СПОСОБ КОНТРОЛЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ ЛЕЧЕНИЯ СИФИЛИСА Российский патент 2013 года по МПК G01N33/49 G09B23/28 

Изобретение относится к медицине, а именно к лечению сифилиса, и касается способа определения индивидуальной эффективности проведения регламентированной антибиотикотерапии сифилиса перед переводом пролеченных пациентов на диспансерный клинико-серологический контроль (или при снятии их с диспансерного учета).

Существует регламентированный способ определения эффективности проведенного лечения сифилиса, при котором на фоне отсутствия клинических проявлений заболевания наблюдается обязательное отсутствие в сыворотках крови пролеченных пациентов антикардиолипиновых (неспецифических) антител, определенных в количественных реакциях с кардиолипином (К) - РСК-К и микропреципитации РМП-К на сифилис.

Отсутствие клинических проявлений и антикардиолипиновых антител в сыворотках крови после лечения является основанием для перевода пациента на диспансерный учет (от 1,5 до 2-х лет). Отрицательные результаты его контрольных обследований в этот период являются основанием определения эффективности проведенного лечения и снятия с учета как вылеченного от сифилиса [1].

Недостатком данного способа является развитие у значительного числа лиц, снятых с диспансерного учета, поздних клинических форм сифилиса (поздний латентный, висцеральный и нейросифилис). При беременности активизация латентной сифилитической инфекции у матери приводит к развитию у новорожденных различных форм врожденного сифилиса.

По данным отечественных и зарубежных научных источников, диагностика поздних и врожденных форм заболевания является основанием для врачей сифилидологов ретроспективно диагностировать неэффективность в прошлом проведенного лечения сифилиса. По мнению ученых, это связано с наличием персистирующей сифилитической инфекции в организме пролеченных пациентов при отсутствии клинических и серологических проявлений (при которых пациенты считаются здоровыми), а ее активизация под влиянием различных внешних и внутренних факторов может привести к развитию и, как следствие, к возникновению и проявлению поздних форм сифилиса.

До настоящего времени решение проблемы достоверного тестового контроля излечения сифилиса после проведения регламентированного лечения отсутствует.

Целью предлагаемого изобретения является разработка надежного способа контроля эффективности проведенного лечения сифилиса.

В основу заявляемого способа легли полученные результаты о падении титров антикардиолипиновых антител вплоть до полной негативации их в неспецифических тестах на сифилис (РМП-К, РСК-К и др.), что связано не с излечением сифилиса, а с установленной способностью извитых форм патогенных бледных трепонем переходить в другие морфологические формы - гранулярно-зернистые, цистные и их включающие L-формы. Это может происходить как под действием недостаточных доз антибиотиков [2], так и без антибиотикотерапии [3].

Сущность изобретения заключается в том, что заявляемый способ контроля эффективности проведенного лечения сифилиса осуществляется на признанной в мировой практике модели для изучения сифилитической инфекции - кроликах с экспериментальным сифилисом, зараженных патогенными бледными трепонемами (ПБТ) штамма Никольс по стандартной методике с использованием в качестве антибиотика прокаин пенициллина (ПП), который по данным научных работ среди дюрантных антибиотиков является более результативным и включен в регламентированные схемы лечения активных форм сифилитических инфекций [1].

Кроликам породы «Шиншилла» весом 3-3,2 кг (опытные группы) вводили для лечения ПП по 50000 ME на 1 кг веса в сутки в течение 10 дней (1500000 ME на курс лечения) и по 100000 ME на 1 кг веса в сутки в течение 10 дней (3000000 ME на курс лечения).

Для контрольного парентерального введения использовали в качестве антигенов высокоспецифические очищенные протеины клеточных структур культуральных бледных трепонем (ОПКСТ) или соответствующий им по высокой антигенности комплекс специфических полипептидов клеточных структур с различной молекулярной массой (представленных 4 КД, 15 КД, 17 КД, 38 КД, 42 КД, 43 КД, 44 КД и 47 КД), полученных из патогенных T.pallidum pallidum методами генной инженерии и их синтетическими аналогами, полученными путем биохимического синтеза в стандартных дозах.

В серологических исследованиях использовали в качестве специфических антигенов ультраозвученный трепонемный антиген (в РСК-УЗТА).

Отличительными признаками заявляемого способа по прототипу являются:

- введение в организм после антибиотикотерапии на фоне отсутствия клинических проявлений и отрицательных серологических тестов на сифилис с неспецифическими кардиолипиновыми антигенами высокоспецифических очищенных протеинов клеточных структур культуральных бледных трепонем или комплекса высокоантигенных специфических полипептидов клеточных структур с различной молекулярной массой (4 КД, 15 КД, 17 КД, 38 КД, 42 КД, 43 КД, 47 КД), полученных из патогенных T.pallidum pallidum методами генной инженерии и их синтетическими аналогами, полученными путем биохимического синтеза;

- определение через интервал времени наличия в организме антикардиолипиновых антител в серологических тестах с неспецифическими кардиолипиновыми агентами;

- при отсутствии антиокардиолипиновых антител диагностирование эффективности проведенного лечения сифилитической инфекции или подтверждение обоснованности снятия с учета после диспансерного клинического и серологического контроля;

- при наличии антикардиолипиновых антител считать антибиотикотерапию неэффективной и требующей проведения дополнительного курса лечения и повторного контроля эффективности лечения этим же методом.

Преимущество заявляемого способа не связано с используемым широким набором антибиотиков и дозами их введения при регламентированном лечении сифилиса и позволяет индивидуально диагностировать при неэффективном лечении наличие персистирующих низкоантигенных морфологических форм возбудителя сифилиса и проводить курсы дополнительного лечения. Одновременно использование способа позволит предотвратить случаи диагностики развития поздних форм сифилитической инфекции и врожденного сифилиса, которые за последние 10 лет существенно увеличились [4, 5, 6].

Возможность практического осуществления заявляемого способа подтверждается примерами конкретного выполнения с использованной полной совокупности заявляемых признаков.

Пример 1. Контрольная группа - 15 здоровых кроликов с отрицательными сыворотками крови в серологических тестах на сифилис (РСК-УЗТА, РСК-К, РМП-К).

Всем 15 кроликам вводили очищенные протеины клеточных структур трепонем (ОПКСТ) в стандартных дозах. Максимальные титры антитрепонемных антител в РСК-УЗТА при первичном введении ОПКСТ антигена были 1:65±3. Сроки 100% негативации сывороток крови у всех взятых в опыт кроликов в РСК-УЗТА после введения антигена составили 7 месяцев.

10 кроликам ОПКСТ вводили повторно на фоне негативации сывороток крови в РСК-УЗТА, результаты определения максимальных средних титров 1:85±3 в РСК-УЗТА установлены через 3 недели.

Полученные результаты позволили установить при всех серологических исследованиях отсутствие в сыворотках крови антикардиолипиновых антител.

У 5 кроликов, которым ОПКСТ антиген повторно не вводился, сыворотки крови в РСК-УЗТА оставались отрицательными при всех сроках исследования.

Пример 2. Контрольная группа - 15 кроликов, зараженных экспериментальным сифилисом.

Лечение антибиотиками не проводилось.

Максимальные титры антител сывороток крови на 45 сутки после заражения были в РСК-УЗТА - 1:17,8±1, в РСК-К - 1:17,8±1, в РМП-К - 1:8,3±0,4.

Сроки 100% негативации сывороток крови в РСК-УЗТА и РСК-К установлены через 9,5 месяцев, а в РМП-К - через 8 месяцев после заражения.

10 кроликам на фоне 100% негативации сывороток крови в серологических тестах на сифилис введение ОПКСТ антигена в стандартных дозах позволило через 2 недели установить во всех сыворотках наличие антитрепонемных антител (средние титры 1:36±4), что естественно, и антикардиолипиновых антител (средние титры в РСК-К 1:5±0, а в РМП-К - 1:2±1), сохранявшиеся в 100% случаев в течение 2,5 и 2 месяцев соответственно, что свидетельствует об активизации сифилитической инфекции ОПКСТ антигеном, т.е. о наличии патогенных извитых форм возбудителя в организме.

5 кроликам ОПКСТ антиген не вводили. Их сыворотки крови при всех исследованиях на сифилис в течение 3 месяцев (срок наблюдения) оставались отрицательными.

Пример 3. Опытная группа (а) - 15 кроликов, зараженных экспериментальным сифилисом, которым на фоне 100% положительных результатах исследования сывороток крови во всех тестах на сифилис на 14 день после заражения ПБТ вводили прокаин пенициллин с 16 по 25 день (10 дней) по 300000 ME в сутки (3000000 ME - курсовая доза).

В процессе серологических исследований на 28 день после заражения ПБТ были установлены максимальные титры антител в серологических тестах на сифилис, показавшие в РСК-УЗТА в разведениях 1:16,5±2,1, в РСК-К - 1:14±1,3, вРМП-К - 1:7,6±1,4.

Сроки 100% негативации сывороток крови в РСК-УЗТА и в РСК-К составили 6 месяцев, а в РМП-К - 5 месяцев после заражения кроликов ПБТ.

10 кроликам на фоне 100% негативации сывороток во всех тестах на сифилис вводили ОПКСТ антиген в стандартной дозе и установили при всех исследованиях наличие только антитрепонемных антител (в РСК-УЗТА), максимальные титры которых были определены на 21 день и составили в РСК-УЗТА 1:58±3. У всех кроликов на протяжении исследований сывороток крови в РСК-К и РМП-К кардиолипиновые антитела не определялись.

5 кроликам этой группы ОПКСТ антиген не вводили. Серологические тесты при всех исследованиях их сывороток крови на сифилис оставались отрицательными в течение 3 месяцев.

Полученные данные у 10 кроликов опытной группы говорят о 100% эффективности проведенного лечения в курсовой дозе 3000000 ME прокаин пенициллина, установленной при контрольном введении ОПКСТ антигена на фоне отрицательных результатов серологических исследований в тестах на сифилис после его введения, по отсутствию в сыворотках крови антикардиолипиновых антител.

Пример 4. Опытная группа (б) - 15 кроликов с экспериментальным сифилисом, которым на фоне 100% положительных результатах исследования сывороток крови во всех тестах на сифилис (14 день после заражения этой группы ПБТ) с 16 по 25 день (10 дней) вводили прокаин пенициллин по 150000 ME в сутки (курсовая доза 1500000 ME).

В процессе серологических исследований на 28 день после заражения ПБТ были установлены максимальные титры специфических и неспецифических антител, которые в РСК-УЗТА составили в средних разведениях 1:15,5±4,3, в РСК-К - 1:13,5±4,3, в РМП-К - 1:8±1,7.

Сроки 100% негативации сывороток крови в РСК-УЗТА и в РСК-К были установлены на 6 месяц, а в РМП-К - на 5 месяц после заражения кроликов ПБТ.

Введение 10 кроликам на фоне 100% негативации сывороток крови в серологических тестах на сифилис ОПКСТ антигена в стандартной дозе, позволило установить на 28 день после введения антигена максимальные средние титры антитрепонемных антител в РСК-УЗТА в разведении 1:47±5,7. При этом у 5 кроликов при всех исследованиях сывороток крови в РСК-К и РМП-К антикардиолипиновые антитела не определялись.

Исследования оставшихся 5 кроликов дали 100% положительные результаты выявления антикардиолипиновых антител, полученные на 21 день после введения ОПКСТ антигена и которые сохранялись в РСК-К в течение 1,5 месяцев (средние титры 1:5±0), а в РМП-К в течение 1 месяца (средние титры 1:2±0).

5 кроликам этой группы ОПКСТ антиген не вводился. Серологические тесты при всех исследованиях их сывороток крови на сифилис оставались отрицательными в течение 3 месяцев (срок наблюдения).

Полученные результаты говорят о том, что у 5 кроликов лечение в курсовой дозе в 1500000 ME неэффективно и требует проведения дополнительного курса лечения сифилиса с последующим контролем его эффективности по предлагаемому способу.

Таким образом, изобретение практически осуществимо, его использование позволит установить эффективность проведенного лечения сифилиса путем введения на фоне отрицательных серологических реакций на сифилис с кардиолипином после лечения ОПКСТ антигена и по определению наличия или отсутствия в сыворотках крови обследуемых антикардиолипиновых антител осуществлять контроль лечения сифилиса.

При наличии в сыворотках крови антикардиолипиновых антител назначаются дополнительные курсы лечения и дополнительный контроль его эффективности, что в свою очередь исключит вероятность развития поздних клинических форм сифилиса.

Список использованной литературы

1. Приказ МЗ РФ №327 от 25.07.2003. Об утверждении протокола ведения больных «Сифилис» [п.п. 7.1.15; 7.2.15; 7.3.15].

2. Устименко Л.М. L-формы патогенной бледной трепонемы // Актуальные вопросы теоретической и практической медицины. Тез. доклада научно-практической конф. - Казань, 1983. - С.201-204.

3. Пожарская В.О с соавт. Влияние антигена из очищенных протеинов культуральных бледных трепонем на течение экспериментальной сифилитической инфекции у кроликов // Клин. дерматол. и венерол. - 2010. - №3 - С.64-69.

4. Кубанова А.А. Анализ эпидемиологической ситуации по заболеваемости инфекциями, передаваемыми половым путем… по данным официальной государственной статистики // Вестн. дерматол. и венерол. - 2008. - №5. - С.8-18.

5. Чеботарев В.В. Актуальные проблемы сифилидологии // Монография. Ставрополь, - 2005. - С.192-295.

6. Юлдашев К.А. с соавт. К вопросу скрытого сифилиса // III Всерос. конгресс дерматовенерол. Тез. научн. работ. Казань. 2009. - С.97-98.

Изобретение относится к области медицины. Для контроля эффективности лечения сифилиса после проведенного лечения с помощью стандартных серологических реакций с кардиолипиновыми антигенами на сифилис определяют отсутствие в сыворотке крови организма антикардиолипиновых антител. При отрицательных результатах серологических реакций с кардиолипиновыми антигенами на сифилис в организм вводят высокоспецифические полипептидные антигены клеточных структур культуральных или патогенных T.pallidum pallidum, полученные разными способами. Через интервал времени повторно определяют наличие или отсутствие в сыворотке крови организма антикардиолипиновых антител. При отсутствии в сыворотке крови антикардиолипиновых антител принимают решение об эффективности проведенного лечения. При наличии в сыворотке крови антикардиолипиновых антител принимают решение о неэффективности лечения - и необходимости повторного лечения. Способ повышает точность контроля эффективности лечения сифилиса. 4 пр.

Способ контроля эффективности лечения сифилиса, включающий определение после проведенного лечения с помощью стандартных серологических реакций с кардиолипиновыми антигенами на сифилис отсутствия в сыворотке крови организма антикардиолипиновых антител, отличающийся тем, что при отрицательных результатах серологических реакций с кардиолипиновыми антигенами на сифилис в организм вводят высокоспецифические полипептидные антигены клеточных структур культуральных или патогенных T.pallidum pallidum, полученные разными способами, определяют повторно через интервал времени наличие или отсутствие в сыворотке крови организма антикардиолипиновых антител, принимают решение об эффективности проведенного лечения при отсутствии в сыворотке крови антикардиолипиновых антител и неэффективности лечения - при наличии в сыворотке крови антикардиолипиновых антител и необходимости повторного лечения.