъекционного раствора в виде эмульсии могут быть использовано, по меньшей мере, одно вещество, выбранное из группы, включающей соевый лецитин для инъекций, полисорбат-20, полисорбат-60, полисорбат-80, спан-20, спан-40, спан-60, спан-85, додецилсульфат натрия.

В качестве антиоксидантов в композиции для инъекционного раствора в виде эмульсии может быть использован любой из вышеперечисленных антиоксидантов. Для увеличения антимикробной стабильности препарата в состав композиции может быть включен один из вышеперечисленных консервантов. В оливковом масле растворяют полисорбат-80, нипазол, масляный раствор витамина Е (α-токоферола ацетат). Гептапептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro растворяют в минимальном количестве воды для инъекций. Полученный водный раствор действующего вещества при перемешивании количественно переносят в масляный раствор, содержащий антиоксидант, консервант и эмульгатор.

Конкретная фармацевтическая композиция была выполнена в жидкой форме, по внешнему виду представляет собой вязкую жидкость, в ампуле или флаконе. В ампуле/флаконе содержится

гептапептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro 0,002 г, α-токоферола ацетат 0,020 г, полисорбат-80 0,010 г, нипазол 0,001 г, вода для инъекций 0,25 мл, масло оливковое до 2 мл.

Пример 7. Получение лиофилизированного порошка для приготовления раствора для инъекций.

Для получения стабильного при хранении и хорошо растворимого лиофилизированного порошка для приготовления раствора для инъекций применяют вспомогательные формообразующие вещества из групп наполнителей, стабилизаторов, буферирующих добавок, пролонгаторов.

Фармацевтическая композиция на основе гептапептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro может быть получена любым известным способом лиофилизации. Один из таких способов включает следующие стадии:

1. Приготовление раствора для розлива.

- Растворение гептапептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro в воде для инъекций.

- Добавление антиоксиданта и вспомогательных веществ.

2. Стерилизующая фильтрация, которая включает предварительную и стерилизующую фильтрацию на последовательно установленных фильтрах «Pall» с диаметром пор 0,5 и 0,22 мкм.

3. Асептический розлив раствора в ампулы или флаконы.

4. Сублимационная сушка раствора в сублимационной установке. Кассеты помещают в установку для сублимационной сушки и замораживают в течение 4 часов до температуры (-45)°С. Сушку проводят при остаточном давлении от 100 до 120 мкм рт.ст. в течение 48 часов.

5. Запайка ампул, укупорка и закатка флаконов с готовым продуктом.

6. Упаковка и маркировка.

Фармацевтическая композиция выполнена в стерильной твердой форме, по внешнему виду представляет собой аморфный порошок или рыхлую таблетку в ампуле или флаконе.

В каждой ампуле или флаконе содержится

гептапептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro 0,002 г, аскорбиновая кислота 0,010 г, α-липоевая кислота 0,002 г, глицин 0,026 г.

При использовании содержимое ампулы или флакона растворяют в 1-2 мл воды для инъекций или изотонического 0,9% раствора натрия хлорида или в 0,5-1% раствора прокаина непосредственно перед инъекцией.

Пример 8. Влияние инъекционных форм предлагаемой композиции на объем некроза при развитии фокального инсульта.

В работе использовали крыс популяции Wistar. В экспериментах использовали крыс возрастом 14 недель и весом 253,2±35,6 г. Срок карантина составил 10 дней. Крыс содержали в стандартных условиях: 12-часовой регулируемый режим день-ночь, свободный доступ к воде и пище, по 8 крыс в стандартной клетке Т4 смешанно - животные контрольной и экспериментальных групп. Для кормления использовали полноценный комбикорм для содержания крыс в условиях вивария, дополнительных прикормов не вводили. Животные были разделены на шесть экспериментальных групп, по 9-11 крыс в каждой группе.

Изучение эффектов пептидных препаратов на объем поражения мозга при ишемическом инсульте проводили на модели фокального инсульта по модифицированной методике (Chen, 1964). Операцию проводили под наркозом, 400 мг/кг хлоралгидрата внутрибрюшинно. Ишемическое повреждение создавали окклюзией левой ветви средней мозговой артерии и подходящей к ней вены с одновременной перевязкой ипсилатеральной сонной артерии для стабилизации объема поражения. Экспериментальные препараты пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro вводили внутрибрюшинно в дозе 150 мкг/кг в объеме 100 мкл на 100 г веса животного через 15 мин и 2 часа 15 мин после коагуляции средней мозговой артерии и в той же дозе через 24 и 48 часов после операции. 1% раствор гептапептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro вводили инъекционно в той же дозе. Контрольной группе вводили инъекционно физиологический раствор в эквивалентном объеме. Через 72 часа наркотизированных (400 мг/кг хлоралгидрата внутрибрюшинно) крыс декапитировали, мозг извлекали для определения объема некроза. Для определения размера области поражения коры мозга срезы толщиной 1,5-2 мм окрашивали 1% раствором 2,3,5-Tripheniltetrazolium chloride (TTX), выявляющим дегидрогеназную активность живых клеток. Размер инфаркта мозга измеряли планиметрически при помощи программы Auc7.

Таблица 1 Размер поражения коры головного мозга у крыс с фокальным инсультом Лекарственная форма Размер поражения (% от общего объема коры левого полушария мозга) 1 Гептапептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro 5 мас.%, аскорбиновая кислота 25 мас.%, α-липоевая кислота 5 мас.%, глицин 65 мас.%. (пример 7) 5,1±0,3* 2 Гептапептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro 0,47 мас.%, рутин 2,35 мас.%, глицин 3,14 мас.%, лактоза 94,04 мас.%. (пример 1) 5,3±0,4* 3 Гептапептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro 0,35 мас.%, кверцетин 0,10 мас.%, поливинилпирролидон 0,15 мас.%, трилон-Б 0,10 мас.%, глицин 0,50 мас.%, вода для инъекций до 1 мл (пример 3). 6,4±0,6* 4 Гептапептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro 0,1 мас.%, α-токоферола ацетат 1,0 мас.%, полисорбат-80 0,5 мас.%, нипазол 0,05 мас.%, вода для инъекций 12,5 мас.%, масло оливковое до 2 мл (85,85 мас.%) (пример 6) 6,0±0,7* 5 Гептапептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro 1,0 мас.%, раствор натрия хлорида изотонической 0,9% 1 мл. 8,3±1,5 6 Физиологический р-р (раствор натрия хлорида изотонической 0,9%) - контроль 9,5±2,4 Примечание: * P≤0,05 по отношению к группам 5 и 6

По результатам этой серии экспериментов можно заключить, что инъекционные формы гептапептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro защищают мозг крыс от ишемии, размер некроза значимо снижен по сравнению с группами контроля (6) и инъекционного введения 1% раствора гептапептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro в растворе натрия хлорида изотоническом 0,9%.

Пример 9. Изучение влияния инъекционных форм гептапептида последовательности Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro на модели неполной глобальной ишемии мозга у крыс.

Исследование проводили на крысах популяции Wistar весом 165,5±15,7 г. Животные были разделены на шесть экспериментальных групп, по 15 крыс в каждой группе.

Оценку неврологической симптоматики и смертности животных при ишемическом поражении мозга крыс оценивали в модели неполной глобальной ишемии мозга (Hossmann K.-A., 1998). Неполную глобальную ишемию мозга создавали необратимой одновременной перевязкой двух сонных артерий под эфирным наркозом. Для профилактики реперфузии на каждый из двух сосудов накладывали две лигатуры, между которьми сосуд перерезали. Эфирный наркоз позволяет практически сразу вести наблюдение за развитием неврологической симптоматики и не вызывает защитного действия на мозг при развитии ишемии (McGraw, 1977). Препараты пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro вводили внутрибрюшинно в дозе 150 мкг/кг в объеме 100 мкл на 100 г веса животного через 15 мин и 2 часа 15 мин после перевязки сонных артерий в день операции и в той же дозе один раз в сутки еще в течение 4 дней после операции. 1% раствор гептапептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro вводили инъекционно в той же дозе. Контрольной группе вводили инъекционно физиологический раствор в эквивалентном объеме. В течение 10 суток оценивали динамику веса и смертность животных.

После одномоментной двусторонней перевязки общих сонных артерий развивается выраженная симптоматика неврологического дефицита, выражающаяся сначала в ограничении подвижности животного, появлении птозов (опущение верхнего века, обусловленное нарушением функции мышцы, поднимающей его), затем насильственных движений или пропульсий: кружений и прыжков, вращательных, клонических и тонических судорожных припадков в течение нескольких часов после окклюзии общих сонных артерий, парезов (уменьшение силы или амплитуды произвольных движений, обусловленное нарушением иннервации соответствующих мышц) и параличей (выпадение двигательной функции в результате патологических процессов в нервной системе) конечностей, затем наступает кома - животное дышит, но не реагирует на раздражения, и в конечном счете животное умирает. Состояние каждого животного после перевязки сонных артерий оценивали по балльной шкале каждые 30 минут в течение десяти часов и на следующие сутки. Определенный балл приписан каждому признаку, возникающему у животных после ишемии. Накопленные баллы суммировали каждые 30 мин, общий балл характеризует тяжесть неврологического дефицита: 0-3 балла - состояние оценивается как близкое к нормальному, 3-6 - средней тяжести, 7-24 - тяжелое, 25 баллов по шкале Саркисовой - смерть. Результат по оценке развития неврологического дефицита по шкале Саркисовой представлен на Фиг.1. Как видно из фиг.1, животные исследуемых групп, которым вводили гептапептид последовательности Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro в лекарственных формах в соответствии с Таблицей 1 к Примеру 8, имеют одинаковый средний балл и динамику развития неврологического статуса. Статистически эти группы достоверно отличаются от группы контроля (физиологический р-р) начиная со 2 часа развития ишемии и группы инъекционного введения 1% раствора Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro. Статистическая обработка результатов позволяет говорить о том, что разработанные лекарственные формы на основе гептапептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, введенные внутрибрюшинно в дозе 150 мкг/кг, облегчают неврологический статус по сравнению с контрольной группой животных.

Пример 10. Частота появления крыс с легким и тяжелым проявлением неврологической симптоматики при неполной глобальной ишемии мозга на фоне экспериментальной терапии инъекционными лекарственными формами гептапептида последовательности Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro.

Эксперимент проводили в соответствии с методикой, описанной в Примере 9. Облегчение неврологического статуса обусловлено появлением большего числа животных с легкой формой неврологического дефицита в этих группах. В этой серии экспериментов при обработке данных опирались на оценку частоты появления крыс с легким и тяжелым течением болезни (Табл. 2). Из таблицы 2 следует, что гептапептид последовательности Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, введенный в виде предлагаемых препаратов внутрибрюшинно в острую стадию развития ишемического поражения, вызывает облегчение неврологического статуса крыс. Инъекционное введение 1% раствора указанного гептапептида приводило к снижению тяжелых форм на уровне тенденции.

Таблица 2
Соотношение крыс с легким и тяжелым неврологическим дефицитом в разных экспериментальных группах Экспериментальные группы Число крыс с тяжелой симптоматикой Число крыс с легкой симптоматикой Статистически значимые различия по сравнению с контрольной группой Гептапептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro 5 мас.%, аскорбиновая кислота 25 мас.%, α-липоевая кислота 5 мас.%, глицин 65 мас.% (пример 7) 3 12 Р=0,006 Гептапептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro 1,17 мас.%, аскорбиновая кислота 2,34 мас.%, натрия хлорид 1,40 мас.%, натрия гидрофосфат
1,40 мас.%, натрия дигидрофосфат 0,70 мас.%, маннит 93,02 мас.% (пример 2) 5 10 Р=0,035 Гептапептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro 0,35 мас.%, кверцетин 0,10 мас.%, поливинилпирролидон 0,15 мас.%, трилон-Б 0,10 мас.%, глицин 0,50 мас.%, вода для инъекций до 1 мл (пример 3). 4 11 Р=0,035 Гептапептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro 0,1 мас.%, α-токоферола ацетат 1,0 мас.%, полисорбат-80 0,5 мас.%, нипазол 0,05 мас.%, вода для инъекций 12,5 мас.%, масло оливковое до 2 мл (85,85 мас.%) (пример 6) 6 9 Р=0,009 Гептапептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro 1,0 мас.%, раствор натрия хлорида изотонический 0,9% 1 мл. 7 8 Р=0,052 Физиологический р-р (раствор натрия хлорида изотонический 0,9%) - контроль 13 3  

Пример 11. Смертность крыс с неполной глобальной ишемии мозга при экспериментальной терапии инъекционными лекарственными формами гептапептида последовательности Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro.

Эксперимент проводили в соответствии с методикой, описанной в Примере 9. Во время острого периода развития ишемии введение инъекционных форм гептапептида последовательности Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro предотвращало смертность крыс. В группах, получавших эти препараты в первые 12 часов эксперимента, умерло значимо меньше крыс, чем в контрольной группе (Фиг.2). Однако общая смертность животных через 10 суток после эксперимента одинакова и не отличается в этих группах. Таким образом, разработанные инъекционные лекарственные формы достоверно расширяют «терапевтическое окно» при ишемическом поражении головного мозга, но не являются заменой общих реанимационных мероприятий.

Пример 12. Влияние экспериментальной терапии инъекционными лекарственными формами гептапептида последовательности Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro на восстановление условных рефлексов после закрытой черепно-мозговой травмы (ЧМТ).

Исследование проведено на самцах крыс-альбиносов массой 150-160 г. Животных содержали в виварии в пластмассовых клетках по 5 голов при температуре воздуха 20-22°С, естественном освещении, на подстилках из опилок деревьев лиственных пород. Кормление осуществлялось ad libitum, в первой половине дня. Для маркировки животных применяли спиртовой раствор пикриновой кислоты. Сопоставимость экспериментальных групп обеспечивали рандомизацией выборок, использовавшихся в экспериментах. Количество животных в группе 20 шт.

Моделирование ЧМТ проводилось с помощью weight-drop метода на оригинальной установке. Экспериментальную терапию начинали через 0,5 часа после механического воздействия. Экспериментальные препараты вводили в внутрибрюшинно в дозе 150 мкг/кг в объеме 100 мкл на 100 г веса животного через 15 мин и 2 часа 15 мин после коагуляции средней мозговой артерии; и в той же дозе через 24 и 48 часов после операции. 1% раствор гептапептида последовательности Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro вводили инъекционно в той же дозе. Контрольной группе вводили инъекционно физиологический раствор в эквивалентном объеме.

Для исследования восстановления мнестических функций после черепно-мозговой травмы использовался метод активного избегания плаванием. До моделирования закрытой ЧМТ у экспериментальных животных в течение 3 дней формировали условный рефлекс активного избегания плаванием с латентным периодом 10-20 с. В процессе выработки рефлексов производилась выбраковка животных, не способных к выполнению предъявляемых задач.

Оценка восстановления предварительно сформированного условного рефлекса проводилась, начиная с первых суток после нанесения ЧМТ, и продолжалась ежедневно на протяжении 7 суток. Оценивалось время нахождения животным центрального стержня в бассейне и выхода животного из воды.

Исследуемые препараты при внутрибрюшинном введении оказывали положительное влияние на время восстановления условного рефлекса, начиная с 3 дня эксперимента. Инъекционное введение 1% раствора гептапептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro также оказывало положительное, но менее выраженное воздействие на восстановление когнитивных функций. Динамика восстановления данного рефлекса представлена в Таблице. 3.

Таблица 3
Динамика восстановления условного рефлекса активного избегания плаванием (время выхода животных из воды, сек) Экспериментальные группы Сроки исследования, сут   до травмы 1 2 3 4 5 6 Гептапептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro 5 мас.%, аскорбиновая кислота 25 мас.%, α-липоевая кислота 5 мас.%, глицин 65 мас.% (пример 7) 17,4 24,3 9,3* 6,9* 5,8* 6,8* 5,9* Гептапептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro 1,17 мас.%, аскорбиновая кислота 2,34 мас.%, натрия хлорид 1,40 мас.%, натрия гидрофосфат 1,40 мас.%, натрия дигидрофосфат 0,70 мас.%, маннит 93,02 мас.% (пример 2) 17,4 22,8 8,2* 5,8* 6,3 6,2* 5,1* Гептапептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro 0,35 мас.%, кверцетин 0,10 мас.%, поливинилпирролидон 0,15 мас.%, трилон-Б 0,10 мас.%, глицин 0,50 мас.%, вода для инъекций до 1 мл (пример 3). 17,4 29,8 8,5* 7,2* 7,8* 7,9* 6,1* Гептапептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro 0,1 мас.%, α-токоферола ацетат 1,0 мас.%, полисорбат-80 0,5 мас.%, нипазол 0,05 мас.%, вода для инъекций 12,5 мас.%, масло оливковое до 2 мл (85,85 мас.%) (пример 6) 17,4 30,6 9,3* 6,9* 7,1* 6,8* 5,9* Гептапептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro 1,0 мас.%, раствор натрия хлорида изотонический 0,9% 1 мл. 17,4 28,6 13,9 9,5* 12,1 11,1* 10,2* Физиологический р-р (раствор натрия хлорида изотонический 0,9%) - контроль 17,4 31,5 15,5 17,1 12,5 18,4 17,2 Примечание: * - р<0,05 в сравнении с группой «Физиологический р-р (контроль)»

Пример 12. Изучение синергетического эффекта гептапептида последовательности Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro и антиоксидантов в составе комплексных инъекционных препаратов на модели фокальной ишемии мозга у крыс, индуцированной фототромбозом.

Работа выполнена на 80 самцах крыс Вистар массой 213±2 г. Животные содержались в виварии при свободном доступе к пище и воде и двенадцатичасовом световом режиме (освещение - с 7:00 до 19:00).

Односторонний фокальный ишемический инфаркт сенсоромоторной области коры головного мозга крыс создавали методом фотохимически индуцируемого тромбоза согласно методике, описанной Ватсоном и соавт. (Watson et al., 1985). Для определения неврологического дефицита, вызванного фотохимически индуцированным тромбозом, и оценки влияния препаратов на восстановление нарушенных функций (двигательная активность конечностей, координация движений) использовали Limb-placing и Forelimbplacing тесты. Для визуального контроля размеров ишемического инфаркта мозга, вызываемого фототромбозом, на следующий день после проведения последних указанных выше тестов (на 8-ой день после операции) животных декапитировали, извлекали мозг из черепной коробки и проводили визуальную оценку степени повреждения коры в сенсоромоторной области.

Limb-placing test. Использовали вариант теста, впервые описанного Де Риком и соавт. (De Ryck et al., 1989), в модификации Йолкконена и соавт. (Jolkkonen et al., 2000). Этот тест состоит из 7 упражнений, в которых определяется реакция передних и задних конечностей на тактильную и проприоцептивную стимуляцию. Выполнение заданий оценивали по 3-балльной шкале: 2 балла - нормальная реакция; 1 балл - реакция ослабленная или с задержкой ≥2 с; 0 баллов - реакция отсутствует. Максимальное количество баллов равнялось 14. Крыс приручали в течение нескольких дней и затем тестировали за 1 сутки до операции («базовая линия») и через 1, 2, 3, 5 и 6 суток после операции. Тестировали отдельно правые и левые конечности. Forelimb-placing test. Тест проводили согласно методике, подробно описанной в работе (Jolkkonen et al., 2003).

Статистическая обработка данных. Статистический анализ проводили с использованием программы Statistica 6.0 (StatSoft, USA) для Windows. Нормальность распределения признака в выборке оценивали по W-критерию Шапиро-Уилка. Для сравнения показателей, полученных в тестах Limb-placing и Forelimb-placing, проводили с помощью дисперсионного анализа ANOVA с критериями Краскела-Уоллиса. Для внутригрупповых сравнений использовали U-критерий Манна-Уитни с поправкой Бонферрони.

Наиболее четкие и показательные результаты были получены в тесте Limb Placing. Для уменьшения дисперсии в качестве показателя использовали соотношение баллов для правой и левой конечностей. Из полученных в тестах Forelimb Placing и Limb Placing данных ясно видно, что в первые дни тестирования (дни 1 и 2 - 1 и 2 суток после операции) в результате ишемического повреждения сенсоромоторной области коры левого полушария происходит избирательное ухудшение неврологических показателей для правых конечностей, но, уже начиная с 2-го дня (2 суток после операции), во всех экспериментальных группах наблюдали постепенное восстановление неврологических показателей. Практически полное восстановления неврологических показателей наблюдали уже на 7-ой день после операции. В тоже время у ложнооперированных животных нарушения были незначительными.

Исследовали влияние гептапептида последовательности Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro в дозе 15 мкг/кг в физиологическом растворе, антиоксидантов и смеси указанного гептапептида с антиоксидантами на изменение неврологических показателей после фокальной ишемии сенсоромоторной области в тесте Limb Placing. Крысам делали 8 внутрибрюшинных инъекций указанных препаратов в течение семи дней после операции. Результаты этого эксперимента представлены в таблице 4. Как видно из этой таблицы, установлено статистически значимое улучшение неврологических показателей по сравнению с контролем через 2, 3 и 5 дней после фотохимически индуцируемого тромбоза (Таблица 4 в группах 5-7). При этом наблюдали выраженный синергетический эффект при использовании препаратов, представляющих собой смесь гептапептида и антиоксидантов (группы 5-7), по сравнению с контрольными группами, при введении только гептапептида последовательности Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro или только антиоксидантов. Инъекционные формы, выполненные в виде лиофилизированного порошка, содержащие гептапептид последовательности Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro в комбинации с антиоксидантом (α-липоевой кислотой - состав 6, аскорбиновой кислотой - состав 5 и α-токоферола ацетат - состав 7), проявляют значительную эффективность при экспериментальной терапии инсульта, в то время как гептапептид последовательности Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro (15 мкг/кг) и антиоксиданты (кислота аскорбиновая, α-липоевая кислота, α-токоферола ацетат), взятые отдельно, не приводят к достоверному улучшению неврологических показателей по сравнению с контролем. Таким образом, данный эксперимент подтверждает наличие синергетического эффекта.

Пример 13. Изучение стабильности гептапептида последовательности Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro с добавлением антиоксиданта в различных инъекционных формах по сравнению с раствором гептапептида последовательности Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, приготовленным в физиологическом растворе натрия хлорида.

Для экспериментального изучения стабильности предлагаемых инъекционных лекарственных форм препарата Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro (с добавлением антиоксиданта) и установления сроков годности были изготовлены модельные смеси нескольких рецептур препарата (Таблица 5). В качестве препаратов сравнения использовали лекарственное средство «Семакс» для интраназального применения 1% раствор (производитель ИНПЦ «Пептоген») и 1%-ный раствор гептапептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro в изотоническом 0,9% растворе натрия хлорида, приготовленный без добавления антиоксидантов и стабилизирующих добавок. Образцы хранили в защищенном от света прохладном месте и относительной влажности (60±5) % в течение срока наблюдения - 3 года. Результаты изучения стабильности в условиях естественного хранения представлены в Таблице 5.

Таблица 5
Результаты изучения стабильности гептапептида последовательности Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro в предлагаемых инъекционных лекарственных формах (лиофилизированный порошок, сухая рассыпка, эмульсия, раствор для внутримышечного или внутривенного введения) Составы препарата Концентрация действующего вещества (гептапептида последовательности Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro) относительно свежеприготовленного раствора, определенная методом ВЭЖХ, % 1 мес 6 мес 12 мес 18 мес 24 мес 36 мес Гептапептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro 5 мас.%, аскорбиновая кислота 25 мас.%, α-липоевая кислота 5 мас.%, глицин 65 мас.% (лиофилизированный порошок, пример 7) 99,68±0,05 99,50±0,12 99,31±0,09 98,56±0,04 98,51±0,11 97,83±0,15 Гептапептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro 1,17 мас.%, аскорбиновая кислота 2,34 мас.%, натрия хлорид 1,40 мас.%, натрия гидрофосфат 1,40 мас.%, натрия дигидрофосфат 0,70 мас.%, манит 93,02 мас.% (лиофилизированный порошок, пример 2) 98,84±0,21 98,42±0,18 98,02±0,14 97,90±0,12 97,31±0,09 97,25±0,11 Гептапептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro 0,35 мас.%, кверцетин 0,10 мас.%, поливинилпирролидон 0,15 мас.%, трилон-Б 0,10 мас.%, глицин 0,50 мас.%, вода для инъекций до 1 мл (раствор для инъекций, пример 3) 99,26±0,25 99,16±0,18 98,82±0,05 98,61±0,14 98,51±0,11 98,19±0,06 Гептапептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro 0,1 мас.%, α-токоферола ацетат 1,0 мас.%, полисорбат-80 0,5 мас.%, нипазол 0,05 мас.%, вода для инъекций 12,5 мас.%, масло оливковое до 2 мл (85,85 мас.%) (раствор для инъекций, пример 6) 99,52±0,03 99,53±0,07 99,40±0,12 99,14±0,05 99,02±0,05 98,95±0,13 Семакс для интраназального применения 1% р-р (Пептоген) 98,01±0,05 97,16±0,09 95,31±0,17 94,82±0,08 87,68±0,12 78,01±0,19 Гептапептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro 1,0 мас.%, раствор натрия хлорида изотонический 0,9% 1 мл. 97,95±0,16 97,06±0,04 95,22±0,09 92,15±0,23 83,41±0,22 62,27±0,16

Результаты проведенных исследований по изучению стабильности гептапептида последовательности Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro в инъекционных лекарственных формах с добавлением антиоксиданта (лиофилизированный порошок, сухая рассыпка, эмульсия, раствор для внутримышечного или внутривенного введения) подтверждают, что введение антиоксиданта в состав препарата значительно стабилизирует молекулу пептида и способствует увеличению сроков годности в сравнении с препаратом, в котором отсутствуют вспомогательные вещества с антиоксидантным эффектом. Установлено, что наиболее стабильны лекарственные формы препарата, изготовленные в виде лиофилизированного порошка, сухой рассыпки и масляного раствора для инъекций.

Кроме того, предлагаемая композиция обеспечивает возможность хранения препарата при комнатной температуре, выдерживает замораживание/оттаивание не менее 4 раз, сохраняет активность в течение 7 дней при температуре +35°С, а также после длительного хранения (1 год) при пониженной температуре -20°С и далее в течение 2-х лет. Добавление вспомогательных веществ способствует более легкому высвобождению действующего вещества и обеспечению его высокой биодоступности.

Изобретение относится к медицине и касается инъекционной лекарственной формы для лечения острого ишемического инсульта и черепно-мозговой травмы, характеризующейся тем, что содержит в качестве действующего вещества терапевтически эффективное количество гептапептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro и, по меньшей мере, одно вещество, выбранное из группы антиоксидантов. Изобретение обеспечивает высокий нейропротекторный эффект при острых тяжелых поражениях ЦНС на разных моделях инсульта и черепно-мозговой травмы, а также высокую стабильность и продолжительный срок использования. 3 н. и 8 з.п. ф-лы, 2 ил., 5 табл.

1. Инъекционная лекарственная форма на основе гептапептида последовательности Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro для лечения острого ишемического инсульта и черепно-мозговой травмы, характеризующаяся тем, что содержит в качестве действующего вещества терапевтически эффективное количество гептапептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro и, по меньшей мере, одно вещество, выбранное из группы антиоксидантов, включающих β-каротин, ретинола ацетат, α-токоферола ацетат, аскорбиновую кислоту, лютеин, кверцетин, рутин (витамин Р), дигидрокверцетин, бутилгидрокситолуол, α-липоевую кислоту, L-карнитин, янтарную кислоту, а также, не обязательно, по меньшей мере, одно вспомогательное вещество, выбранное из группы, включающей стабилизаторы, пролонгаторы, буферирующие добавки, эмульгаторы-солюбилизаторы, растворители, наполнители, консерванты и другие вспомогательные вещества, разрешенные к медицинскому применению, при следующем соотношении компонентов, мас.%:
гептапептид 0,0002-99,99998 антиоксидант 0,00002-99,9998

2. Инъекционная лекарственная форма по п.1, отличающаяся тем, что дополнительно содержит, по меньшей мере, одно вспомогательное вещество, выбранное из группы, включающей стабилизаторы, пролонгаторы, буферирующие добавки, эмульгаторы-солюбилизаторы, растворители, наполнители, консерванты и другие вспомогательные вещества, разрешенные к медицинскому применению, при этом в качестве стабилизатора содержит, по меньшей мере, одно вещество, выбранное из группы, включающей трилон Б, натрия метабисульфит, натрия тиосульфат, глицин, аргинин, гистидин, лизин или их физиологически приемлемые соли, например гидрохлорид, сульфат, ацетат, глутамат, аспартат и малеат, в качестве пролонгатора - по меньшей мере, одно вещество, выбранное из группы, включающей поливинилпирролидон с молекулярной массой 10-60 кДа, декстран с молекулярной массой 10-100 кДа, например полиглюкин или реополиглюкин, поливиниловый спирт, натрий карбоксиметилцеллюлозу, в качестве буферирующей добавки - по меньшей мере, одно вещество, выбранное из группы, включающей натрия хлорид, натрия/калия гидро- и/или дигидрофосфат, натрия или аммония ацетат, в качестве эмульгатора-солюбилизатора - по меньшей мере, одно вещество, выбранное из группы, включающей соевый лецитин для инъекций, полисорбат-20, полисорбат-60, полисорбат-80, спан-20, спан-40, спан-60, спан-85, додецилсульфат натрия, в качестве растворителя - по меньшей мере, одно вещество, выбранное из группы, включающей воду для инъекций, масло оливковое, масло персиковое, масло подсолнечное, в качестве наполнителя - по меньшей мере, одно вещество, выбранное из группы, включающей сорбит, маннит, ксилит, лактозу, сахарозу, декстрозу, сополимер D,L-молочной и гликолевых кислот, в качестве консерванта - по меньшей мере, одно вещество, выбранное из группы, включающей хлорбутанолгидрат, спирт этиловый, спирт бензиловый, фенол, хлоркрезол, кислоту бензойную, кислоту сорбиновую, мертиолат, нипагин, нипазол, бензалкония хлорид, бензэтония хлорид, цетилпиридиния хлорид, диметилдодецилбензиламмония хлорид.

3. Инъекционная лекарственная форма по любому из пп.1 и 2, отличающаяся тем, что может быть выполнена в виде лиофилизированного порошка, сухой рассыпки, эмульсии, раствора для внутримышечного или внутривенного введения, или инъекционного раствора для инфузий.

4. Инъекционная лекарственная форма по п.2, отличающаяся тем, что содержит в каждой ампуле или флаконе, мас.%:
гептапептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro 0,1-5,0 рутин 0,05-5,0 глицин 0,00-5,0 лактозу до 100,0,

и выполнена в виде сухой рассыпки.

5. Инъекционная лекарственная форма по п.2, отличающаяся тем, что содержит в каждой ампуле или флаконе, мас.%:
гептапептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro 0,1-5,0 аскорбиновую кислоту 0,01-10,0 натрия хлорид 0,02-2,0 натрия гидрофосфат 0,01-1,00 натрия дигидрофосфат 0,01-0,50 манит до 100,0,

и выполнена в виде сухой рассыпки.

6. Инъекционная лекарственная форма по п.2, отличающаяся тем, что содержит в каждой ампуле или флаконе, мас.%:
гептапептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro 0,1-2,0 кверцетин 0,005-1,0 поливинилпирролидон 0,005-5,0 трилон-Б 0,00-1,0 глицин 0,001-5,0 воду для инъекций до 100,0,

и выполнена в виде раствора.

7. Инъекционная лекарственная форма по п.2, отличающаяся тем, что содержит в каждом флаконе или контейнере для инфузионных растворов, мас.%:
гептапептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro 0,0002-0,004 аскорбиновую кислоту 0,00002-0,1 янтарную кислоту 0,00002-0,06 лизин 0,00-0,006 декстран с молекулярной массой 10-100 кДа 0,0-6,0 раствор натрия хлорида 0,9% изотонический или   раствор глюкозы 5-10% до 100,0,

и выполнена в виде раствора для инфузии.

8. Инъекционная лекарственная форма по п.2, отличающаяся тем, что содержит в каждой ампуле или флаконе, мас.%:
гептапептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro 0,05-1,0 α-токоферола ацетат 0,0025-2,5 полисорбат-80 0,005-0,5 нипазол 0,0025-0,005 воду для инъекций 5,0-50,0 масло оливковое до 100,0,

и выполнена в виде эмульсии.

9. Инъекционная лекарственная форма по п.2, отличающаяся тем, что содержит в каждой ампуле или флаконе, мас.%:
гептапептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro 0,50-15,0 аскорбиновую кислоту 0,25-35,0 α-липоевую кислоту 0,25-17,5 глицин до 100,0,

и выполнена в виде лиофилизированного порошка.

10. Способ приготовления лекарственной формы для инъекционного введения, охарактеризованной в любом из пп.1-9, включающий смешивание гептапептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro с антиоксидантом и соответствующим, по меньшей мере, одним вспомогательным веществом и, при необходимости, стерилизацию инъекционной лекарственной формы; розлив раствора в ампулы, флаконы или контейнеры для инфузионных растворов; при необходимости, сушку растворов в сублимационной установке; запайку ампул и контейнеров для инфузионных растворов или укупорку флаконов с готовой продукцией.

11. Применение инъекционной лекарственной формы гептапептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, охарактеризованной в любом из пп.1-9 для лечения острого ишемического инсульта и черепно-мозговой травмы.