Способ определения пестицидной интоксикации рыб Советский патент 1991 года по МПК G01N33/18 

Изобретение относится к водной токсикологии и может быть использовано для диагностики интоксикации рыб при загрязнении рыбоводных водоемов пестицидами.

Цель изобретения - повышение точности определения. .

На чертеже изображена кинетическая кривая, поясняющая способ.

Способ осуществляют следующим образом.

Рыб разделяют на опытную и контрольную партии, опытную партию помещают в

исследуемую среду, затем отбирают пробы крови у рыб обеих партий, проводят отмывку эритроцитов в забуферной изотонической среде и гемолиз эритроцитов путем смешивания отмытых эритроцитов с буфером и последующим центрифугированием, определяют концентрацию гемоглобина и выравнивают ее во всех пробах, далее устанавливают в них значение рН. равное физиологическому рН крови рыб, после обработки Проб нитритом натрия ежесекундно регистрируют экстинкцию гемоглобина, а пестицидную интоксикацию у рыб устанавливают при отклонении времени полуо чэ

СА) СП -N 00

окисления гемоглобина в опыте по сравнению с контролем более чем на 30%.

Пример 1. Для эксперимента бралм ещей 2-летнего возраста, выдержанных 4- 5 сут в аэрированной водопроводной воде. Их помещали в емкости с водой, содержащей хлорорганический пестицид полихлор- пинен (ПХП) в концентрации 0 5 мг/л. В контроле рыбы содержались в аэрируемой водопроводной воде без токсиканта. Эритроциты отмывали в 130 мМ раствора NaCI забуференным 20 мМ трис-буфером рН 7,4 и гемолизировали 10 мМ трис-буфером рН 7,4. Концентрацию гемоглобина выравнивали во всех гемолизатах, доводя до 0,5001 ±0,010 путем разбавления гемолиза- та 10 мМ трис-буфером рН 7,4.

Для контроля выравнивания снимали спектры поглощения гемолизатов в диапазоне длин волн 500-600 им на спектрофотометре. К 3 мл гемолизата в кювете спектрофотометра добавляли 50 мкл 35 мМ раствора нитрита натрия 10 мМ трис-НС буфера рН 7,4. Кинетику реакции окисления НЬ02 нитритом натрия регистрировали при 630 нм, температуре 25°С, рН 7,4. Оптимальная концентрация нитрита натрия для гемоглобина леща составляла 10 мМ. Изменение экстинкции гемоглобина регистрировали в течение 500 с со скоростью 60 измерений в 1 мин. По кинетической кривой определяли время, за которое экстинкция гемоглобина достигала величины, равной половине максимальной, время полуокисления гемоглобина to,5 выражали в секундах. Полученные данные приведены в табл.1.

Как видно из табл,1, воздействие ПХП на лещей в течение 24 ч достоверно снижает время полуокисления гемоглобина (to.s) на 42,8% (,02). При 48-часовой экспозиции ПХП отмечается достоверное снижение to.s

Пример 2. Аналогично примеру 1 исследовали действие ГХЦГ (гексахлорцик- логексана) на кинетику полуокисления гемоглобина леща нитритом натрия. Концентрация ГХЦГ составляла 2 мг/л.

Результаты исследования представлены в табл.2.

Как видно из табл.2, под влиянием ГХЦГ достоверно снижается время полуокисления гемоглобина лещей на 36%.

Пример 3. Аналогично примеру 1 определяли кинетику окисления гемоглобина лещей нитритом натрия под воздействием растворенных в воде фосфорорганических пестицидов паратион-метила и базудина в концентрации 5 мг/л и 0,1 мг/л соответственно.

Результаты исследований представлены в табл.3.

Как видно из табл.3, воздействие на лещей паратион-метила в течение 24 ч, увеличивает to,5 на 107,9 %, а через 48 ч - на 43,5%, базудина на 127,8 и 42,6% соответственно. Полученные данные свидетельствуют о существенных нарушениях функционального состояния гемоглобина при пестицидной

интоксикации.

Сравнение результатов регистрации кинетики полуокисления гемоглобина подвоз- действием хлор- и фосфорорганических пестицидов показыает, что хлорорганичеекая интоксикация сопровождается снижением времени полуокисления, а воздействие фосфорорганических - противоположным изменением функционального состояния гемоглобина.

Минимальное отклонение от контроля в приведенных примерах составляло 30,5%. Таким образом, изменение кинетики полуокисления гемоглобина рыб более чем на 30% по сравнению с контролем свидетельствует о патологии и может быть принято за показатель пестицидной интоксикации рыб. Предлагаемый способ позволяет улучшить качество исследований пестицидной интоксикации рыб за счет повышения точности и достоверности ее определения.

Формула изобретения

Способ определения пестицидной интоксикации рыб, предусматривающий разделение рыб на опытную и контрольную партии, помещение опытной партии рыб в исследуемую среду, отбор проб крови у рыб обеих партий, отмывку и гемолиз эритроцитов, определение концентрации гемоглобина, обработку нитритом натрия, установление времени полуокисления гемоглобина путем регистрации динамики экстинкции раствора, сравнение опытных и

контрольных данных и установление пестицидной интоксикации у рыб опытной партии в случае отклонения опытных данных от контрольных, отличающийся тем, что, с целью повышения точности определения,

отмывку эритроцитов проводят в забуфе- ренной изотонической среДе, а гемолиз - путем смешивания отмытых эритроцитов с буфером с последующим центрифугированием, после определения концентрации гемоглобина осуществляют выравнивание экстинкции растворов и установление в них значения рН, равного физиологическому рН крови рыб, во всех пробах, после обработки нитритом натрия экстинкцию гемоглобина

регистрируют эжесекундно, а пестицидную

интоксикацию у рыб опытной партии устанавливают при отклонении времени полуокисления гемоглобина в опыте по сравнению с контролем более чем на 30%.

Таблица 1

Изобретение относится к водной токсикологии и может быть использовано для диагностики интоксикации рыб. Целью изобретения является повышение точности определения. Рыб разделяют на опытную и контрольную партии. Опытную партию помещают в исследуемую среду. Затем отбирают пробы крови у рыб обеих партий, проводят отмывку эритроцитов в забуфер- ной изотонической среде и гемолиз эритроцитов путем смешивания отмытых эритроцитов с буфером и последующим центрифугированием. Определяют концентрацию гемоглобина и выравнивают ее во всех пробах, далее устанавливают в н,их значение рН, равное физиологическому рН крови рыб. После обработки проб нитритом натрия ежесекундно регистрируют экстинк- цию гемоглобина, а пестицидную интоксикацию у рыб устанавливают при отклонении времени полуокисления гемоглобина в опыте по сравнению с контролем более чем на 30%. 3 табл. (Л С

Кинетика нитритного окисления гемоглобина

422,8

255, 19,

131, 255, 322,

478,2 286,4±ЗУ,8

±ЗУ,8

108,8

117,2

20,2

135,5

152,0

149,1

206,3

238,0

163/J±16,5 «10,02 -42,8

193,9 261,6

221,7 183,7 148,4 221,8 224,0

207,9113,7 0,05 -30,5

ТаблиЦа2

ТаблицэЗ

0.0800.007ОМ

0020

юо

200

300

500 t(c)