СПОСОБ НЕСПЕЦИФИЧЕСКОЙ СЕРОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ СЕРОНЕГАТИВНЫХ ФОРМ ТЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЯ СИФИЛИСОМ Российский патент 2012 года по МПК A61B10/00 A61K39/02 A61P43/00 G01N33/53 

Описание патента на изобретение RU2442536C2

Изобретение относится к области медицины, а именно к диагностике заболевания сифилисом, и может быть использовано при серологической диагностике серонегативных форм заболевания сифилисом по результатам определения в организме наличия неспецифических (антикардиолипиновых) антител.

Изобретение решает задачу неспецифической серологической диагностики серонегативных (при отсутствии в организме антитрепонемных и антикардиолипиновых антител) форм течения сифилитической инфекции.

Известны способы лабораторной диагностики заболевания сифилисом [приказ МЗ РФ №87 от 26.03.2001 «О совершенствовании серологической диагностики сифилиса»]. Наиболее убедительным доказательством наличия Treponema pallidum pallidum в организме является его прямая визуализация - микроскопический способ выявления возбудителя. Однако использование данного способа диагностики возможно только при отдельных формах течения сифилитической инфекции, а отсутствие визуально наблюдаемых трепонем не означает отсутствие заболевания.

Известны способы серологической диагностики сифилиса, основанные на определении результата взаимодействия в реакциях антигенов - индикаторов с сывороткой крови, содержащей специфические и неспецифические антитела к Т. pallidum pallidum. Течение заболевания сифилисом сопровождается выработкой в организме двух видов антител: антикардиолипиновых (реагинов) и специфических - антитрепонемных. Реагины продуцируются и определяются в сыворотке крови организма, больного сифилисом, и их наличие, совместно с антитрепонемными антителами, указывает на наличие заболевания сифилисом и присутствие в организме вегетативных форм патогенной Т. pallidum pallidum.

В качестве антигена при постановке специфических реакций используется широкий спектр специфических антигенов патогенных и культуральных бледных трепонем, а в качестве антигена при постановке неспецифических реакций - кардиолипин [приказ МЗ РФ №87 от 26.03.2001 «О совершенствовании серологической диагностики сифилиса»].

Наиболее близким к заявляемому способу является способ неспецифической серологической диагностики сифилиса, включающий при постановке диагноза заболевания определение в организме при помощи неспецифических серологических реакций на сифилис наличия неспецифических (антикардиолипиновых) антител.

В связи с тем, что сифилис относится к социально значимым и представляющим опасность для окружающих заболеваниям, особую остроту приобретает вопрос исключения ложноотрицательных результатов неспецифических серологических реакций, используемых в качестве отборочного теста на сифилис и при контроле качества лечения.

Нетрепонемными тестами, определяющими наличие в организме антикардиолипиновых антител, являются реакция связывания комплимента с кардиолипиновым антигеном (РСК-К), микрореакция преципитации с кардиолипином (РМП-К), которая используется в качестве отборочного теста при массовых обследованиях населения на сифилис, а также при определении эффективности проведенного лечения, и различные зарубежные аналоги этих реакций (RPR, TRUST, VDRL) и др. [приказ МЗ РФ №87 от 26.03.2001 «О совершенствовании серологической диагностики сифилиса», стр.5-6].

Однако недостатком данного способа неспецифической серологической диагностики сифилиса является невозможность диагностировать с его помощью серонегативные формы течения сифилитической инфекции в связи с отсутствием в организме при данных формах сифилиса антитрепонемных и антикардиолипиновых антител.

Наличие серонегативных латентных и поздних форм сифилиса, репозитивация с течением времени серологических реакций у лиц, ранее леченных в связи с заболеванием вторичным рецидивным и скрытым сифилисом [Суворов А.П., Бакулев А.Л., Румянцева Е.В. Случаи рецидива сифилиса после лечения бензатин - бензилпенициллином G // Рос. ж. кож. и венер. болезней. - 2000. - №3. - С.46-48, Кошкин С.В., Зайцева Г.А. Чершных Г.В. Некоторые показатели иммунитета у больного с вторичным сифилисом с отрицательными серологическим реакциями // Вестн. дерм-тол. и венерол. - 2003. - №6. - С.53-54, Милич М.В., Сущенко Л.В. Куршакова Т.С. и др. Случаи вторичного рецидивного сифилиса с отрицательным стандартным серологическим комплексом // Вестн. дерматол. и венерол. - 1988. - №9. - С.68-69] позволяет сделать вывод о том, что при отрицательных результатах серологических реакций в организме может находиться в той или иной форме жизни возбудитель заболевания сифилисом [Беднова В.Н. К вопросу о биологии возбудителя сифилиса (аналитический обзор) // Вестн. последипломного мед. образования. - 2001. - №4. - С.24-27]. Данный вывод подтверждается результатами изучения экспериментального сифилиса у кроликов [Овчинников Н.М. Экспериментальный сифилис. - 1955. М.: Медгиз. - 388 с., стр.351], которые указывают на наличие в их организме патогенных бледных трепонем после негативации специфических реакций с трепонемным антигеном и неспецифических реакций с кардиолипином на сифилис.

Серьезные трудности представляет серодиагностика нейросифилиса. Так по данным [Киселёва Г.А. Ликвордиагностика сифилиса методом ИФА с тест - системой ЗАО «Вектор - Бест», предназначенной для выявления иммуноглобулинов класса G // ИППП. - 2003. - №2. - С.27-31] при диагностике нейросифилиса при помощи РМП-К чувствительность реакции составляет от 21% до 35,3%.

Целью изобретения является повышение достоверности неспецифической серологической диагностики серонегативных форм течения заболевания сифилисом.

Поставленная цель достигается тем, что при неспецифической серологической диагностике серонегативных форм течения заболевания сифилисом, в организм на фоне отрицательных серологических реакций на сифилис предварительно вводят высокоспецифичный антиген культуральных бледных трепонем, а наличие неспецифических (антикардиолипиновых) антител определяют при помощи неспецифической серологической реакции с кардиолипином через интервал времени активизации сифилитической инфекции.

По отношению к вышеописанному прототипу заявленный способ имеет следующие отличительные признаки.

Предварительное введение в организм на фоне отрицательных результатов серологических реакций на сифилис высокоспецифичного антигена культуральных бледных трепонем, что приводит, как известно [Пожарская В.О., Гуртовой Е.А. Новая технология производства положительных сывороток для диагностики сифилиса // Роль иммунобиологических препаратов в современной медицине: Матер. междун. симпозиума. - Уфа. - 1995. - Ч.2. - С.194], к активизации сифилитического процесса при наличии в организме возбудителя сифилиса, связанной с переходом патогенных бледных трепонем под воздействием специфического антигена из невегетативных форм жизни (цист и зерен) в вегетативные (извитые) формы.

Определение через интервал времени активизации сифилитической инфекции присутствие в организме неспецифических (антикардиолипиновых) антител. Установлено, что в результате активизации сифилитической инфекции патогенная бледная трепонема переходит в вегетативную форму жизнедеятельности, начинает размножаться, что приводит к распаду клеток в организмах человека и животных и появлению антикардиолипиновых антител, которые, как известно [Уфимцева М.А., Герасимова Н.М., Лесняк В.И. Антитела к кардиолипину и β2-гликопротеину I при скрытом сифилисе и хронических ложноположительных реакциях на сифилис // Рос. журн. кож. венер. болезней. - 2005. - №4. - С.23-27, Беднова В.Н., Борисенко К.К. Неспецифические положительные результаты серологических реакций на сифилис. Количественные модификации современных серологических реакций // Методич. рекомендации. - МЗ СССР ЦКВИ. - 1990. - М., 1990. - 20 с.], являются антителами к митохондральным мембранам распавшихся клеток.

Введение высокоспецифичных антигенов культуральных бледных трепонем в организм больных серонегативными формами сифилиса приводит к выработке в нем, как специфических (антитрепонемных), так и неспецифических (антикардиолипиновых) антител. Однако доказано [Пожарская В.О. Особенности иммунного ответа кроликов на введение антигенов из бледных трепонем // 7-й Рос. съезд дерматол. и венерол.: Тез. докл. - Казань, 1996. - Ч.3. - С.72], что в организме, свободном от сифилитической инфекции, при введении высокоспецифичных антигенов культуральных бледных трепонем антикардиолипиновые антитела не вырабатываются. Данный факт при неспецифической серологической диагностике сифилиса позволяет дифференцировать по результату определения присутствия в организме антикардиолипиновых антител наличие или отсутствие в организме возбудителя сифилиса, т.е. наличие или отсутствие заболевания сифилисом.

Возможность практического использования предлагаемого способа подтверждается примерами конкретной его реализации.

Общепризнанной моделью заболевания сифилисом являются кролики с экспериментальным сифилисом, полученным путем их интратестикулярного заражения патогенной бледной трепонемой шт. Nikols. Установлена на генетическом уровне патогенной бледной трепонемы прочная связь между патогенами возбудителя сифилиса человека и кролика, зараженного штаммом Nikols [Stronhal M., Smajs D., Vatejkova P. Genome differences between Treponema pallidum subsp. pallidum strain Nichols and T. paraluisculi strain Cunikuli: A. // Infekt Immun. - 2007. - 75 (12). - P.5859-66]. Установлено, что антиген клеточных структур культуральных бледных трепонем, содержащий клеточные стенки с фрагментами цитоплазматических мембран и наружные фибриллы КБТ является высокоспецифичным антигеном [Пожарская В.О., Гуртовой Е.А. Новая технология производства положительных сывороток для диагностики сифилиса // Роль иммунобиологических препаратов в современной медицине: Матер. междун. симпозиума. - Уфа. - 1995. - Ч.2. - С.194].

Пример реализации предлагаемого способа серологической неспецифической диагностики серонегативных форм течения заболевания сифилисом.

Опытная группа №1 кроликов с экспериментальным сифилисом (10 голов). Через 9,5 месяцев после заражения кроликов патогенной бледной трепонемой шт. Nikols по результатам реакции связывания комплимента с ультраозвученным трепонемным антигеном, реакции связывания комплимента и реакции микропреципитации с кардиолипином установлено отсутствие в организме всех кроликов антитрепонемных и антикардиолипиновых антител. Через 11 месяцев после повторно подтвержденной в указанных выше реакциях у всех кроликов стойкой негативации в сыворотке крови специфических и неспецифических антител, кроликам предварительно внутривенно ввели 0,023 г высокоспецифичного антигена из клеточных структур культуральных бледных трепонем, содержащего клеточные стенки с фрагментами цитоплазматических мембран и наружные фибриллы КВТ. Через 30 дней после введения антигена при серологической диагностике на сифилис РСК-УЗТА, РСК и РМП с кардиолипином дали с сыворотками крови этих кроликов резко положительные результаты (++++). Установленное наличие у всех кроликов резко положительных результатов РСК и РМП с кардиолипином после введения высокоспецифичного трепонемного антигена подтверждает известные данные о наличии возбудителя сифилиса в организме кроликов при отрицательных первоначальных (до введения антигена) всех результатах серологических реакций, так как известно, что само выздоровление кроликов с экспериментальным сифилисом не происходит.

Опытная группа №2 здоровых кроликов с отрицательными серологическими реакциями на сифилис (10 голов). Здоровым кроликам одновременно с опытной группой №1 внутривенно ввели 0,023 г высокоспецифичного антигена клеточных структур культуральных бледных трепонем. Через 30 дней после введения антигена, одновременно с опытной группой №1, в группе №2 провели серологическую диагностику кроликов на сифилис: у всех кроликов РСК-УЗТА дала резко положительные результаты (++++), РСК и РМП с кардиолипином остались отрицательными, так как в организме здоровых кроликов антикардиолипиновые антитела не вырабатываются, что подтверждает известный заранее диагноз об отсутствии заболевания сифилисом в данной группе кроликов.

Контрольная группа №3 кроликов с экспериментальным сифилисом (10 голов). Через 9,5 месяцев после заражения кроликов патогенной бледной трепонемой шт. Nikols по результатам реакции связывания комплимента с ультраозвученным трепонемным антигеном, реакции связывания комплимента и реакции микропреципитации с кардиолипином у всех кроликов в сыворотке крови установлено отсутствие в организме антитрепонемных и антикардиолипиновых антител. Через 11 месяцев и при последующих постановках эти серологические реакции на сифилис в данной группе кроликов показали отрицательные результаты, что говорит о наличии стойкой негативации специфических и неспецифических антител в сыворотке крови кроликов с экспериментальным сифилисом. Данный факт подтверждает недостоверность отрицательных результатов серологической диагностики сифилиса в контрольной группе кроликов, так как при экспериментальном сифилисе кроликов не происходит их само выздоровление.

Таким образом, изобретение реально осуществимо, между совокупностью существенных признаков заявляемого объекта и достигаемым положительным результатом существует причинно-следственная связь, использование предлагаемого способа повышает достоверность неспецифической серологической диагностики серонегативных форм течения заболевания сифилисом.

Похожие патенты RU2442536C2

название год авторы номер документа
СПОСОБ КОНТРОЛЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ ЛЕЧЕНИЯ СИФИЛИСА 2011
  • Пожарская Виктория Олеговна
  • Корякин Михаил Васильевич
  • Селиванова Ирина Сергеевна
RU2474820C2
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОНТРОЛЬНОЙ СЫВОРОТКИ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ АНТИКАРДИОЛИПИНОВЫХ АНТИТЕЛ В КОЛИЧЕСТВЕННОЙ РЕАКЦИИ МИКРОПРЕЦИПИТАЦИИ НА СИФИЛИС 2009
  • Пожарская Виктория Олеговна
  • Климанович Инна Викторовна
  • Селиванова Ирина Сергеевна
  • Казиев Азрет Хусеевич
  • Лысогора Елизавета Вильевна
  • Гуртовой Евгений Алексеевич
RU2399383C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИГЕНОВ ИЗ КУЛЬТУРАЛЬНЫХ БЛЕДНЫХ ТРЕПОНЕМ 1996
  • Пожарская В.О.
RU2141339C1
СПОСОБ СЕРОДИАГНОСТИКИ РАННЕГО НЕЙРОСИФИЛИСА 2001
  • Иванов А.М.
  • Теличко И.Н.
  • Вербов В.Н.
  • Самцов А.В.
  • Сбойчаков В.Б.
  • Сухарев А.В.
  • Смирнова Т.С.
RU2205409C2
Способ серодиагностики сифилиса 1987
  • Пожарская Виктория Олеговна
  • Беднова Валентина Николаевна
  • Угримов Станислав Александрович
  • Падалка Сергей Филиппович
SU1650098A1
СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ СИФИЛИСА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ МЕТОДА ПРЯМОГО ПРОТЕОМНОГО ПРОФИЛИРОВАНИЯ СЫВОРОТКИ КРОВИ 2008
  • Кубанова Анна Алексеевна
  • Кубанов Алексей Алексеевич
  • Лесная Ирина Николаевна
  • Китаева Наталья Владимировна
  • Хайруллин Рафиль Фидаилевич
  • Фриго Наталия Владиславовна
  • Полетаева Ольга Александровна
  • Лихарева Виктория Владимировна
RU2381505C1
СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ СИФИЛИСА ПУТЕМ ОДНОВРЕМЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ РЕАГИНОВЫХ И ТРЕПОНЕМОСПЕЦИФИЧЕСКИХ АНТИТЕЛ К T.PALLIDUM НА МИКРОСКОПНЫХ АЛЬДЕГИДНЫХ СЛАЙДАХ 2009
  • Кубанова Анна Алексеевна
  • Кубанов Алексей Алексеевич
  • Лесная Ирина Николаевна
  • Фриго Наталия Владиславовна
  • Китаева Наталья Владимировна
  • Ротанов Сергей Владимирович
  • Волков Илья Алексеевич
RU2394496C1
АНТИГЕННАЯ КОМПОЗИЦИЯ И СПОСОБ ОБНАРУЖЕНИЯ ПРИСУТСТВИЯ TREPONEMA PALLIDUM У ЧЕЛОВЕКА 2000
  • Поуп Виктория
  • Кастро Арнолд Р.
  • Моррилл Уильям Э.
RU2244933C2
СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ НЕЙРОСИФИЛИСА 2018
  • Потекаев Николай Николаевич
  • Жукова Ольга Валентиновна
  • Фриго Наталия Владиславовна
  • Негашева Екатерина Сергеевна
  • Негашева Марина Анатольевна
  • Дмитриев Георгий Александрович
  • Маляренко Евгений Николаевич
  • Чистова Ольга Юрьевна
  • Левощенко Елена Павловна
RU2699057C1
СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ СИФИЛИСА (ВАРИАНТЫ) 1999
  • Базиков И.А.
  • Тюменцева И.С.
  • Ефременко В.И.
  • Афанасьев Е.Н.
  • Жарникова И.В.
RU2200327C2

Реферат патента 2012 года СПОСОБ НЕСПЕЦИФИЧЕСКОЙ СЕРОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ СЕРОНЕГАТИВНЫХ ФОРМ ТЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЯ СИФИЛИСОМ

Изобретение относится к медицины, а именно к венерологии, и может быть использовано для неспецифической серологической диагностики серонегативных форм течения заболевания сифилисом. Для этого определяют в организме при помощи неспецифических серологических реакций на сифилис наличие неспецифических (антикардиолипиновых) антител. В случае отрицательных серологических реакций в организм предварительно вводят высокоспецифичный антиген культуральных бледных трепонем. Затем через интервал времени активизации сифилитической инфекции определяют наличие антикардиолипиновых антител. При наличии в организме антикардиолипиновых антител ставят диагноз заболевания сифилисом. Способ обеспечивает повышение достоверности неспецифической серологической диагностики серонегативных форм течения заболевания сифилисом за счет активизации сифилитического процесса вследствие введения в организм высокоспецифичного антигена культуральных бледных трепонем, что позволяет перевести течение серонегативного сифилиса, характеризующегося отсутствием иммунного ответа организма на находящийся в нем возбудитель сифилиса, в его серопозитивную форму, характеризующуюся наличием иммунного ответа организма на находящийся в нем возбудитель.

Формула изобретения RU 2 442 536 C2

Способ неспецифической серологической диагностики серонегативных форм течения заболевания сифилисом, включающий определение в организме при помощи неспецифических серологических реакций на сифилис наличия неспецифических (антикардиолипиновых) антител, постановку диагноза заболевания сифилисом при наличии в организме антикардиолипиновых антител, отличающийся тем, что в организм на фоне отрицательных серологических реакций на сифилис предварительно вводят высокоспецифичный антиген культуральных бледных трепонем, а наличие неспецифических (антикардиолипиновых) антител определяют через интервал времени активизации сифилитической инфекции.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2012 года RU2442536C2

ТКАЧЁВ В.К
и др
«ИФА-диагностика сифилиса» - информационно-методическое пособие, 3-е издание
- Кольцово, 2005, с.20-22, с.5-7, с.27-31 [он-лайн] [Найдено 2010.12.24] найдено из Интернет: http://www.vector-best.ru/publ/doc/9607.php
RU 2185856 C1, 27.07.2002
Способ диагностики сифилиса 1976
  • Гарник Людмила Павловна
SU577018A1
US 4738932 A, 19.04.1988
УСТАНОВКА ДЛЯ СУХОЙ ПЕРЕГОНКИ ДЕРЕВА 1930
  • Насакин С.П.
SU23350A1

RU 2 442 536 C2

Авторы

Пожарская Виктория Олеговна

Корякин Михаил Васильевич

Климанович Инна Викторовна

Селиванова Ирина Сергеевна

Даты

2012-02-20Публикация

2010-02-16Подача