ИНГИБИТОРЫ ФДЭ И ИХ КОМБИНАЦИИ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ УРОЛОГИЧЕСКИХ РАССТРОЙСТВ Российский патент 2011 года по МПК A61K31/522 A61P13/00 A61P3/10 

Область изобретения

Данное изобретение относится к фосфодиэстеразам (ФДЭ) и к фармакологии ингибиторов ФДЭ. Более конкретно, изобретение относится к ингибиторам ФДЭ-5 и ФДЭ-4 и их применению для приготовления лекарственных средств, предназначенных для лечения урологических расстройств.

Предпосылки создания изобретения

Доброкачественная гиперплазия предстательной железы (ДГПЖ), приводящая к обструкции выходного отверстия мочевого пузыря (ОВМП), является очень частым новообразованием у мужчин. Считается, что приблизительно 80% мужчин старше 50 лет, имеют как умеренные, так и серьезные признаки, включая учащенное мочеиспускание, никтурию и неотложные состояния, сопровождающиеся слабым напором мочи и задержкой мочи. Поэтому ДГПЖ считается одной из самых больших проблем здравоохранения западных стран (Guess, 1995). Помимо хирургического лечения предстательной железы (20% всех пациентов с ДГПЖ), обычное лечение заболевания включает ингибиторы 5-альфа редуктазы (финастерид) и альфа-блокаторы (тамсулозин, доксазазин, теразозин, альфузозин) (Truss, 2001). Ингибиторы 5-альфа редуктазы влияют на механический компонент ДГПЖ и ингибируют пролиферацию ткани простаты. Альфа-блокаторы влияют на динамический компонент и уменьшают раздражающие симптомы ДГПЖ путем расслабления гладкой мускулатуры простаты, которая, в свою очередь, уменьшает сопротивление мочеиспусканию. Кроме того, альфа-блокаторы в состоянии расслабить непосредственно гладкомышечные клетки мочевого пузыря и уменьшить сокращения, не приводящие к опорожнению мочевого пузыря. Однако все эти варианты лечения имеют ограниченную эффективность и/или нежелательный профиль побочных эффектов (Carbone, 2003). Таким образом, различные попытки направлены на новые терапевтические варианты ингибирования пролиферации ткани простаты или уменьшения тонуса гладкой мускулатуры простаты и мочевого пузыря. Они включают ингибиторы ароматазы (Sciarra, 2000), антагонисты фактора роста (Desgrandchamps, 1997), активаторы калиевых каналов (Gopalakrishnan, 2004) и антагонисты эндотелина (Andersson, 2002).

Также хорошо установлено, что циклические нуклеотиды кАМФ и кГМФ могут уменьшить тонус гладкой мускулатуры (Drescher, 1994). кАМФ и кГМФ синтезируются из нуклеотидов трифосфатов аденилат- и гуанилатциклазы соответственно. Они разрушаются циклическими нуклеотидными фосфодиэстеразами (ФДЭ), которые эффективно регулируют внутриклеточный уровень кАМФ и кГМФ. На сегодняшний день идентифицированы 11 различных членов семейства ФДЭ, которые отличаются по структуре, регулированию и специфике для их субстрата (Soderling, 2000). Роль ФДЭ в лечении урологических расстройств, однако, недостаточно понята, характеристика изоформ ФДЭ отстала от других систем, и большая часть литературы была издана до определения недавно идентифицированного ФДЭ. Хотя ФДЭ экспрессированы в нижнем отделе мочевыделительной системы, то есть в мочевом пузыре, тканях уретры и простаты, данные экспрессии тРНК и прямые сравнения всех изогенов ФДЭ все еще отсутствуют или непоследовательные. Есть некоторые доказательства, что неспецифическое ингибирование ФДЭ в состоянии расслабить ткань простаты человека (Drescher, 1994). Данные об эффекте ингибирования ФДЭ-5 очень ограничены. Было показано, что запринаст, ингибитор ФДЭ-5, который также ингибирует ФДЭ-6, -9 и -11, в состоянии расслабить сокращенную ткань простаты человека в пробирке (Uckert, 2001), тогда как должна быть определена роль и других семейств ФДЭ в отношении этой ткани. В пределах мочевого пузыря неспецифическая блокада различных ФДЭ IBMX (ингибирование ФДЭ-1, -2, -3, -4, -5, -6, -10, и -11) могла расслабить мочевой пузырь самок морских свинок, тогда как запринаст был неэффективен (Gillespie, 2004). Несмотря на эти противоречивые результаты известна роль ФДЭ-5 в расслаблении кавернозных тел в лечении эректильной дисфункции, и на рынке уже есть очень эффективные и селективные ингибиторы ФДЭ-5. Эффективные и селективные ингибиторы ФДЭ-4 главным образом используются для астмы и ХОБЛ (Spina, 2003).

Раскрытие изобретения

Один из аспектов изобретения предоставляет совокупность параметров экспрессии тРНК ФДЭ, демонстрирующую большое количество кГМФ-зависимых ФДЭ-5 и кАМФ-зависимых ФДЭ-4 не только в ткани простаты, но также и в ткани мочевого пузыря (фигуры 1, 2). Поэтому селективные ингибиторы ФДЭ-5 или ФДЭ-4, в их специфических комбинациях, должны не только уменьшить сократимость простаты, но, так же как дополнительное преимущество их комбинации, улучшить симптомы раздражения, вызванные синдромом инфравезикальной обструкции, поскольку это часто происходит при урологических расстройствах. Селективные ингибиторы ФДЭ-5 - варденафил, силденафил и тадалафил, селективный ингибитор ФДЭ-4 - рофлумиласт.

Урологические расстройства, для которых предназначены лекарственные средства по изобретению, включают доброкачественную гиперплазию предстательной железы (ДГПЖ), симптомы нижних мочевых путей (СНМП) и, в частности, раздражающие симптомы, вызванные ДГПЖ-индуцированным синдромом инфравезикальной обструкции (СИВО). Поэтому не только симптоматические раздражения мочевого пузыря, но и подчеркнутая ДГПЖ-обусловленная инфравезикальная обструкция подвергаются лечению специфическими ингибиторами ФДЭ-5 и/или ФДЭ-4 (и их комбинациями). Это лечение обеспечивает значительное преимущество над способами лечения, которые были известны в уровне техники. Другие урологические расстройства, которые со значительным преимуществом могут лечиться вышеупомянутыми ингибиторами или комбинациями ингибиторов, представляют собой мочеполовые расстройства, включающие нейрогенный мочевой пузырь [также упоминается как сверхактивный пузырь (САП) или интерстициальный цистит (ИЦ)], недержание мочи (НМ), такое как смешанное, острое, стрессовое или недержание от переполнения; боль в тазу, доброкачественные и злокачественные заболевания органов, составляющих мочеполовую систему мужчин и женщин; заболевания почек, такие как острая и хроническая почечная недостаточность; иммунологически обусловленные заболевания почек, такие как отторжение почечного трансплантата, волчаночный нефрит; заболевания почек, вызванные иммунными комплексами, гломерулонефрит, нефрит, токсическая нефропатия, обструктивные уропатии и эректильная дисфункция.

Другим аспектом изобретения является ингибитор ФДЭ-5 варденафил, который оказывает расслабляющий эффект на уретральные кольца крысы с ЕС₅₀, равным 0,96 мкмоль/л, на простату и волокна мочевого пузыря с ЕС₅₀, равным 1,1 и 5,0 мкмоль/л (Фигура 3, таблица 1).

Другим аспектом изобретения являются ингибиторы ФДЭ-4 рофлумиласт и ФДЭ-5 варденафил, которые оказывают релаксирующий эффект на волокна мочевого пузыря кроликов с IC₅₀, равным 260 мкмоль/л и 1,7 мкмоль/л соответственно (Фигура 4, таблица 2).

Другой аспект изобретения предоставляет ингибитор ФДЭ-5 варденафил, который значительно уменьшает количество непроизвольных сокращений, являющихся мерой симптомов раздражения при ДГПЖ у крыс с синдромом инфравезикальной обструкции (СИВО) (модель) (Фигура 5).

Изобретение предоставляет ингибиторы ФДЭ-5, которые одни или в комбинации с ингибиторами ФДЭ-4 пригодны для лечения урологических расстройств. В частности, соединениями по изобретению являются тадалафил ((6R,12aR)-2,3,6,7,12,12а-гексагидро-2-метил-6-(3,4-метилена-диокси-фенил)-пиразино(1′,2′:1,6)пиридо(3,4-b)индол-1,4-дион), варденафил (2-(2-этокси-5-(4-этилпиперазин-1-ил-1-сульфонил)фенил)-5-метил-7-пропил-3Н-имидазо(5,1-f)(1,2,4)триазин-4-он), силденафил (3-[2-этокси-5-(4-метилпиперазин-1-ил)сульфонил-фенил]-7-метил-9-пропил-2,4,7,8-тетразабицикло[4.3.0]нона-3,8,10-триен-5-он), уденафил 5-[2-пропилокси-5-(1-метил-2-пироллидинил-этил-амидосульфонил)фенил]-метил-3-пропил-1,6-дагидро-7Н-пиразол(4,3-d)пирими-дин-7-он, дасантафил 7-(3-бромо-4-метоксибензил)-1-этил-8-[[(1,2)-2-гидроксициклопентил]амино]-3-(2-гидроксиэтил)-3,7-дигидро-1-пурин-2,6-дион, аванафил 4-{[(3-хлоро-4-метоксифенил)метил]амино}-2-[(2S)-2-(гидроксиметил)пирролидин-1-ил]-N-(пиримидин-2-илметил)пиримидин-5-карбоксамид, SLx 2101 Surface Logix, LAS 34179 триазоло[1,2-]ксантин-6-метил-4-пропил-2-[2-пропокси-5-(4-метилпиперазино)сульфонил]фенил-, рофлумиласт (3-(циклопропилметокси)-N-(3,5-дихлорпиридин-4-ил)-4-(дифторометокси)бензамид), силомиласт (4-циано-4-(3-циклопентокси-4-метокси-фенил)-циклогексан-1-карбоксиловая кислота) и пикламиласт (3-циклопентокси-N-(3,5-дихлоропиридин-4-ил)-4-метокси-бензамид).

Другим аспектом изобретения является способ отбора ингибиторов ФДЭ, в частности ингибиторов ФДЭ-4 и ФДЭ-5, для применения поодиночке или в комбинации, для приготовления лекарственных средств для лечения урологических расстройств, упомянутых выше.

Изобретение предоставляет способы (упомянутые здесь "скрининговые испытания") для идентификации ингибиторов ФДЭ, которые могут использоваться для лечения урологических расстройств. Способы определяют идентификацию кандидата или испытуемого соединения или средства (например, пептиды, пептидомиметики, маленькие молекулы или другие молекулы), которые связываются с фосфодиэстеразами и/или оказывают стимулирующий или ингибирующий эффект на биологическую деятельность ФДЭ1А или их экспрессии, и затем определяют, какое из этих соединений будет оказывать эффект на симптомы или заболевания, включающие урологические заболевания в in vivo испытаниях.

Кандидат или испытуемые соединения или средства, которые связываются с ФДЭ-4 или ФДЭ-5 и/или имеют стимулирующий или ингибирующий эффект на активность или экспрессию ФДЭ-4 или ФДЭ-5, идентифицированы в испытании, в котором используют клетки, которые экспрессируют ФДЭ-4 и/или ФДЭ-5 (испытание с использованием клеток), или в испытании с изолированным ФДЭ-4 и/или ФДЭ-5 (испытание без клеток). Разные испытания могут использовать различные варианты ФДЭ (например, ФДЭ во всю длину, биологически активный фрагмент ФДЭ или белок слияния, который включает всю или часть ФДЭ). Кроме того, ФДЭ-4 и/или ФДЭ-5 могут быть получены из любого подходящего рода млекопитающих. Испытание может быть связывающим испытанием, определяющим прямые или косвенные измерения связывания испытуемых соединений или известных лигандов ФДЭ-4 или ФДЭ-5 с ФДЭ-4 или ФДЭ-5. Испытание может быть испытанием активности, определяющим прямые или косвенные измерения активности ФДЭ-4 и ФДЭ-5. Испытание может также быть испытанием экспрессии, определяющим прямые или косвенные измерения экспрессии ФДЭ-4 и/или ФДЭ-5 тРНК или белка ФДЭ-4 и/или ФДЭ-5. Различные скрининговые испытания комбинируют с испытаниями in vivo, определяющими измерение эффекта испытуемых соединений на урологические симптомы.

Настоящее изобретение включает биохимические, бесклеточные испытания, которые делают возможной идентификацию ингибиторов и агонистов ФДЭ, пригодных как инициирующие структуры для развития фармакологических лекарств. Такое испытание включает в себя контактирование ФДЭ-4 и/или ФДЭ-5 с испытуемыми соединениями и определяет способность исследуемого соединения действовать в качестве антагониста (предпочтительно) или агониста ферментативной активности ФДЭ-4 и/или ФДЭ-5. В одном варианте реализации испытание включает мониторинг ФДЭ активности ФДЭ-4 и/или ФДЭ-5 путем измерения превращения цАМФ или цГМФ в нуклеозидный монофосфат после контактирования ФДЭ-4 и/или ФДЭ-5 с испытуемым соединением.

Например, уровни цАМФ и цГМФ могут быть измерены с использованием трития, содержащего соединения 3НцАМФ и 3НцГМФ, как описано у Hansen R.S. и Beavo J.A., PITAS USA, 1982.79: 2788-92. Для скрининга совокупности соединений, включающего большое количество соединений, может быть использован сцинтилляционный анализ сближения на базе микротитровальных пластин [Bardelle С. и др. (1999) Annal. Biochem. 275: 148-155].

Альтернативно, фосфодиэстеразная активность рекомбинантного протеина может быть испытана с использованием коммерчески доступного СБИ набора (Amersham Pharmacia). Фермент ФДЭ гидролизирует циклические нуклеотиды, например цАМФ и цГМФ до их линейных копий. Испытание СБИ использует меченные тритием циклические нуклеотиды [3Н]кАМФ или [3Н]кГМФ и основано на селективном взаимодействии меченного тритием нециклического продукта с СБИ частицами, тогда как циклические субстраты связываются неэффективно.

Радиомеченный продукт, связанный с сцинтилляционными частицами, генерирует свет, который может быть проанализирован в сцинтилляционном счетчике.

Фармацевтическая композиция по изобретению сформулирована таким образом, чтобы быть совместимой с намеченным путем ее введения. Примеры путей введения включают парентеральный (например, внутривенное, внутриартериальное, внутрикожное, подкожное, внутримышечное, ингаляционное, трансдермальное, трансмукозное, назальное и ректальное введение), оральный (например, буккальное, сублингвальное, оральное через слизистую или пероральное введение) и местный (например, локальные инсталляции растворов или суспензий и местные имплантаты).

Фармацевтические композиции, подходящие для инъекций и инфузий, включают стерильные водные растворы (если активный ингредиент хорошо растворим в воде), суспензии, эмульсии, стерильные порошки, приготавливаемые по мере требования для стерильных инъекционных растворов или дисперсий. Носитель может быть растворителем или дисперсионной средой, содержащей, например, воду, этанол, фармацевтически приемлемые полиол, такой как глицерин, пропиленгликоль, жидкий полиэтиленгликоль и их подходящие смеси. Фармацевтически приемлемые ингредиенты могут быть добавлены как буферы, консерванты, антиоксиданты, изотонические агенты или сурфактанты. Депо инъекции основаны на известных составных частях препаративных форм как масляные растворы, или суспензии, или частицы поддающихся биологическому разложению полимеров.

При введении путем ингаляции вещества доставляются в форме аэрозолей, распыляемых из аэрозольной тары, или дозирующих устройств, которые содержат подходящий пропеллент из распылителя или ингалятора сухого порошка.

Системное введение может также быть трансмукозным или трансдермальным. Для трансмукозного или трансдермального введения в препаративных формах используются проникающие жидкости, предназначенные для проникновения через барьер. Такие проникающие жидкости в основном известны из уровня техники и включают, например для трансмукозного введения - детергенты, желчные соли, производные фусидовой кислоты. Трансмукозное введение может быть достигнуто путем использования назальных спреев, сублингвальных и буккальных лекарственных препаратов или суппозиториев. Для трансдермального введения активные соединения представляют собой препаративные формы в виде мазей, пластырей, гелей или кремов, в основном известных в уровне техники.

Соединения могут также быть изготовлены в форме суппозиториев (например, суппозитории с обычными основами, такими как масло какао или другие глицериды) или удерживаемых клизм для ректальной доставки.

Композиции для орального введения в основном содержат инертный разбавитель или наполнитель и функциональные наполнители. Они могут быть заключены в капсулы или спрессованы в таблетки. Другие подходящие дозируемые формы - шипучие таблетки, жевательные таблетки, диспергируемые орально таблетки, мягкие желатиновые капсулы, заполненные жидкостью, твердые желатиновые капсулы, порошки в пакетиках и оральные жидкости.

Подходящие функциональные наполнители для приготовления оральных дозируемых форм известны в уровне техники и включают, например, такие связующие, как поливинилпирролидон или гидроксипропилметилцеллюлоза; разделители, такие как кросповидон или косармеллоза натрия, скользящие, такие как коллоидный диоксид кремния; смазки, такие как стеарат магния, макрогол или стеариновая кислота; подсластители, такие как аспартам, сахароза или натрия сахарин, и вкусо-ароматические добавки, такие как мята или апельсиновый ароматизатор.

В одном варианте реализации активные соединения изготавливают с носителями, которые будут защищать состав от быстрого выведения из организма, такие как таблетки с контролируемым высвобождением или покрытые гранулы, заполняющие капсулы или парентеральные препаративные формы с контролируемым высвобождением, включающие имплантаты и микроинкапсулированные системы доставки. Могут использоваться поддающиеся биологическому разложению или биологически совместимые полимеры, такие как этиленвинилацетат, полиангидриды, полигликолевая кислота, коллаген, полиортоэфиры, полилактамная кислота или полигликоль-полилактам-сополимеры.

В другом варианте реализации изобретение предоставляет комбинации ФДЭ-4 и ФДЭ-5 ингибиторов и их использование для приготовления фармацевтических композиций для лечения урологических расстройств, в соответствии с чем эти композиции включают i) фармацевтические композиции, содержащие соединение, имеющее ингибирующую активность и на ФДЭ-4 и на ФДЭ-5, или ii) фармацевтические композиции, содержащие, по крайней мере, один ингибитор ФДЭ-4 и, по крайней мере, один ингибитор ФДЭ-5 в виде фиксированной комбинации в одной единице применения, или iii) набор, содержащий, по крайней мере, два набора фармацевтических композиций, каждый набор включает, по крайней мере, одно фармацевтическое средство, содержащее ингибитор ФДЭ-5 в единицах по крайней мере одной дозы, и по крайней мере одно фармацевтическое средство, содержащее ингибитор ФДЭ-4 в единицах по крайней мере одной дозы, посредством чего каждая единица применения указанных фармацевтических композиций вводится в комбинации, последовательно, в виде однократной дозы или многократным доз.

Настоящее изобретение предоставляет далее:

Способ отбора ФДЭ-5 ингибиторов, пригодных в качестве лекарственных веществ для лечения заболевания, входящего в группу заболеваний, включающую доброкачественную гиперплазию предстательной железы (ДГПЖ), синдром инфравезикальной обструкции (СИВО) и симптомы нижних мочевых путей (СНМП), включающий стадии: i) контактирование испытуемого соединения (которое может иметь или может не иметь ингибирующую ФДЭ-4 активность) с ФДЭ-5 полипептидом, ii) определение активности полипептида ФДЭ-5 при определенной концентрации испытуемого соединения или в отсутствие указанного испытуемого соединения, iii) определение активности указанного полипептида ФДЭ-5 при различной концентрации указанного испытуемого соединения, iv) отбор по крайней мере одного соединения с ингибирующим эффектом на полипептид ФДЭ-5.

Способ отбора ФДЭ-4 ингибиторов, пригодных в качестве лекарственных веществ для лечения заболевания, входящего в группу заболеваний, включающую доброкачественную гиперплазию предстательной железы (ДГПЖ), синдром инфравезикальной обструкции (СИВО) и симптомы нижних мочевых путей (СНМП), включающий стадии: i) контактирование испытуемого соединения с полипептидом ФДЭ-4, ii) определение активности полипептида ФДЭ-4 при определенной концентрации испытуемого соединения или в отсутствие указанного испытуемого соединения, iii) определение активности указанного полипептида ФДЭ-4 при различной концентрации указанного испытуемого соединения, iv) отбор по крайней мере одного соединения с ингибирующим эффектом на полипептид ФДЭ-4.

Способ отбора комбинаций ФДЭ-5 ингибиторов и ФДЭ-4 ингибиторов, пригодных в качестве лекарственных веществ для лечения заболевания, входящего в группу заболеваний, включающую доброкачественную гиперплазию предстательной железы (ДГПЖ), синдром инфравезикальной обструкции (СИВО) и симптомы нижних мочевых путей (СНМП), включающий стадии: i) контактирование первого испытуемого соединения с полипептидом ФДЭ-5, ii) определение активности полипептида ФДЭ-5 при определенной концентрации первого испытуемого соединения или в отсутствие указанного испытуемого соединения, iii) определение активности полипептида ФДЭ-5 при различной концентрации указанного первого испытуемого соединения, iv) отбор по крайней мере одного первого соединения с ингибирующим эффектом на полипептид ФДЭ-5, v) контактирование второго испытуемого соединения с полипептидом ФДЭ-4, vi) определение активности полипептида ФДЭ-4 при определенной концентрации второго испытуемого соединения или в отсутствие указанного второго испытуемого соединения, vii) определение активности полипептида ФДЭ-4 при различной концентрации указанного второго испытуемого соединения, vii) отбор по крайней мере одного второго соединения с ингибирующим эффектом на полипептид ФДЭ-4, vii) объединение по крайней мере одного соединения с ФДЭ-5-ингибирующей активностью с по крайней мере одним соединением, имеющим ФДЭ-4-ингибирующую активность.

Способы отбора, которые включают в себя контактирование испытуемого соединения в клетке или на поверхности клетки в то время, когда клетка находится in vitro.

Способы отбора, которые включают в себя контактирование испытуемого соединения с ФДЭ-4 или полипептидом ФДЭ-5 в свободной клеточной системе.

Способы отбора могут касаться испытуемого соединения, которое связано с обнаруживаемыми метками.

В частности, настоящее изобретение предоставляет:

Фармацевтическую композицию для лечения заболевания, входящего в группу заболеваний, включающую доброкачественную гиперплазию предстательной железы (ДГПЖ), синдром инфравезикальной обструкции (СИВО) и симптомы нижних мочевых путей (СНМП), мочеполовые расстройства, включающие синдром неврогенного мочевого пузыря (НМП), недержание мочи (НМ), такое как смешанное, острое, стрессовое или недержание от переполнения, боль в тазу, доброкачественные и злокачественные заболевания органов, составляющих мочеполовую систему мужчин и женщин, заболевания почек, такие как острая и хроническая почечная недостаточность, иммунологически обусловленные заболевания почек, такие как отторжение почечного трансплантата, волчаночный нефрит, заболевания почек, вызванные иммунными комплексами, гломерулонефрит, нефрит, токсическая нефропатия, обструктивные уропатии и эректильная дисфункция у млекопитающих, содержащую лекарственное вещество, которое регулирует активность полипептида ФДЭ-5.

Фармацевтическую композицию для лечения заболевания, входящего в группу заболеваний, включающую доброкачественную гиперплазию предстательной железы (ДГПЖ), синдром инфравезикальной обструкции (СИВО) и симптомы нижних мочевых путей (СНМП) у млекопитающих, содержащую лекарственное вещество, регулирующее активность полипептида ФДЭ-4.

Фармацевтическую композицию для лечения заболевания, входящего в группу заболеваний, включающую доброкачественную гиперплазию предстательной железы (ДГПЖ), синдром инфравезикальной обструкции (СИВО) и симптомы нижних мочевых путей (СНМП) у млекопитающих, содержащую лекарственное вещество, которое представляет собой комбинацию вышеупомянутых выбранных лекарственных веществ.

Фармацевтическую композицию для лечения заболевания, входящего в группу заболеваний, включающую доброкачественную гиперплазию предстательной железы (ДГПЖ), синдром инфравезикальной обструкции (СИВО) и симптомы нижних мочевых путей (СНМП) у млекопитающих, содержащую лекарственное вещество, которое регулирует активность полипептида ФДЭ-5 и полипептида ФДЭ-4.

Фармацевтическую композицию для лечения заболевания, входящего в группу заболеваний, включающую доброкачественную гиперплазию предстательной железы (ДГПЖ), синдром инфравезикальной обструкции (СИВО) и симптомы нижних мочевых путей (СНМП) у млекопитающих, содержащую ингибитор ФДЭ-4, выбранный из группы ингибиторов ФДЭ-4, включающей рофлумиласт (3-(циклопропилметокси)-N-(3,5-дихлоропиридин-4-ил)-4-(дифтор-метокси)бензамид), силомиласт (4-циано-4-(3-циклопентокси-4-метокси-фенил)-циклогексан-1-карбоксильная кислота) и пикламиласт (3-циклопентокси-N-(3,5-дихлоропиридин-4-ил)-4-метокси-бензамид).

Фармацевтическую композицию для лечения заболевания, входящего в группу заболеваний, включающую доброкачественную гиперплазию предстательной железы (ДГПЖ), синдром инфравезикальной обструкции (СИВО) и симптомы нижних мочевых путей (СНМП), мочеполовые расстройства, включающие синдром неврогенного мочевого пузыря (НМП), недержание мочи (НМ), такое как смешанное, острое, стрессовое или недержание от переполнения, боль в тазу, доброкачественные и злокачественные заболевания органов, составляющих мочеполовую систему мужчин и женщин, заболевания почек, такие как острая и хроническая почечная недостаточность, иммунологически обусловленные заболевания почек, такие как отторжение почечного трансплантата, волчаночный нефрит, заболевания почек, вызванные иммунными комплексами, гломерулонефрит, нефрит, токсическая нефропатия, обструктивные уропатии у млекопитающих, включающую ингибитор ФДЭ-5, выбранный из группы ингибиторов ФДЭ-5, включающей тадалафил ((6R,12aR)-2,3,6,7,12,12а-гексагидро-2-метил-6-(3,4-метилен-диоксифенил)пиразино(1′,2′:1,6)пиридо(3,4-b)индол-1,4-дион), варденафил (2-(2-этокси-5-(4-этилпиперазин-1-ил-1-сульфонил)фенил)-5-метил-7-пропил-3Н-имидазо(5,1-f)(1,2,4)триазин-4-он), силденафил (3-[2-этокси-5-(4-этилпиперазин-1-ил)сульфонил-фенил]-7-метил-1-9-пропил-2,4,7,8-тетразабицикло[4.3.0]нона-3,8,10-триен-5-он), уденафил 5-[2-пропилокси-5-(1-метил-2-пирролидинил-этил-амидосульфонил)фенил]-метил-3-пропил-1,6-дигидро-7Н-пиразоло(4,3-d)пирими-дин-7-он, дасантафил 7-(3-бромо-4-метоксибензил)-1-этил-8-[[(1,2)-2-гидроксициклопентил]амино]-3-(2-гидроксиэтил)-3,7-дигидро-1-пурин-2,6-дион, аванафил 4-{[(3-хлоро-4-метоксифенил)метил]амино}-2-[(2S)-2-(гидроксиметил)пирролидин-1-ил]-N-(пиримидин-2-илметил)пиримидин-5-карбоксамид, SLx 2101 Surface Logix, LAS 34179 триазоло[1,2-]ксантин-6-метил-4-пропил-2-[2-ропокси-5-(4-метилпиперазино)-сульфонил]фенил или их соли, гидраты или гидраты солей.

Фармацевтическую композицию для лечения заболевания, входящего в группу заболеваний, включающую доброкачественную гиперплазию предстательной железы (ДГПЖ), синдром инфравезикальной обструкции (СИВО) и симптомы нижних мочевых путей (СНМП) у млекопитающих, содержащую комбинацию по крайней мере одного ингибитора ФДЭ-4, выбранного из группы ингибиторов ФДЭ-4, включающей рофлумиласт (3-(циклопропилметокси)-N-(3,5-дихлоропиридин-4-ил)-4-(дифтор-метокси)бензамид), силомиласт (4-циано-4-(3-циклопентокси-4-метокси-фенил)-циклогексан-1-карбоксильная кислота) и пикламиласт (3-циклопентокси-N-(3,5-дихлоропиридин-4-ил)-4-метокси-бензамид), и по крайней мере одного ингибитора ФДЭ-5, выбранного из группы ингибиторов ФДЭ-5, включающей варденафил (2-(2-этокси-5-(4-этилпиперазин-1-ил-1-сульфонил)фенил)-5-метил-7-пропил-3Н-имидазо(5,1-f)(1,2,4)триазин-4-он), силденафил (3-[2-этокси-5-(4-этилпиперазин-1-ил)сульфонил-фенил]-7-метил-1-9-пропил-2,4,7,8-тетразабицикло[4.3.0]нона-3,8,10-триен-5-он) и тадалафил ((6R,12аR)-2,3,6,7,12,12а-гексагидро-2-метил-6-(3,4-метилен-диоксифенил)пиразино-(1′,2′:1,6)пиридо(3,4-b)индол-1,4-дион).

Применение ингибитора ФДЭ-5 для приготовления фармацевтической композиции для лечения заболевания, входящего в группу заболеваний, включающую доброкачественную гиперплазию предстательной железы (ДГПЖ), синдром инфравезикальной обструкции (СИВО) и симптомы нижних мочевых путей (СНМП), мочеполовые расстройства, включающие синдром неврогенного мочевого пузыря (НМП), недержание мочи (НМ), такое как смешанное, острое, стрессовое или недержание от переполнения, боль в тазу, доброкачественные и злокачественные заболевания органов, составляющих мочеполовую систему мужчин и женщин, заболевания почек, такие как острая и хроническая почечная недостаточность, иммунологически обусловленные заболевания почек, такие как отторжение почечного трансплантата, волчаночный нефрит, заболевания почек, вызванные иммунными комплексами, гломерулонефрит, нефрит, токсическая нефропатия, обструктивные уропатии у млекопитающих.

Применение ингибитора ФДЭ-4 для приготовления фармацевтической композиции для лечения заболевания, входящего в группу заболеваний, включающую доброкачественную гиперплазию предстательной железы (ДГПЖ), синдром инфравезикальной обструкции (СИВО) и симптомы нижних мочевых путей (СНМП) у млекопитающих.

Применение комбинации по крайней мере одного ингибитора ФДЭ-4 и по крайней мере одного ингибитора ФДЭ-5, выбранного из группы ингибиторов ФДЭ-5 для приготовления фармацевтической композиции для лечения заболевания, входящего в группу заболеваний, включающую доброкачественную гиперплазию предстательной железы (ДГПЖ), синдром инфравезикальной обструкции (СИВО) и симптомы нижних мочевых путей (СНМП), мочеполовые расстройства, включающие синдром неврогенного мочевого пузыря (НМП), недержание мочи (НМ), такое как смешанное, острое, стрессовое или недержание от переполнения, боль в тазу, доброкачественные и злокачественные заболевания органов, составляющих мочеполовую систему мужчин и женщин, заболевания почек, такие как острая и хроническая почечная недостаточность, иммунологически обусловленные заболевания почек, такие как отторжение почечного трансплантата, волчаночный нефрит, заболевания почек, вызванные иммунными комплексами, гломерулонефрит, нефрит, токсическая нефропатия, обструктивные уропатии у млекопитающих.

Применение ингибитора ФДЭ-5, выбранного из группы ингибиторов ФДЭ-5, включающей тадалафил ((6R,12аR)-2,3,6,7,12,12а-гексагидро-2-метил-6-(3,4-метилен-диоксифенил)пиразино(1′,2′:1,6)пиридо(3,4-b)индол-1,4-дион), варденафил (2-(2-этокси-5-(4-этилпиперазин-1-ил-1-сульфонил)фенил)-5-метил-7-пропил-3Н-имидазо(5,1-f)(1,2,4)триазин-4-он), силденафил (3-[2-этокси-5-(4-этилпиперазин-1-ил)сульфонил-фенил]-7-метил-1-9-пропил-2,4,7,8-тетразабицикло[4.3.0]нона-3,8,10-триен-5-он), уденафил 5-[2-пропилокси-5-(1-метил-2-пирролидинил-этил-амидосульфонил)фенил]-метил-3-пропил-1,6-дигидро-7Н-пиразоло(4,3-d)пирими-дин-7-он, дасантафил 7-(3-бромо-4-метоксибензил)-1-этил-8-[[(1,2)-2-гидроксициклопентил]амино]-3-(2-гидроксиэтил)-3,7-дигидро-1-пурин-2,6-дион, аванафил 4-{[(3-хлоро-4-метоксифенил)метил]амино}-2-[(2S)-2-(гидроксиметил)пирролидин-1-ил]-N-(пиримидин-2-илметил)пиримидин-5-карбоксамид, SLx 2101 Surface Logix, LAS 34179 триазоло[1,2-]ксантин-6-метил-4-пропил-2-[2-ропокси-5-(4-метилпиперазино)-сульфонил]фенил или их соли, гидраты или гидраты солей, для лечения заболевания, входящего в группу заболеваний, включающую доброкачественную гиперплазию предстательной железы (ДГПЖ), синдром инфравезикальной обструкции (СИВО) и симптомы нижних мочевых путей (СНМП), мочеполовые расстройства, включающие синдром неврогенного мочевого пузыря (НМП), недержание мочи (НМ), такое как смешанное, острое, стрессовое или недержание от переполнения, боль в тазу, доброкачественные и злокачественные заболевания органов, составляющих мочеполовую систему мужчин и женщин, заболевания почек, такие как острая и хроническая почечная недостаточность, иммунологически обусловленные заболевания почек, такие как отторжение почечного трансплантата, волчаночный нефрит, заболевания почек, вызванные иммунными комплексами, гломерулонефрит, нефрит, токсическая нефропатия, обструктивные уропатии у млекопитающих.

Применение ингибитора ФДЭ-4, выбранного из группы ингибиторов ФЭД-4, включающей рофлумиласт (3-(циклопропилметокси)-N-(3,5-дихлоропиридин-4-ил)-4-(дифтор-метокси)бензамид), силомиласт (4-циано-4-(3-циклопентокси-4-метокси-фенил)-циклогексан-1-карбоксильная кислота) и пикламилает (3-пиклопентокси-N-(3,5-дихлоропиридин-4-ил)-4-метокси-бензамид), для приготовления фармацевтической композиции для лечения заболевания, входящего в группу заболеваний, включающую доброкачественную гиперплазию предстательной железы (ДГПЖ), синдром инфравезикальной обструкции (СИВО) и симптомы нижних мочевых путей (СНМП) у млекопитающих.

Применение комбинации по крайней мере одного ингибитора ФДЭ-4, выбранного из группы ингибиторов ФДЭ-4, включающей рофлумиласт (3-(циклопропилметокси)-N-(3,5-дихлоропиридин-4-ил)-4-(дифтор-метокси)бензамид), силомиласт (4-циано-4-(3-циклопентокси-4-метокси-фенил)-циклогексан-1-карбоксильная кислота) и пикламиласт (3-циклопентокси-N-(3,5-дихлоропиридин-4-ил)-4-метокси-бензамид), и, по крайней мере, одного ингибитора ФДЭ-5, выбранного из группы ингибиторов ФДЭ-5, включающей варденафил (2-(2-этокси-5-(4-этилпиперазин-1-ил-1-сульфонил)фенил)-5-метил-7-пропил-3Н-имидазо(5,1-f)(1,2,4)триазин-4-он), силденафил (3-[2-этокси-5-(4-этилпиперазин-1-ил)сульфонил-фенил]-7-метил-1-9-пропил-2,4,7,8-тетразабицикло[4.3.0]нона-3,8,10-триен-5-он) и тадалафил ((6R,12aR)-2,3,6,7,12,12а-гексагидро-2-метил-6-(3,4-метилен-диоксифенил)пиразино-(1',2':1,6)пиридо(3,4-b)индол-1,4-дион), для приготовления фармацевтической композиции для лечения заболевания, входящего в группу заболеваний, включающую доброкачественную гиперплазию предстательной железы (ДГПЖ), синдром инфравезикальной обструкции (СИВО) и симптомы нижних мочевых путей (СНМП), мочеполовые расстройства, включающие синдром неврогенного мочевого пузыря (НМП), недержание мочи (НМ), такое как смешанное, острое, стрессовое или недержание от переполнения, боль в тазу, доброкачественные и злокачественные заболевания органов, составляющих мочеполовую систему мужчин и женщин, заболевания почек, такие как острая и хроническая почечная недостаточность, иммунологически обусловленные заболевания почек, такие как отторжение почечного трансплантата, волчаночный нефрит, заболевания почек, вызванные иммунными комплексами, гломерулонефрит, нефрит, токсическая нефропатия, обструктивные уропатии и эректильная дисфункция у млекопитающего.

Способ приготовления фармацевтической композиции, пригодной для лечения заболевания, входящего в группу заболеваний, включающую доброкачественную гиперплазию предстательной железы (ДГПЖ), синдром инфравезикальной обструкции (СИВО) и симптомы нижних мочевых путей (СНМП), мочеполовые расстройства, включающие синдром неврогенного мочевого пузыря (НМП), недержание мочи (НМ), такое как смешанное, острое, стрессовое или недержание от переполнения, боль в тазу, доброкачественные и злокачественные заболевания органов, составляющих мочеполовую систему мужчин и женщин, заболевания почек, такие как острая и хроническая почечная недостаточность, иммунологически обусловленные заболевания почек, такие как отторжение почечного трансплантата, волчаночный нефрит, заболевания почек, вызванные иммунными комплексами, гломерулонефрит, нефрит, токсическая нефропатия, обструктивные уропатии и эректильная дисфункция у млекопитающего, включающий стадии: i) идентификация ингибитора ФДЭ-5 в соответствии с описанным выше способом отбора, ii) идентификация ингибитора ФДЭ-4 в соответствии с описанным выше способом отбора - определение, улучшают ли указанные выше ингибиторы симптомы заболеваний, входящих в группу заболеваний, включающую доброкачественную гиперплазию предстательной железы (ДГПЖ), синдром инфравезикальной обструкции (СИВО) и симптомы нижних мочевых путей (СНМП) у млекопитающих; iii) объединение, по крайней мере, одного из указанных ингибиторов с подходящим фармацевтическим носителем.

Способ приготовления фармацевтической композиции, в которой ингибитор ФДЭ-5 является ингибитором PDE-5, выбранным из группы ингибиторов ФДЭ-5, включающей варденафил (2-(2-этокси-5-(4-этилпиперазин-1-ил-1-сульфонил)фенил)-5-метил-7-пропил-3Н-имидазо(5,1-f)(1,2,4)триазин-4-он), силденафил (3-[2-этокси-5-(4-этилпиперазин-1-ил)сульфонил-фенил]-7-метил-1-9-пропил-2,4,7,8-тетразабицикло[4.3.0]нона-3,8,10-триен-5-он), тадалафил ((6R,12aR)-2,3,6,7,12,12а-гексагидро-2-метил-6-(3,4-метилен-диоксифенил)пиразино(1′,2′:1,6)-пиридо(3,4-b)индол-1,4-дион), уденафил 5-[2-пропилокси-5-(1-метил-2-пирролидинил-этил-амидосульфонил)фенил]-метил-3-пропил-1,6-дигидро-7Н-пиразоло(4,3-d)пирими-дин-7-он, дасантафил 7-(3-бромо-4-метоксибензил)-1-этил-8-[[(1,2)-2-гидроксициклопентил]амино]-3-(2-гидроксиэтил)-3,7-дигидро-1-пурин-2,6-дион, аванафил 4-{[(3-хлоро-4-метоксифенил)метил]амино}-2-[(2S)-2-(гидроксиметил)пирролидин-1-ил]-N-(пиримидин-2-илметил)пиримидин-5-карбоксамид, SLx 2101 Surface Logix, LAS 34179 триазоло[1,2-]ксантин-6-метил-4-пропил-2-[2-ропокси-5-(4-метилпиперазино)-сульфонил]фенил.

Способ приготовления фармацевтической композиции, в которой ингибитор ФДЭ-4 является ингибитором ФДЭ-4, выбранным из группы ингибиторов ФДЭ-4, включающей рофлумиласт (3-(циклопропилметокси)-N-(3,5-дихлоропиридин-4-ил)-4-(дифтор-метокси)бензамид), силомиласт (4-циано-4-(3-циклопентокси-4-метокси-фенил)-циклогексан-1-карбоксильная кислота) и пикламиласт (3-циклопентокси-N-(3,5-дихлоропиридин-4-ил)-4-метокси-бензамид).

Применение упомянутой выше фармацевтической композиции для регулирования активности ФДЭ у млекопитающих, имеющих заболевание, входящее в группу заболеваний, включающую доброкачественную гиперплазию предстательной железы (ДГПЖ), синдром инфравезикальной обструкции (СИВО) и симптомы нижних мочевых путей (СНМП), мочеполовые расстройства, включающие синдром неврогенного мочевого пузыря (НМП), недержание мочи (НМ), такое как смешанное, острое, стрессовое или недержание от переполнения, боль в тазу, доброкачественные и злокачественные заболевания органов, составляющих мочеполовую систему мужчин и женщин, заболевания почек, такие как острая и хроническая почечная недостаточность, иммунологически обусловленные заболевания почек, такие как отторжение почечного трансплантата, волчаночный нефрит, заболевания почек, вызванные иммунными комплексами, гломерулонефрит, нефрит, токсическая нефропатия, обструктивные уропатии и эректильная дисфункция.

Набор компонентов для лечения заболевания, входящего в группу заболеваний, включающую доброкачественную гиперплазию предстательной железы (ДГПЖ), синдром инфравезикальной обструкции (СИВО) и симптомы нижних мочевых путей (СНМП) у млекопитающих, включая людей, содержащий комбинацию, по крайней мере, одной фармацевтической композиции, выбранной из группы фармацевтических композиций, содержащих варденафил, силденафил и тадалафил, и, по крайней мере, одной фармацевтической композиции, выбранной из группы фармацевтических композиций, содержащих рофлумиласт, силомиласт и пикламиласт.

Способ приготовления набора компонентов, пригодного для лечения болезни, входящей в группу болезней, включающую доброкачественную гиперплазию предстательной железы (ДГПЖ), синдром инфравезикальной обструкции (СИВО) и симптомы нижних мочевых путей (СНМП) у млекопитающих, включающий стадии: i) выбор, по крайней мере, одной фармацевтической композиции из группы фармацевтических композиций, содержащих варденафил, силденафил и тадалафил; ii) выбор, по крайней мере, одной фармацевтической композиции из группы фармацевтических композиций, содержащих рофлумиласт, силомиласт и пикламиласт; iii) объединение, по крайней мере, двух из указанных фармацевтических составов, создавая, таким образом, указанный набор компонентов.

Набор компонентов для лечения заболевания, входящего в группу заболеваний, включающую доброкачественную гиперплазию предстательной железы (ДГПЖ), синдром инфравезикальной обструкции (СИВО) и симптомы нижних мочевых путей (СНМП) у млекопитающих, содержащий комбинацию, по крайней мере, одного лекарственного средства, регулирующего авктивность полипептида ФДЭ-5, и тадалафил и, по крайней мере, одного лекарственного средства, регулирующего активность полипептида ФДЭ-4.

Способ приготовления набора компонентов для лечения заболевания, входящего в группу заболеваний, включающую доброкачественную гиперплазию предстательной железы (ДГПЖ), синдром инфравезикальной обструкции (СИВО) и симптомы нижних мочевых путей (СНМП) у млекопитающих, включающий стадии: i) выбор, по крайней мере, одной фармацевтической композиции, включающей лекарственное средство, регулирующее активность полипептида ФДЭ-5, ii) выбор, по крайней мере, одной фармацевтической композиции, включающей лекарственное средство, регулирующее активность полипептида ФДЭ-4, iii) объединение, по крайней мере, двух из указанных фармацевтических композиций, создавая, таким образом, набор компонентов.

Предпочтительным вариантом реализации изобретения является фармацевтическая композиция, содержащая варденафил или его соль, гидрат или гидрат соли, для лечения заболевания, входящего в группу заболеваний, включающую доброкачественную гиперплазию предстательной железы (ДГПЖ), синдром инфравезикальной обструкции (СИВО) и симптомы нижних мочевых путей (СНМП), мочеполовые расстройства, включающие синдром неврогенного мочевого пузыря (НМП), недержание мочи (НМ), такое как смешанное, острое, стрессовое или недержание от переполнения, боль в тазу, доброкачественные и злокачественные заболевания органов, составляющих мочеполовую систему мужчин и женщин, заболевания почек, такие как острая и хроническая почечная недостаточность, иммунологически обусловленные заболевания почек, такие как отторжение почечного трансплантата, волчаночный нефрит, заболевания почек, вызванные иммунными комплексами, гломерулонефрит, нефрит, токсическая нефропатия, обструктивные уропатии у млекопитающих.

Удивительным образом было обнаружено, что особенно варденафил или его соль, гидрат или гидрат соли проявляют более высокую активность и демонстрируют лучшие результаты в лечении неврогенного мочевого пузыря (также упоминается как сверхактивный мочевой пузырь или интерстициальный цистит), в сравнении с другими ФДЭ-5 ингибиторами.

Описание чертежей

Фигура 1: Относительная тРНК экспрессия ФДЭ-5 в почке (П), мочевом пузыре (МП), простате (П), уретре (У) и кавернозных телах (С) у Sprague Dawley крысы. Данные представляют собой среднее значение + SEM, n=10.

Фигура 2: Относительная тРНК экспрессия ФДЭ-4а, -4b, -4c, -4d и ФДЭ-5 в мочевом пузыре и простате у Sprague Dawley крысы. Данные представляют собой среднее значение + SEM, n=10.

Фигура 3: Воздействие варденафила на сокращение изолированных уретральных колец у крысы (черные треугольники), мочевого пузыря (черные ромбы), простаты (серые квадраты). Волокна мочевого пузыря были предварительно сокращены с использованием К⁺ (50 ммоль/л) раствора Krebs-Henseleit. Простата и ткани уретры были предварительно сокращены с использованием 10 мкмоль/л фенилэфрина. Расслабление было выражено как процент от предварительного сокращения. Каждая точка представляет собой среднее значение ± SEM, n=9.

Фигура 4: Воздействие рофлумиласта (черные ромбы) и варденафила (серые квадраты) на сокращение изолированных волокон мочевого пузыря кролика. Волокна мочевого пузыря были предварительно сокращены с использованием К⁺ (50 ммоль/л) раствора Krebs-Henseleit. Расслабление было выражено как процент от предварительного сокращения. Каждая точка представляет собой среднее значение ± SEM, n=9.

Фигура 5: Число непроизвольных сокращений в % после внутривенного введения болюса со средой (V) и варденафилом НСl (1, 3 и 10 мг/кг). Данные представляют собой среднее значение + SEM, * = значительный с р<0.05 (парный t-тест Стьюдента).

Фигура 6: интервал мочеиспускания в % после внутривенного введения болюса со средой (V) и варденафила НСl (1,3 мг/кг) по сравнению с основным интервалом мочеиспускания (С). Данные представляют собой среднее значение + SEM, * = значительный с р<0.05 (парный t-тест Стьюдента).

Пример 1

Отбор образцов ткани и подготовка РНК: для сбора ткани использовались самцы крысы Sprague Dawley с массой тела между 200-250 г. Крысы были на короткое время обезболены смесью 5%-ного изофлурана (Baxter S.A.) в носители с 70%-ным N₂O и 30%-ным О₂, а затем умерщвлены путем декапитации. Живот был вскрыт разрезом по средней линий, и почки, ткани нижнего отдела мочевыводящих путей, мозговое вещество почки, мочеточник, мочевой пузырь, простата и уретра были обнажены и быстро удалены. Ткани были заморожены в жидком азоте и сохранены до подготовки РНК. Полная РНК была изолирована с использованием РНазных мини-колонок (Qiagen Inc.) и далее очищена расщеплением РНазы.

Количественный анализ тРНК ФДЭ: экспрессия тРНК различных изогенов ФДЭ в тканях нижних мочевыводящих путей крысы была измерена количественно с помощью количественных PCR-экспериментов в режиме реального времени (TaqMan-PCR, Heid, 1996). Затем 1 мкг всей РНК был транскрибирован в кДНК с набором для синтеза Superscript II RT кДНК (Gibco, Inc.) согласно руководству поставщика. тРНК для ФДЭ были измерены в режиме реального времени на аппарате для определения последовательности ABI Prism 7700 (Applied Biosystems, Inc.). Специфические последовательности для комплементарных началу и концу праймеров, как и для флуоресцентной пробы каждого тРНК ФДЭ изогена, были разработаны Primer Express 1.5 Software (Applied Biosystems, Inc.). Во время PCR амплификации 5' нуклеотидная активность Taq полимеразы расщепляет пробу, отделяя 5' репортерный флуоресцирующий краситель от 3' гасящего люминесценцию красителя. Цикл пороговой величины, Ct, который находится в обратно пропорциональном соотношении с заданным уровнем м-РНК, был измерен как число циклов, при котором репортерное флуоресцентное излучение увеличивается на 10 стандартных отклонений сверх фонового уровня. Как конститутивный ген, бета-действие было измерено как описано выше, с использованием в качестве праймера начала 5'-accttcaacaccccagcca-3', праймера конца 5'-cagtggtacgaccagaggca-3' и флуоресцентной пробы 5'-6AFM- acgtagccatccaggctgtgttgtcc-TAMARA-3'. Уровни м-РНК ФДЭ были скорректированы для бета-актина и рассчитаны как относительная экспрессия с использованием сравнительного Ct-способа.

Экспрессия тРНК ФДЭ-5 и ФДЭ-4А, -4В, -4С, -4D в нижних отделах мочевыделительной системы: так как существуют только неполные данные по профилю экспрессии ФДЭ-5 в ткани нижнего отдела мочевыделительной системы, тРНК ФДЭ был определен количественно у самцов крыс Sprague Dawley с помощью PCR TaqMan. Наиболее заметная экспрессия ФДЭ-5 была найдена в мочевом пузыре (Фигура 1). Более низкие уровни экспрессии были найдены в уретре, кавернозных телах и простате (Фигура 1). Эти результаты показали, что имеет место существенная экспрессия тРНК ФДЭ-5 в нижнем отделе мочевыводящих путей, особенно в мочевом пузыре.

Более того, экспрессия ФДЭ-4 тРНК всех четырех изогенов ФДЭ-4 (PDE-4А, -4В, -4С и -4D) была определена с помощью TaqMan-PCR в мочевом пузыре и простате (Фигура 2). Была найдена очень низкая экспрессия ФДЭ-4с, которая была на границе определительной способности, однако тРНКазы ФДЭ-4А, -4В и -4D были в значительной степени экспрессированы в обеих тканях. В мочевом пузыре ФДЭ-4D был в наибольшем количестве тРНК ФДЭ-4 изогена, тогда как в простате ФДЭ-4а и -4D почти одинаково распределены и в 2,5 раза более экспрессированы, чем тРНК ФДЭ-5 (Фигура 2).

Профиль экспрессии демонстрирует, что тРНКазы ФДЭ-5 и ФДЭ-4D превалируют в мочевом пузыре, а также и в ткани простаты. Поэтому ингибиторы ФДЭ-5 или ФДЭ-4, но в отдельных комбинациях обоих, ингибиторов ФДЭ-5 и ингибиторов ФДЭ-4, таких как варденафил в комбинации с рофлумиластом, должны не только уменьшить пузырь, но также и сокращаемость простаты, таким образом, обеспечивая преимущество над способами лечения известных урологических заболеваний, указанные заболевания включают, например, доброкачественную гиперплазию предстательной железы (ДГПЖ), и в частности раздражающие симптомы, вызванные ДГПЖ-индуцированной инфравезикальной обструкцией, включающие, но не ограниченные ими, симптомы нижних мочевыводящих путей.

Пример 2

Подготовка ткани: самцы крысы Wistar (200-300 г) были подвергнуты эвтаназии при помощи углекислого газа. Ткани были удалены и помещены в ледяной буфер Krebs-Henseleit следующего состава (в моль/л): NaCl 112, КСl 5,9, CaCl₂ 2,0, MgCl₂ 1,2, NaH₂PO₄ 1,2, NaHCO₃ 25, глюкоза 11,5. Четыре продольных полосы одинакового размера приблизительно 2 мм × 10 мм были вырезаны с тела мочевого пузыря. Полосы простаты были получены путем поперечного разрезания через доли предстательной железы, параллельно уретре. Одно кольцо у каждого животного было рассечено от проксимальной части уретры.

Белые Новозеландские кролики были обезболены тиопенталом. Мочевой пузырь был удален и помещен в ледяной буфер Krebs-Henseleit следующего состава (в моль/л): NaCl 112, КСl 5,9, CaCl₂ 2,0, MgCl₂ 1,2, NaH₂PO₄ 1,2, NаНСО₃ 25 и глюкоза 11,5. Продольные полосы одинакового размера приблизительно 2 мм × 10 мм были отрезаны от тела мочевого пузыря.

Регистрация механической активности: препараты были перемещены в 20 мл органическую ванну, содержащую раствор Krebs-Henseleit, уравновешенный с 95%-ным O₂, 5%-ным СO₂ при 37°С. Полосы были закреплены между двумя зацепами посредством двух зажимов. Для того чтобы делать запись изометрического напряжения, один из зацепов был связан с преобразователем силы, который был в свою очередь связан с регистратором диаграммы и усилителем. Другой зацеп был присоединен к подвижному блоку, обеспечивающему точное регулирование предварительной нагрузки напряжения. Всем тканям дали 60-минутный период балансировки, во время которого они были вымыты, и остаточное напряжение было урегулировано до 1 г каждые 20 мин.

После периода балансировки каждый эксперимент был начат путем воздействия на приготовления К⁺ (50 ммоль/л) раствором Krebs-Henseleit. Процедура была повторена 3 раза и ткани были вымыты по крайней мере три раза между каждым сокращением.

Волокна мочевого пузыря были затем предварительно сокращены с использованием К⁺ (50 ммоль/л) раствора Krebs-Henseleit. Когда сокращение было стабилизировано, была построена кривая ответа накапливаемой дозы испытуемого соединения. Устойчивое сокращение, вызванное К⁺ (50 ммоль/л) раствором Krebs-Henseleit, было определено как 100%-ная напряженность. Расслабление было определено как процент напряженности.

Полосы простаты и уретральные кольца были предварительно сокращены с использованием 10^-6 ммоль/л фенилэфрина. Воздействие соединений на ткань простаты было проверено некумулятивным образом со стадиями промывания между каждой концентрацией.

Исследования органической ванны: воздействие варденафила на изолированные мочеполовые органы крысы: воздействие ингибитора ФДЭ-5 варденафила на расслабление гладкой мускулатуры было проверено в системе органической ванны. Соединение применялось в диапазоне концентрации от 10^-8 моль/л до 10^-5 моль/л (Фигура 3, таблица 1). Варденафил расслабил уретральные кольца с ЕС₅₀, равным 0,96 мкмоль/л, и простату и волокна мочевого пузыря с ЕС₅₀, равным 1,1 и 5,0 мкмоль/л соответственно.

Таблица 1

Воздействие варденафила на сокращение изолированных мочеполовых тканей крысы. Расслабление выражено как процент от предварительного сокращения. Каждая точка представляет среднее значение ± SEM, n=9

Концентрация (мкмоль/л) Мочевой пузырь (% сокращения) Уретра (% сокращения) Простата (% сокращения) 0,001 94,3±0,9 88,4±2,4 - 0,01 91,2±1,3 88,5±2,1 - 0,1 89,9±1,8 77,1±3,9 99,2±3,0 1 77,8±2,1 44,9±1,5 76,0±2,3 10 25,3±3,2 3,5±1,7 25,3±3,2

Пример 3

Подготовка ткани: самцы крысы Wistar (200-300 г) были подвергнуты эвтаназии с использованием углекислого газа. Ткани были удалены и помещены в ледяной буфер Krebs-Henseleit следующего состава (в моль/л): NaCl 112, КСl 5,9, CaCl₂ 2,0, MgCl₂ 1,2, NaH₂PO₄ 1,2, NаНСО₃ 25, глюкоза 11,5. Четыре продольные полоски одинакового размера приблизительно 2 мм × 10 мм были отрезаны от тела мочевого пузыря. Полосы простаты были получены путем поперечного разрезания через доли предстательной железы, параллельно уретре. Одно кольцо у каждого животного было рассечено от проксимальной части уретры.

Белые Новозеландские кролики были обезболены с использованием тиопентала. Мочевой пузырь был удален и помещен в ледяной буфер Krebs-Henseleit следующего состава (в моль/л): NaCl 112, КСl 5,9, СаСl₂ 2,0, MgCl₂ 1,2, NaH₂PO₄ 1,2, NaHCO₃ 25 и глюкоза 11,5. Продольные полосы одинакового размера приблизительно 2 мм × 10 мм были отрезаны от тела мочевого пузыря.

Регистрация механической активности: препараты были перемещены в 20-мл органическую ванну, содержащую раствор Krebs-Henseleit, уравновешенный с 95%-ным О₂, 5%-ным СO₂ при 37°С. Полосы были закреплены между двумя зацепами посредством двух зажимов. Для того чтобы делать запись изометрического напряжения, один из зацепов был связан с преобразователем силы, который был в свою очередь связан с регистратором диаграммы и усилителем. Другой зацеп был присоединен к подвижному блоку, обеспечивающему точное регулирование предварительной нагрузки напряжения. Всем тканям дали 60-минутный период балансировки, во время которого они были вымыты, и остаточное напряжение было урегулировано до 1 г каждые 20 мин.

После периода балансировки каждый эксперимент был начат путем воздействия на приготовления К⁺ (50 ммоль/л) раствором Krebs-Henseleit. Процедура была повторена 3 раза и ткани были вымыты по крайней мере три раза между каждым сокращением.

Волокна мочевого пузыря были затем предварительно сокращены с использованием К⁺ (50 ммоль/л) раствора Krebs-Henseleit. Когда сокращение было стабилизировано, была построена кривая ответа накапливаемой дозы испытуемого соединения. Устойчивое сокращение, вызванное К⁺(50 ммоль/л) раствором Krebs-Henseleit, было определено как 100%-ная напряженность. Расслабление было определено как процент напряженности.

Полосы простаты и уретральные кольца были предварительно сокращены с использованием 10^-6 ммоль/л фенилэфрина. Воздействие соединений на ткань простаты было проверено некумулятивным образом со стадиями промывания между каждой концентрацией.

Воздействие ФДЭ-5 и ФДЭ-4 ингибиторов на изолированные полосы мочевого пузыря кролика: воздействие ингибитора ФДЭ-5 варденафила и ингибитора ФДЭ-4 рофлумиласта на расслабление гладкой мускулатуры мочевого пузыря было проверено в органической ванне с использованием полосы мочевого пузыря кролика. Оба соединения были протестированы в концентрации от 10^-9 моль/л до 10^-5 моль/л (Фигура 4, таблица 2). И рофлумиласт и варденафил расслабили полосы пузыря с IC₅₀ 260 мкмоль/л и 1,7 мкмоль/л соответственно (таблица 2).

Таблица 2
Воздействие рофлумиласта и варденафила на сокращение изолированных полос мочевого пузыря кролика. Расслабление выражено в процентах от предварительного сокращения. Каждая точка представляет собой среднее значение ± SEM, n=9 Концентрация (мкмоль/л) Рофлумиласт (% сокращения) Варденафил (% сокращения) 0,001 100,8±0,6 100,9±1,0 0,01 90,1±1,7 99,9±0,9 0,1 75,1±2,1 95,7±1,7 1 55,8±2,5 76,3±3,7 10 40,9±3,3 9,6±12,6

Пример 4

Все эксперименты на животных были выполнены согласно "Немецкому закону по защите лабораторных животных" и проводились благодаря одобренным руководящим принципам разрешения "Tierversuchsvorhaben Номер 401/А01 М010/М011 от 09.07.2004". Эксперименты были выполнены с самками крыс Sprague Dawley с массой тела между 200-250 г.

Инфравезикальная обструкция (ИВО): Для инфравезикальной обструкции крысы были обезболены смесью 1,5-2% изофлурана в носителе 66%-ный N₂O, 33%-ный O₂. Живот был побрит, вскрыт нижним срединным разрезом, мочевой пузырь и уретра были идентифицированы, и было обнажено уретровезикальное соединение. 1,0-миллиметровый металлический прут был помещен вдоль проксимального отдела уретры, и 6-0 лигатура нейлона была туго привязана к уретре и пруту. Прут был последовательно удален, а живот был закрыт шелковой лигатурой и вымыт 70%-ным этанолом. Послеоперационное обезболивание проводилось 10 мг/кг Rimadyl^® (Pfizer). Потом крысы находились две недели на воде из-под крана и на стандартном корме для крыс. За 24 часа цистометрии крысы были обезболены изофлураном, как описано выше. Лапаротомия была выполнена, как описано выше, был обнажен мочевой пузырь, и в полость мочевого пузыря был имплантирован полиэтиленовый катетер (РЕ50). Катетер был подкожно размещен с использованием канюли, чтобы достигнуть задней поверхности шеи животного. Дополнительно катетер для внутривенного введения был помещен в яремную вену и подкожно проведен к задней поверхности шеи животного. Оба катетера были зафиксированы швом и пластырем.

Цистометрия: для цистометрии животные были быстро обезболены изофлураном, как описано выше, помещены в клетку Ballman's и зафиксированы. Затем животные были восстановлены по крайней мере за один час до начала эксперимента. Катетер мочевого пузыря затем был подсоединен к т-образной трубке, для дальнейшего соединения с преобразователем давления для измерения давления внутри мочевого пузыря (MLT0698, ADInstruments) и с инфузионным насосом (Perfusor Compact^®, Braun Melsungen) для непрерывного вливания соляного раствора при расходе 10 мл/ч. Животные с ИВО показали увеличение емкости мочевого пузыря (из-за увеличения мочевого пузыря) и непроизвольные сокращения (подражающие раздражающим признакам ДГПЖ), в сравнении с контрольным животным. Эффективность лечения была определена количественно путем вычисления сокращений, не приводящих к освобождению мочевого пузыря в интервал мочеиспускания перед и после лечения. Для точного контроля использовался антагонист альфа-рецепторов тамсулозин (10 мкг/кг). Оценки были даны в % уменьшения сокращений, не приводящих к освобождению мочевого пузыря.

Статистический анализ результатов: данные выражены как средние значения ± стандартная ошибка значений (SEM), и n обозначает число экспериментов. Значения различий между значениями были определены путем парного и непарного t-теста Стьюдента. Уровни вероятности меньше чем 0,05 считали существенными.

Воздействие варденафила на сокращения, не приводящие к освобождению мочевого пузыря у крыс с ИВО: для модели ИВО было использовано наложение частичного шва на уретру у крысы под анестезией. ИВО, вызванная этими сокращениями, привела к значительному увеличению массы мочевого пузыря (результаты не показаны), указывая на явную гипертрофию мочевого пузыря. Это также вызвало сокращения, не приводящие к опорожнению мочевого пузыря (НСМП), которые были обнаружены путем цистометрии у животных в сознании. Эти НСМП были мерой раздражающих признаков при ДГПЖ и были значительно уменьшены внутривенным введением лекарственного средства, содержащего 3 мг/кг варденафила.

Пример 5

Все эксперименты на животных были выполнены согласно "Немецкому закону по защите лабораторных животных" и проводились согласно одобренным руководящим принципам разрешения "Tierversuchsvorhaben Номер 401/А01 МО 10/МО 11 с 09.07.2004". Эксперименты были выполнены с самками крыс Sprague Dawley с массой тела между 200-250 г.

Анестезированная цистометрия: для проведения цистометрии самки SD крыс были обезболены уретаном (1,2 г/кг, ип). После лапаротомии мочевой пузырь был извлечен и оба мочеточника были перевязаны и отрезаны. Полиэтиленовая канюля (РЕ50) была имплантирована в полость мочевого пузыря и живот был закрыт. Катетер мочевого пузыря был соединен с т-образной трубкой для того, чтобы соединить с инфузионным насосом (Perfusor Compact®; Braun Melsungen) для непрерывного вливания соляного раствора и для соединения с преобразователем давления (Combitrans; Braun Melsungen) для измерения давления внутри мочевого пузыря. Сигналы давления внутри пузыря были зарегистрированы Powerlab System (MLT0698, ADInstrument). Цистометрия была выполнена после одного часа периода балансировки хирургической процедуры. Для внутривенной лекарственной терапии в левую бедренную вену был введен полиэтиленовый катетер. Эффект лечений был подсчитан на интервале мочеиспускания (соответствующий емкости мочевого пузыря).

Стимуляция сверхактивного мочевого пузыря была выполнена путем инфузии с использованием 0,2% раствора уксусной кислоты (растворенной солевым раствором) в мочевой пузырь вместо соляного раствора или с и.п. инъекцией 150 мг/кг циклофосфамида за 18 часов до цистометрии.

Статистический анализ результатов: данные выражены как средние значения ± стандартная ошибка значений (SEM), и n - указание числа экспериментов. Значение различий между значениями было определено путем парного и непарного t-теста Стьюдента. Уровень вероятности меньше чем 0,05 считается действительным.

Воздействие варденафила на интервал мочеиспускания у CYP-леченных крыс: интервал мочеиспускания был значительно увеличен путем внутривенного введения лекарственного средства, содержащего 3 мг/кг варденафила.

Предложены применение варденафила или его соли, гидрата или гидрата соли для приготовления фармацевтической композиции для лечения заболевания, входящего в группу заболеваний, включающую синдром инфравезикальной обструкции (СИВО), мочеполовые расстройства, включающие синдром неврогенного мочевого пузыря (НМП), недержание мочи (НМ), такое как смешанное, острое, стрессовое или недержание от переполнения, боль в тазу, доброкачественные и злокачественные заболевания органов, составляющих мочеполовую систему мужчин и женщин, заболевания почек, такие как острая и хроническая почечная недостаточность, иммунологически обусловленные заболевания почек, такие как отторжение почечного трансплантата, волчаночный нефрит, заболевания почек, вызванные иммунными комплексами, гломерулонефрит, нефрит, токсическая нефропатия, и обструктивные уропатии у млекопитающих, а также для лечения нейрогенного мочевого пузыря, сверхактивного мочевого пузыря и интерстициального цистита, и соответствующие фармацевтические композиции. Показано расслабление гладкой мускулатуры мочевого пузыря и увеличение интервала мочеиспускания под действием варденафила. 4 н.п. ф-лы, 6 ил., 2 табл.

1. Фармацевтическая композиция для лечения заболевания, входящего в группу заболеваний, включающую синдром инфравезикальной обструкции (СИВО), мочеполовые расстройства, включающие синдром неврогенного мочевого пузыря (НМЛ), недержание мочи (НМ), такое как смешанное, острое, стрессовое или недержание от переполнения, боль в тазу, доброкачественные и злокачественные заболевания органов, составляющих мочеполовую систему мужчин и женщин, заболевания почек, такие как острая и хроническая почечная недостаточность, иммунологически обусловленные заболевания почек, такие как отторжение почечного трансплантанта, волчаночный нефрит, заболевания почек, вызванные иммунными комплексами, гломерулонефрит, нефрит, токсическая нефропатия и обструктивные уропатии у млекопитающих, содержащая варденафил или его соль, гидрат или гидрат соли.

2. Применение варденафила или его соли, гидрата или гидрата соли для приготовления фармацевтической композиции для лечения заболевания, входящего в группу заболеваний, включающую синдром инфравезикальной обструкции (СИВО), мочеполовые расстройства, включающие синдром неврогенного мочевого пузыря (НМЛ), недержание мочи (НМ), такое как смешанное, острое, стрессовое или недержание от переполнения, боль в тазу, доброкачественные и злокачественные заболевания органов, составляющих мочеполовую систему мужчин и женщин, заболевания почек, такие как острая и хроническая почечная недостаточность, иммунологически обусловленные заболевания почек, такие как отторжение почечного трансплантанта, волчаночный нефрит, заболевания почек, вызванные иммунными комплексами, гломерулонефрит, нефрит, токсическая нефропатия, и обструктивные уропатии у млекопитающих.

3. Фармацевтическая композиция для лечения нейрогенного мочевого пузыря, сверхактивного мочевого пузыря и интерстициального цистита, содержащая варденафил или его соль, гидрат или гидрат соли.

4. Применение варденафила или его соли, гидрата или гидрата соли для приготовления фармацевтической композиции для лечения нейрогенного мочевого пузыря, сверхактивного мочевого пузыря и интерстициального цистита.