СПОСОБ КОРРЕКЦИИ ГИПОЭСТРОГЕНИНДУЦИРОВАННОЙ ЭНДОТЕЛИАЛЬНОЙ ДИСФУНКЦИИ ФУРОСТАНОЛОВЫМИ ГЛИКОЗИДАМИ ИЗ КУЛЬТУРЫ КЛЕТОК РАСТЕНИЯ Dioscorea deltoidea Российский патент 2008 года по МПК A61K31/565 A61K36/8945 A61P5/30 

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной кардиофармакологии.

Наиболее близким к заявленному решению является способ коррекции эндотелиальной дисфункции с помощью 17βэстрадиола, относящегося к эстрогенам, описанный Francesco Squadrito в статье «Effect of genistein on endothelial function in postmenopausal women: a randomized, double-blind, controlled study» в American Journal of Medicine 2003 Apr 15; 114 (6):470-6, который заключается в пероральном приеме 17рэстрадиола у женщин в периоде постменопаузы для коррекции эндотелиальной дисфункции.

Основным недостатком способа является большое количество побочных эффектов (канцерогенез, повышение случаев тромбоэмболии, влияние на гемокоагуляцию, провоспалительные эффекты) действия эстрогенов при эндотелиальной дисфункции. Поэтому целесообразна коррекция эндотелиальной дисфункции с применением фуростаноловых гликозидов из культуры клеток Dioscorea Deltoidea.

Техническим результатом изобретения является способ коррекции эндотелиальной дисфункции, включающий использование фуростаноловых гликозидов из культуры клеток растения Dioscorea Deltoidea, обладающих эстрогенными эффектами.

Технический результат достигается тем, что на фоне моделирования эндотелиальной дисфункции в эксперименте с помощью билатеральной овариэктомии у лабораторного животного проводится ее коррекция в течение 6 недель ежедневным однократно в сутки внутрибрюшинным введением фуростаноловых гликозидов из культуры клеток растения Dioscorea Deltoidea в дозе 1 мг/кг, которая приводит к активизации коррекции гипоэстроген-индуцированной эндотелиальной дисфункции, так как протодиосцин и дельтозид являются эстроген-подобными соединениями, следовательно, способны корригировать экспериментальное гипоэстрогенное состояние, одновременно препятствуя перекисной модификации липидов и увеличивая время жизни основного вазодилататора - оксида азота.

СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЯЕТСЯ СЛЕДУЮЩИМ ОБРАЗОМ

Опыты проводят на белых крысах самках линии Wistar массой 180-250 г. Овариэктомия проводилась под наркозом - этаминал натрий внутрибрюшинно в дозе 40 мкг/кг из расчета 0,1 мл раствора на 100 г массы животного. На 42 день (6 недель) от начала эксперимента под наркозом (этаминал натрия 50 мг/кг) вводят катетер в левую сонную артерию для регистрации показателей артериального давления (АД), болюсное введение фармакологических агентов осуществляют в правую бедренную вену. Показатели гемодинамики: систолическое артериальное давление (САД), диастолическое артериальное давление (ДАД) и частоту сердечных сокращений (ЧСС) измеряют непрерывно посредством датчика и компьютерной программы "Bioshell". Функциональные пробы: эндотелий зависимая вазодилатация (ЭЗВ) - внутривенное введение ацетилхолина (АХ) в дозе 40 мкг/кг, эндотелий независимая вазодилатация (ЭНЗВ) - внутривенное введение нитропруссида натрия (НП) в дозе 30 мкг/кг.

При статистической обработке данных рассчитывали среднее значение, величину стандартного отклонения. Различия считали достоверными при p<0,05.

ПРИМЕР КОНКРЕТНОГО ВЫПОЛНЕНИЯ.

Болюсное внутривенное введение АХ в течение 3-5 сек приводило к резкому падению артериального давления, достигающего пика у интактных животных для систолического давления (САД) 83,9±4,8 мм рт.ст., для диастолического давления (ДАД) - 41,9±2,2 мм рт.ст. и для среднего артериального давления (Ср.АД) 55,8±2,2 мм рт.ст., при этом в течение первых 2-3 сек развивалась резкая брадикардия до 130-150 ударов в минуту (табл.1). Восстановление АД происходило в среднем за 43,6±2,2 сек после нормализации сердечного ритма. Именно этот интеграл нами принимался как сосудистый компонент реакции на АХ и использовался для дальнейших расчетов (табл.2).

ЭНЗВ также характеризовалась снижением САД до 91,0±4,6, ДАД до 48,5±2,9 и Ср.АД до 62,7±3,2 мм рт.ст.(табл.1) с последующим полным восстановлением в среднем в течение 40,2±2,4 сек (табл.2).

Гипоэстрогенное состояние через 6 недель после проведения овариэктомии вызывало артериальную гипертензию (САД - 160,0±6,2, ДАД - 124,9±5,5, СрАД - 136,6±5,6 мм рт.ст.) и приводило к меньшему снижению показателей АД после введения АХ (САД до 91,8±8,0, ДАД до 57,3±7,1, СрАД до 68,8±7,3 мм рт.ст.) и НП (САД до 87,4±7,5, ДАД до 57,8±6,6 и СрАД до 67,7±6,1 мм рт.ст.) по сравнению с интактными животными (табл.1).

Через 6 недель после проведения самкам крыс линии Wistar билатеральной овариэктомии имело место достоверное снижение интеграла (реакция восстановления АД после введения АХ) до 1022,5±131 усл.ед. по сравнению с интактной группой животных, у которых этот показатель составлял 1673,6±132,4 усл.ед. (табл.1). Напротив, ЭНЗР, являющаяся отражением реакции на введение НП, увеличилась у животных с экспериментальной эндотелиальной дисфункции и ее интеграл составил соответственно 2157,3±167 усл.ед. и 1338,1±121,1 усл.ед. в группе контроля

Принципиальная разница в ЭЗВ и ЭНЗВ у интактных животных и животных с овариэктомией привела нас к необходимости введения специального показателя, характеризующего степень эндотелиальной дисфункции, являющегося отношением площади треугольника над трендом реакции восстановления АД в ответ на введение НП к площади треугольника над трендом реакции восстановления АД в ответ на введение АХ.

Таблица 1Динамика показателей АД и ЧСС при моделировании эндотелиальной дисфункции и ее коррекции фуростаноловыми гликозидамиГруппы животныхФармакологическая пробаСАД, мм рт.ст.ДАД, мм рт.ст.ЧСС, уд.мин.ИнтактныеИсходные128,1±6,095,7±4401,0±8,0АХ83,9±4,841,9±2,2398,0±11,0НП91,0±4,648,5±2,9402,0±10,0Получавшие в течение 6 недель 0,9% р-р NaCl (контроль)Исходные160,0±6,2*124,9±5,5*385,0±13,0АХ91,8±8,057,3±7,1385,0±9,0НП87,4±7,557,8±6,6397,0±8,0Получавшие в течение 6 недель диоскорею(1 мг/кг)Исход144,5±5,9114,9±5,4391,0±7,0АХ68,1±2,541,9±2,7387,0±8,0НП90,0±4,362,5±4,8401,0±6,0* - р<0,05 в сравнении с группой интактных

Мы рассчитывали это отношение у каждого животного интактной группы и крыс после моделирования дисфункции эндотелия овариэктомией и получили разницу данного показателя соответственно 1,1 у интактных и 2,1 у животных после овариэктомии.

Таким образом, для дальнейшей оценки влияния АХ и НП при ЭЗВ и ЭНЗВ нами использовано это отношение как показатель коррекции эндотелиальной дисфункции. Так, в группе, где на фоне овариэктомии вводились фуростаноловые гликозиды, это отношение соответствовало значению 1,2±0,1 (табл.2).

Таблица 2Показатели, отражающие коррекцию эндотелиальной дисфункции на фоне введения фуростаноловых гликозидов.Группы животныхФункциональные пробыΔСр.АД сосудистой реакции (мм рт.ст.)Время сосудистой реакции (сек)Интеграл сосудистой реакции (усл.ед)Отношение площадей сосудистой реакции АХ кНПИнтактныеАХ77,9±4,843,6±2,21673,6±132,40,8±0,11НП64,0±540,2±2,41338,1±121,1Получавшие в течение 6 недель 0,9% р-р NaCl (контроль)АХ57,4±4,233,1±4,41022,5±131*2,1±0,2*НП89,0±6,752,5±1,72157,3±167*Получавшие в течение 6 недель диоскорею (1 мг/кг)АХ77,5±4,142,4±2,21501,2±189,3**1,2±0,1**НП70,0±445,7±3,81779,6±253,2*** - р<0,05 - в сравнении с группой интактных животных,** - р<0,05- в сравнении с группой животных получавших L-NAME

Таким образом, фуростаноловые гликозиды из культуры клеток растения Dioscorea deltoidea предотвращают развитие гипоэстроген-индуцированной эндотелиальной дисфункции в эксперименте снижая показатель отношения площадей сосудистой реакции АХ к НП до уровня такового у интактных животных.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной кардиологии и эндокринологии, и касается коррекции гипоэстроген-индуцированной эндотелиальной дисфункции. Для этого самкам крыс линии Wistar в течение 6 недель после овариэктомии вводят ежедневно внутрибрюшинно фуростаноловые гликозиды из культуры клеток Dioscorea deltoidea в дозе 1 мг/кг однократно в сутки. Способ обеспечивает эффективную коррекцию эндотелиальной дисфункции при отсутствии побочных эффектов за счет эстроген-подобной активности фуростаноловых гликозидов. 2 табл.

Способ коррекции гипоэстрогениндуцированной эндотелиальной дисфункции, отличающийся тем, что в эксперименте самкам крыс линии Wistar в течение 6 недель после овариэктомии вводят ежедневно внутрибрюшинно фуростаноловые гликозиды из культуры клеток Dioscorea deltoidea в дозе 1 мг/кг однократно в сутки.