Изобретение относится к новой соли ингибитора ренина 2(S),4(S),5(S),7(S)-N-(3-амино-2,2-диметил-3-оксопропил)-2,7-ди(1-метилэтил)-4-гидрокси-5-амино-8-[4-метокси-3-(3-метоксипропокси)фенил]октанамиду формулы
Указанное соединение (МНН - алискирен) подробно описано в ЕР 678503 А.
Активный ингредиент алискирен является свободным основанием, которое подробно описано в ЕР 678503 А и которое содержит одну основную аминогруппу в положении 5, рКа 9,79. Таким образом, одна кислотная группа может связываться с неразделенной парой электронов аминогруппы.
В патенте ЕР 678503 А в качестве специфических солей алискирена описаны гидрохлорид (пример 137) и полуфумарат (пример 83). Однако в этом документе свойства указанных солей подробно не описаны. В то же время активный ингредиент алискирен в форме полуфумарата предлагается использовать в качестве антигипертензивного агента. Полуфумарат, в отличие от свободного основания и гидрохлорида, характеризуется более простой обработкой, способен по крайней мере частично кристаллизоваться и является более доступным. Кроме того, в данной области техники известно, что сильные кислоты, в отличие от слабых кислот, не образуют стабильной соли алискирена.
Температура плавления полуфумарата в открытом тигле составляет 96,6°С (скорость нагрева 10 К/мин), а энтальпия плавления 28,9 Дж·г-1.
При обработке полуфумарата алискирена возникают значительные трудности. Обычно при получении галеновых составов, включающих полуфумарат алискирена, требуется высокое содержание лекарственной субстанции (ЛС), что создает проблемы при формировании таблеток.
Например, полуфумарат алискирена образует иглообразные кристаллы, что отрицательно влияет на объемные свойства ЛС, например, на текучесть и объемную плотность. ЛС характеризуется нестабильностью при прессовании, что приводит к ослаблению связей между частицами и изменению полиморфизма под давлением и/или аморфизации при прессовании. Полуфумарат алискирена содержит высокоэластичный компонент, что также приводит к ослаблению связей между частицами. В связи с высокой дозой (от 300 до 600 мг свободного основания в таблетке) возникает необходимость в высоком содержании ЛС при получении таблеток приемлемого размера.
Качество ЛС значительно изменяется и влияет на условия переработки ЛС в таблетки, например, распределение частиц по размеру, объемная плотность, текучесть, свойства при увлажнении, площадь поверхности и адгезивные свойства. Кроме того, алискирен является высокогигроскопичным. При контактировании с водой полиморфные формы ЛС превращаются в аморфные формы, что снижает стабильность по сравнению с кристаллической формой. Комбинация этих ограничений приводит к возникновению значительных трудностей при получении стандартных таблеток.
Прямое прессование является непригодным для стандартного получения по причине, например, высокой гигроскопичности, иглообразной формы частиц, низкой текучести, что приводит к проблемам при переработке и равномерном распределении дозы. Способ ротационного прессования приводит к снижению насыпного объема ЛС. Более того, предварительное прессование ЛС в процессе ротационного прессования приводит к значительным трудностям и не позволяет при дальнейшем прессовании получать таблетки с достаточной твердостью и низкой хрупкостью в отсутствие высокого содержания эксципиентов, что связано с низкой способностью ЛС к прессованию. Установлено, что невозможно получить стандартные таблетки с содержанием алисрикена более приблизительно 35% (например, с достаточной твердостью и низкой хрупкостью) и использовать стандартный процесс переработки в таблетки (например, проблемы, связанные с прилипанием к пресс-форме и извлечением из нее в процессе ротационного прессования и таблетирования).
Как указано выше, в связи с низкой кристаллизуемостью, гигроскопичностью и относительно низкой стабильностью, прежде всего в присутствии влаги, усложняется способ получения, прежде всего при выделении конечного продукта. Из-за указанных выше нежелательных свойств полуфумарата алискирена возрастает продолжительность процессов фильтрации и высушивания. Полуфумарат алискирена также чувствителен к процессу грануляции.
Следовательно, несмотря на широкую распространенность алискирена в медицине, указанные нежелательные свойства значительно снижают экономичность способа его получения. В связи с этим существует необходимость в получении более стабильных, например, кристаллических форм алискирена, которые существенно упростят процессы высушивания, фильтрования или грануляции после завершения химического синтеза, а также на следующей стадии переработки в фармацевтические составы. Было предпринято множество неудачных попыток поиска улучшенных форм соли, т.е. в значительной степени кристаллических, а также физически и химически стабильных. Только соль по настоящему изобретению, ее сольваты и полиморфные формы характеризуются необходимыми улучшенными свойствами.
Было установлено, что образование солей алискирена с необходимыми преимуществами представляет проблему. В большинстве случаев образуются, например, аморфные соли с низкой стабильностью (такие как твердые пены, воски или масла). Авторами в результате интенсивных исследований было установлено, что соль алискирена по настоящему изобретению характеризуется значительными преимуществами по сравнению с полуфумаратом алискирена.
Настоящее изобретение относится к соли соединения формулы I
и серной кислоты, или, соответственно, к их аморфной форме, сольвату, прежде всего, гидрату, а также к полиморфной форме.
Предпочтительными солями алискирена являются, например, сульфат (SO4 2-) и гидросульфат (HSO4 -). В случае сульфата две молекулы алискирена связаны с одной молекулой сульфата. В случае гидросульфата одна молекула алискирена связана с одной молекулой гидросульфата. Наиболее предпочтителен гидросульфат алискирена.
Предпочтительные соли, выбирают из группы, включающей
соль алискирена в аморфной форме, или
соль алискирена в кристаллической или частично кристаллической форме, прежде всего в их сольватной форме.
Соль по изобретению существует предпочтительно в предварительно очищенной и в значительной степени очищенной форме, например, чистота которой составляет >95%, предпочтительно >98%, более предпочтительно >99%. Энантиомерная чистота солей по настоящему изобретению составляет >98%, предпочтительно >99%.
Неожиданно было установлено, что по сравнению с полуфумаратом, соль по изобретению, включая ее аморфные формы, сольваты, такие как гидраты соли, а также их соответствующие полиморфные формы, характеризуются улучшенными свойствами. При указанных условиях соль, прежде всего, кристаллическая соль и частично кристаллическая соль, включая сольваты соли, характеризуются четкой температурой плавления, что связано с высокой эндотермической энтальпией плавления. Соль по изобретению, прежде всего, кристаллическая форма или частично кристаллическая форма характеризуются стабильностью и более высоким качеством по сравнению с полуфумаратом алискирена в процессе хранения и транспортировки.
Кроме того, обе формы соли по изобретению как кристаллическая, так и аморфная, являются менее гигроскопичными по сравнению с чем полуфумаратом, предпочтительно, при относительной влажности менее 40%. Таким образом, установлено, что соль по изобретению характеризуется высокой физической стабильностью. Такое свойство в основном обусловлено более высокой энтальпией плавления соли по изобретению, хотя температуры плавления обеих солей сопоставимы.
Улучшенные физико-химические свойства определенных солей или определенных сольватов солей имеют большое значение как при получении фармацевтически активной субстанции, так и при получении, хранении и применении галеновых препаратов. Таким образом, за счет улучшенных физических параметров можно обеспечить более высокое качество составов. Высокая стабильность соли или сольватов соли обеспечивает также экономические преимущества в связи с упрощением стадий переработки в процессе получения. Предпочтительная высокая кристаллизуемость соли или сольватов соли позволяет использовать определенные аналитические методы, прежде всего различные методы рентгеноструктурного анализа, который обеспечивает четкий и простой контроль полученных форм. Этот фактор также имеет большое значение для качества активной субстанции и галеновых форм при получении, хранении и введении пациентам. Кроме того, исключается необходимость выполнять набор условий для стабилизации активного ингредиента в галеновых составах.
Таким образом, неожиданно было установлено, в отличие от общепринятого мнения, что сильная кислота, а именно серная кислота, может образовывать стабильную соль алискирена.
Изобретение соответственно относится к кристаллическим, а также частично кристаллическим и аморфным солям алискирена. Степень кристаллизуемости соли предпочтительно составляет более 30%, более предпочтительно более 40%, еще более предпочтительно более 50%, например, 55-60%.
Изобретение относится как к сольватам, таким как гидраты, так и к полиморфным формам солей по изобретению.
Сольваты и также гидраты солей по изобретению получают, например, в виде полу-, моно-, ди-, три-, тетра-, пента", гексасольватов или гидратов, соответственно. Растворители, использованные для кристаллизации, такие как ацетонитрил, спирты, предпочтительно метанол, этанол, альдегиды, кетоны, прежде всего, ацетон, эфиры, например, этилацетат, или алканы, прежде всего, пентан, гексан, гептан или циклогексан, включены в кристаллическую решетку. Предпочтительным сольватом является сольват ацетонитрила. Количество молекул выбранного растворителя или воды в составе сольвата или гидрата, образующегося при кристаллизации и на следующих стадиях процесса (или образование свободного основания), обычно является непредсказуемым и зависит от комбинаций условий получения и различных типов взаимодействия между алисрикеном и выбранным растворителем, прежде всего, ацетонитрилом. Относительную стабильность образующихся кристаллов или твердых аморфных солей, сольватов и гидратов, также как и соответствующих сольватов соли или гидратов соли, определяют экспериментальным путем. Таким образом, невозможно однозначно оценить химический состав и стехиометрическое соотношение молекул в образующемся твердом веществе, поскольку при данных обстоятельствах могут образоваться как различные твердые кристаллические, так и различные аморфные вещества.
Предпочтительными являются сольваты и гидраты солей, поскольку молекулы растворителя или воды в кристаллической структуре связаны сильными межмолекулярными связями, и поэтому вносят значительный вклад в образование структуры этих кристаллов, которые, в свою очередь, являются чрезвычайно стабильными. В отличие от указанных кристаллических структур сольваты полуфумарата являются нестабильными. Однако молекулы растворителя или воды также присутствуют в определенных кристаллических решетках и связаны между собой достаточно слабыми межмолекулярными связями. Такие молекулы в большей или меньшей степени включаются в образующуюся кристаллическую структуру, но с более низким энергетическим эффектом. Содержание растворителя или воды в твердом аморфном веществе в основном можно точно определить, также как и в кристаллических сольватах или гидратах, но эта величина в значительной степени зависит от условий высушивания и окружающей среды. Напротив, в случае стабильных сольватов или гидратов существует четкое стехйометрическое соотношение между фармацевтически активной субстанцией и растворителем или водой. Во многих случаях указанное соотношение не соответствует точному стехиометрическому составу, которое обычно составляет более низкие значения по сравнению с теоретическим значением из-за некоторых дефектов в кристаллах. Соотношение органических молекул и молекул растворителя или воды для более слабо связанных молекул воды изменяется в значительной степени, например, образуются ди-, три- или тетрагидраты. С другой стороны, твердые аморфные вещества, содержащие растворитель или воду, характеризуются нестехиометрическим составом, однако, стехиометрические структуры могут образовываться случайно.
В некоторых случаях невозможно определить точный стехиометрический состав (для молекул растворителя или воды), поскольку образуется многослойная структура и форму включенных молекул растворителя или воды практически невозможно определить.
В предпочтительном варианте изобретения присутствуют две части сольвата на три части соли.
Твердые кристаллы идентичного химического состава, образующие различные кристаллические решетки, называются полиморфными формами.
Следует понимать, что любая ссылка в данном контексте на соли по изобретению также означает соответствующие сольваты, такие как гидраты, и полиморфные модификации, а также аморфные формы.
На рентгеновской порошковой диаграмме соли наблюдается множество дискретных пиков и практически отсутствуют сигналы некристаллического или аморфного компонентов. Следовательно, продукт характеризуется неожиданно высокой степенью кристаллизации.
Указанный способ определения структуры кристалла позволяет в нормальных условиях, таких как высокая физическая, химическая и энантиомерная чистота исследуемых кристаллов, с высокой точностью определить структуру на молекулярном или атомном уровне, а именно, симметрию и размер элементарных ячеек, положение атомов и температурные факторы, а с использованием определенного объема кристаллической ячейки можно получить изображение распределения электронной плотности с учетом молекулярной массы. Указанный рентгеноструктурный анализ позволяет повысить степень разрешения определяемой структуры.
При нагревании в открытом контейнере со скоростью Тr=10 К/мин температура плавления образца составляет 97,1°С и энтальпия плавления 39,3 Дж·г-1. Указанная температура плавления означает величину, определенную только в открытом контейнере.
Эти две термодинамические характеристики свидетельствуют о преимуществе физических свойств по сравнению с двумя соответствующими значениями для полуфумарата, а именно температура плавления полуфумарата в открытом тигле составляет 96,6°С и энтальпия плавления 28,9 Дж·г-1. Эти термодинамические характеристики свидетельствуют о высокой стабильности указанной кристаллической формы. Они вносят основной вклад в физическую и химическую стабильность гидросульфата алискирена.
При анализе инфракрасного спектра поглощения гидросульфата алискирена в таблетках бромида калия наблюдаются следующие пики при длине волны в см-1 (интенсивность сигналов поглощения: (w) = слабая, (m) = средняя и (st) сильная). Спектры регистрируют методом ИК-спектроскопии с Фурье-преобразованием с использованием микроскопа Hyperion фирмы Bruker Optics, Германия.
СО для всех полос поглощения в режиме нарушенного полного отражения (ИК-НПВО) составляет ±2 см-1: 3353 (ушир.), 3078, 2960, 2935, 2876, 1660 (С=O), 1516 (амид II), 1470, 1444, 1425, 1389, 1371, 1260, 1234 (арил-O), 1191, 1163, 1140, 1047, 872, 809, 768, 723.
Гидросульфат алискирена характеризуют также по межплоскостным расстояниям, определенным по пикам на порошковой дифрактограмме. Порошковые дифрактограммы получают на порошковом дифрактометре Scintag XDS2000 в режиме отражения с использованием излучения Сu-Ка1+2 и детектора дисперсии энергии при комнатной температуре. Предпочтительную характеристику гидросульфата алискирена проводят с использованием межплоскостных расстояний d, определенных на порошковой дифрактограмме, т.е. получают средние значения ±СО.
По наиболее интенсивным пикам на дифрактограмме определяют межплоскостные расстояния: d (±0,1 Å): 21,3, 12,4, 10,7, 10,1, 8,4, 7,9, 6,7, 6,0, 5,3, 4,9, 4,7, 4,5, 4,4, 4,1.
Характерным признаком качества очищенной субстанции как для физико-химических процессов, таких как высушивание, просеивание, измельчение, так и для способов получения галеновых составов, которые получают в смеси с фармацевтическими эксципиентами, то есть для способов смешивания, грануляции, высушивания с распылением и таблетирования, является абсорбция или потеря воды в активной субстанции в зависимости от температуры и относительной влажности окружающей среды. При получении определенных составов свободная и связанная вода поступает из эксципиентов и/или в процессе обработки в зависимости от соответствующего способа формирования состава. Таким образом, фармацевтически активная субстанция находится в свободной воде в течение достаточно длительного периода времени, причем вода характеризуется различной активностью в зависимости от температуры (парциального давления паров).
Точную характеристику такой активности определяют по изотермическим свойствам, которые регистрируют через определенные промежутки времени и при определенной относительной влажности методом динамической сорбции паров (прибор DVS фирмы Surface Measurement Systems LTD, Marlow, Buckinghamshire, Великобритания). В таблице 4 представлено изменение массы, т.е. абсорбция или потеря воды в зависимости от относительной влажности при 25°С для образца 9,5 мг гидросульфата алискирена в течение 4 ч. Приведены следующие циклы изменения относительной влажности: от 40 до 0% и от 0 до 95%.
Ошибка измерения сорбции методом термогравиметрии составляет 0,1%. Следовательно, гидросульфат алискирена в данных условиях, которые соответствуют реальным условиям получения форм галеновых составов, характеризуется значительной степенью сорбции или потери воды при относительной влажности более 40%. Указанная величина в значительной степени сопоставима со свойствами для полуфумарата, однако, при относительной влажности менее 40% гидросульфат алискирена захватывает меньшее количество воды по сравнению с полуфумаратом. Указанное свойство является чрезвычайно важным на последних стадиях химического синтеза, а также на практике на всех стадиях получения различных галеновых лекарственных форм.
Благодаря указанным улучшенным свойствам гидросульфата, указанная соль является пригодной для прессования непосредственно при получении соответствующей таблетки.
Кроме достаточно высоких физико-химических свойств, преимущества гидросульфата заключаются в усовершенствовании и упрощении способа получения лекарственного средства. Например, при использовании способа, описанного, например, в патенте ЕР 678503 А, полуфумарат получают на отдельной стадии после удаления N-защитных групп. Однако при использовании серной кислоты удаление N-защитных групп и образование соли можно проводить на одной стадии, что позволяет повысить эффективность способа.
Другой объект изобретения относится к получению солей по изобретению.
Соли по изобретению, включая их аморфную и кристаллическую формы, получают следующим образом.
Для получения соли процесс проводят в системе растворителя, в котором оба реагента, а именно основание алискирена и соответствующая кислота, характеризуются достаточно высокой растворимостью. Целесообразно использовать растворитель или смеси растворителей, в которых образующаяся соль слаборастворима или нерастворима для того, чтобы инициировать кристаллизацию или осаждение. В одном варианте получения соли по изобретению используют растворитель, в котором указанная соль характеризуются высокой растворимостью, и затем добавляют в этот раствор антирастворитель, т.е. такой растворитель, в котором образующаяся соль характеризуются низкой растворимостью. В другом варианте кристаллизация соли включает концентрирование солевого раствора, например, при нагревании, при необходимости при пониженном давлении, или медленном упаривании растворителя, например, при комнатной температуре, или при добавлении затравочных кристаллов для осаждения, или при использовании воды с необходимой активностью для образования гидратов.
Используют растворители, такие как, например, С3-С7-алкилнитрилы, прежде всего, ацетонитрил, С1-С5алканолы, предпочтительно этанол и изопропанол, сложные эфиры, прежде всего, (С1-С5)алкиловый эфир (С2-С7)алканкарбоновой кислоты, такой как этилацетат или изопропилацетат, простые ди(С1-С5)алкиловые эфиры, такие как трет-бутилметиловый эфир, и кроме того, тетрагидрофуран, и (С5-С8)алканы, прежде всего, пентан, гексан, циклогексан или гептан и смеси указанных растворителей с водой. Наиболее предпочтительным растворителем является ацетонитрил.
Для получения гидратов прежде всего используют процесс растворения и кристаллизации или процесс кристаллизации в равновесии с водой.
Способ растворения и кристаллизации заключается в том, что
(1) свободное основание алискирена растворяют в органическом растворителе,
(2) в раствор, полученный на стадии 1, добавляют серную кислоту, предпочтительно в виде водного раствора,
(3) раствор выдерживают для индукции кристаллизации,
(4) кристаллы отделяют фильтрованием и высушивают, при этом получают соль.
На стадии растворения (1) в качестве органического растворителя предпочтительно используют спирт, такой как этанол или изопропанол, или алкилнитрил, прежде всего ацетонитрил, и воду. При необходимости растворитель нагревают до температуры выше комнатной, например, от 25° до 60°С, более предпочтительно от 30° до 50°С.
На стадии (2) предпочтительно используют водный раствор серной кислоты при концентрации от 10 до 30%, более предпочтительно от 15 до 25%, например, 20% раствор.
На стадии (3) раствор предпочтительно выдерживают для медленного упаривания растворителя. Указанную стадию проводят предпочтительно при охлаждении до комнатной температуры или ниже, более предпочтительно от -10° до 10°С, еще более предпочтительно от -5° до 10°С, наиболее предпочтительно от 0° до 5°С. Концентрирование раствора также проводят при нагревании до температуры выше комнатной, например, от >25° до 100°С, более предпочтительно от 30° до 70°С. Обычно раствор выдерживают в течение от 1 до 48 ч, предпочтительно от 17 до 36 ч, более предпочтительно от 20 до 30 ч.
На стадии (4) высушивание проводят предпочтительно при повышенной температуре, более предпочтительно от 20° до 50°С, наиболее предпочтительно от 30° до 40°С. Высушивание можно проводить при давлении от 1 до 100 мбар, предпочтительно от 10 до 50 мбар, более предпочтительно от 20 до 40 мбар, например, 30 мбар. Высушивание обычно проводят до постоянной массы образца. В зависимости от условий, высушивание занимает от 5 до 48 ч, предпочтительно от 10 до 24 ч, например, от 15 до 20 ч.
Способы получения солей также являются объектами настоящего изобретения.
В предпочтительном варианте кристаллизацию оптимизируют, например, ускоряют при добавлении по крайней мере одного кристалла для затравки.
Соли по изобретению можно использовать, например, в форме фармацевтических композиций, которые содержат активную субстанцию, например, в терапевтически эффективном количестве, необязательно в смеси с фармацевтически приемлемым носителем, например, с неорганическим или органическим, твердым или необязательно также жидким фармацевтически приемлемым носителем, который является приемлемым для энтерального, например, перорального или парентерального введения.
Изобретение относится прежде всего к фармацевтической композиции, прежде всего, в твердой лекарственной форме, предпочтительно для перорального введения, необязательно в смеси с фармацевтически приемлемым носителем.
Фармацевтические препараты указанного типа можно использовать, например, для профилактики и лечения заболеваний или состояний, которые поддаются лечению при блокировании рецептора AT1, например,
заболевания или состояния, выбранного из группы, включающей следующие заболевания:
(a) гипертензия, застойная сердечная недостаточность, почечная недостаточность, прежде всего хроническая почечная недостаточность, рестеноз после подкожной транслюминальной ангиопластики и рестеноз после хирургического шунтирования коронарной артерии,
(b) атеросклероз, резистентность к инсулину и синдром X, сахарный диабет 2 типа, ожирение, нефропатия, почечная недостаточность, например, хроническая почечная недостаточность, гипотиреоз, состояние после инфаркта миокарда (ИМ), коронарная болезнь сердца, гипертензия у пожилых пациентов, семейная дислимидемическая гипертензия, повышенное образование коллагена, фиброз и гипертензия после реконструкции сосудов (антипролиферативное действие комбинации). Все эти заболевания или состояния сопровождаются или не сопровождаются гипертензией,
(c) эндотелиальная дисфункция с гипертензией или без нее,
(d) гиперлипидемия, гиперлипопротеинемия, атеросклероз и гиперхолестеринемия и
(e) глаукома.
Первичное назначение включает лечение высокого кровяного давления и застойной сердечной недостаточности, а также состояния после инфаркта миокарда.
Специалист в данной области техники может выбрать пригодную и стандартную модель животного для подтверждения указанных в данном контексте терапевтических показаний и высокой эффективности.
Фармацевтическую активность при введении типичных солей по настоящему изобретению или комбинации активных агентов по настоящему изобретению можно оценивать, например, с использованием соответствующих фармакологических моделей, известных в предшествующем уровне техники. Специалист в данной области техники может выбрать пригодную модель животных для подтверждения указанных в данном контексте показаний и высокой эффективности.
Эффективность лекарственного средства оценивали с использованием различных моделей животных, включая гипертензию крыс, вызванную ацетатом дезоксикортикостерона (ДОКА), и спонтанную гипертензию крыс (SHR), которые получали нормальный солевой корм или корм с высоким содержанием соли (4-8% в корме крыс или 1% NaCl в качестве питьевой воды).
Модель ДОКА использовали при однократном или продолжительном введении. Протокол испытаний с однократным ввведением позволяет оценивать действие различных исследуемых веществ в течение 6 ч с использованием крыс, которым имплантировали катетеры в бедренную артерию и вену. Испытания при однократном ввведении позволяют оценивать исследуемые вещества по их способности снижать повышенное кровяное давление на сформировавшейся фазе гипертензии, вызванной ДОКА. И наоборот, испытания при продолжительном введении позволяют оценивать способность исследуемых веществ предотвратить или замедлить повышение кровяного давления на стадии развития гипертензии, вызванной ДОКА. Следовательно, при испытаниях с продолжительным введением можно регистрировать кровяное давление с помощью радиодатчика, который хирургическим путем имплантируют в брюшную аорту крыс до начала лечения гипертензии, индуцированной ДОКА, т.е. до индукции гипертензии. Кровяное давление регистрировали непрерывно в течение 6 недель (приблизительно за одну неделю до введения ДОКА и в течение 5 недель после введения).
Крыс анестезировали 2-3% изофлурана при ингаляции кислородом, затем амиталом натрия (амобарбитал) в дозе 100 мг/кг массы тела. Степень анестезии регистрировали по уровню ритмичности дыхания.
Испытания при введении однократной дозы
Крысам проводили одностороннюю нефректомию во время имплантации ДОКА. Шерсть состригали с левого бока и с шеи со стороны спины, протирали (кожу) стерильными тампонами, пропитанными спиртом и смесью повидон/иод. Во время операции крыс помещали на подогреваемый матрас для поддерживания температуры тела 37°С.
Через кожу и прилежащую мышцу делали надрез размером 20 мм, чтобы извлечь левую почку. Почку очищали от окружающей ткани, извлекали и накладывали две прочные лигатуры вокруг почечной артерии и вены, проксимальных к месту ее соединения с аортой (шелк 3-0). Затем почечную артерию и вену отделяли и почку извлекали. Мышцы и кожу сшивали (шелк 4-0) и зажимали зажимами из нержавеющей стали, соответственно. В то же время, на шее со стороны спины делали надрез размером 15 мм и имплантировали подкожно пеллет с замедленным высвобождением в течение 3 недель (фирмы Innovative Research of America, Sarasota, Флорида), содержащий ацетат дезоксикортикостерона (100 мг/кг). Затем рану зажимали зажимом из нержавеющей стали и обе раны обрабатывали смесью повидон/иод, крысам после операции вводили внутримышечно прокаин пенициллина G (100000 Ед) и бупренофин (0,05-0,1 мг/кг) подкожно. Крысам немедленно обеспечивали доступ к питьевому раствору 1% NaCl+0,2% КСl. Указанное введение продолжали в течение по крайней мере 3 недель, в течение которых у животных развивалась гипертензия и их использовали для испытаний.
За 48 ч до испытаний животных анестезировали изофлураном и вводили катетеры в бедренную артерию и вену для измерения артериального давления, для отбора крови и введения исследуемых соединений. Для восстановления крыс выдерживали в течение 48 ч в фиксированном состоянии в клетке из оргстекла, которую также использовали для испытаний.
Испытания при продолжительном введении
Указанные испытания проводили анлогично тому, как описано выше, но крысам имплантировали радиодатчик за 7-10 сут до односторонней нефректомии и введения ДОКА и соли. Кроме того, крысам не вводили катетеры в бедренную артерию и вену. Радиодатчик имплантировали, как описано в статье М.К.Bazil, С.Krulan и R.L.Webb. J.Cardiovasc. Pharmacol. 22: 897-905 (1993).
Условия испытаний вводили в компьютер для анализа кровяного давления, сердечного ритма и т.п., в определенные периоды времени. Исходные данные собирали в различные периоды времени и через различные интервалы времени. Например, исходные данные или значения до введения дозы обычно включали средние величины по трем последовательным значениям, полученным через каждые 24 ч до введения лекарственного средства.
Кровяное давление, сердечный ритм и активность определяли в предварительно определенные периоды времени до, во время и после введения лекарственного средства. Все измерения проводили с использованием животных в бесстрессовом и спокойном состоянии. Максимальное время испытаний определялось сроком работы батареек и составляло девять месяцев. В указанный период крысам вводили носитель перорально (1-3 мл/кг) не более 2-х раз в сутки или лекарственное средство в питьевой воде или в корме. Для более коротких испытаний в течение 8 недель лекарственные средства вводили подкожно из имплантированных осмотических мининасосов. Скорость осмотических мининасосов устанавливали в зависимости от необходимой скорости и времени доставки лекарственного средства. Доза алисрикена составляла от 1 до 10 мг/кг/сут.
Кроме того, для изучения действия алисрикена использовали крыс со спонтанной гипертензией (SHR), которую индуцировали при непрерывном введении соли для подавления системы ренин-ангиотензин (RAS) или непрерывном отсутствии соли для активации RAS у крыс SHR. Указанные испытания проводили для более интенсивной оценки действия различных исследуемых веществ. Эксперименты проводили с использованием крыс SHR, полученных на фирме Taconic Farms, Germantown, Нью-Йорк (Tac:N(SHR)fBR). Радиометрическое устройство (Data Sciences International, Inc., St. Paul, Миннесота) имплантировали в нижнюю брюшную аорту всем экспериментальным животным в возрасте от 14 до 16 недель. После операции всех крыс SHR выдерживали в течение по крайней мере 2 недель до начала испытаний для восстановления. Сердечно-сосудистые параметры непрерывно регистрировали с использованием радиодатчика и получение сигналы преобразовывали в цифровые данные, которые сохраняли в компьютере. Кровяное давление (среднее артериальное, систолитическое и диастолитическое давление) и сердечный ритм регистрировали у крыс (SHR), которые находились в сознании и в бесстрессовом свободном состоянии в клетках. Артериальное кровяное давление и сердечный ритм измеряли каждые 10 мин в течение 10 с и регистрировали. Данные, полученные для каждой крысы, представляли в виде средних значений, полученных в течение 24 ч, и собирали образцы каждый день (144-10 мин). Исходные значения кровяного давления и сердечного ритма представляли в виде средних величин по трем последующим значениям, полученным через каждые 24 ч, до начала лечения лекарственным средством. Всех крыс помещали отдельно в клетки с контролируемой температурой, влажностью и с циклом свет - темнота (12 ч/12 ч).
Кроме сердечно-сосудистых параметров, для всех крыс также регистрировали массу тела один раз в неделю. Лекарственное средство вводили перорально в питьевой воде один раз в сутки через желудочный зонд или с использованием осмотических мининасосов, как указано выше. При введении с питьевой водой потребление воды регистрировали пять раз в неделю. Затем рассчитывали дозы алискирена (свободное основание) для каждой отдельной крысы по потреблению воды, концентрации лекарственного средства в питьевой воде и индивидуальной массы тела. Все свежие растворы лекарственного средства в питьевой воде готовили каждые три - четыре дня. Обычная доза алискирена в питьевой воде находится в интервале от 3 до 30 мг/кг/сут. Однако, если экспериментальной крысе вводили комбинацию лекарственных средств, использовали дозы, аналогичные дозам при монотерапии.
При введении лекарственного средства через желудочный зонд доза алискирена (свободное основание) находится в интервале от 1 до 50 мг/кг/сут.
После завершения испытаний при продолжительном введении крыс SHR или крыс ДОКА анестезировали и из тела быстро удаляли сердце. После отделения и удаления предсердий, левого желудочка и, левого и правого желудочков (общая масса), их взвешивали и полученные результаты регистрировали. Массу левого желудочка и общую массу желудочков затем нормализовали по массе тела и регистрировали. Все значения, полученные для кровяного давления и сердечной массы, представляли в виде средних значений для группы ±СО.
Функцию и структуру сосудов оценивали после введения комбинации для оценки ее эффективности. Крыс SHR испытывали по методике, описанной в статье Intengan H.D., Thibault G., Li J.S., Schiffrin E.L., Circulation 100 (22); 2267-2275 (1999). Аналогичным образом, оценивали функцию сосудов у крыс ДОКА, как описано в статье Intengan H.D., Park J.B., Schiffrin E.L., Hypertension 34 (4 Part 2): 907-913 (1999).
Фармацевтические препараты по настоящему изобретению, которые при необходимости могут дополнительно содержать фармакологически активные субстанции, получают известным способом, например, при смешивании, грануляции, нанесении покрытия, растворении или лиофилизации, и полученные препараты содержат от приблизительно 0,1% до 100%, прежде всего, от приблизительно 1% до приблизительно 50%, лиофилизата и вплоть до 100% активной субстанции.
Изобретение также относится к композициям, содержащим соли по изобретению.
Изобретение также относится к применению солей по изобретению, предпочтительно для получения фармацевтических препаратов, предназначенных, прежде всего, для профилактики и также для лечения заболеваний или состояний, которые поддаются лечению при ингибировании ренина. Прежде всего, указанные соли можно использовать для лечения высокого кровяного давления, почечной недостаточности, дисфункции левого желудочка и сердечной недостаточности.
Изобретение также относится к применению для профилактики и лечения заболеваний или состояний, которые поддаются лечению при ингибировании ренина, и указанное применение заключается в том, что пациенту, включая человека, нуждающемуся в таком лечении, вводят терапевтически эффективное количество соли по изобретению, необязательно в комбинации по крайней мере с одной композицией, предназначенной для лечения сердечно-сосудистых заболеваний и связанных с ними состояний и заболеваний, перечисленных в данном контексте.
Изобретение также относится к комбинациям, например, фармацевтическим комбинациям, содержащим соль по настоящему изобретению, или в каждом случае фармацевтически приемлемую соль в комбинации по крайней мере с одной композицией, предназначенной для лечения сердечно-сосудистых заболеваний и связанных с ними состояний и заболеваний, перечисленных в данном контексте, или в каждом случае фармацевтически приемлемую соль указанных соединений. Комбинации с другими композициями для лечения сердечно-сосудистых заболеваний и связанных с ними состояний и заболеваний, перечисленных в данном контексте, или в каждом случае фармацевтически приемлемая соль указанных соединений, также являются объектами настоящего изобретения.
Комбинацию получают, например, с использованием следующих композиций, которые выбирают из группы, включающей:
(1) ингибитор редуктазы HMG-Co-A или ее фармацевтически приемлемую соль,
(2) ингибитор ангиотензин-конвертирующего фррмента (АКФ) или его фармацевтически приемлемую соль,
(3) блокатор кальциевых каналов (ССВ) или его фармацевтически приемлемую соль,
(4) ингибитор альдостеронсинтазы или его фармацевтически приемлемую соль,
(5) антагонист альдостерона или его фармацевтически приемлемую соль,
(6) двойной ингибитор ангиотензин-конвертирующего фермента/нейтральной эндопептидазы (АКФ/НЭП) или их фармацевтически приемлемую соль,
(7) антагонист эндотелина или его фармацевтически приемлемую соль,
(8) блокаторы рецептора ангиотензина II (ARB) или его фармацевтически приемлемую соль, и
(9) диуретик или его фармацевтически приемлемую соль.
Ингибиторы редуктазы HMG-Co-A (так называемые ингибиторы β-гидрокси-β-метилглутарил-кофермент-А-редуктазы) означают активные агенты, которые используют для снижения уровней липидов, включая холестерин в крови.
Класс ингибиторов редуктазы HMG-Co-A включает соединения с различными структурными признаками. Например, следует отметить соединения, которые выбирают из группы, включающей аторвастатин, церивастатин, компактин, далвастатин, дигидрокомпактин, флуиндостатин, флувастатин, ловастатин, питавастатин, мевастатин, правастатин, ривастатин, симвастатин и велостатин или, в каждом случае, их фармацевтически приемлемые соли.
Предпочтительными ингибиторами редуктазы HMG-Co-A являются коммерческие препараты, наиболее предпочтительными являются флувастатин и питавастатин или, в каждом случае, их фармацевтически приемлемая соль.
Наиболее эффективным способом регуляции кровяного давления и, следовательно, лечения застойной сердечной недостаточности является подавление ферментативной деградации ангиотензина I до ангиотензина II под действием так называемых ингибиторов АКФ.
Класс ингибиторов АКФ включает соединения с различными структурными признаками. Например, следует отметить соединения, которые выбирают из группы, включающей алацеприл, беназеприл, беназеприлат, каптоприл, церонаприл, цилазаприл, делаприл, эналаприл, энаприлат, фозиноприл, имидаприл, лизиноприл, мовелтоприл, периндоприл, хинаприл, рамиприл, спираприл, темокаприл и трандолаприл или, в каждом случае, их фармацевтически приемлемую соль.
Предпочтительными ингибиторами АКФ являются коммерческие препараты, наиболее предпочтительны беназеприл и эналаприл.
Класс ССВ включает, прежде всего, дигидропиридины (ДГП) и не-ДГП, такие как ССВ типа дилтиазема и верапамила.
Класс ССВ, который используют в указанной комбинации, включает предпочтительно ДГП, выбранные из группы, включающей амлодипин, фелодипин, риозидин, исрадипин, лацидипин, никардипин, нифедипин, нигулдипин, нилудипин, нимодипин, низолдипин, нитрендипин и нивалдипин, и предпочтительно включает не-ДГП, выбранные из группы, включающей флунаризин, прениламин, дилтиазем, фендилин, галлопамил, мибефрадил, анипамил, тиапамил и верапамил и, в каждом случае, их фармацевтически приемлемую соль. Все указанные ССВ используют в медицине, например, в качестве антигипертензивных, антистенокардических или антиаритмических лекарственных средств. Предпочтительные ССВ включают амлодипин, дилтиазем, исрадипин, никардипин, нифедипин, нимодипин, низолдипин, нитрендипин и верапамил или, например, в зависимости от специфичности ССВ, их фармацевтически приемлемую соль. Прежде всего, предпочтительные ДГП включают амлодипин или его фармацевтически приемлемую соль, прежде всего, безилат. Наиболее предпочтительные не-ДГП включают верапамил или его фармацевтически приемлемую соль, прежде всего, гидрохлорид.
Ингибитор альдостеронсинтазы означает фермент, который превращает кортикостерон в альдостерон при гидроксилировании кортикостерона с образованием 18-ОН-кортикостерона, а затем 18-ОН-кортикостерон превращается в альдостерон. Известно, что класс ингибиторов альдостеронсинтаз, применяемых для лечения гипертензии и первичного альдостеронизма, включает как стероидные, так и нестероидные ингибиторы альдостеронсинтаз, при этом последние наиболее предпочтительны.
Предпочтительными являются коммерческие ингибиторы альдостеронсинтаз или ингибиторы альдостеронсинтаз, которые утверждены органами здравоохранения.
Класс ингибиторов альдостеронсинтаз включает соединения с различными структурными признаками. Например, следует отметить соединения, которые выбирают из группы, включающей нестероидные ингибиторы ароматазы, анастрозол и фадрозол (включая их (+)-энантиомеры), а также стероидный ингибитор ароматазы, эксеместан, или в каждом случае, если возможно, их фармацевтически приемлемую соль.
Наиболее предпочтительным нестероидным ингибитором альдостеронсинтазы является (+)-энантиомер гидрохлорида фадрозола (патенты US 4617307 и 4889861) формулы
Предпочтительным стероидным антагонистом альдостерона является эплеренон формулы
или спиронолактон.
Предпочтительным двойным ингибитором ангиотензин-конвертирующего фермента/нейтральной эндопептидазы (АКФ/НЭП) является, например, омапатрилат (см. ЕР 629627), фазидотрил или фазидотрилат или, соответственно, их фармацевтически приемлемая соль.
Предпочтительным антагонистом эндотелина является, например, бозентан (см. ЕР 526708 А), или тезосентан (см. WO 96/19459), или в каждом случае, их фармацевтически приемлемая соль.
Приемлемые блокаторы рецептора ангиотензина II, которые используются в комбинации по настоящему изобретению, включают антагонисты рецептора AT1, с различными структурными признаками, предпочтительно непептидной природы. Например, следует отметить соединения, которые выбирают из группы, включающей валсартан (ЕР 443983), лосартан (ЕР 253310), кандесартан (ЕР 459136), эпросартан (ЕР 403159), ирбесартан (ЕР 454511), олмесартан (ЕР 503785), тазосартан (ЕР 539086), телмисартан (ЕР 522314), соединение Е-4177 формулы
соединение SC-52458 формулы
и соединение ZD-8731 формулы
или, в каждом случае, их фармацевтически приемлемую соль.
Предпочтительно антагонистами рецептора AT1 являются коммерческие препараты, более предпочтителен валсартан или его фармацевтически приемлемая соль.
Диуретиком является, например, тиазидпроизводное, выбранное из группы, включающей хлортиазид, гидрохлортиазид, метилхлортиазид и хлорталидон. Наиболее предпочтителен гидрохлортиазид.
Совместные терапевтически эффективные количества активных агентов в составе комбинации по настоящему изобретению предпочтительно вводят одновременно или последовательно в любом порядке, совместно, раздельно или в фиксированнной комбинации.
Структуру активных агентов можно определить по общим торговым названиям, которые указаны в текущем издании стандартного справочника"Тhе Merck Index" или в базе данных, например, патентов Patents International (например, IMS World Publications). Их содержание включено в данное описание в качестве ссылок. Специалист в данной области техники с использованием указанных ссылок может идентифицировать активные агенты, а также получить их и провести испытания фармацевтических показаний и свойств стандартными методами анализа in vitro и in vivo.
Соответствующие активные ингредиенты или их фармацевтически приемлемые соли можно также использовать в форме сольвата, такого как гидрат, или сольвата с другими растворителями, использованными для кристаллизации.
Соединения в составе комбинаций можно использовать также в виде фармацевтически приемлемых солей. Если указанные соединения включают, например, по крайней мере один основный центр, они образуют кислотно-аддитивные соли. Соответствующие кислотно-аддитивные соли получают при необходимости, если присутствует дополнительный основный центр. Соединения, содержащие кислотную группу (например, СООН), образуют также основно-аддитивные соли.
Один из вариантов настоящего изобретения включает "набор компонентов", например, если соединения в составе комбинации по настоящему изобретению можно вводить независимо или в составе различных фиксированных комбинаций, содержащих определенное количество компонентов, т.е. одновременно или в различные периоды времени. Компоненты набора можно затем вводить, например, одновременно или поочередно, то есть в различные периоды времени и через равные или через различные интервалы времени для любого компонента набора. Временные интервалы предпочтительно выбирают таким образом, чтобы повысить эффективность лечения заболевания или состояния при комбинированнном введении по сравнению с действием каждого компонента в отдельности.
Кроме того, изобретение относится к коммерческой упаковке, включающей комбинацию по настоящему изобретению и инструкцию для одновременного, раздельного или последовательного применения.
Доза алискирена (свободное основание) зависит от различных факторов, таких как способ введения, вид, возраст и/или индивидуальное состояние. Например, доза, предназначенная для введения теплокровному животному, включая человека, с массой тела приблизительно 75 кг, прежде всего доза, эффективная для ингибирования активности ренина, например, для снижения кровяного давления, составляет приблизительно от 3 мг до приблизительно 3 г, предпочтительно от приблизительно 10 мг до приблизительно 1 г, например, от 20 до 200 мг/субъект/сут, предпочтительно разделенная на одноразовые дозы от 1 до 4 доз, например, на равные дозы. Обычно детям вводят приблизительно половину дозы взрослых. Для каждого субъекта подбирают индивидуальную дозу, например, при измерении концентрации активного ингредиента в сыворотке и повышают дозу до оптимальной величины. Одна доза включает, например, 75 мг, 150 мг или 300 мг для взрослого пациента (в расчете на свободное основание).
Изобретение иллюстрируется, прежде всего, примерами и также относится к новым соединениям, описанным в примерах, к их применению и к способам их получения.
Следующие примеры представлены для иллюстрации изобретения и не ограничивают его объем.
Пример 1
Получение гидросульфата 2(S),4(S),5(S),7(S)-N-(3-амино-2,2-диметил-3-оксопропил)-2,7-ди(1-метилэтил)-4-гидрокси-5-амино-8-[4-метокси-3-(3-метоксипропокси)фенил]октанамида
11 г 2(S),4(S),5(S),7(S)-N-(3-амино-2,2-диметил-3-оксопропил)-2,7-ди(1-метилэтил)-4-гидрокси-5-амино-8-[4-метокси-3-(3-метоксипропокси)фенил]октанамида в виде свободного основания (0,019 моля) растворяли в ацетонитриле (10 мл). В полученный раствор добавляли по каплям при перемешивании водный раствор серной кислоты (4,9 г, 20% раствор, 0,01 моль). Раствор охлаждали (0-5°С) в течение 1 ч и выдерживали в течение нескольких ч, обычно от 10 до 48 ч при указанной температуре для индукции кристаллизации. Полученные кристаллы отделяли фильтрованием и сушили в вакуум-сушильном шкафу (давление 39 мбар, 40°С, 18 ч). После высушивания получали 8,21 г бесцветной соли.
Температура плавления сульфата алискирена, полученного в примере 1, в открытом тигле составляла 96,6°С (скорость нагревания 10 К/мин), а энтальпия плавления 28,9 Дж·г-1.
Энантиомерную чистоту соли, полученной в примере 1, определяли методом стереоспецифической ЖХВР. Стереоспецифическое разделение проводили на хиральной колонке (Chiral AGP). Энантиомерная чистота (ее) составляет 100%.
По наиболее интенсивным пикам для гидросульфата алискирена на порошковых дифрактограммах, полученных на порошковом дифрактометре Scintag XDS2000, определяли межплоскостные расстояния: d (Å): 21,3, 12,4, 10,7, 10,1. 8,4, 7,9, 6,7, 6,0, 5,3, 4,9, 4,7, 4,5, 4,4, 4,1.
Спектр 1Н-ЯМР в ДМСО-d6 представлен ниже:
1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): 0,81 (d, 6,8 Гц, 3Н), 0,82 (d, 6,8 Гц, 3Н), 0,86 (d, 6,6 Гц, 6Н, Н-С(l), Н-С(m) и Н-С(9)), 1,06 (s, 6Н, h, h'), 1,25-1,8 (m, 6Н, Н-С(3, 6, 7, 8)), 1,95 (квинтет, 2Н, H-C(d)), 2,24 (m, 1H, H-C(2)), 2,45 (AB, 2H, H-C(b)), 2,69 (ушир.s, 1H, H-N(n')), 3,07 (dd, 5,5 Гц, 13,1 Гц, 2H) и 3,31 (dd, 6,8 Гц, 13,3 Гц, 2H, H-C(i)), 3,24 (s, 3Н, H-C(f)), 3,71 (s, 3Н, H-C(g)), 3,47 (t, 6,3 Гц, 2H, Н-С(е)), 3,96 (t, 6,5 Гц, 2H, Н-С(с)), 5,3 (ушир.s, 1H, ОН), 6,68 (d, 8,1 Гц, 1H, Н-С(а')), 6,67 (d, 1,8 Гц, 1H, Н-С(а")), 6,82 (d, 8,1 Гц, 1H, Н-С(а)), 6,83 и 7,13 (s, каждый 1H, H-N(n)). 7,46 (ушир. t, 1H, H-N(n'), 7,6 (ушир. s, 3Н, Н3N+).
Данные элементного анализа соответствуют составу гидросульфата алискирена и ацетонитрилу. Результаты элементного анализа с учетом СО соответствуют брутто-формуле 3·(C30H53N3O6·HSO3)+2·CH3CN гидросульфата, содержащего ацетонитрил (40 мол.% или 4 мас.%).
Найдено С: 55,00%, H: 8,34%, N: 7,57%, О: 23,66%, S: 4,60%.
Рассчитано* С: 55,66%, H: 8,34%, N: 7,57%, О: 23,66%, S: 4,74%.
Настоящее изобретение относится к новой соли алискирена, - гидросульфату алискирена в кристаллической или сольватированной форме, а также к ее получению и применению в качестве лекарственного средства или активного ингредиента в фармацевтической композиции. 4 н. и 3 з.п. ф-лы.
1. Гидросульфат алискирена в кристаллической или сольватированной форме.
2. Гидросульфат алискирена по п.1, характеризующийся
(1) порошковыми дифрактограммами, полученными на порошковом дифрактометре Scintag XDS2000, которые включают следующие межплоскостные расстояния: d (±0,1A°): 21,3, 12,4, 10,7, 10,1, 8,4, 7,9, 6,7, 6,0, 5,3, 4,9, 4,7, 4,5, 4,4, 4,1 или
(2) ИК-спектром нарушенного полного отражения (ИК-НПВО) и следующими пиками при длине волны в см-1: 3353 (ушир.), 3078, 2960, 2935, 2876, 1660 (С=O), 1516 (амид II), 1470, 1444, 1425, 1389, 1371, 1260, 1234 (арил-O), 1191, 1163, 1140, 1047, 872, 809, 768, 723.
3. Гидросульфат алискирена по п.1 в сольватированной ацетонитрилом форме.
4. Фармацевтическая композиция, обладающая активностью ингибитора ренина, включающая в качестве активного ингредиента эффективное количество гидросульфата алискирена по п.1 и фармацевтически приемлемый эксципиент.
5. Фармацевтическая композиция по п.4, содержащая гидросульфат алискирена по любому из пп.1-3 в комбинации по крайней мере с одним компонентом, выбранным из группы, включающей:
(1) ингибитор редуктазы HMG-Co-A или его фармацевтически приемлемую соль,
(2) ингибитор ангиотензин-конвертирующего фермента (АКФ) или его фармацевтически приемлемую соль,
(3) блокатор кальциевых каналов или его фармацевтически приемлемую соль,
(4) ингибитор альдостеронсинтазы или его фармацевтически приемлемую соль,
(5) антагонист альдостерона или его фармацевтически приемлемую соль,
(6) двойной ингибитор ангиотензин-конвертирующего фермента /нейтральной эндопептидазы (АКФ/НЭП) или его фармацевтически приемлемую соль,
(7) антагонист эндотелина или его фармацевтически приемлемую соль,
(8) блокаторы рецептора ангиотензина II (ARB) или его фармацевтически приемлемую соль и
(9) диуретик или его фармацевтически приемлемую соль.
6. Применение гидросульфата алискирена по любому из пп.1-3 для получения лекарственного средства, предназначенного для профилактики или лечения заболеваний и состояний, которые поддаются лечению при ингибировании ренина.
7. Способ получения гидросульфата алискирена по п.1, который заключается в том, что
(1) алискирен в виде свободного основания растворяют в органическом растворителе,
(2) серную кислоту добавляют в раствор, полученный на стадии (1), в виде водного раствора,
(3) полученный раствор охлаждают и выдерживают для индукции кристаллизации,
(4) полученные кристаллы отделяют фильтрованием и высушивают с получением гидросульфата алискирена в кристаллической или сольватированной форме.
| Устройство для генерации звука | 1977 |
|
SU678503A1 |
| Способ обработки целлюлозных материалов, с целью тонкого измельчения или переведения в коллоидальный раствор | 1923 |
|
SU2005A1 |
| Аппарат для очищения воды при помощи химических реактивов | 1917 |
|
SU2A1 |
| RU 2007111752 A2, 10.10.2008 | |||
| Sandham, D | |||
| СПОСОБ ВЫЩЕЛАЧИВАНИЯ ОКИСИ ЦИНКА ИЗ ПОЛУПРОДУКТОВ ЦИНКОВОГО ПРОИЗВОДСТВА | 1940 |
|
SU60536A1 |
| Dondoni, A | |||
| et al | |||
| Облицовка комнатных печей | 1918 |
|
SU100A1 |
