ПИРИДО [2,3-d] ПИРИМИДИНЫ, ПОЛЕЗНЫЕ В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ HCV, И СПОСОБЫ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ Российский патент 2012 года по МПК C07D471/04 A61K31/519 A61P31/14 

Настоящее изобретение относится к применению пиридо[2,3-d]пиримидинов в качестве ингибиторов репликации HCV, а также их применению в фармацевтических композициях, предназначенных для лечения инфекций HCV или борьбы с инфекциями HCV. Кроме того, настоящее изобретение относится к соединениям как таковым. Настоящее изобретение относится также к способам получения таких соединений, фармацевтическим композициям, включающим эти соединения, и комбинациям указанных соединений с другими агентами против HCV.

После его открытия в 1989 в качестве агента, принимающего участие в большинстве вирусных гепатитов не-А, не-В (Choo et al., Science 244, 359-362, 1989), вирус гепатита С (HCV) становится объектом значительного медицинского исследования (Lauer, G.M. and Walker, B.D., New Eng. J. Med. 345, 41-52, 2001). HCV является членом семейства вирусов семейства Flaviviridae, рода hepacivirus и тесно связан с родом flavivirus, который включают в себя ряд вирусов, принимающих участие в заболевании человека, таких как вирус Денге и вирус желтой лихорадки, и семейством pestivirus животных, которое включает в себя вирус бычьей вирусной диареи (BVDV). HCV является содержащим ±одноцепочечную РНК вирусом с геномом, имеющим приблизительно 9600 оснований. Геном включает в себя как 5'-, так и 3'-нетранслированные области, которые выбирают вторичные структуры РНК, и центральную открытую рамку считывания, которая кодирует один полипротеин приблизительно с 3010-3030 аминокислотами. Полипротеин состоит из десяти генных продуктов, которые генерируются из полипротеина-предшественника оркестрованным рядом со- и послетрансляционных эндопротеолитических расщеплений, опосредуемых как протеазами хозяина, так и вирусными протеазами. Вирусные структурные белки включают в себя коровый нуклеокапсидный белок и два оболочечных гликопротеина Е1 и Е2. Неструктурные (NS) белки выполняют некоторые существенные вирусные ферментативные функции (геликазы, полимеразы, протеазы), а также являются белками неизвестной функции. Репликация вирусного генома опосредуется РНК-зависимой РНК-полимеразой в виде неструктурного белка 5b (NS5B). Обнаружено, что помимо полимеразы функции геликазы и протеазы, обе из которых присущи бифункциональному белку NS3, являются существенными для репликации РНК HCV в моделях инфицированной шимпанзе (Kolykhalov, A.A., Mihalik, K., Feinstone, S.M., and Rice, C.M. J. Virol. 74, 2046-2051, 2000). Помимо серинпротеазы NS3 HCV кодирует также металлопротеиназу в области NS2.

HCV реплицируется преимущественно в гепатоцитах, но не является непосредственно цитопатическим, приводящим к персистентной инфекции. В частности, оказывается, что отсутствие сильной Т-лимфоцитной реакции и высокая предрасположенность вируса к мутированию стимулируют высокую степень хронической инфекции. Имеется 6 основных генотипов HCV и более чем 50 подтипов, которые различно распределены по географическим зонам. Тип 1 HCV является преобладающим генотипом в США и Европе. Например, тип 1 HCV является причиной 70-75 процентов всех HCV-инфекций в Соединенных Штатах. Экстенсивная генетическая гетерогенность HCV имеет важное диагностическое и клиническое значения, возможно, объясняя трудности в разработке вакцины и отсутствие реакции на терапию. Установлено, что 170 миллионов человек во всем мире инфицированы вирусом гепатита С (HCV). После начальной острой инфекции у большинства инфицированных индивидуумов развивается хронический гепатит, который может прогрессировать до фиброза печени, приводящего к циррозу, конечной стадии заболевания печени, и НСС (гепатоцеллюлярной карциноме) (National Institutes of Health Consensus Development Conference Statement: Management of Hepatitis C. Hepatology, 36, 5 Suppl. S3-S20, 2002). Цирроз печени из-за инфекции HCV является ответственным за приблизительно 10000 смертей в год только в США и является основной причиной для трансплантаций печени. Передача инфекции HCV может иметь место посредством контактирования с инфицированной кровью или продуктами крови, например, после переливания крови или внутривенного введения лекарственного средства. Введение диагностических тестов, применяемых при проведении скрининга крови, привело к понижающей тенденции в частоте инфицирования HCV после переливания крови. Однако, при условии медленного развития заболевания печени до конечной стадии, существующие инфекции будут продолжать представлять собой серьезное медицинское и экономическое бремя в течение десятилетий (Kim, W.R. Hepatology, 36, 5 Suppl. S30-S34, 2002).

Лечение данного хронического заболевания является неудовлетворенной клинической потребностью, поскольку современная терапия является только частично эффективной и ограничивается нежелательными побочными действиями.

Современные терапии инфекции HCV основаны на (пэгилированном) интерфероне-альфа (IFN-α) в комбинации с рибавирином. Эта комбинированная терапия обеспечивает устойчивую вирологическую реакцию у более чем 40% пациентов, инфицированных вирусами генотипа 1, и приблизительно у 80% пациентов, инфицированных генотипами 2 и 3. Помимо ограниченной эффективности для HCV типа 1, комбинированная терапия имеет значительные побочные действия и плохо переносится многими пациентами. Например, в исследованиях с регистрацией пэгилированного интерферона и рибавирина значительные побочные действия приводили к прекращению лечения у приблизительно 10-14 процентов пациентов. Основные побочные действия комбинированной терапии включают в себя подобные гриппу симптомы, гематологические аномальности и нейропсихиатрические симптомы. Разработка более эффективных, подходящих и переносимых лечений является основной задачей общественного здравоохранения.

Таким образом, существует большая потребность в лекарственных соединениях с низкой молекулярной массой, применение которых приводит к ингибированию репликации HCV.

Неожиданно обнаружено, что производные пиридо[2,3-d]пиримидинов проявляют антивирусную активность у млекопитающих, инфицированных HCV, в частности эти производные ингибируют репликацию HCV. Поэтому эти соединения являются полезными при лечении инфекций HCV или в борьбе с такими инфекциями у млекопитающих.

В US 2004/0038856 описаны производные хиназолина, которые являются ингибиторами рецептора киназы TGFβ-R1 и TGF-β-опосредуемой передачи сигнала. В WO 00/12497 описаны также производные хиназолина, которые являются ингибиторами TGF-β и/или р38-α-киназы.

Помимо этого, в WO 04/020584 описаны соединения, которые являются антагонистами активности рецептора хемокина, и способы получения таких соединений. Указанная патентная публикация включает в себя также фармацевтические композиции, содержащие эти соединения. Далее предложены способы лечения нарушений, связанных с рецептором хемокина CCR4, и лечения и профилактики астмы, ревматоидного артрита, псориаза, отторжения трансплантированного твердого органа или хронического обструктивного заболевания легких.

В WO 2003/059913 описаны ингибиторы Ро-киназы, их производные и их синтез. Указанные соединения являются полезными для ингибирования роста опухолей, лечения эректильной дисфункции и лечения других заболеваний, опосредуемых Ро-киназой, например коронарной болезни сердца.

В JP 2003/321472 описаны ингибиторы GRK, полезные для профилактики и лечения сердечной недостаточности.

Кроме того, в WO 95/19774 описаны бициклические гетероароматические соединения, которые ингибируют рецептор эпидермального фактора роста и родственные рецепторы и, особенно, ферментативную активность тирозинкиназы. Такие соединения являются полезными при подавлении роста опухолей, особенно рака молочной железы, где митогенез интенсивно вызывается членами семейства EGFR. Кроме того, указанные соединения являются полезными в качестве терапевтических агентов против заболеваний с пролиферативным избыточным ростом, включающих в себя, но не ограничивающихся перечисленным, начало синовиального паннуса при артрите, васкулярный рестеноз, псориаз и ангиогенез. Соединения, описанные в нем, являются также полезными при лечении панкреатита и заболевания почек и в качестве противозачаточного агента.

В патенте США 3873545 описаны замещенные производные пиридо[2,3-d]пиримидина, которые являются особенно полезными в качестве нейролептических и транквилизирующих агентов.

Osselaere et al. (1973, 1974) описали производные пиридо[2,3-d]пиримидина, в частности производные 4-амино-2-арилпиридо[2,3-d]пиримидина, обладающие противовоспалительными и спазмолитическими свойствами.

После начального воздействия вируса гепатита С РНК HCV можно детектировать в крови через 1-3 недели. За время в среднем 50 дней фактически у всех пациентов развивается повреждение клеток печени. Большинство пациентов являются бессимптомными и безжелтушными. Только у 25-23 процентов пациентов развивается недомогание, слабость или анорексия и некоторые становятся желтушными. Антитела против HCV (анти-HCV) почти неизменно становятся детектируемыми в течение срока болезни. Анти-HCV можно детектировать у 50-70 процентов пациентов в начале появления симптомов и приблизительно у 90 процентов пациентов через 3 месяца после начала инфекции. Инфекция HCV самоограничивается только в 15 процентах случаев. Выздоровление характеризуется исчезновением РНК HCV в крови и возвращением уровня ферментов печени к нормальному.

Приблизительно у 85 процентов HCV-инфицированных индивидуумов к 6 месяцам вирус отчетливо не обнаруживается, но развивается хронический гепатит с персистенцией, несмотря на иногда интермиттирующую виремию. Эта способность вызывать хронический гепатит является одним из наиболее поразительных признаков HCV-инфекции. Хронический гепатит С является обычно постепенно развивающимся процессом, прогрессирующим, если это вообще имеет место, при низкой скорости без симптомов или физических признаков у большинства пациентов в течение первых двух десятилетий после инфекции. Симптомы сначала появляются у многих пациентов с хроническим гепатитом С во время развития запущенного заболевания печени.

При хроническом гепатите воспалительные клетки проникают в портальные тракты и могут собираться также в небольшие скопления в паренхиме. Последний случай обычно сопровождается некрозом фокальных клеток печени. Край паренхимы и портальные тракты могут становиться воспаленными с некрозом клеток печени в этом месте (гепатит поверхности границы раздела). Если и когда заболевание прогрессирует, воспаление и гибель клеток печени может привести к фиброзу. Слабый фиброз ограничивается портальными трактами и непосредственно соседней паренхимой. Более тяжелый фиброз приводит к появлению мостика между портальными трактами и между портальными трактами и венами печени. Такой фиброз может развиться в цирроз, определяемый как состояние диффузного фиброза, при котором волокнистая перегородка разделяет скопление клеток печени в узелки. Степень фиброза определяет стадию заболевания, и ее можно надежно оценить. Тяжелый фиброз и некровоспалительные изменения предсказывают развитие до цирроза. После того как цирроз установлен, в результате могут появиться осложнения, которые являются вторичными к печеночной недостаточности и/или портальной гипертензии, такие как желтуха, асциты, кровотечение из варикозно расширенных вен и энцефалопатия. Развитие любого из этих осложнений является признаком перехода компенсированного цирроза в декомпенсированный цирроз.

Инфекция хронического гепатита С приводит к циррозу у, по меньшей мере, 20 процентов пациентов через два десятилетия после начала инфекции. Цирроз и конечная стадия заболевания печени могут иногда развиваться быстро, особенно среди пациентов с сопутствующим потреблением алкоголя. Хроническая инфекция HCV связана с повышенным риском рака печени. Преобладающая концепция состоит в том, что печеночно-клеточная карцинома (НСС) имеет место на фоне воспаления и генерации, связанной с хроническим гепатитом на протяжении времени приблизительно 3 или более десятилетий. Наиболее часто связанная с HCV HCC имеет место при циррозе.

Фиброз печени является одним из процессов, который имеет место, когда печень повреждается. Такое повреждение может быть результатом вирусной активности (например, хронического гепатита типа В или С) или других инфекций печени (например, паразитов, бактерий); химикатов (например, фармацевтических средств, рекреационных лекарственных средств, избыточного алкоголя, воздействия загрязняющих веществ); иммунных процессов (например, аутоиммунного гепатита); метаболических нарушений (например, нарушений, связанных с накапливанием липида, гликогена или металла) или роста раковой опухоли (первичного или вторичного рака печени). Фиброз является как симптомом повреждения печени, так и потенциального процесса, способствующего печеночной недостаточности из-за прогрессирующего цирроза печени.

Описано, что ингибирование киназ семейства TGFβ является полезным при лечении фибропролиферативных нарушений, в том числе фиброза печени. Однако, как указано выше, фиброз печени может быть вызван различными этиологическими агентами, включающими в себя вирус гепатита С. Наиболее важно, что фиброз печени является специфическим состоянием при развитии заболевания пациентов, инфицированных HCV.

Неожиданно было обнаружено, что соединения настоящего изобретения ингибируют репликацию HCV. Репликация HCV относится к процессу репродуцирования или образования копий РНК HCV. В настоящем изобретении репликация HCV относится как к репликации вируса HCV в целом, так и репликации генома РНК HCV.

Важным является лечение инфицированных HCV пациентов на ранних стадиях, чтобы избежать развития заболевания, тем самым предотвратить развитие у пациента хронического гепатита, фиброза печени, цирроза, печеночно-клеточной карциномы (НСС) или смерти.

Соединения изобретения являются ценными в том, что они могут уменьшить вирусную загрузку пациента HCV до неподдающихся обнаружению уровней.

Описание изобретения

Настоящее изобретение, таким образом, относится к применению соединения формулы (I) для изготовления лекарственного средства, полезного для ингибирования активности HCV у млекопитающего, инфицированного HCV. Такое соединение представляет собой пиридо[2,3-d]пиримидин формулы (I)

его N-оксид, соль, стереоизомерную форму, рацемическую смесь, пролекарство, сложный эфир или метаболит, где

R¹ представляет собой водород, амино, моно- или дизамещенный амино, где заместитель(и) аминогруппы может быть выбран из C_1-6алкила, С_2-6алкенила, С_2-6алкинила, С_1-4алкилоксиС_1-4алкила, диС_1-4алкиламиноС_1-4алкила, пиперидин-1-илС_1-4алкила, арилС_1-6алкила, где арильная группа может быть дополнительно замещена С_1-4алкилом или C_1-4алкокси;

L представляет собой -NR⁸-, -NR⁸-С_1-6алкандиил-, -NR⁸-CO-C_1-6алкандиил-, -NR⁸-SO₂-C_1-6алкандиил-, -O-, -O-C_1-6алкандиил-, -O-СО-, -O-CO-C_1-6алкандиил-, -S-, -S-C_1-6алкандиил- или

где обозначенное пунктиром кольцо вместе с N и Z образуют цикл Het¹, являющийся 5-8-членным, включающим в качестве членов кольца N и Z, и где указанное кольцо L присоединено к кольцу пиридо[2,3-d]пиримидина через атом азота;

Z представляет собой N или СН;

R² представляет собой водород, гидроксиС_1-6алкил, С_3-7циклоалкил, арил, Het¹ или Het², где указанные С_3-7циклоалкил, арил, Het¹ и Het², каждый независимо, необязательно замещены одним или несколькими заместителями, выбранными из С_1-4алкила, С_2-4алкенила, С_2-4алкинила, полигалогенС_1-4алкила, галогена, циано, нитро, -COR⁶, -COOR⁷, -CONR^4aR^4b, -OR⁷, -OCOR⁶, -OCONR^4aR^4b, -NR^4aR^4b, -NR^4aCOR⁶, -NR^4aCONR^4aR^4b, -NR^4aSOR⁵, -NR^4aSO₂R⁵, -SR⁵, -SOR⁷, -SO₂R⁵, -SO₃R⁷, -SO₂NR^4aR^4b, морфолин-4-ила, фенила, аминофенила и аминофенилкарбонила, и где С_1-4алкил может быть дополнительно замещен -COOR⁷;

R³ представляет собой C_1-6алкил, С_3-7циклоалкил, арил, арилC_1-6алкил, Het¹, Het² или Het²-C_1-6алкил, каждый из которых независимо необязательно замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из С_1-4алкила, С_2-4алкенила, С_2-4алкинила, полигалогенС_1-4алкила, галогена, циано, нитро, -COR⁶, -COOR⁷, -CONR^4aR^4b, -OR⁷, -OCOR⁶, -OCONR^4aR^4b, -NR^4aR^4b, -NR^4aCOR⁶, -NR^4aCOOR⁷, -NR^4aCONR^4aR^4b, -NR^4aSOR⁵, -NR^4aSO₂R⁵, -SR⁵, -SOR⁷, -SO₂R⁵, -SO₃R⁷ и -SO₂NR^4aR^4b;

каждый из R^4a и R^4b независимо представляет собой водород, С_1-4алкил, гидроксиС_1-4алкил, Het^l-C_1-4алкил, полигалогенС_1-4алкил, циано или нитро;

каждый R⁵ независимо представляет собой водород или С_1-4алкил;

каждый R⁶ независимо представляет собой водород или С_1-4алкил;

каждый R⁷ независимо представляет собой водород или C_1-4алкил; и

каждый R⁸ независимо представляет собой водород, C_1-10алкил, С_2-10алкенил, С_2-10алкинил, C_1-10алкилкарбонил, аминоС_1-10алкил, арил, арилкарбонил, арилС_1-10алкил, Het¹, Het¹C_1-6алкил или защищающую азот группу, где арил необязательно замещен 1-3 заместителями, выбранными из С_1-4алкила, С_2-4алкенила, С_2-4алкинила, C_1-4алкилкарбонила, фенила, С_1-4алкилфенила, фенилкарбонила, аминофенила, аминоС_1-4алкилфенила, аминофенилкарбонила, галогена, -OR⁶, -NR^4aR^4b, -SR⁵, -SOR⁵, -NR^4aSOR⁵, -NR^4aSO₂R⁵, -SO₂R⁵, -OCOR⁶, -NR^4aCOR⁶, -NR^4aCONR^4aR^4b, -NR^4aCOOR⁶, -OCONR^4aR^4b, -COOR⁶, -SO₃R⁶, -CONR^4aR^4b, -SO₂NR^4aR^4b, циано, полигалогенС_1-4алкила и нитро;

Het¹ как группа или часть группы представляет собой насыщенный или частично ненасыщенный моноциклический, бициклический или трициклический гетероцикл, который является предпочтительно 3-12-членным циклом, более предпочтительно 5-10-членным циклом и наиболее предпочтительно 5-8-членным циклом, который содержит один или несколько гетероатомов в качестве членов цикла, выбранных из атома азота, кислорода или серы, и который необязательно замещен на одном или нескольких атомах углерода C_1-6алкилом, C_1-6алкилокси, галогеном, гидрокси, оксо, необязательно моно- или дизамещенным амино, нитро, циано, полигалогенС_1-4алкилом, карбоксилом, C_1-6алкоксикарбонилом, С_3-7циклоалкилом, необязательно моно- или дизамещенным аминокарбонилом, метилтио, метилсульфонилом, арилом и насыщенным или частично ненасыщенным моноциклическим, бициклическим или трициклическим гетероциклом, который является 3-12-членным циклом, который содержит один или несколько гетероатомов в качестве членов цикла, выбранных из атома азота, кислорода или серы, и в результате чего необязательными заместителями на любой функциональной аминогруппе являются водород или С_1-4алкил;

Het² как группа или часть группы представляет собой ароматический моноциклический, бициклический или трициклический гетероцикл, который является 3-14-членным циклом, предпочтительно 5-10-членным циклом и более предпочтительно 5- или 6-членным циклом, который содержит один или несколько гетероатомов в качестве членов цикла, каждый из которых независимо выбран из атома азота, кислорода или серы, и который необязательно замещен на одном или нескольких атомах углерода C_1-6алкилом, необязательно моно- или дизамещенным аминоС_1-6алкилом, гидроксиС_1-6алкилом, C_1-6алкилокси, галогеном, гидрокси, необязательно моно- или дизамещенным амино, нитро, циано, полигалогенС_1-4алкилом, карбоксилом, C_1-6алкоксикарбонилом, С_3-7циклоалкилом, необязательно моно- или дизамещенным аминокарбонилом, метилтио, метилсульфонилом, арилом, Het¹ и ароматическим моноциклическим, бициклическим или трициклическим гетероциклом, являющимся 3-12-членным циклом; и в результате чего необязательными заместителями на любой функциональной аминогруппе являются водород или С_1-4алкил; и

арил как группа или часть группы представляет собой фенил.

В варианте осуществления настоящее изобретение относится к применению соединения формулы (II)

его N-оксида, соли, стереоизомерной формы, рацемической смеси, пролекарства, сложного эфира или метаболита, где

R¹, R³ и R⁸ имеют значения, указанные выше,

R⁹ представляет собой С_1-4алкил, С_2-4алкенил, С_2-4алкинил, полигалогенС_1-4алкил, галоген, циано, нитро, -COR⁶, -COOR⁷, -CONR^4aR^4b, -OR⁷, -OCOR⁶, -OCONR^4aR^4b, -NR^4aR^4b, -NR^4aCOR⁶, NR^4aCONR^4aR^4b, -NR^4aSOR⁵, -NR^4aSO₂R⁵, -SR⁵, -SOR⁷, -SO₂R⁵, -SO₃R⁷, -SO₂NR^4aR^4b, морфолин-4-ил, фенил, аминофенил или аминофенилкарбонил, и где С_1-4алкил может быть дополнительно замещен -COOR⁷; и n равно 0, 1, 2, 3 или 4,

для изготовления лекарственного средства, полезного для ингибирования активности HCV у млекопитающего, инфицированного HCV.

В варианте осуществления настоящее изобретение относится к применению соединения формулы (III)

его N-оксида, соли, стереоизомерной формы, рацемической смеси, пролекарства, сложного эфира или метаболита, где

R¹, L и R² имеют значения, указанные выше, и

R¹⁰ представляет собой С_1-4алкил, С_2-4алкенил, С_2-4алкинил, полигалогенС_1-4алкил, галоген, циано, нитро, -COR⁶, -COOR⁷, CONR^4aR^4b, -OR⁷, -OCOR⁶, -OCONR^4aR^4b, -NR^4aR^4b, -NR^4aCOR⁶, NR^4aCOOR⁷, -NR^4aCONR^4aR^4b, -NR^4aSOR⁵, -NR^4aSO₂R⁵, -SR⁵, -SOR⁷, -SO₂R⁵, -SO₃R⁷ или -SO₂NR^4aR^4b; и

m равно 0, 1, 2, 3 или 4,

для изготовления лекарственного средства, полезного для ингибирования активности HCV у млекопитающего, инфицированного HCV.

В варианте осуществления настоящее изобретение относится к применению соединения формулы (IV)

его N-оксида, соли, стереоизомерной формы, рацемической смеси, пролекарства, сложного эфира или метаболита, где

R¹, R⁸, R⁹, R¹⁰, m и n имеют значения, указанные выше,

для изготовления лекарственного средства, полезного для ингибирования активности HCV у млекопитающего, инфицированного HCV.

В варианте осуществления настоящее изобретение относится к применению соединения формулы (V)

его N-оксида, соли, стереоизомерной формы, рацемической смеси, пролекарства, сложного эфира или метаболита, где

R¹ и R⁸ имеют значения, указанные выше;

каждый из R¹¹ и R¹² независимо представляет собой водород, C_1-4алкил, С_2-4алкенил, С_2-4алкинил, полигалогенС_1-4алкил, галоген, циано, нитро, -COR⁶, -COOR⁷, -CONR^4aR^4b, -OR⁷, -OCOR⁶, -OCONR^4aR^4b, -NR^4aR^4b, -NR^4aCOR⁶, -NR^4aCONR^4aR^4b, -NR^4aSOR⁵, -NR^4aSO₂R⁵, -SR⁵, -SOR⁷, -SO₂R⁵, -SO₃R⁷, -SO₂NR^4aR^4b, морфолин-4-ил, фенил, аминофенил или аминофенилкарбонил, и где С_1-4алкил может быть дополнительно замещен -COOR⁷;

R¹³ представляет собой водород или галоген; и

R¹⁴ представляет собой галоген;

для изготовления лекарственного средства, полезного для ингибирования активности HCV у млекопитающего, инфицированного HCV.

В варианте осуществления настоящее изобретение относится к применению соединения формулы (V) для изготовления лекарственного средства для ингибирования репликации HCV у млекопитающего, инфицированного HCV. Указанное соединение является пиридо[2,3-d]пиримидином формулы (V)

его солью, стереоизомерной формой или рацемической смесью, где

R¹ представляет собой водород, амино, моно- или дизамещенный амино, где заместители амино могут быть выбраны из C_1-6алкила, C_1-4алкилоксиС_1-4алкила, диС_1-4алкиламиноС_1-4алкила, пиперидин-1-илС_1-4алкила, фенилС_1-6алкила, где фенил может быть дополнительно замещен С_1-4алкилом или С_1-4алкокси;

каждый R^4a и R^4b независимо представляет собой водород или С_1-4алкил;

каждый R⁵ независимо представляет собой водород или C_1-4алкил;

каждый R⁶ независимо представляет собой водород или C_1-4алкил;

каждый R⁷ независимо представляет собой водород или C_1-4алкил;

R⁸ представляет собой водород или защищающую азот группу;

каждый из R¹¹ и R¹² представляет собой независимо водород, С_1-4алкил, который может быть дополнительно замещен -COOR⁷, полигалогенС_1-4алкил, галоген, -COR⁶, -COOR⁷, -OR⁷, -NR^4aR^4b, NR^4aSO₂R⁵, -SR⁵, -SO₂R⁵ или -SO₂NR^4aR^4b;

R¹³ представляет собой водород или галоген; и

R¹⁴ представляет собой галоген.

В следующем аспекте изобретение относится к способу ингибирования репликации HCV у млекопитающего, инфицированного HCV, причем указанный способ включает в себя введение эффективного для ингибирования HCV количества соединения формулы (I), (II), (III), (IV) или (V), описываемой выше или дополнительно описываемой ниже.

В следующем аспекте изобретения относится к способу лечения млекопитающего, инфицированного HCV, причем указанный способ включает в себя введение эффективного для ингибирования HCV количества соединения формулы (I), (II), (III), (IV) или (V), описываемой выше или дополнительно описываемой ниже.

Следующий вариант осуществления относится к применению соединений формулы (V) для изготовления лекарственного средства для ингибирования репликации HCV у млекопитающего, инфицированного HCV. Указанные соединения являются птеридинами формулы (V) и их солями, стереоизомерными формами или рацемическими смесями, где

R¹ представляет собой водород, амино, моно- или дизамещенный амино, где заместители амино могут быть выбраны из C_1-6алкила, C_1-4алкилоксиС_1-4алкила, диС_1-4алкиламиноС_1-4алкила, пиперидин-1-илС_1-4алкила, фенилС_1-6алкила, где фенил может быть дополнительно замещен С_1-4алкилом или С_1-4алкокси;

каждый R⁵ независимо представляет собой водород или C_1-4алкил;

каждый R⁶ независимо представляет собой водород или C_1-4алкил;

каждый R⁷ независимо представляет собой водород или C_1-4алкил;

R⁸ представляет собой водород или защищающую азот группу;

каждый из R¹¹ и R¹² представляет собой независимо водород, С_1-4алкил, который может быть дополнительно замещен -COOR⁷, полигалогенС_1-4алкил, галоген, -COR⁶, -COOR⁷, -OR⁷, -SR⁵;

R¹³ представляет собой водород или галоген; и

R¹⁴ представляет собой галоген.

Таким образом, следующие варианты осуществления изобретения относятся к способу ингибирования репликации HCV у млекопитающего, инфицированного HCV, и способу лечения млекопитающего, инфицированного HCV, причем указанные способы включают в себя введение эффективного для ингибирования HCV количества соединения формулы (V), где R¹, R⁸, R¹¹, R¹², R¹³, R¹⁴ имеют значения, указанные в предыдущем абзаце.

Следующий вариант осуществления изобретения относится к применению соединений формулы (V) для изготовления лекарственного средства для ингибирования репликации HCV у млекопитающего, инфицированного HCV. Указанные соединения являются птеридинами формулы (V) и их солями, стереоизомерными формами или рацемическими смесями, где

R¹ представляет собой водород, амино, монозамещенный амино, где заместители амино могут быть выбраны из С_1-4алкилоксиС_1-4алкила, диС_1-4алкиламиноС_1-4алкила, пиперидин-1-илС_1-4алкила, фенилС_1-6алкила, где фенил может быть дополнительно замещен C_1-4алкокси;

каждый R⁵ представляет собой С_1-4алкил;

каждый R⁷ представляет собой С_1-4алкил;

R⁸ представляет собой водород или защищающую азот группу;

каждый из R¹¹ и R¹² представляет собой независимо водород, С_1-4алкил, который может быть дополнительно замещен -COOR⁷, полигалогенС_1-4алкил, галоген, -COOR⁷, -OR⁷, -SR⁵;

R¹³ представляет собой водород или галоген; и

R¹⁴ представляет собой галоген.

Таким образом, следующие варианты осуществления изобретения относятся к способу ингибирования репликации HCV у млекопитающего, инфицированного HCV, и способу лечения млекопитающего, инфицированного HCV, причем указанные способы включают в себя введение эффективного для ингибирования HCV количества соединения формулы (V), где R¹, R⁸, R¹¹, R¹², R¹³, R¹⁴ имеют значения, указанные в предыдущем абзаце.

Следующий вариант осуществления изобретения относится к применению соединений формулы (V) для изготовления лекарственного средства для ингибирования репликации HCV у млекопитающего, инфицированного HCV. Указанные соединения являются птеридинами формулы (V) и их солями, стереоизомерными формами или рацемическими смесями, где

R¹ представляет собой водород, амино, монозамещенный амино, где заместители амино могут быть выбраны из С_1-4алкилоксиС_1-4алкила, пиперидин-1-илС_1-4алкила, фенилС_1-6алкила, где фенильная группа может быть дополнительно замещена С_1-4алкокси;

каждый R⁵ представляет собой С_1-4алкил;

R⁸ представляет собой водород или защищающую азот группу;

каждый из R¹¹ и R¹² представляет собой независимо водород, С_1-4алкил, который может быть дополнительно замещен -COOR⁷, галоген, -OR⁷ или -SR⁵;

R¹³ представляет собой водород или галоген; и

R¹⁴ представляет собой галоген.

Таким образом, следующие варианты осуществления изобретения относятся к способу ингибирования репликации HCV у млекопитающего, инфицированного HCV, и способу лечения млекопитающего, инфицированного HCV, причем указанные способы включают в себя введение эффективного для ингибирования HCV количества соединения формулы (V), где R¹, R⁸, R¹¹, R¹², R¹³, R¹⁴ имеют значения, указанные в предыдущем абзаце.

Следующий вариант осуществления изобретения относится к применению соединений формулы (V) для изготовления лекарственного средства для ингибирования репликации HCV у млекопитающего, инфицированного HCV. Указанные соединения являются птеридинами формулы (V) и их солями, стереоизомерными формами или рацемическими смесями, где

R¹ представляет собой водород или амино;

каждый R⁵ представляет собой С_1-4алкил;

R⁸ представляет собой водород или защищающую азот группу;

каждый R¹¹ и R¹² представляет собой независимо водород, C_1-4алкил, -OR⁷ или -SR⁵;

R¹³ представляет собой водород или галоген; и

R¹⁴ представляет собой галоген.

Таким образом, следующие варианты осуществления изобретения относятся к способу ингибирования репликации HCV у млекопитающего, инфицированного HCV, и способу лечения млекопитающего, инфицированного HCV, причем указанные способы включают в себя введение эффективного для ингибирования HCV количества соединения формулы (V), где R¹, R⁸, R¹¹, R¹², R¹³, R¹⁴ имеют значения, указанные в предыдущем абзаце.

Способ лечения клинических состояний, относящихся к инфекции HCV, у млекопитающего, причем указанный способ включает в себя введение эффективного для ингибирования HCV количества соединения формулы (V), где R¹, R⁸, R¹¹, R¹², R¹³, R¹⁴ имеют значения, указанные ниже.

Способ, как в предыдущем абзаце, где клинические состояния являются другими, чем фиброз печени.

Соединения формул (I), (II), (III), (IV) и (V) обнаруживают активность против вируса HCV и поэтому являются полезными в качестве лекарственного средства и для изготовления лекарственного средства для профилактики, лечения или подавления инфекции или заболевания, связанного с инфекцией HCV.

Соединения формул (I), (II), (III), (IV) и (V) обнаруживают активность против вируса HCV и поэтому являются полезными в качестве лекарственного средства и при изготовлении лекарственного средства для профилактики, лечения или подавления клинических состояний, связанных с инфекцией HCV, другого, чем фиброз печени.

Термин «C_1-2алкил» как группа или часть группы означает насыщенные углеводородные радикалы с неразветвленной или разветвленной цепью, имеющие 1-2 атома углерода, такие как, например, метил, этил и т.п.

Термин «С_1-4алкил» как группа или часть группы означает насыщенные углеводородные радикалы с неразветвленной или разветвленной цепью, имеющие 1-4 атома углерода, такие как, например, группы, указанные для С_1-2алкила, и пропил, бутил, 2-метилпропил и т.п.

Термин «C_1-6алкил» как группа или часть группы означает насыщенные углеводородные радикалы с неразветвленной или разветвленной цепью, имеющие 1-6 атомов углерода, такие как, например, группы, указанные для С_1-4алкила, и пентил, гексил, 2-метилбутил, 3-метилпентил и т.п.

Термин «C_1-10алкил» как группа или часть группы означает насыщенные углеводородные радикалы с неразветвленной или разветвленной цепью, имеющие 1-10 атомов углерода, такие как, например, группы, указанные для C_1-6алкила, и гептил, октил, нонил, децил и т.п.

Термин «С_2-4алкенил» как группа или часть группы означает углеводородные радикалы с неразветвленной или разветвленной цепью, имеющие насыщенные углерод-углеродные связи и, по меньшей мере, одну двойную связь и имеющие от 2 или 4 атомов углерода, такие как, например, этенил, проп-1-енил, бут-1-енил, бут-2-енил и т.п. Предпочтительными являются С_2-4алкенилы, имеющие одну двойную связь.

Термин «С_2-6алкенил» как группа или часть группы означает углеводородные радикалы с неразветвленной или разветвленной цепью, имеющие насыщенные углерод-углеродные связи и, по меньшей мере, одну двойную связь и имеющие от 2 или 6 атомов углерода, такие как, например, группы, указанные для С_2-4алкенила, и пент-1-енил, пент-2-енил, гекс-1-енил, гекс-2-енил, гекс-3-енил, 1-метилпент-2-енил и т.п. Предпочтительными являются С_2-6алкенилы, имеющие одну двойную связь.

Термин «С_2-10алкенил» как группа или часть группы означает углеводородные радикалы с неразветвленной или разветвленной цепью, имеющие насыщенные углерод-углеродные связи и, по меньшей мере, одну двойную связь и имеющие от 2 или 10 атомов углерода, такие как, например, группы, указанные для С_2-6алкенила, и гепт-1-енил, гепт-2-енил, 2-метилгепт-1-енил, окт-3-енил, нон-4-енил, 1-метилнон-2-енил и т.п. Предпочтительными являются С_2-10алкенилы, имеющие одну двойную связь.

Термин «С_2-4алкинил» как группа или часть группы означает углеводородные радикалы с неразветвленной или разветвленной цепью, имеющие насыщенные углерод-углеродные связи и, по меньшей мере, одну тройную связь и имеющие от 2 или 4 атомов углерода, такие как, например, этенил, проп-1-инил, бут-1-инил, бут-2-инил и т.п. Предпочтительными являются С_2-4алкинилы, имеющие одну тройную связь.

Термин «С_2-6алкинил» как группа или часть группы означает углеводородные радикалы с неразветвленной или разветвленной цепью, имеющие насыщенные углерод-углеродные связи и, по меньшей мере, одну тройную связь и имеющие от 2 или 6 атомов углерода, такие как, например, группы, указанные для С_2-4алкинила, и пент-1-инил, пент-2-инил, гекс-1-инил, гекс-2-инил, гекс-3-инил, 1-метилпент-2-инил, пент-2-ен-4-инил и т.п. Предпочтительными являются С_2-6алкинилы, имеющие одну тройную связь.

Термин «С_2-10алкинил» как группа или часть группы означает углеводородные радикалы с неразветвленной или разветвленной цепью, имеющие насыщенные углерод-углеродные связи и, по меньшей мере, одну тройную связь и имеющие от 2 или 10 атомов углерода, такие как, например, группы, указанные для С_2-6алкинила, и гепт-1-инил, гепт-2-инил, 2-метилгепт-1-инил, окт-3-инил, нон-4-инил, 1-метилнон-2-инил и т.п. Предпочтительными являются С_2-10алкинилы, имеющие одну тройную связь.

Термин «C_1-6алкандиил» как группа или часть группы означает двухвалентные углеводородные радикалы с неразветвленной или разветвленной цепью, имеющие 1-6 атомов углерода, такие как, например, метандиил, 1,2-этандиил или 1,1-этандиил, 1,3-пропандиил, 1,3-бутандиил, 1,4-бутандиил, 1,3-пентандиил, 1,5-пентандиил, 1,4-гександиил, 1,6-гександиил и т.п.

Термин «С_3-7циклоалкил» является родовым для циклопропила, циклобутила, циклопентила, циклогексила и циклогептила.

Предполагается, что термин «арил» как группа или часть группы включает в себя фенил или нафтил. В предпочтительном варианте осуществления термин «арил» как группа или часть группы является фенилом.

Термин «галоген» является родовым для фтора, хлора, брома или йода.

Применяемый выше и ниже по контексту термин «полигалогенС_1-4алкил» как группа или часть группы означает моно- или полигалогензамещенный С₁-С₄алкил, например 1,1,1-трифторэтил, 1,1-дифторэтил, полигалогенметильные группы, указанные ниже, и т.п. Предпочтительной подгруппой полигалогенС_1-4алкила является полигалогенметил, где последний как группа или часть группы означает моно- или полигалогензамещенный метил, в частности метил с одним или несколькими атомами фтора, например дифторметил или трифторметил. В случае, когда более чем один атом галогена присоединен к алкильной группе в определении полигалогенметила или полигалогенС_1-4алкила, они могут быть одинаковыми или разными.

Термин «защищающая азот группа» относится к аминозащитной группе, такой как, например, C_1-10алкоксикарбонил, арилС_1-10алкоксикарбонил, подобный бензоилу, анизоил-, изобутироил-, ацетил- или трет-бутилбензоилу (Breipohl et al. (1997) Tetrahedron 53, 14671-14686). Защищающей азот группой может быть также лабильная под действием кислоты защищающая азот группа, такая как диметокситритил. В одном варианте осуществления защищающая азот группа выбрана из C_1-6алкилоксикарбонила, арилметоксикарбонила, трифторацетила и арилметила. В другом варианте осуществления защищающей азот группой является трет-бутоксикарбонил, бензилоксикарбонил, бензил или трифторметил.

Следует также отметить, что положения радикалов на любой молекулярной части, применяемой в определениях, если не оговорено особо, могут быть где угодно на такой части, пока она является химически стабильной. Например, пиридил включают в себя 2-пиридил, 3-пиридил и 4-пиридил; пентил включает в себя 1-пентил, 2-пентил и 3-пентил.

Когда любой символ (например, галоген или С_1-4алкил) встречается более чем один раз в любой составляющей, каждое определение является независимым.

Имеется в виду, что N-оксидные формы данных соединений включают в себя любое из соединений настоящего изобретения, у которого один или несколько атомов азота окислены в так называемый N-оксид.

Для терапевтического применения солями соединений настоящего изобретения являются соли, у которых противоион является фармацевтически или физиологически приемлемым. Однако соли, имеющие фармацевтически неприемлемый противоион, могут найти также применение, например, при получении или очистке фармацевтически приемлемого соединения формулы (I), (II), (III), (IV) или (V). Все соли, независимо от того, являются ли они фармацевтически приемлемыми или нет, включены в пределы настоящего изобретения.

Фармацевтически приемлемые или физиологически переносимые аддитивные солевые формы, которые могут образовывать соединения настоящего изобретения, можно удобно получить с применением подходящих кислот, таких как, например неорганические кислоты, такие как галогеноводородные кислоты, например, хлористоводородная или бромистоводородная кислота, серная, гемисерная, азотная, фосфорная и подобные кислоты; или органические кислоты, такие как, например, уксусная, аспарагиновая, додецилсерная, гептановая, гексановая, бензойная, никотиновая, пропановая, гидроксиуксусная, молочная, пировиноградная, щавелевая, малоновая, янтарная, малеиновая, фумаровая, яблочная, винная, лимонная, метансульфоновая, этансульфоновая, бензолсульфоновая, п-толуолсульфоновая, цикламиновая, салициловая, п-аминосалициловая, памоевая и подобные кислоты.

Наоборот, указанные формы кислотно-аддитивных солей можно превратить обработкой подходящим основанием в форму свободного основания.

Соединения формулы (I), (II), (III), (IV) или (V), содержащие кислотный протон, можно также превратить в форму их аддитивной соли с основанием нетоксичного металла или амина обработкой подходящими органическими и неорганическими основаниями. Формы подходящих солей с основаниями включают в себя, например, аммониевые соли, соли щелочных и щелочноземельных металлов, например соли лития, натрия, калия, магния, кальция и т.п., соли с органическими основаниями, например соли бензатина, N-метил-D-глюкамина, гидрабамина, и соли с аминокислотами, такими как, например, аргинин, лизин и т.п. В альтернативном случае, когда в соединении формулы (I), (II), (III), (IV) или (V) присутствует карбоксильная часть, соединение можно также доставлять в виде соли с фармацевтически приемлемым катионом.

Наоборот, указанные формы основно-аддитивных солей можно превратить обработкой подходящей кислотой в форму свободной кислоты.

Термин «соли» включает в себя также гидраты и аддитивные формы с растворителем, которые соединения настоящего изобретения способны образовывать. Примерами таких форм являются, например, гидраты, алкоголяты и т.п.

В случае, когда любой из заместителей соединений формулы (I), (II), (III), (IV) или (V) содержит хиральные центры, как это действительно содержат некоторые заместители, соединения формулы (I), (II), (III), (IV) или (V) включают в себя все их стереоизомерные формы как в виде выделенных стереоизомеров, так и смесей этих стереоизомерных форм.

Термин стереохимические изомерные формы соединений настоящего изобретения, применяемый здесь ранее, означает все возможные соединения, составленные из тех же атомов, связанных той же самой последовательностью связей, но имеющие разные трехмерные структуры, которые не являются взаимозаменяемыми и которыми соединения настоящего изобретения могут обладать. Если не оговорено или не указано особо, химическое определение соединения включает в себя смесь всех возможных стереохимически изомерных форм, которые указанное соединение может иметь. Указанная смесь может содержать все диастереомеры и/или энантиомеры основной молекулярной структуры указанного соединения. Имеется в виду, что все стереохимически изомерные формы соединений настоящего изобретения как в чистой форме, так и в смеси друг с другом включены в объем настоящего изобретения.

Чистые стереоизомерные формы соединений и промежуточных соединений, указываемые здесь, означают изомеры, по существу не содержащие другие энантиомерные или диастереомерные формы такой же основной молекулярной структуры указанных соединений или промежуточных соединений. В частности, термин «стереохимически чистый» относится к соединениям или промежуточным соединениям, имеющим стереоизомерный избыток, по меньшей мере, 80% (т.е. минимум 90% одного изомера и максимум 10% других возможных изомеров) вплоть до стереоизомерного избытка 100% (т.е. 100% одного изомера и ни одного другого), более конкретно, соединениям или промежуточным соединениям, имеющим стереоизомерный избыток от 90% вплоть до 100%, еще более конкретно, имеющим стереоизомерный избыток от 94% вплоть до 100%, и наиболее конкретно, имеющим стереоизомерный избыток от 97% вплоть до 100%. Термины «энантиомерно чистый» и «диастереомерно чистый» следует понимать аналогичным образом, но в таком случае имеющим отношение к энантиомерному избытку, соответственно диастереомерному избытку рассматриваемой смеси.

Чистые стереоизомерные формы соединений и промежуточных соединений данного изобретения можно получить применением известных в данной области методик. Например, энантиомеры можно разделить друг от друга селективной кристаллизацией их диастереомерных солей с оптически активными кислотами или основаниями. Примерами их являются винная кислота, дибензоилвинная кислота, дитолуоилвинная кислота и камфорасульфоновая кислота. В альтернативном случае энантиомеры можно разделить хроматографическими методиками с применением хиральных неподвижных фаз. Указанные чистые стереохимически изомерные формы можно также получить из соответствующих чистых стереохимически изомерных форм подходящих исходных соединений при условии, что реакция протекает стереоспецифически. Если желательным является определенный стереоизомер, указанное соединение можно предпочтительно синтезировать стереоспецифическими методами получения. В этих методах преимущественно применяют энантиомерно чистые исходные вещества.

Диастереомерные рацематы формулы (I), (II), (III), (IV) или (V) можно получить отдельно общепринятыми методами. Подходящими физическими методами разделения, которые можно применять преимущественно, являются, например, селективная кристаллизация и хроматография, например колоночная хроматография.

Настоящие соединения могут существовать также в их таутомерных формах. Предполагается, что такие формы, хотя они точно не указаны в приведенной выше формуле, включены в объем настоящего изобретения. Например, в определении Het² 1,2,4-оксадиазол может быть замещен, например, гидрокси- или меркаптогруппой в 5-положении, поэтому в данном случае находится в равновесии с его соответствующей таутомерией формой, как показано ниже.

Термин «пролекарство», применяемый на всем протяжении текста, означает фармакологически приемлемые производные, такие как сложные эфиры, амиды и фосфаты, так что образовавшийся in vivo продукт биопревращения этого производного является активным лекарственным средством, указываемым для соединений формулы (I), (II), (III), (IV) или (V). Публикация Goodman и Gilman (The Pharmacological Basis of Therapeutics, 8^th ed, McGraw-Hill, Int. Ed. 1992, "Biotransformation of Drugs", pp.13-15), описывающая в общем пролекарства, таким образом включена здесь в качестве ссылки. Пролекарства соединения настоящего изобретения получают модификацией функциональных групп, присутствующих в соединении, таким образом, чтобы продукты модификации расщеплялись либо обычной манипуляцией, либо in vivo, с образованием «родительского» соединения. Например, заместитель, содержащий сульфгидрил, можно сочетать с носителем, который делает соединение биологически неактивным до тех пор, пока носитель не удаляется эндогенными ферментами, например ферментами, прицельно направленными к конкретному рецептору или месту в организме субъекта.

Пролекарства характеризуются превосходной водной растворимостью, повышенной биологической доступностью и легко преобразуются в активные ингибиторы in vivo.

Предполагается, что настоящее изобретение включает в себя все изотопы атомов, присутствующих в настоящих соединениях. Изотопы включают в себя такие атомы, имеющие такое же атомное число, но другие массовые числа. В качестве общего примера, но без ограничения перечисленным, изотопы водорода включают в себя тритий и дейтерий. Изотопы углерода включают в себя С-13 и С-14.

Имеется в виду, что всякий раз применяемый ниже термин «соединения формулы (I)», «соединения формулы (II)», «соединения формулы (III)», «соединения формулы (IV)», «соединения формулы (V)» или «настоящие соединения» или подобный термин включает в себя соединения общих формул (I), (II), (III), (IV) и (V), их N-оксиды, соли, стереоизомерные формы, рацемические смеси, пролекарства, сложные эфиры и метаболиты, а также их кватернизованные азотистые аналоги. Представляющей интерес подгруппой соединений настоящего изобретения или любой их подгруппой являются их N-оксиды и все стереоизомерные формы.

Вариантами осуществления настоящего изобретения являются такие соединения формулы (I), (II), (III), (IV) или (V), любая из подгрупп соединений формулы (I), (II), (III), (IV) или (V), у которых 4-пиридил образует N-оксид, например N-оксид соединения №21, или применение указанных соединений для изготовления лекарственного средства, полезного для ингибирования активности HCV.

N-Оксид соединения №21

Следующими вариантами осуществления настоящего изобретения являются такие соединения формулы (I), (II), (III), (IV) или (V), любая из подгрупп соединений формулы (I), (II), (III), (IV) или (V), где соединение формулы (I), (II), (III), (IV) или (V) находится в виде кислотно-аддитивной соли, причем соль предпочтительно выбрана из гидрохлорида, гидробромида, трифторацетата, фумарата, хлорацетата, метансульфоната, оксалата, ацетата и цитрата, или применение указанных соединений для изготовления лекарственного средства, полезного для ингибирования активности HCV.

Следующими вариантами осуществления настоящего изобретения являются такие соединения формулы (I), (II), (III), (IV) или (V), любая из подгрупп соединений формулы (I), (II), (III), (IV) или (V), у которых R¹ независимо представляет собой водород, амино, моно- или дизамещенный амино, где заместитель(и) аминогруппы может быть выбран из C_1-6алкила, С_1-4алкилоксиС_1-4алкила, диС_1-4алкиламиноС_1-4алкила, пиперидин-1-илС_1-4алкила, фенилС_1-4алкила, где фенильная группа может быть дополнительно замещена С_1-4алкилом или С_1-4алкокси, или применение указанных соединений для изготовления лекарственного средства, полезного для ингибирования активности HCV.

Следующими вариантами осуществления настоящего изобретения являются такие соединения формулы (I), (II), (III), (IV) или (V), любая из подгрупп соединений формулы (I), (II), (III), (IV) или (V), у которых R¹ независимо представляет собой водород, амино, моно- или дизамещенный амино, где заместитель(и) аминогруппы может быть выбран из С_1-4алкила, С_1-4алкилоксиС_1-4алкила, диС_1-4алкиламиноС_1-4алкила, пиперидин-1-илС_1-4алкила, фенилС_1-4алкила, где фенильная группа может быть дополнительно замещена С_1-4алкокси, или применение указанных соединений для изготовления лекарственного средства, полезного для ингибирования активности HCV.

Следующими вариантами осуществления настоящего изобретения являются такие соединения формулы (I), (II), (III), (IV) или (V), любая из подгрупп соединений формулы (I), (II), (III), (IV) или (V), у которых R¹ независимо представляет собой водород, амино, моно- или дизамещенный амино, где заместитель(и) аминогруппы может быть выбран из С_1-2алкила, С_1-2алкилоксиС_1-2алкила, диС_1-2алкиламиноС_1-2алкила, пиперидин-1-илС_1-2алкила, фенилС_1-2алкила, где фенильная группа может быть дополнительно замещена С_1-2алкокси, или применение указанных соединений для изготовления лекарственного средства, полезного для ингибирования активности HCV.

Следующими вариантами осуществления настоящего изобретения являются такие соединения формулы (I), (II), (III), (IV) или (V), любая из подгрупп соединений формулы (I), (II), (III), (IV) или (V), у которых R¹ независимо представляет собой водород, амино, моно- или дизамещенный амино, где заместитель(и) аминогруппы может быть выбран из метила, метилоксиэтила, диметиламиноэтила, пиперидин-1-илэтила, фенилметила, где фенильная группа может быть дополнительно замещена метокси, или применение указанных соединений для изготовления лекарственного средства, полезного для ингибирования активности HCV.

Следующими вариантами осуществления настоящего изобретения являются такие соединения формулы (I), (II), (III), (IV) или (V), любая из подгрупп соединений формулы (I), (II), (III), (IV) или (V), у которых R¹ независимо представляет собой водород, амино или монозамещенный амино, где заместитель аминогруппы может быть выбран из метилоксиэтила, диметиламиноэтила, пиперидин-1-илэтила и фенилметила, где фенильная группа может быть дополнительно замещена метокси, или применение указанных соединений для изготовления лекарственного средства, полезного для ингибирования активности HCV.

Следующими вариантами осуществления настоящего изобретения являются такие соединения формулы (I), (II), (III), (IV) или (V), любая из подгрупп соединений формулы (I), (II), (III), (IV) или (V), у которых R¹ независимо представляет собой водород или амино, или применение указанных соединений для изготовления лекарственного средства, полезного для ингибирования активности HCV.

Следующими вариантами осуществления настоящего изобретения являются такие соединения формулы (I), (II), (III), (IV) или (V), любая из подгрупп соединений формулы (I), (II), (III), (IV) или (V), у которых R¹ представляет собой амино, моно- или дизамещенный амино, где заместитель(и) аминогруппы может быть выбран из C_1-6алкила, С_1-4алкилоксиС_1-4алкила, диС_1-4алкиламиноС_1-4алкила, пиперидин-1-илС_1-4алкила, фенилС_1-6алкила, где фенильная группа может быть дополнительно замещена С_1-4алкилом или C_1-4алкокси, или применение указанных соединений для изготовления лекарственного средства, полезного для ингибирования активности HCV.

Следующими вариантами осуществления настоящего изобретения являются такие соединения формулы (I), (II), (III), (IV) или (V), любая из подгрупп соединений формулы (I), (II), (III), (IV) или (V), у которых R⁸ представляет собой водород, C_1-10алкил, аминоС_1-10алкил, фенилС_1-10алкил, Het¹C_1-6алкил или защищающую азот группу, где фенил необязательно замещен 1-3 заместителями, выбранными из С_1-4алкила, С_1-4алкилкарбонила, галогена, -OR⁶, NR^4aR^4b, -SR⁵ и полигалогенС_1-4алкила, или применение указанных соединений для изготовления лекарственного средства, полезного для ингибирования активности HCV.

Следующими вариантами осуществления настоящего изобретения являются такие соединения формулы (I), (II), (III), (IV) или (V), любая из подгрупп соединений формулы (I), (II), (III), (IV) или (V), у которых R⁸ представляет собой водород, C_1-6алкил, аминоС_1-6алкил, фенилС_1-6алкил, Het¹C_1-6алкил или C_1-6алкоксикарбонил, или применение указанных соединений для изготовления лекарственного средства, полезного для ингибирования активности HCV.

Следующими вариантами осуществления настоящего изобретения являются такие соединения формулы (I), (II)/ (III), (IV) или (V), любая из подгрупп соединений формулы (I), (II), (III), (IV) или (V), у которых R⁸ представляет собой водород, C_1-6алкил, аминоС_1-6алкил, фенилС_1-4алкил, пирролидин-1-илС_1-4алкил или C_1-6алкоксикарбонил, или применение указанных соединений для изготовления лекарственного средства, полезного для ингибирования активности HCV.

Следующими вариантами осуществления настоящего изобретения являются такие соединения формулы (V), любая из подгрупп соединений формулы (V), у которых каждый из R¹¹ и R¹² независимо представляет собой водород, С_1-4алкил, полигалогенС_1-4алкил, галоген, -COR⁶, -COOR⁷, -OR⁷, -NR^4aR^4b или -SR⁵, и где С_1-4алкил может быть дополнительно замещен -COOR⁷, или применение указанных соединений для изготовления лекарственного средства, полезного для ингибирования активности HCV.

Следующими вариантами осуществления настоящего изобретения являются такие соединения формулы (V), любая из подгрупп соединений формулы (V), у которых каждый из R¹¹ и R¹² независимо представляет собой водород, метил, трифторметил, галоген, -COR⁶, -COOR⁷, -OR⁷ или -SR⁵, и где метил может быть дополнительно замещен -COOR⁷, или применение указанных соединений для изготовления лекарственного средства, полезного для ингибирования активности HCV.

Следующими вариантами осуществления настоящего изобретения являются такие соединения формулы (V), любая из подгрупп соединений формулы (V), у которых R¹³ представляет собой водород или фтор, или применение указанных соединений для изготовления лекарственного средства, полезного для ингибирования активности HCV.

Следующими вариантами осуществления настоящего изобретения являются такие соединения формулы (V), любая из подгрупп соединений формулы (V), у которых R¹⁴ представляет собой хлор, бром или фтор, или применение указанных соединений для изготовления лекарственного средства для ингибирования активности HCV.

Следующими вариантами осуществления настоящего изобретения являются такие соединения формулы (V), любая из подгрупп соединений формулы (V) и их N-оксиды, соли, стереоизомерные формы, рацемические смеси, пролекарства, сложные эфиры и метаболиты, у которых

R¹ независимо представляет собой водород, амино, моно- или дизамещенный амино, где заместитель(и) аминогруппы может быть выбран из C_1-6алкила, С_1-4алкилоксиС_1-4алкила, диС_1-4алкиламиноС_1-4алкила, пиперидин-1-илС_1-4алкила, фенилС_1-6алкила, где фенильная группа может быть дополнительно замещена С_1-4алкилом или C_1-4алкокси,

R^4a, R^4b, R⁵, R⁶, R⁷ имеют значения, указанные выше для соединений формулы (V);

R⁸ представляет собой водород или защищающую азот группу;

каждый из R¹¹ и R¹² независимо представляет собой водород, С_1-4алкил, полигалогенС_1-4алкил, галоген, -COR⁶, -COOR⁷, -OR⁷, NR^4aR^4b, -NR^4aSO₂R⁵, -SR⁵, -SO₂R⁵ или -SO₂NR^4aR^4b;

R¹³ представляет собой водород или галоген;

R¹⁴ представляет собой галоген;

при условии, что два следующих соединения:

- 2-(5-хлор-2-фторфенил)-N-4-пиридинилпиридо[2,3-d]пиримидин-4-амин,

- 2-(5-хлор-2-фторфенил)-N-(3-метил-4-пиридинил)пиридо[2,3-d]пиримидин-4-амин,

исключены;

или применение указанных соединений для изготовления лекарственного средства, полезного для ингибирования активности HCV.

Следующими вариантами осуществления настоящего изобретения являются такие соединения формулы (V), любая из подгрупп соединений формулы (V) и их N-оксиды, соли, стереоизомерные формы, рацемические смеси, пролекарства, сложные эфиры и метаболиты, у которых

R¹ представляет собой амино или моно- или дизамещенный амино, где заместители амино могут быть выбраны из С_1-6алкила, C_1-4алкилоксиС_1-4алкила, диС_1-4алкиламиноС_1-4алкила, пиперидин-1-илС_1-4алкила, фенилС_1-6алкила, где фенильная группа может быть дополнительно замещена С_1-4алкилом или С_1-4алкокси;

каждый из R^4a и R^4b независимо представляет собой водород или С_1-4алкил;

каждый R⁵ независимо представляет собой водород или C_1-4алкил;

каждый R⁶ независимо представляет собой водород или С_1-4алкил;

каждый R⁷ независимо представляет собой водород или С_1-4алкил;

R⁸ представляет собой водород или защищающую азот группу;

каждый из R¹¹ и R¹² независимо представляет собой водород, С_1-4алкил, который может быть дополнительно замещен -COOR⁷, полигалогенС_1-4алкил, галоген, -COR⁶, -COOR⁷, -OR⁷, -NR^4aR^4b, NR^4aSO₂R⁵, -SR⁵, -SO₂R⁵ или -SO₂NR^4aR^4b;

R¹³ представляет собой водород или галоген; и

R¹⁴ представляет собой галоген;

или применение указанных соединений для изготовления лекарственного средства, полезного для ингибирования активности HCV.

Следующими вариантами осуществления настоящего изобретения являются такие соединения формулы (V), любая из подгрупп соединений формулы (V) и их N-оксиды, соли, стереоизомерные формы, рацемические смеси, пролекарства, сложные эфиры и метаболиты, у которых

R¹ представляет собой амино или моно- или дизамещенный амино, где заместители амино могут быть выбраны из C_1-6алкила, C_1-4алкилоксиС_1-4алкила, диС_1-4алкиламиноС_1-4алкила, пиперидин-1-илС_1-4алкила, фенилС_1-6алкила, где фенил может быть дополнительно замещен С_1-4алкилом или С_1-4алкокси;

каждый R^4a, R^4b, R⁵, R⁷ независимо представляет собой водород или С_1-4алкил;

R⁸ представляет собой водород или защищающую азот группу;

каждый R¹¹ и R¹² независимо представляет собой водород, C_1-4алкил, галоген, -OR⁷ или -SR⁵;

R¹³ представляет собой водород или галоген; и

R¹⁴ представляет собой галоген;

или применение указанных соединений для изготовления лекарственного средства, полезного для ингибирования активности HCV.

Следующими вариантами осуществления настоящего изобретения являются такие соединения формулы (V), любая из подгрупп соединений формулы (V) и их N-оксиды, соли, стереоизомерные формы, рацемические смеси, пролекарства, сложные эфиры и метаболиты, у которых

R¹ представляет собой амино;

каждый R^4a, R^4b, R⁵, R⁷ независимо представляет собой водород или С_1-4алкил;

R⁸ представляет собой водород или защищающую азот группу;

каждый R¹¹ и R¹² независимо представляет собой водород, C_1-4алкил, галоген, -OR⁷ или -SR⁵;

R¹³ представляет собой водород или галоген; и

R¹⁴ представляет собой галоген;

или применение указанных соединений для изготовления лекарственного средства, полезного для ингибирования активности HCV.

Следующими вариантами осуществления настоящего изобретения являются такие соединения формулы (V), любая из подгрупп соединений формулы (V) и их N-оксиды, соли, стереоизомерные формы, рацемические смеси, пролекарства, сложные эфиры и метаболиты, у которых

R¹¹ представляет собой водород, и

R¹² представляет собой С_1-4алкил, галоген, С_1-4алкокси, C_1-4алкилтио или трифторметил,

или применение указанных соединений для изготовления лекарственного средства, полезного для ингибирования активности HCV.

Следующими вариантами осуществления настоящего изобретения являются такие соединения формулы (V), любая из подгрупп соединений формулы (V) и их N-оксиды, соли, стереоизомерные формы, рацемические смеси, пролекарства, сложные эфиры и метаболиты, у которых

R¹³ и R¹⁴ представляют собой галоген,

или применение указанных соединений для изготовления лекарственного средства, полезного для ингибирования активности HCV.

Представляющими особенный интерес соединениями являются соединения формулы (I), перечисленные в приведенной ниже таблице 1, в частности соединения номер 1, номер 2, номер 3, номер 6, номер 7, номер 8, номер 9, номер 10, номер 11, номер 22 и номер 26 и их N-оксиды, соли и стереоизомеры.

Для получения соединений изобретения можно применять ряд синтетических путей. В общем, их можно синтезировать применением реакций, известных в данной области. Можно применять любой известный в данной области метод синтеза. Однако для получения соединений изобретения подходящими являются следующие синтетические пути.

Соединения формулы (V) можно синтезировать по адаптированной методике Wamhoff, H.; Kroth, E. Synthesis, 1994, 405-410, как описано на схеме 1.

Схема 1

По существу, метил-2-амино-3-пиридинкарбоксилат (1а) подвергают взаимодействию с ацилхлоридом в присутствии подходящего растворителя, такого как хлороформ или пиридин, получая при этом 2-ациламинопиридин-3-карбоксилаты (1b). Указанные 2-ациламинопиридин-3-карбоксилаты (1b) превращают, например, обработкой гидрохлоридом аммония в 2-ациламинопиридин-3-амиды (1d). 2-Ациламинопиридин-3-амиды (1d) необязательно могут уже быть получены ацилированием 2-амино-3-пиридинамида (1с).

2-Ациламинопиридин-3-амиды (1d) затем циклизуют добавлением основания с образованием производных пиридо[2,3-d]пиримидин-4-ола формулы (1e). Спиртовую группу можно затем заменить на галоген с помощью галогенирующего агента, такого как тионилхлорид, в подходящем растворителе, подобном хлороформу, дихлорэтану или тетрагидрофурану (ТГФ), в присутствии каталитического количества диметилформамида (ДМФ). Затем проводят нуклеофильное замещение на соединении (1f) взаимодействием с амином или спиртом формулы HLR вместе с подходящим основанием, таким как TEA или DIPEA, в органическом растворителе, таком как DCM, ТГФ или ДМФ, получая при этом соединение (1g).

В альтернативном случае 2-ациламинопиридин-3-амиды можно превратить методикой, проводимой в одном сосуде, в пиридо[2,3-d]пиримидины формулы (V) взаимодействием соединения формулы (1е) с амином или спиртом формулы HLR² вместе с подходящим основанием, таким как TEA или DIPEA, в присутствии гексафторфосфата бензотриазол-1-илокситриспирролидинофосфония (PyBOP). В формуле HLR² Н представляет собой водород, и L и R² имеют значения, указанные выше в определении заместителей соединения формулы (V).

Схема 2

В альтернативном случае, соединения формулы (V) можно получить из соответствующих производных пиридопиримидинона, применяемых в качестве исходных веществ, с последующим их превращением в иминохлориды и затем заменой атома хлора подходящим амином, таким как 4-аминопиридин, как показано ниже на схеме 2.

(i) тионилхлорид, ДМФ; (ii) метиловый эфир 4-аминоникотиновой кислоты, TEA; (iii) NaOH; (iv) PyBOP, TEA, HNR^4aR^4b.

На схемах 3 и 4, показанных ниже, представлены альтернативные пути синтеза пиридильного кольца и дополнительного его замещения.

Схема 3

Схема 4

Схема 5: общий метод присоединения 4-аминопиридина к бициклическому пиримидину

На схеме 1 показано, как 4-гидроксипиримидин можно превратить в 4-галогенпиримидин, который затем сочетают с 4-аминопиридином. Сочетание проводят с применением палладиевого катализатора, его можно проводить в некоторых случаях с производным 4-хлорпиримидина, но в некоторых случаях проводили с 4-йодпроизводным.

Требуемая 3-карбоксамидная группа может присутствовать на 4-аминопиридине, когда пиридин добавляют к пиримидину, или пиридильная группа может содержать сложный эфир в 3-положении, как показано на схеме 5. В этом случае сложный эфир можно гидролизовать основанием с образованием карбоновой кислоты после введения пиридиновой группы. Эту карбоновую кислоту легко сочетают с большим разнообразием аминных групп методами, хорошо известными в данной области для образования амидных связей, как показано на схеме 2. Вследствие большого разнообразия аминов, которые являются доступными, и универсальности этой реакции образования амида данный метод обеспечивает доступность большого разнообразия соединений настоящего изобретения.

Соединения, включенные в настоящее изобретение, показаны ниже в таблице 1.

Таблица 1 № R¹ L R² R³ 1 Н 2 Н -NH- 3 Н -NH- 4 -NH- 5 Н -NH-

№ R¹ L R² R³ 6 Н -NH- 7 Н -NH- 8 Н -NH- 9 -NH₂ -NH- 10 Н -NH- 11 Н -NH- 12 Н -NH- 13 -NH- 14 -NH- 15 -NH₂ -NH- 16 Н -NH-

№ R¹ L R² R³ 17 -NH₂ -NH- 18 -NH- 19 -NH- 20 -NH- 21 Н -NH- 22 Н -NH- 23 -NH- 24 -NH- 25 -NH- 26 Н -NH-

№ R¹ L R² R³ 27 -NH₂ -NH- 28 -NH- 29 -NH₂ -NH- 30 -NH- 31 -NH- 32 H -NH- 33 H -NH- 34 H -NH- 35 -NH₂ -NH- 36 -NH₂ -NH-

№ R¹ L R² R³ 37 -NH-

Способ введения соединений и изготовления препаратов из соединений, полезных в изобретении, и родственных им соединений будет зависеть от природы состояния, тяжести состояния, конкретного подвергаемого лечению субъекта и оценки практикующего врача; тип препарата будет зависеть от метода введения. Поскольку соединения изобретения являются маленькими молекулами, их подходящим образом вводят пероральным путем, сочетая их с подходящими фармацевтическими эксципиентами так, чтобы получить таблетки, капсулы, сиропы и т.п. Подходящие препараты для перорального введения могут включать в себя применяемые в небольшом количестве компоненты, такие как буферы, корригенты и т.п. Количество активного ингредиента в препарате обычно находится в диапазоне 5-95% всего препарата, но в зависимости от носителя допускаются варианты в широких пределах. Подходящие носители включают в себя сахарозу, пектин, стеарат магния, лактозу, арахисовое масло, оливковое масло, воду и т.п.

Соединения, полезные для применения в изобретении, можно также вводить посредством суппозиториев или других устройств для введения через слизистую оболочку. Такие препараты обычно включают в себя эксципиенты, которые облегчают прохождение соединения через слизистую оболочку, такие как фармацевтически приемлемые поверхностно-активные вещества.

Соединения можно также вводить местным методом или в препарате, предназначенном для проникновения через кожу. Они включают в себя лосьоны, кремы, мази и т.п., которые можно изготовить известными методами.

Соединения можно также вводить инъекцией, включающей в себя внутривенную, внутримышечную, подкожную или внутрибрюшинную инъекцию. Типичные препараты для такого применения являются жидкими препаратами в изотонических наполнителях, таких как раствор Ханка или раствор Рингера.

Альтернативные препараты включают в себя спреи для носа, липосомальные препараты, препараты с медленным высвобождением и т.п., которые являются известными в данной области.

Можно применять любой подходящий препарат. Краткое руководство по известным в данной области препаратам имеется в Remington's Pharmaceutical Sciences, latest edition, Mack Publishing Company, Easton, PA. Ссылка на данный справочник является общепринятой в данной области.

Дозы соединений изобретения будут зависеть от ряда факторов, которые будут варьироваться от пациента к пациенту. Однако считается, что суточная пероральная доза обычно составляет 0,001-100 мг/кг общей массы тела, предпочтительно 0,01-50 мг/кг и более предпочтительно приблизительно 0,01 мг/кг-10 мг/кг. Однако схема приема лекарственного средства будет варьироваться в зависимости от подвергаемых лечению состояний и оценки практикующего врача.

Следует отметить, что соединения изобретения можно вводить в виде индивидуальных активных ингредиентов или в виде смесей нескольких вариантов осуществления соединений этой формулы. Кроме того, соединения изобретения можно применять в виде отдельных терапевтических агентов или в комбинации с другими терапевтическими агентами.

Вследствие их благоприятных противовирусных свойств, как будет очевидно из примеров, соединения настоящего изобретения являются полезными при лечении индивидуумов, инфицированных HCV, и для профилактики этих индивидуумов. В общем, соединения настоящего изобретения могут быть полезными при лечении теплокровных животных, инфицированных флавивирусами. Состояния, которые можно предотвратить или лечить соединениями настоящего изобретения, особенно включают в себя состояния, связанные с HCV и другими патогенными флавирусами, такими как вирус желтой лихорадки, лихорадки Денге (типы 1-4), энцефалита Сент-Луиса, японского энцефалита, энцефалита долины Муррея, вируса Западного Нила и вируса Куньин. Состояния, связанные с HCV, включают в себя прогрессирующий фиброз печени, воспаление и некроз, приводящие к циррозу, последнюю стадию заболевания печени и НСС; и состояния, связанные с другими патогенными флавирусами, включают в себя желтую лихорадку, лихорадку Денге, геморрагическую лихорадку и энцефалит.

Соединения настоящего изобретения или любую их подгруппу можно поэтому применять в качестве лекарственных средств против вышеуказанных состояний. Указанное применение в качестве лекарственного средства или способ лечения включает в себя системное введение HCV-инфицированным субъектам количества соединения, эффективного для борьбы с состояниями, связанными с HCV и другими патогенными флавивирусами. Следовательно, соединения настоящего изобретения можно применять для изготовления лекарственного средства, полезного для лечения состояний, связанных с HCV и другими патогенными флавивирусами.

В варианте осуществления изобретение относится к применению соединений формулы (V) или любой их подгруппы, как указано здесь, при изготовлении лекарственного средства для лечения или подавления инфекций или заболеваний, связанных с инфекцией HCV у млекопитающего. Изобретение относится также к способу лечения флавирусной инфекции или заболевания, связанного с флавирусной инфекцией, включающему в себя введение млекопитающему, нуждающемуся в этом, эффективного количества соединений формулы (V) или указываемой здесь их подгруппы.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к применению соединений формулы (V) или любой их подгруппы, как указано здесь, для изготовления лекарственного средства, полезного для ингибирования активности HCV у млекопитающего, инфицированного флавивирусом, в частности HCV.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к применению соединений формулы (V) или любой их подгруппы, как указано здесь, для изготовления лекарственного средства, полезного для ингибирования активности HCV у млекопитающего, инфицированного флавивирусом, где указанный HCV ингибируют при его репликации.

Кроме того, в комбинированной терапии можно применять комбинацию ранее известного анти-HCV-соединения, такого как, например, интерферон-α (IFT-α), пэгилированный интерферон-α и/или рибавирин, и соединения настоящего изобретения. Термин «комбинированная терапия» относится к применению продукта, содержащего обязательно (а) соединение настоящего изобретения и (b) необязательно другое анти-HCV-соединение, в качестве комбинированного препарата для одновременного, раздельного или последовательного применения при лечении инфекций HCV, особенно при лечении инфекций HCV типа 1. Таким образом, для борьбы с HCV-инфекциями или лечения этих инфекций соединения данного изобретения можно совместно вводить в комбинации, например, с интерфероном-α (IFT-α), пэгилированным интерфероном-α и/или рибавирином, а также терапевтическими агентами на основе антител, нацеленных против HCV-эпитопов, короткой интерферирующей РНК (Si RNA), рибозимов, ДНКзимов, антисмысловой РНК, имеющих маленькую молекулу антагонистов, например, протеазы NS3, геликазы NS3 и полимеразы NS5B.

Согласно этому, настоящее изобретение относится к применению соединений формулы (V) или любой их подгруппы, как указано выше, для изготовления лекарственного средства, полезного для ингибирования активности HCV у млекопитающего, инфицированного вирусами HCV, где указанное лекарственное средство применяют в комбинированной терапии, причем указанная комбинированная терапия предпочтительно включает в себя применение соединения формулы (V) и (пэгилированного) IFT-α и/или рибавирина.

Специалисту в данной области должно быть понятно, что соединения формулы (V) можно испытывать в клеточной системе репликона HCV на основе публикации Lohmann et al. (1999) Science 285: 110-113 с дополнительными модификациями, описанными Krieger et al. (2001) Journal of Virology 75: 4614-4624 (публикация включена здесь в качестве ссылки), которая дополнительно описана в разделе примеров. Эта модель, хотя и не является совершенной моделью инфекции для HCV, является широко признаваемой в качестве наиболее надежной и эффективной модели автономной репликации РНК HCV, доступной в настоящее время. Соединения, проявляющие анти-HCV-активность в этой клеточной модели, рассматривают в качестве кандидатов для дальнейшей разработки при лечении HCV-инфекций у млекопитающих. Должно быть понятно, что важно отличать соединения, которые специфически препятствуют функциям HCV, от соединений, которые оказывают цитотоксические или цитостатические действия в модели репликона HCV и, как следствие этого, вызывают снижение концентрации РНК HCV или присоединенного репортера-фермента. В области оценки клеточной цитоксичности известны анализы, основанные, например, на активности митохондриальных ферментов с применением флуорогенных редокс-красителей, таких как резазурин. Кроме того, существуют клеточные контрскринирования для оценки неселективного ингибирования активности связанного репортерного гена, такого как ген люциферазы светляка. Подходящие типы клеток можно стабильно трансфицировать репортерным геном люциферазы, экспрессия которого зависит от конституитивно активного промотора гена, и такие клетки можно применять для контрскрининга для исключения неселективных ингибиторов.

Все патенты, заявки на патенты и статьи, приведенные выше или ниже в контексте, включены здесь в качестве ссылки.

Примеры

Нижеследующие примеры предназначены для иллюстрации, но не для ограничения изобретения.

Пример 1

Синтез пиридо[2,3-d]пиримидинов

Соединения, описанные в настоящем изобретении, можно синтезировать по методикам, описанным в WO 03/097615, в частности в схеме реакций 4.

Пример 2

Активность соединений формулы (V) в анализах репликона HCV

Анализы репортера клеток со стабильным репликоном

Соединения настоящего изобретения изучали на активность в отношении ингибирования репликации РНК HCV в клеточном анализе. Анализ показал, что настоящие соединения проявляют активность против функции репликонов HCV в клеточной культуре. Клеточный анализ был основан на конструкции бицистронной экспрессии, как описано Lohmann et al. (1999) Science vol.285, pp.110-113, с модификациями, описанными Krieger et al. (2001) Journal of Virology 75: 4614-4624, со стратегией скрининга множественных мишеней. По существу метод был следующим.

В анализе применяли стабильно трансфицированную клеточную линию Huh-7 luc/neo (далее обозначаемую Huh-Luc). Эта клеточная линия имела РНК-кодирующую конструкцию бицистронной экспрессии, включающую в себя области NS3-NS5B дикого типа HCV типа 1b, транслированные из внутреннего сайта вхождения рибосомы (IRES) вируса энцефаломиокардита (EMCV), которым предшествует репортерная часть (FfL-люцеферазы) и селектируемая маркерная часть (neo^R неомицинфосфотрансферазы). Конструкция имела 5'- и 3'-NTR (нетранслированные области) из HCV типа 1b. Продолжительность культивирования клеток с репликонами в присутствии G418 (neo^R) зависела от репликации РНК HCV. Для скрининга противовирусных соединений применяли стабильно трансфицированные клетки с репликоном, которые экспрессировали РНК HCV, которая реплицировалась автономно и до высоких уровней, кодируя inter alia люциферазу.

Экспериментальный метод клеточного анализа

Клетки с репликоном культивировали в 384-луночных планшетах в присутствии испытуемых и контрольных соединений, которые добавляли при различных концентрациях. После инкубации три дня репликацию HCV измеряли анализом активности люцеферазы (с применением стандартных субстратов и реагентов для анализа люциферазы и устройства для микропланшетов для получения изображения Perkin Elmer ViewLux™ ultraHTS). Клетки с репликоном в контрольных культурах имели высокую экспрессию люциферазы в отсутствие любого ингибитора. Мониторинг ингибирующей активности соединения в отношении активности люциферазы проводили на клетках Hug-Luc, позволяющих получать кривую доза-реакция для каждого испытуемого соединения. Затем вычисляли величины ЕС50, такие величины представляют собой количество соединения, требуемого для снижения на 50% уровня детектированной активности люциферазы или, более конкретно, способности реплицировать генетически связанной РНК репликона HCV.

Обнаружено, что испытанные соединения имеют активности, указанные ниже.

№ соединения Активность в отношении репликона HCV (мкМ) 1 0,13 2 0,23 3 0,41 4 >10 5 25 6 0,56 7 0,57 8 0,57 9 0,67 10 0,76 11 0,77 12 1,1 13 1,3 14 1,6 15 1,8 16 2,1 17 2,2 18 5,1 19 3,4 20 3,9 21 3,2 22 0,49 23 >10 24 >10 25 >10 26 0,48 27 >10 28 >10 29 >10 30 >10 31 >10 32 12 33 15 34 19 35 12 36 >10 37 >10

Изобретение относится к новым пиридо[2,3-d]пиримидинам формулы (V) и к применению соединений формулы (I), включающей соединения формулы (V), для изготовления лекарственного средства, полезного для ингибирования репликации HCV у млекопитающего, инфицированного HCV, а также фармацевтической композиция на их основе. В формуле (I)

R¹ представляет собой водород, амино, моно- или дизамещенный амино, где заместитель(и) аминогруппы может быть выбран из C_1-6алкила, С_1-4алкилоксиС_1-4алкила, диС_1-4алкиламиноС_1-4алкила, пиперидин-1-илС_1-4алкила, фенилС_1-6алкила, где фенильная группа может быть дополнительно замещена С_1-4алкокси; L представляет собой -NR⁸-; R² представляет собой Het², где указанный Het² представляет собой ароматический моноциклический 6-членный гетероцикл, который содержит один атом азота и необязательно замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из C_1-4алкила, полигалогенС_1-4алкила, галогена, -COOR⁷, -CONR^4aR^4b, -OR⁷, -SR⁵, и где C_1-4алкил может быть дополнительно замещен -COOR⁷; R³ представляет собой фенил, необязательно замещенный одним или двумя атомами галогена; каждый из R^4a и R^4b независимо представляет собой водород, С_1-4алкил, гидроксиС_1-4алкил; каждый R⁵ независимо представляет собой С_1-4алкил; каждый R⁷ независимо представляет собой водород или С_1-4алкил; и каждый R⁸ независимо представляет собой водород или C_1-10алкоксикарбонил. В формуле (V) значения радикалов указаны в формуле изобретения. 4 н. и 14 з.п. ф-лы, 1 табл., 2 пр.

1. Применение соединения формулы (I)

или его фармацевтически приемлемой соли,
где R¹ представляет собой водород, амино, моно- или дизамещенный амино, где заместитель(и) аминогруппы может быть выбран из C_1-6алкила, С_1-4алкилоксиС_1-4алкила, диС_1-4алкиламиноС_1-4алкила, пиперидин-1-илС_1-4алкила, фенилС_1-6алкила, где фенильная группа может быть дополнительно замещена С_1-4алкокси;
L представляет собой -NR⁸-;
R² представляет собой Het², где указанный Het² представляет собой ароматический моноциклический 6-членный гетероцикл, который содержит один атом азота и необязательно замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из С_1-4алкила, полигалогенС_1-4алкила, галогена, -COOR⁷, -CONR^4aR^4b, -OR⁷, -SR⁵, и где С_1-4алкил может быть дополнительно замещен -COOR⁷;
R³ представляет собой фенил, необязательно замещенный одним или двумя атомами галогена;
каждый из R^4a и R^4b независимо представляет собой водород, С_1-4алкил, гидроксиС_1-4алкил;
каждый R⁵ независимо представляет собой С_1-4алкил;
каждый R⁷ независимо представляет собой водород или С_1-4алкил; и
каждый R⁸ независимо представляет собой водород или С_1-10алкоксикарбонил;
для изготовления лекарственного средства, полезного для ингибирования репликации HCV у млекопитающего, инфицированного HCV.

2. Применение по п.1, где соединением является соединение формулы (II)

или его фармацевтически приемлемой соли,
где R¹, R³ и R⁸ имеют значения, указанные в п.1,
R⁹ представляет собой С_1-4алкил, полигалогенС_1-4алкил, галоген, -COOR⁷, -CONR^4aR^4b, -OR⁷, -SR⁵, и где С_1-4алкил может быть дополнительно замещен -COOR⁷;
n равно 0, 1, 2, 3 или 4.

3. Применение по п.1, где соединением является соединение формулы (III)

или его фармацевтически приемлемой соли,
где R¹, L и R² имеют значения, указанные в п.1,
R¹⁰ представляет собой галоген, и
m равно 0, 1 или 2.

4. Применение по любому из пп.1-3, где соединением является соединение формулы (IV)

или его фармацевтически приемлемой соли,
где R¹, R⁸ имеют значения, указанные в п.1;
R⁹ и n имеют значения, указанные в п.2; и
R¹⁰ и m имеют значения, указанные в п.3.

5. Применение по п.1, где соединением является соединение формулы (V)

или его фармацевтически приемлемой соли,
где R¹ и R⁸ имеют значения, указанные в п.1;
каждый из R¹¹ и R¹² независимо представляет собой водород, С_1-4алкил, полигалогенС_1-4алкил, галоген, -COOR⁷, -CONR^4aR^4b, -OR⁷, -SR⁵, и где С_1-4алкил может быть дополнительно замещен -COOR⁷;
R¹³ представляет собой водород или галоген; и
R¹⁴ представляет собой галоген.

6. Применение по п.5,
где R¹ представляет собой водород, амино, моно- или дизамещенный амино, где заместители аминогруппы могут быть выбраны из C_1-6алкила, С_1-4-алкилоксиС_1-4алкила, диС_1-4алкиламиноС_1-4алкила, пиперидин-1-илС_1-4алкила, фенилC_1-6алкила, где фенил может быть дополнительно замещен С_1-4алкокси;
каждый из R^4a и R^4b независимо представляет собой водород или С_1-4алкил;
каждый R⁵ независимо представляет собой С_1-4алкил;
каждый R⁷ независимо представляет собой водород или С_1-4алкил;
R⁸ представляет собой водород или С_1-10алкоксикарбонил;
каждый из R¹¹ и R¹² представляет собой независимо водород, С_1-4алкил, который может быть дополнительно замещен -COOR⁷, полигалогенС_1-4алкил, галоген, -COOR⁷, -OR⁷, или -SR⁵;
R¹³ представляет собой водород или галоген; и
R¹⁴ представляет собой галоген.

7. Применение по п.5, где
R¹ представляет собой водород, амино, монозамещенный амино, где заместители аминогруппы могут быть выбраны из С_1-4алкилоксиС_1-4алкила, диС_1-4алкиламиноС_1-4алкила, пиперидин-1-илС_1-4алкила, фенилС_1-6алкила, где фенил может быть дополнительно замещен С_1-4алкокси;
каждый R⁵ представляет собой C_1-4алкил;
каждый R⁷ представляет собой С_1-4алкил;
R⁸ представляет собой водород или С_1-10алкоксикарбонил;
каждый из R¹¹ и R¹² независимо представляет собой водород, С_1-4алкил, который может быть дополнительно замещен -COOR⁷, полигалогенС_1-4алкил, галоген, -COOR⁷, -OR⁷, -SR⁵;
R¹³ представляет собой водород или галоген; и
R¹⁴ представляет собой галоген.

8. Применение по п.5, где
R¹ представляет собой водород, амино, монозамещенный амино, где заместители аминогруппы могут быть выбраны из С_1-4алкилоксиС_1-4алкила, пиперидин-1-илС_1-4алкила, фенилС_1-6алкила, где фенильная группа может быть дополнительно замещена С_1-4алкокси;
каждый R⁵ представляет собой С_1-4алкил;
R⁸ представляет собой водород или С_1-10алкоксикарбонил;
каждый из R¹¹ и R¹² независимо представляет собой водород, С_1-4алкил, который может быть дополнительно замещен -COOR⁷, галоген, -OR⁷ или -SR⁵;
R¹³ представляет собой водород или галоген; и
R¹⁴ представляет собой галоген.

9. Применение по п.1,
где R¹ представляет собой водород или амино;
каждый R⁵ представляет собой С_1-4алкил;
R⁸ представляет собой водород или С_1-10алкоксикарбонил;
каждый из R¹¹ и R¹² независимо представляет собой водород, С_1-4алкил, -OR⁷ или -SR⁵;
R¹³ представляет собой водород или галоген; и
R¹⁴ представляет собой галоген.

10. Применение по любому из пп.1-3 и 5-9, где R⁸ представляет собой C_1-10алкоксикарбонил.

11. Способ ингибирования репликации HCV у млекопитающего, инфицированного HCV, включающий введение эффективного для ингибирования HCV количества соединения формулы (I), (II), (III), (IV) или (V), как оно описано по любому из пп.1-10.

12. Соединение формулы (V)

или его фармацевтически приемлемая соль,
где R¹ представляет собой амино или моно- или дизамещенный амино, где заместители аминогруппы могут быть выбраны из C_1-6алкила, С_1-4алкилоксиС_1-4алкила, диС_1-4алкиламиноС_1-4алкила, пиперидин-1-илС_1-4алкила, фенилС_1-6алкила, где фенил может быть дополнительно замещен С_1-4алкокси;
каждый из R^4a и R^4b независимо представляет собой водород или С_1-4алкил;
каждый R⁵ независимо представляет собой С_1-4алкил;
каждый R⁷ независимо представляет собой водород или С_1-4алкил;
R⁸ представляет собой водород или С_1-10алкилоксикарбонил;
каждый из R¹¹ и R¹² независимо представляет собой водород, С_1-4алкил, который может быть дополнительно замещен -COOR⁷, полигалогенС_1-4алкил, галоген, -COOR⁷, -OR⁷, -SR^5b;
R¹³ представляет собой водород или галоген; и
R¹⁴ представляет собой галоген.

13. Соединение по п.12,
где R¹ представляет собой амино или моно- или дизамещенный амино, где заместители аминогруппы могут быть выбраны из C_1-6алкила, С_1-4алкилоксиС_1-4алкила, диС_1-4алкиламиноС_1-4алкила, пиперидин-1-илС_1-4алкила, фенилС_1-6алкила, где фенил может быть дополнительно замещен С_1-4алкокси;
каждый из R^4a, R^4b, R⁷ независимо представляет собой водород или С_1-4алкил;
R⁵ представляет собой С_1-4алкил;
R⁸ представляет собой водород или С_1-10алкилоксикарбонил;
каждый из R¹¹ и R¹² независимо представляет собой водород, С_1-4алкил, галоген, -OR⁷ или -SR⁵;
R¹³ представляет собой водород или галоген; и
R¹⁴ представляет собой галоген.

14. Соединение по п.12 или 13,
где R¹¹ представляет собой водород, и
R¹² представляет собой С_1-4алкил, галоген, С_1-4алкокси, С_1-4алкилтио или трифторметил.

15. Соединение по п.12 или 13, где R¹³ и R¹⁴ представляют собой галоген.

16. Соединение по п.12 или 13, где R⁸ представляет собой С_1-10алкилоксикарбонил.

17. Соединение по п.12 или 13, предназначенное для применения в качестве лекарственного средства, обладающего свойствами ингибитора репликации HCV.

18. Фармацевтическая композиция, обладающая свойствами ингибитора репликации HCV, включающая одно или несколько соединений по любому из пп.12-16 в эффективном количестве и, по меньшей мере, один фармацевтически приемлемый эксципиент.