СПОСОБ ОЦЕНКИ ТОКСИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ ПЕСТИЦИДОВ НА ВОДНЫЕ ОБЪЕКТЫ Российский патент 2012 года по МПК G01N33/18 

Предлагаемое изобретение относится к исследованиям в области охраны окружающей среды, водной токсикологии, а именно к способам токсикологической оценки действия пестицидов на водные объекты, имеющие рыбохозяйственное значение. Способ может быть использован для ужесточения класса экологической опасности пестицидов при нормировании их содержания в воде рыбохозяйственных водоемов.

Основной путь предотвращения загрязнения водоемов пестицидами -предварительное определение степени токсичности для гидробионтов каждого из перспективных пестицидов и запрещение использования в пределах водоохранной рыбохозяйственной зоны тех, которые характеризуются высокой токсичностью для водных организмов.

В этой связи требуется разработка быстрых, дешевых и эффективных методов предварительного определения токсичности пестицидов.

Известен способ определения токсичности химических веществ (а.с. СССР №1564539, МПК 5 G01N 33/18, 33/00) [1], включающий культивирование штамма Saccharomyces cerevisial 15 В-П4 на жидкой питательной среде, воздействие на него исследуемого вещества с последующей оценкой полученных результатов.

Известен способ количественного определения фосфорорганических пестицидов (а.с. СССР №1111270, МПК 4 A012K 61/00, G01N 33/18) [2], предусматривающий помещение в анализируемый раствор в качестве тест-объектов дафний (Daphnia magna), учет продолжительности их выживания при 34-36°C и последующее определение количества пестицида по градуировочному графику.

Известен способ определения токсичности водных сред (а.с. СССР №1270699, МПК 4 G01N 33/18, C02F 3/32) [3], включающий исследование адаптации в них гидробионтов - брюхоногих моллюсков, предварительную калибровку степени чувствительности и устойчивости гидробионтов к эталонному токсиканту, проведение тестовых воздействий на опытные серии гидробионтов определенными концентрациями исследуемых сред, обеспечивая постоянство внешних условий и ступенчатое нарастание концентраций при воздействии на каждую из последующих серий гидробионтов, вычисление по ней двигательной активности для каждой концентрации и оценку степени токсичности водных сред.

Существующая в настоящее время классификация по установлению класса опасности пестицида для водных экосистем базируется на данных токсичности по величине ПДК, стабильности данного вещества в водоеме и его кумулятивным свойствам (Методические рекомендации по установлению эколого-рыбохозяйственных нормативов (ПДК и ОБУВ) загрязняющих веществ для воды водных объектов, имеющих рыбохозяйственное значение. - М.: ВНИРО, 1998. - 147 с.) [4].

В то же время, согласно этим «Методическим рекомендациям» [4], утвержденным Министерством сельского хозяйства и продовольствия Российской Федерации в 1998 г., при эколого-рыбохозяйственном нормировании пестицидов обязательным является проведение экспериментов по выявлению специфических эффектов - мутагенности, цитогенотоксичности, тератогенности веществ для водных организмов. Известны способы оценки специфических эффектов (Мутагенные вещества в рыбохозяйственных водоемах. Методическое руководство по оценке генотоксичности и цитотоксичности при разработке рыбохозяйственных нормативов (ПДК). 1991) [5], (Детлаф Т.А., Гинзбург А.С., Шмальгаузен О.И. Развитие осетровых рыб. - М.: Наука, 1981) [6].

Результаты многолетних исследований показали, что наличие мутагенных свойств и генотоксичности у пестицидов последних поколений является скорее исключением. Однако зафиксировано, что большинство современных пестицидов новых поколений в определенных дозах обладают тератогенной активностью для рыб на ранних стадиях развития (эмбрионы и предличинки). В то же время при установлении класса экологической опасности пестицидов для водных экосистем степень тератогенной опасности для гидробионтов не учитывается, что является недостатком известной классификации.

Установлено, что наиболее уязвимыми к загрязнению и другим изменениям условий окружающей среды являются гидробионты на ювенальной стадии развития. К ним относятся икра и личинки рыб. Известно, что икра и личинки из-за недостаточной сформированности систем защиты и невозможности ухода из зон загрязнения могут быть наиболее подвержены пестицидной интоксикации.

При оценке пестицидной интоксикации для рыб на ранних стадиях онтогенеза важно иметь полную картину нарушений, которые вызывает тот или иной пестицид.

Наиболее близким к предложенному является, выбранный в качестве прототипа, способ оценки токсичности загрязнителей вод дальневосточных морей (патент RU №2215290, МПК 7 G01N 33/18) [7], в котором тест-объекты, в качестве которых используют предличинки японского анчоуса, выдерживают в тестируемых растворах, регистрируют физиологический ответ и о степени токсичности загрязнителя судят по токсилогическим параметрам - ЛК₀, ЛК₁₆, ЛК₅₀, ЛК₈₄, ЛК₁₀₀, где ЛК₁₆ считается пороговой концентрацией (максимально переносимая концентрация, вызывающая гибель 16% эмбрионов).

В известном способе не учитывается степень тератогенной опасности токсикантов для гидробионтов, что снижает достоверность оценки токсического воздействия загрязняющих веществ на водные объекты.

Цель настоящего изобретения - повышение точности оценки токсичности пестицидов для водных экосистем с учетом их тератогенного действия на эмбрионы осетровых рыб.

Техническим результатом предлагаемого изобретения является более полноценная оценка токсичности пестицидов для водных экосистем.

Это достигается тем, что в известном способе оценки токсического действия пестицидов на водные объекты, в котором тест-объекты выдерживают в тестируемых растворах, регистрируют показатели выживаемости тест-объектов, на основе которых рассчитывают пороговые концентрации токсичности тестируемых пестицидов, и оценивают степень токсичности пестицидов, согласно изобретению дополнительно регистрируют патоморфологические изменения у тест-объектов, подсчитывают средний процент уродств, и в качестве пороговой концентрации тератогенного воздействия устанавливают концентрацию пестицида, оказывающую минимальное тератогенное воздействие на тест-объекты, а о степени токсичности пестицидов судят на основании коэффициента пороговых концентраций, который рассчитывают по формуле

где К_п ^эмб - коэффициент пороговых концентраций токсичности пестицидов, учитывающий их тератогенность.

ЛК₁₆ - пороговая концентрация токсичности пестицидов, вызывающая гибель 16% эмбрионов.

Э_терК₁₆ - пороговая концентрация тератогенного действия пестицидов.

При этом при значениях коэффициента К_п ^эмб

>10 устанавливают класс опасности пестицидов I, т.е. чрезвычайно опасные;

5-10 устанавливают класс опасности пестицидов II, т.е. высокоопасные;

1-5 устанавливают класс опасности пестицидов III, т.е. опасные;

<1 класс опасности пестицидов IV, т.е. умеренно опасные.

В качестве тест-объектов используют эмбрионы осетровых рыб.

Сравнение прототипа и заявляемого способа показывает, что последний отличается от прототипа дополнительной регистрацией, учетом и анализом тератогенного воздействия токсикантов на тест-объекты. А полученные в результате исследований независимые показатели порогов летального и тератогенного действия используются в совокупности и служат для выведения коэффициента пороговых концентраций (К_п ^эмб). В результате расчета коэффициента (К_п ^эмб) достигается цель повышения точности и достоверности оценки токсичности пестицидов для эмбрионов рыб. Далее на основе коэффициента К_п ^эмб разработана классификация пестицидов по степени тератогенной активности для рыб в период раннего онтогенеза.

Способ осуществляется следующим образом.

Были проведены экспериментальные исследования действия более 50 пестицидов на водные организмы. В качестве тест-объектов использовали осетровые рыбы в период раннего онтогенеза - икра бестера (Huso huso L. X Acipenser ruthenus L.), осетра (Acipenser gueldenstaedti), севрюги (Acipenser stellatus).

В химические 2-литровые емкости вносили исследуемые пестициды, создавая ряд заданных концентраций. А также оставляли контрольные емкости без токсикантов. Оплодотворенную икру раскладывали в чашки Петри и помещали в емкости с пестицидами.

Для оценки летального действия пестицида регистрировали показатели выживаемости эмбрионов в период эмбриогенеза. Были проведены систематические наблюдения и учет живых и погибших эмбрионов на протяжении опыта, устанавлена зависимость выживаемости организмов от концентрации пестицида и времени его воздействия. По окончании эксперимента был проведен расчет основных токсикометрических параметров (ЛК₀, ЛК₁₆, ЛК₅₀, ЛК₈₄, ЛК₁₀₀) методом пробит-анализа по В.Б.Прозоровскому (Прозоровский В.Б. Использование метода наименьших квадратов для пробит-анализа кривых летальности. // Фармакол. и токсикол. - 1962. №1) [8]. Расчетная величина ЛК₁₆ (максимально переносимая концентрация, вызывающая гибель 16% эмбрионов) считается пороговой. Значение порога летального действия ЛК₁₆ для всех исследованных пестицидов приведены в таблице 1.

Тератогенный анализ проводили на стадиях развития эмбрионов рыб и выклева. Интегральным показателем тератогенного эффекта пестицидов служили патоморфологические изменения у подопытных организмов, были фиксированы аномалии развития оплодотворенной икры и патоморфологические признаки выклюнувшихся эмбрионов. На основе тератогенного анализа был подсчитан средний процент уродств, а в качестве пороговой концентрации была устанавлена экспериментальная концентрация пестицида, оказывающая минимальное тератогенное действие.

Экспериментальные исследования показали, что не всегда удается экспериментальным путем определить пороговую концентрацию тератогенного действия пестицидов. В некоторых случаях экспериментально установленные минимальные действующие концентрации по аномальному развитию эмбрионов, например для пестицидов, принадлежащих к химическим классам пиретроидов, дитиокарбаматов, производных имидазола, бензимидазола и других превышали 16% уровень, принятый как пороговый в токсикологических экспериментах (таблица 1).

В связи с этим возникла необходимость в унификации определения пороговой концентрации и получении расчетной величины для оценки специфичности действия изучаемых пестицидов.

Расчетная величина пороговой концентрации тератогенного действия пестицидов (Э_терК₁₆), не используемая ранее в эмбриотоксикологических исследованиях, была получена в результате математической обработки данных по аномальному развитию эмбрионов рыб методом пробит-анализа по В.Б.Прозоровскому (8), основанным на прямолинейной взаимосвязи между концентрацией и эффектом, выраженным в пробитах. Величина Э_терК₁₆ позволила с большей точностью определить порог тератогенного воздействия пестицидов различных химических классов. Значения Э_тepK₁₆ для всех экспериментальных пестицидов даны в таблице 1.

На основе рассчитанных пороговых величин ЛК₁₆ и Э_терК₁₆ была разработана формула, отражающая меру тератогенного воздействия пестицидов для эмбрионов рыб. Меру тератогенности (специфичности действия) пестицидов для эмбрионов рыб определяли по величине коэффициента пороговых концентраций (К_п ^эмб), т.е. отношения порога летального действия к порогу тератогенного действия:

Рассчитанные величины К_п ^эмб по всем экспериментальным пестицидам даны в таблице 1.

Величина К_п ^эмб позволила определить степень потенциальной опасности пестицида определенного химического класса в отношении возможности развития тератогенного эффекта. Величина К_п ^эмб, превышающая 1, свидетельствует об избирательном действии пестицида на развитие эмбрионов рыб.

Анализ представленных в таблице 1 данных и рассчитанные величины К_п ^эмб для эмбрионов осетровых рыб позволили заключить, что по степени усиления тератогенной активности для эмбрионов изученные химические классы пестицидов располагались в следующий ряд: производные пиридина < стробилурины < производные сульфонилмочевин < производные арилоксифеноксипропионовых кислот < производные N-арилкарбаминовых кислот < неоникотиноиды, производные имидазола и бензимидазола < триазолы < производные пиримидина, тиафосфорной и дитиокарбаминовой кислот < пиретроиды.

При учете коэффициента пороговых концентраций (К_п ^эмб) была разработана классификация пестицидов по степени тератогенной опасности, представленная в таблице 2. Согласно предложенной классификации пестициды, у которых величина К_п ^эмб меньше 1, являются умеренно опасными для эмбрионов рыб, если К_п ^эмб 1-5 - опасные, К_п ^эмб 5-10 - высокоопасные. Величина К_п ^эмб, превышающая 10, свидетельствует о чрезвычайной опасности пестицида.

Техническим результатом предлагаемого изобретения является более полноценная оценка токсичности пестицидов.

Сущность изобретения поясняется примером.

Исследования по установлению степени токсичности фунгицида Тир, 425 г/л, ТПС на икру бестера (Huso huso L. X Acipenser ruthenus L.) проводили с концентрациями в диапазоне 0.05-5.0 мг/л.

В опыт брали искусственно оплодотворенную икру на стадии 4-х бластомеров. Раскладывали в чашки Петри по 30 штук в каждую и помещали в 2-литровые емкости с растворами фунгицида Тир, куда подавали кислород. Высота столба жидкости значения не имела, так как благоприятные условия газообмена зародышей обеспечивались непрерывной подачей кислорода. Температура воды в среднем составляла 18.6°С.

Степень токсичности различных концентраций фунгицида на развивающуюся икру бестера оценивали по следующим показателям: выживаемость, длительность инкубационного периода, скорость прохождения стадий, патоморфологические признаки эмбрионов и выклюнувшихся предличинок (тератологический анализ). В ходе эксперимента ежедневно проводили учет погибших зародышей, фиксировали стадии развития.

На основании данных по выживаемости оплодотворенной икры бестера в растворах 0.05-5.0 мг/л рассчитаны токсикометрические параметры, представленные в таблице 3. Расчет токсикометрических параметров пестицида для эмбрионов бестера произведен с вычетом естественной гибели в контроле и опыте (поправка Аббота).

Данные по динамике выклева и длительности инкубационного периода эмбрионов бестера представлены в таблице 4.

В растворах с максимальной концентрацией фунгицида Тир 5.0 мг/л развитие зародышей продолжалось до стадии 15 (стадия средней гаструлы), затем наступила их гибель.

В ходе наблюдений за развивающимися эмбрионами бестера в растворах фунгицида в диапазоне концентраций 0.1-2.5 мг/л выявлено тератогенное действие.

Пестицид в концентрациях 0.5-2.5 мг/л оказывал сильное токсическое действие, вызывая различные нарушения эмбриогенеза, задержку выклева, растянутость его во времени. В растворах с вышеуказанными концентрациями фунгицида у эмбрионов отмечались нарушения процесса гаструляции, что проявлялось в задержке обрастания темных вегетативных клеток и сохранении желточной пробки значительного размера. В дальнейшем это привело к закладке укороченной, искривленной нервной пластинки. Наряду с этим, на стадиях органогенеза отмечены специфические нарушения, характерные для пестицидов, производных дитиокарбаминовой кислоты. К таким нарушениям можно отнести сильное обводнение собирающих почечных каналов, скопление жидкости в полости продолговатого мозга, перикардиальной полости, своеобразное множественное искривление хорды, придающее ей "гофрированный" вид. В растворах с концентрациями 0.5-2.5 мг/л все выклюнувшиеся эмбрионы имели аномалии в строении - укороченное, С-образно искривленное туловище, "гофрированную" хорду, укороченный хвост, водянку перикардиальной полости, недоразвитие головного отдела.

В растворах с концентрацией фунгицида Тир 0.1 мг/л также наблюдались описанные выше нарушения развития эмбрионов, однако гибель зародышей не превышала естественную. Отмечена задержка выклева на сутки и асинхронность выклева.

В растворах с концентрацией пестицида 0.05 мг/л отклонений в развитии эмбрионов от контрольной группы не наблюдалось. Скорость прохождения стадий, единичный и массовый выклев проходили синхронно с контролем. У выклюнувшихся зародышей патологии не обнаружено.

На основе проведенного тератогенного анализа был подсчитан процент уродств эмбрионов бестера перед выклевом (таблица 5).

Как видно из таблицы 5, пороговая концентрация по тератогенезу при концентрации пестицида 0.05 мг/л для эмбрионов бестера в результате экспериментальной работы выявлена не была. В концентрации 0.1 мг/л (следующей за недействующей концентрацией 0.05 мг/л) уродливые особи составили 50.9%.

Поэтому в качестве пороговой концентрации тератогенного воздействия фунгицида Тир для эмбрионов бестера была принята расчетная величина Э_терК₁₆=0.064 мг/л, полученная в результате математической обработки данных по аномальному развитию эмбрионов (проценту уродств) методом пробит-анализа по В.Б.Прозоровскому [Прозоровский В.Б. 1962].

Таким образом, для эмбрионов бестера пороговая концентрация фунгицида Тир по выживаемости (ЛК₁₆) составила 0.39 мг/л, пороговая концентрация по тератогенному воздействию (Э_терК₁₆) - 0.064 мг/л. Данные приведены в таблице 1.

Далее был рассчитан коэффициент пороговых концентраций (К_п ^эмб), представляющий собой отношение порога летального действия к порогу тератогенного действия:

К_п ^эмб=0.39:0.06=6.09.

Следовательно, согласно предложенной классификации (таблица 2) по степени тератогенной опасности фунгицид Тир относится ко II классу (высокоопасные пестициды).

Надо отметить, что класс опасности пестицида устанавливается: а) с целью определения степени экологической опасности пестицида в связи с его появлением в водных экосистемах; б) для установления приоритета при контроле загрязнения водной среды, в) для обоснования рекомендаций по использованию пестицида. Если пестицид относится к 1 классу опасности (чрезвычайно опасные загрязняющие вещества антропогенного происхождения), то его применение в пределах водоохранной рыбохозяйственной зоны запрещается (Методические рекомендации по установлению эколого-рыбохозяйственных нормативов (ПДК и ОБУВ) загрязняющих веществ для воды водных объектов, имеющих рыбохозяйственное значение. - М.: ВНИРО, 1998. - 147 с.) [4].

В результате расчета величины К_п ^эмб было установлено, что класс тератогенной опасности некоторых пестицидов (Альто-супер, Старт, Имидор, ТМТД, Тир) превышал установленный в соответствии с общепринятой классификацией опасности загрязняющих веществ для гидробионтов, учитывающей величину ПДК, коэффициенты накопления (К_н) и стабильности (τ₉₅). Данные представлены в таблице 6.

Таким образом, предложенная классификации пестицидов по степени тератогенной активности для рыб в период раннего онтогенеза может быть использована для ужесточения класса опасности при нормировании пестицидов.

Таблица 1 Параметры токсичности и тератогенности пестицидов для эмбрионов осетровых рыб Название пестицида (название действующего вещества) ЛК₁₆, мг/л Минимальная действующая концентрация, мг/л (% уродливых особей) Э_терК₁₆, мг/л Коэффициент пороговых концентраций, К_п ^эмб (класс опасности) 1 2 3 4 5 Производные циклопропанкарбоновой кислоты (пиретроиды) Альфас (α-ципермерин) 8.69 0.1 (20%) 0.079 109.96 (I) Карачар (λ-цигалотрин) 9.83 0.5 (26.32%) 0.42 23.40 (I) Кинфос (β-цифлутрин+диметоат) 13.07 0.5 (14.54) 0.59 22.15 (I) Чинук (β-цифлурин+имидаклоприд) 28.45 1.0 (32.73) 0.62 45.89 (I) Децис-профи (дельтаметрин) 0.92 0.5 (22.81%) 0.25 3.68 (III) Оперкот (λ-цигалотрин) 0.49 0.5 (23.53%) 0.42 1.17 (III) Модесто (β-цифлутрин+клотианидин) 7.87 5.0 (18.87%) 4.79 1.81 (III) Пончо Бета (β-цифлутрин+клотианидин) 3.81 1.0 (22.6%) 0.77 4.95 (III) Талстар (бифентрин) 0.0078 0.01 (33.3%) 0.0041 1.90 (III) Производные тиофосфорной кислоты Фенитион (фенитротион) 0.84 0.5 (11.11%) 0.54 1.56 (III) Фуфанон (малатион) 6.43 1.0 (17.65%) 1.64 3.92 (III) Производные фосфористой кислоты Эфатол (фосэтил алюминия) 41.93 50.0 (15.22%) 52.37 0.8 (IV) Производные дитиокарбаминовой кислоты ТМТД (тирам) 0.82 0.1 (18.9%) 0.079 10.38 (I) Тир (тирам+тебуконазол) 0.39 0.1 (50.9%) 0.064 6.09 (II) Полирам (метирам) 0.48 0.25 (7.41) 0.17 2.82 (III) Старт (тирам+тебуконазол) 0.39 0.1 (28.92%) 0.07 5.57 (II) Производные N-арилкарбаминовых кислот Бифор Эксперт (десмедифам+фенмедифам+этофумезат) 17.97 10.0 (15.09%) 12.88 1.43 (III) Бетарен Экстра (десмедифам+фенмедифам+этофумезат) 11.29 10.0 (24.4%) 8.34 1.35 (III) Битер Трио (десмедифам+фенмедифам+этофумезат) 2.41 2.5 (15.97%) 2.52 0.96 (IV) Лидер (десмедифам+фенмедифам+этофумезат) 95.76 25.0 (18.87%) 23.37 4.10 (III) Бетанал Квадро (десмедифам+фенмедифам+этофумезат+метамитрон) 23.43 30.0 (10.26%) 32.94 0.71 (IV) Поизводные арилоксифеноксипропионовых кислот АВГ-99 (феноксапроп-п-этил) 0.76 1.0 (23.8%) 0.77 0.99 (IV) Фуроре-ультра (феноксапроп-п-этил) 19.50 10.0 (11.76%) 10.21 1.92 (III) Норвел (хизалофоп-п-этил) 0.86 1.0 (16.98%) 0.97 0.89 (IV) Производные пиримидина Ленацил (ленацил) 85.40 50.0 (32.29%) 34.17 2.50 (III)

Продолжение таблицы 1 1 2 3 4 5 Производные пиридина Дикватерр Супер (дикват) 24.22 25.0 (8.89%) 45.01 0.54 (IV) Голден Ринг (дикват) 25.24 25.0 (13.33%) 31.8 0.79 (IV) Дикват (дикват) 20.37 50.0 (25%) 30.44 0.67 (IV) Суховей (дикват) 17.48 50.0 (11.54%) 31.27 0.56 (IV) Неоникотиноиды (производные имидазола или тиазола) АС-126 (имидаклоприд) 39.86 10.0 (34.55%) 15.54 2.56 (III) Искра золотая (имидаклоприд) 51.39 50.0 (23.4%) 43.96 1.17 (III) Имидор (имидаклоприд) 65.13 10.0 (22.6%) 6.31 10.32 (I) Кондор (имидаклоприд) 45.37 50.0 (29.55%) 21.83 2.08 (III) Актара (тиаметоксам) 6.40 5.0 (24.65%) 2.58 1.94 (III) Апачи (клотианидин) 8.11 5.0 (9.26%) 6.48 1.25 (III) Производные имидазола и бензимидазола Тапир (имазетапир) 515.59 250.0 (5.26%) 448.17 1.15 (III) Фабиан (имазетапир+хлоримурон-этил) 528.50 100.0 (11.1%) 167.76 3.15 (III) Винцит Форте (имазалил+тиабендазол+флутриафол) 6.62 10.0 (8.33%) 8.82 0.75 (IV) □ инер (имазалил+тиабендазол+флутриафол) 14.28 5.0 (28.3%) 4.04 3.53 (III) Производные триазолов Страйк (флутриафол) 7.99 10.0 (28.6%) 6.77 1.18 (111) Алькор (ципроконазол) 2.85 1.0 (9.09%) 1.77 1.61 (III) Альто-супер (ципроконазол+пропиконазол) 34.15 1.0 (10.91%) 2.55 13.39 (I) Карамба (метконазол) 1.14 0.5 (11.11%) 0.63 1.81 (III) Прозаро (протиоконазол+тебуконазол) 15.71 30.0 (9.68%) 32.75 0.48 (IV) Тебутин (тебуконазол) 52.44 100.0 (23.33%) 80.71 0.65 (IV) Производные сульфонилмочевин Зингер (метсульфурон-метил) 75.75 100.0(15%) 186.56 0.41 (IV) АВГ-65 (трибенурон-метил) 510.8 500.0 (13.04%) 563.31 0.91 (IV) Сегмент (азимсульфурон-метил) 672.27 750.0 (23.08%) 662.31 1.02 (111) Артен (метсульфурон-метил) 141.54 50.0 (10.91%) 75.47 1.88 (III) Сарацин (метсульфурон-метил) 122.43 100.0 (8.51%) 172.6 0.71 (IV) Пик (просульфурон-метил) >1500 750.0 (8.9%) 821.9 1.83 (III) Прополол (хлорсульфурон-метил+дикамба) 1125.17 400.0 (14.04%) 415.26 2.71 (III) Фенизан (хлорсульфурон-метил+дикамба) 375.0 250.0 (5.45%) 365.19 1.03 (III) Мушкет (йодосульфурон-метил+мефенпир-диэтил) 1.96 10.0 (27.27%) 7.51 0.26 (IV) Стробилурины Зато (трифлоксистробин) 0.0017 0.0025 (14.28%) 0.0028 0.61 (IV) Кабриотоп (пираклостробин+метирам) 0.71 0.5 (7.41%) 0.79 0.9 (IV) Пиктор (димоксистробин+боскалид) 0.013 5.0 (15.56%) 5.58 0.02 (IV)

Таблица 2 Классификация пестицидов по степени тератогенной опасности Коэффициент пороговых концентраций, К_п ^эмб Класс опасности >10 I - чрезвычайно опасные 5-10 II - высокоопасные 1-5 III - опасные <1 IV - умеренно опасные

Таблица 3 Выживаемость эмбрионов бестера в растворах фунгицида Тир Концентрация, мг/л   Гибель* на стадиях, экземпляры Гибель с поправкой Аббота, % Токсикометрические параметры, мг/л ст.5-12 (дробление) ст.13-18 (гаструляция) ст.19-29 (нейруляция) ст.30-35 (перед выклевом) Всего Контроль 3 2 2 0 7 0 ЛК₀=0.10
ЛК₁₆=0.39
ЛК₅₀=1.74
ЛК₈₄=3.67
ЛК₁₀₀=4.74 0.05 2 3 1 1 7 0 0.1 3 3 1 0 7 0 0.5 4 7 7 0 18 20.75 1.0 6 10 6 1 23 30.19 2.5 6 15 20 3 44 69.81 5.0 12 48 - - 60 100 Примечание: - * - суммарная гибель в трех повторностях эксперимента

Таблица 4 Динамика выклева и длительность инкубационного периода эмбрионов бестера при выдерживании в растворах фунгицида Тир Концентрация, мг/л Выклев, % Длительность инкубационного периода, ч единичный массовый Контроль 9.43 100 104 0.05 11.32 100 104 0.1 0 3.77 132 0.5 0 7.14 136 1.0 0 6.25 136

Таблица 5 Аномалии развития бестера в эмбриональный период развития при выдерживании в растворах фунгицида Тир Концентрация, мг/л Общее количество, экземпляры Количество уродливых особей, экземпляры Количество уродливых особей, % Эмбрионы, стадия 35 Контр. 53 0 0 0.05 53 0 0 0.1 53 27 50.9 0.5 42 42 100 1.0 37 37 100 2.5 16 16 100

Таблица 6 Классы опасности некоторых пестицидов, установленные по классификациям опасности загрязняющих веществ и тератогенезу Название пестицида ПДК, мг/л Класс опасности по ПДК, К_н, τ₉₅ по тератогенезу Альто-Супер 330 г/л, КЭ 0.0003 3 I Старт 400 г/л, КС 0.0002 3 II Имидор 200 г/л, ВРК 2.5 3 I ТМТД 400 г/л, ТПС 0.00025 3 I Тир 425 г/л, ТПС 0.00025 3 II

Изобретение относится к области охраны окружающей среды и водной токсикологии. При осуществлении способа тест-объекты выдерживают в тестируемых растворах, регистрируют показатели выживаемости тест-объектов, на основе которых рассчитывают пороговые концентрации токсичности тестируемых пестицидов, кроме того, регистрируют патоморфологические изменения у тест-объектов, подсчитывают средний процент уродств, и в качестве пороговой концентрации тератогенного воздействия устанавливают концентрацию пестицида, оказывающую минимальное тератогенное воздействие на тест-объекты, а о степени токсичности пестицидов судят на основании коэффициента пороговых концентраций, который рассчитывают по формуле

где К_п ^эмб - коэффициент пороговых концентраций токсичности пестицидов, учитывающий их тератогенность, ЛК₁₆ - пороговая концентрация токсичности пестицидов, вызывающая гибель 16% эмбрионов, Э_терК₁₆ - пороговая концентрация тератогенного действия пестицидов. При этом при значениях коэффициента К_п ^эмб >10 устанавливают класс опасности пестицидов I, т.е. чрезвычайно опасные, 5-10 устанавливают класс опасности пестицидов II, т.е. высокоопасные, 1-5 устанавливают класс опасности пестицидов III, т.е. опасные, <1 класс опасности пестицидов IV, т.е. умеренно опасные. В качестве тест-объектов используют эмбрионы осетровых рыб. Достигается повышение точности и достоверности оценки. 1 з.п. ф-лы, 1 пр., 6 табл.

1. Способ оценки токсического действия пестицидов на водные объекты, в котором тест-объекты выдерживают в тестируемых растворах, регистрируют показатели выживаемости тест-объектов, на основе которых рассчитывают пороговые концентрации токсичности тестируемых пестицидов, и оценивают степень токсичности пестицидов, отличающийся тем, что дополнительно регистрируют патоморфологические изменения у тест-объектов, подсчитывают средний процент уродств и в качестве пороговой концентрации тератогенного воздействия устанавливают концентрацию пестицида, оказывающую минимальное тератогенное воздействие на тест-объекты, а о степени токсичности пестицидов судят на основании коэффициента пороговых концентраций, который рассчитывают по формуле

где К_п ^эмб - коэффициент пороговых концентраций токсичности пестицидов, учитывающий их тератогенность;
ЛK₁₆ - пороговая концентрация токсичности пестицидов, вызывающая гибель 16% эмбрионов;
Э_терK₁₆ - пороговая концентрация тератогенного действия пестицидов,
при этом при значениях коэффициента К_п ^эмб
>10 устанавливают класс опасности пестицидов I, т.е. чрезвычайно опасные;
5-10 устанавливают класс опасности пестицидов II, т.е. высоко опасные;
1-5 устанавливают класс опасности пестицидов III, т.е. опасные;
<1 класс опасности пестицидов IV, т.е. умеренно опасные.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве тест-объектов используют эмбрионы осетровых рыб.