Показать метаданные Скрыть метаданные

(19)

(11)

2 448 117

(13)

(51)

МПК

C07K16/46(2006-01-01)

C07K5/08(2006-01-01)

A61K39/395(2006-01-01)

A61K38/06(2006-01-01)

(21) (22)

Заявка

2006119643/04, 2004-11-05

(24)

Дата начала отсчета патента

2004-11-05

(22)

дата подачи заявки

2004-11-05

(45)

опубликовано

2012-04-20

(72)

авторы

Доронина Светлана О.Сентер Питер Д.Токи Брайан Э.Эбенс Аллен Дж.Клайн Тони БетПолакис ПолСливковски Марк Кс.Спенсер Сюзан Д.

(73)

патентообладатели

Сиэтл Дженетикс, Инк.

(56)

Документы, цитированные в отчете о поиске

US 5767237 A, 16.06.1998WO 2004032828 A2, 22.04.2004WO 2002088172 A2, 30.04.2002DORONINA S.ОET ALDevelopment of potent monoclonal antibody auristatin conjugates for cancer therapyNATURE BIOTECHNOLOGYFRANCISCO J.AET AL

МОНОМЕТИЛВАЛИНОВЫЕ СОЕДИНЕНИЯ, СПОСОБНЫЕ ОБРАЗОВЫВАТЬ КОНЪЮГАТЫ С ЛИГАНДАМИ Российский патент 2012 года по МПК C07K16/46 C07K5/08 A61K39/395 A61K38/06

Описание патента на изобретение RU2448117C2

Ссылки на предшествующие заявки

Настоящая заявка испрашивает приоритет предварительной заявки на патент США, № 60/518534, поданной 6 ноября 2003; предварительной заявки на патент США, № 60/5557116, поданной 26 марта 2004; предварительной заявки на патент США, № 60/598899, поданной 4 августа 2004; и предварительной заявки на патент США, № 60/622455, поданной 27 октября 2004, описание которых включено в настоящее описание посредством ссылки.

1. Предшествующий уровень техники

Настоящее изобретение относится к лекарственному соединению, а в частности к конъюгатам “лекарственное средство-линкер-лиганд”, к соединениям лекарственное средство-линкер и к конъюгатам “лекарственное средство-лиганд”, к композициям, включающим вышеперечисленные соединения и конъюгаты, и к способам их применения для лечения рака, аутоиммунного заболевания или инфекционного заболевания. Настоящее изобретение также относится к конъюгатам “антитело-лекарственное средство”, к композициям, включающим эти конъюгаты, и к способам их применения для лечения рака, аутоиммунного заболевания и инфекционного заболевания. Настоящее изобретение также относится к способам применения соединений, представляющих собой конъюгаты “антитело-лекарственное средство” для in vitro, in situ и in vivo диагностики или обработки клеток млекопитающих или для лечения патологических состояний.

2. Предшествующий уровень техники

Уже много лет проводятся интенсивные исследования по улучшению доставки лекарственных средств и других агентов в клетки, ткани и опухоли-мишени в целях достижения максимальной эффективности при минимальной токсичности. Хотя было предпринято множество попыток разработать эффективные способы доставки биологически активных молекул в клетки, как in vivo, так и in vitro, однако ни одна из них не дала удовлетворительных результатов. Оптимизация конъюгирования лекарственного средства с его внутриклеточной мишенью, а также минимизация внутриклеточного перераспределения лекарственного средства, например, в соседние клетки часто представляет определенные трудности или является неэффективной.

Большинство современных средств, парентерально вводимых пациенту, не нацелены на мишень, что приводит к их системной доставке в клетки и ткани организма, в которых присутствие этих средств не требуется и часто является нежелательным. В результате эти лекарственные средства вызывают нежелательные побочные эффекты, что часто приводит к ограничению доз лекарственного средства (например, химиотерапевтического (противоракового) средства, цитотоксического средства, ингибитора ферментов и противовирусных или противомикробных средств), предназначенных для введения. Хотя пероральное введение лекарственных средств, по сравнению с парентеральным введением, считается удобным и экономичным способом введения, однако и в этом случае проблема неспецифического токсического воздействия лекарственного средства, после его попадания в систему кровообращения, на нормальные клетки остается актуальной. Другие проблемы, возникающие при пероральном введении, связаны с биодоступностью вводимого лекарственного средства и его задержкой в кишечнике, что приводит к дополнительному воздействию лекарственного средства на кишечник, а следовательно, и к повышению риска токсического воздействия на кишечник. В соответствии с этим главной целью настоящего изобретения является разработка способов специфической доставки агентов в клетки и ткани. Преимущества такого лечения заключаются в возможности предотвращения общих физиологических эффектов, связанных с нежелательной доставкой указанных агентов в другие клетки и ткани, такие как неинфицированные клетки. Внутриклеточная доставка может быть достигнута способами, которые обеспечивают аккумуляцию или присутствие активных агентов, то есть активных метаболитов, внутри клеток.

Была разработана терапия с использованием моноклональных антител для целенаправленного лечения пациентов, страдающих раком, иммунологическими и ангиогенными расстройствами.

Использование конъюгатов “антитело-лекарственное средство” в целях локальной доставки цитотоксических или цитостатических агентов, например лекарственных средств для уничтожения или подавления опухолевых клеток при лечении рака (Syrigos & Epenetos (1999) Anticancer Research 19:605-614; Niculescu-Duvaz & Springer (1997) Adv. Drg. Del. Rev. 26:151-172; патент США № 4975278), теоретически позволяет осуществлять направленную доставку лекарственного средства в опухоли и обеспечивать их аккумуляцию внутри клеток, тогда как системное введение этих неконъюгированных лекарственных средств может приводить к продуцированию уровней токсичности, которые являются неприемлемыми для нормальных клеток, а также недостаточными для опухолевых клеток, которые необходимо уничтожить (Baldwin et al., 1986, Lancet pp. (Mar. 15, 1986):603-05; Thorpe, 1985, “Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review” in Monoclonal Antobodies 84:Biological And Clinical Applications, A. Pinchera et al. (eds.), p. 475-506). Таким образом, желательно, чтобы максимальная эффективность сочеталась с минимальной токсичностью. Сообщалось, что в этой стратегии могут быть использованы как поликлональные, так и моноклональные антитела (Rowland et al., 1986, Cancer Immunol. Immunother. 21:183-87). Лекарственными средствами, используемыми в этих способах, являются дауномицин, доксорубицин, метотрексат и виндезин (Rowland et al., 1986, см. выше). Токсинами, используемыми в конъюгатах “антитело-токсин”, являются бактериальные токсины, такие как дифтерийный токсин, растительные токсины, такие как рицин, и небольшие молекулы-токсины, такие как гельданамицин (Kerr et al., 1997, Bioconjugate Chem. 8(6):781-784; Mandler et al., (2000) Jour of the Nat. Cancer Inst. 92(19):1573-1581; Mandler et al., (2000) Bioorganic & Med. Chem. Letters 10:1025-1028; Mandler et al., (2002) Bioconjugate Chem. 13:786-791), майтанзиноиды (ЕР 1391213; Liu et al., (1996) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93:8618-8623) и калихеамицин (Lode et al. (1998) Cancer Res. 58:2928; Hinman et al. (1993) Cancer Res. 53:3336-3342). Токсины могут оказывать свое цитоктоксическое и цитостатическое действие в соответствии с механизмами, включающими связывание с тубулином, связывание с ДНК или ингибирование топоизомеразы (Meyer D.L. & Senter P.D. “Recent Advances in Antibody Drug Conjugates for Cancer Therapy” in Annual Report in Medicinal Chemistry, Vol. 38(2003) Chapter 23, 229-237). Некоторые цитотоксические лекарственные средства, при их конъюгировании с крупными антителами или лигандами белков-рецепторов, имеют тенденцию к потере активности или уменьшению активности.

Зевалин (Zevalin®) (ибритумомаб тиуксетан, Biogen/Idec) представляет собой конъюгат “антитело-радиоизотоп”, состоящий из мышиного моноклонального антитела IgG1-каппа, направленного против антигена CD20, присутствующего на поверхности нормальных и злокачественных В-лимфоцитов, и радиоактивных изотопов ¹¹¹In или ⁹⁰Y, связанных с хелатообразующим комплексом “тиомочевина-линкер” (Wiseman et al. (2000) Eur. Jour. Nucl. Med. 27(7):766-77; Wiseman et al. (2002) Blood 99(12):4336-42; Witzig et al. (2002) J. Clin. Oncol. 20(10):2453-63; Witzig et al. (2002) J. Clin. Oncol. 20(15):3262-69). Хотя зевалин обладает активностью против В-клеточной не-ходжкинской лимфомы (НХЛ), однако его введение приводит к тяжелой и хронической цитопении у большинства пациентов. В 2000 г. было дано разрешение на применение препарата милотарг (Mylotarg®) (гемтузумаб озогамицин, Wyeth Pharmaceuticals), то есть конъюгата “антитело-лекарственное средство”, состоящего из антитела против человеческого CD33, связанного с калихеамицином, для лечения острого миелоидного лейкоза путем инъекции указанного препарата (Drugs of the Future (2000) 25(7):686; патенты США № 4970198; 5079233; 5585989; 5606040; 5693762, 5739116, 5767285, 5773001). Кантузумаб мертанзин (Immunogen, Inc.), конъюгат “антитело-лекарственное средство”, состоящий из антитела против человеческого C242, связанного посредством дисульфидного линкера SPP с майтанзиноидным лекарственным средством, DM1, был использован в испытаниях фазы II для лечения раковых опухолей, экспрессирующих CanAg, таких как раковые опухоли толстой кишки, поджелудочной железы, желудка и т.п. MLN-2704 (Millenium Pharm., BZL Biologics, Immunogen Inc.), конъюгат “антитело-лекарственное средство”, состоящий из моноклонального антитела против мембраносвязанного антигена предстательной железы (PSMA), присоединенного к майтанзиноидному лекарственному средству, DM1, находится на стадии исследования его возможного применения для лечения опухолей предстательной железы. Это майтанзиноидное лекарственное средство, DM1, было конъюгировано с мышиным моноклональным антителом ТА.1 посредством не-дисульфидного линкера, SMCC (Chari et al. (1992) Cancer Research 52:127-131). Сообщалось, что указанный конъюгат был в 200 раз менее эффективным, чем соответствующий конъюгат, связанный посредством дисульфидного линкера. В этой работе линкер SMCC рассматривается как “не-расщепляемый”.

Из морского моллюска Dolabella auricularia было выделено несколько короткоцепочечных пептидных соединений, и было обнаружено, что они обладают биологической активностью (Pettit et al. (1993) Tetrahedron 49:9151; Nakamura et al. (1995) Tetrahedron Letters 36:5059-5062; Sone et al. (1995) Jour. Org. Chem. 60:4474). Были также получены аналоги этих соединений, и было обнаружено, что некоторые из них обладают биологической активностью (обзор см. Pettit et al. (1998) Anti-Cancer Drug Design 13:243-277). Так, например, ауристатин Е (патент США № 5635483) представляет собой синтетический аналог натурального морского продукта доластатина 10, т.е. агент, который ингибирует полимеризацию тубулина путем связывания с таким же доменом на тубулине, как и противораковое лекарственное средство винкристин (G.R. Pettit (1997) Prog. Chem. Org. Nat. Prod. 70:1-79). Доластатин 10, ауристатин РЕ и ауристатин Е представляют собой линейные пептиды, имеющие четыре аминокислоты, три из которых являются уникальными для соединений класса доластатинов, и С-концевой амид.

Ауристатиновые пептиды, ауристатин Е (АЕ) и монометилауристатин (ММАЕ), т.е. синтетические аналоги доластатина, были конъюгированы: (i) с химерными моноклональными антителами cBR96 (специфическими к антигену Lewis Y на карциномах); (ii) с сАС10, который является специфичным к CD30, присутствующему на гематологических злокачественных опухолях (Klussman et al. (2004) Bioconjugate Chemistry 15(4):765-773; Doronina et al. (2003) Nature Biotechnology 21(7):778-784; “Monomethylvaline Compounds Capable of Conjugation to Ligands”; Francisco et al. (2003) Blood 102(4):1458-1465; публикация заявки США 2004/0018194); (iii) с антителами против CD20, такими как ритуксан® (WO 04/032828), используемым для лечения CD20-экспрессирующих раковых опухолей и иммунных расстройств; (iv) с анти-EphB2 антителом 2Н9 и с анти-IL-8 антителом, используемым для лечения рака толстой кишки (Mao et al. (2004) Cancer Research 64(3):781-788)); (v) с антителом против Е-селектина (Bhaskar et al. (2003) Cancer Res. 63:6387-6394) и (vi) с другими анти-CD30 антителами (WO 03/043583).

Ауристатин Е, конъюгированный с моноклональными антителами, описан в работе Senter et al., Proceedings of the American Association for Cancer Research, Volume 45, Abstract Number 623, опубликованной 28 марта 2004.

Вопреки in vitro-данным, полученным в клинических исследованиях соединений класса долостатинов и их аналогов, дозы, необходимые для достижения терапевтического эффекта, продуцируют значительную общую токсичность, что снижает их эффективность. В соответствии с этим необходимость в разработке производных доластатина/ауристатина, обладающих значительно меньшей токсичностью, но ценной терапевтической активностью, остается актуальной. Таким образом, настоящее изобретение направлено на устранение этих и других ограничений и проблем, которые до сих пор остаются нерешенными.

Тирозинкиназные рецепторы семейства ErbB являются важными медиаторами роста, дифференцировки и выживания клеток. Это семейство рецепторов включает четыре различных члена, включая рецептор эпидермального фактора роста (EGFR, ErbB1, HER1), HER2 (ErbB2 или p185^neu), HER3 (ErbB3) и HER4 (ErbB4 или tyro2). Панель анти-ErbB2 антител была охарактеризована с использованием клеточной линии человеческих опухолей молочной железы SCBR3 (Hudziak et al. (1989) Mol. Cell. Biol. 9(3):1165-1172. Максимальное ингибирование достигалось с использованием антитела, называемого 4D5, которое на 56% ингибировало пролиферацию клеток. В этом анализе другие антитела в данной панели антител снижали пролиферацию клеток в меньшей степени. Кроме того, было обнаружено, что антитело 4D5 сенсибилизирует ErbB2-сверхэкспрессирующие клеточные линии опухоли молочной железы с продуцированием цитотоксических эффектов TNF-α (патент США № 5677171). Анти-ErbB2 антитела, обсуждаемые Hudziak et al., были дополнительно охарактеризованы Fendly et al. (1990), Cancer Research 50:1550-1558; Kotts et al. (1990) In vitro 26(3):59А; Sarup et al. (1991) Growth Regulation 1:72-82; Shepard et al. J. (1991) Clin. Immunol. 11(3):117-127; Kumar et al. (1991) Mol. Cell. Biol. 11(2):979-986; Lewis et al. (1993) Cancer Immunol. Immunother. 37:255-263; Pietras et al. (1994) Oncogene 9:1829-1838; Vitetta et al. (1994) Cancer Research 54:5301-5309; Silwkowski et al. (1994) J. Biol. Chem. 269(20):14661-14665; Scott et al. (1991) J. Biol. Chem. 266:14300-5; D'souza et al. Proc. Natl. Acad. Sci. (1994) 91:7202-7206; Lewis et al. (1996) Cancer Research 56:1457-1465 и Schaefer et al. (1997) Oncogene 15:1385-1394.

Другие анти-ErbB2 антитела, обладающие различными свойствами, описаны Tagliabue et al. Int. J. Cancer 47:933-937 (1991); McKenzie et al. Oncogene 4:543-548 (1989); Maier et al. Cancer Res. 51:5361-5369 (1991); Bacus et al. Molecular Carcinogenesis 3:350-362 (1990); Stancovski et al. Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 88:8691-8695 (1991); Bacus et al. Cancer Research 52:2580-2589 (1992); Xu et al. Int. J. Cancer 53:401-408 (1993); в WO94/00136; Kasprzyk et al. Cancer Research 52:2771-2776 (1992); Handcock et al. (1991) Cancer Res. 51:4575-4580; Shawver et al. (1994) Cancer Res. 54:1367-1373; Arteaga et al. (1994) Cancer Res. 54:3758-3765; Harwerth et al. (1992) J. Biol. Chem. 267:15160-15167; в патенте США № 5783186 и Klapper et al. (1997) Oncogene 14:2099-2109.

Скрининг на гомологию позволил идентифицировать два других члена семейства рецепторов ErbB, а именно ErbB3 (патент США № 5183884; патент США № 5480968; KraU.S. et al. (1989) Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 86:9193-9197) и ErbB4 (EP 599274; Plowman et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 90:1746-1750; и Plowman et al. (1993) Nature 366:473-475). Оба эти рецептора обнаруживали повышенную экспрессию, по крайней мере, на некоторых клеточных линиях рака молочной железы.

Герцептин® (трастузумаб) представляет собой рекомбинантное ДНК “гуманизованное” моноклональное антитело, которое в клеточном анализе селективно и с высокой аффинностью (Kd=5 нМ) связывалось с внеклеточным доменом белка-рецептора человеческого эпидермального фактора роста -2, HER2 (ErbB2) (патент США № 5821337; патент США № 6054297; патент США № 6407213; патент США № 6639055; Coussens L. et al. (1985) Science 230:1132-9; Slamon D.J. et al. (1989) Science 244:707-12). Трастузумаб представляет собой антитело IgG1-каппа, которое содержит каркасные области человеческого антитела и гипервариабельные области (комплементарность-определяющие области) мышиного антитела (4D5), которое связывается с HER2. Трастузумаб связывается с антигеном HER2 и, тем самым, ингибирует рост раковых клеток. Поскольку трастузумаб является гуманизованным антителом, то это минимизирует любой НАМА-ответ у пациентов. Гуманизованное антитело против HER2 было продуцировано в суспензионной культуре клеток млекопитающих (клеток яичника китайского хомячка, СНО). Протоонкоген HER2 (или с-erbB2) кодирует трансмембранный рецепторный белок размером 185 кДа, структура которого является родственной структуре рецептора эпидермального фактора роста. Сверхэкспрессия белка HER2 наблюдается в 25%-30% первичных опухолей молочной железы и может быть определена путем иммуногистохимической оценки фиксированных опухолевых срезов (Press M.F. et al. (1993) Cancer Res. 53:4960-70). Анализы, проведенные in vitro и на животных, показали, что трастузумаб ингибирует пролиферацию человеческих опухолевых клеток, которые сверхэкспрессируют HER2 (Hudziak R.M. et al. (1989) Mol. Cell. Biol. 9:1165-72; Lewis G.D. et al. (1993) Cancer Immunol. Immunother; 37:255-63; Baselga J. et al. (1998) Cancer Res. 58:2825-2831). Трастузумаб является медиатором антитело-зависимой клеточной цитотоксичности, ADCC (Hotaling T.E. et al. (1996) [abstract]. Proc. Annual. Meeting Am. Assoc. Cancer Res; 37:471; Pegram M.D. et al. (1997) [abstract] Proc. Am. Assoc. Cancer Res; 38:602). In vitro было показано, что опосредуемая трастузумабом ADCC наблюдается преимущественно на HER2-сверхэкспрессирующих раковых клетках по сравнению с раковыми клетками, которые не обнаруживают сверхэкспрессию HER2. Герцептин® представляет собой единственное средство, которое показано для лечения пациентов, страдающих раковыми опухолями молочной железы с метастазами, которые сверхэкспрессируют белок HER2, и для пациентов, проходивших один или несколько курсов химиотерапии по поводу рака с метастазами. Герцептин® в комбинации с паклитакселом показан для лечения пациентов, страдающих раковыми опухолями молочной железы с метастазами, которые сверхэкспрессируют белок HER2, и для пациентов, не проходивших курса химиотерапии по поводу рака с метастазами. Герцептин® является клинически активным у пациентов с ErbB2-сверхэкспрессирующими раковыми метастазирующими опухолями молочной железы, где указанные пациенты, перед противораковой терапией, проходили интенсивный курс лечения (Baselga et al. (1996) J. Clin. Oncol. 14:737-744).

Мышиное моноклональное анти-HER2 антитело ингибирует рост клеточных линий рака молочной железы, при котором наблюдается сверхэкспрессия HER2 на уровне 2+ и 3+ (1-2×10⁶ рецепторов HER2 на клетку), но это антитело не обладало активностью по отношению к клеткам, которые экспрессировали низкие уровни HER2 (Lewis et al. (1993) Cancer Immunol. Immunother. 37:255-263). Принимая во внимание эти наблюдения, антитело 4D5 было гуманизовано (huMab4D5-8, rhuMab HER2, патент США № 5821337; Carter et al. (1992) Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 89:4285-4289) и протестировано у пациентов с раковыми опухолями молочной железы, которые сверхэкспрессировали HER2, но при этом прогрессировали после проведения стандартной химиотерапии (Cobleigh et al. (1999) J. Clin. Oncol. 17:2639-2648).

Хотя получение герцептина является выдающимся научным достижением в лечении пациентов с ErbB2-сверхэкспрессирующими раковыми опухолями молочной железы, которые были предварительно подвергнуты интенсивной противораковой терапии, однако некоторые пациенты этой группы не обнаруживали какого-либо ответа или обнаруживали лишь незначительный ответ на лечение герцептином.

Поэтому остается актуальной необходимость в разработке других, имеющих важное клиническое значение способов HER2-направленной противораковой терапии пациентов с HER2-сверхэкспрессирующими опухолями или с другими заболеваниями, ассоциированными с экспрессией HER2, которые не поддаются или плохо поддаются лечению герцептином.

Любые работы, цитируемые в настоящей заявке, не должны рассматриваться как прототипы настоящего изобретения.

3. Описание сущности изобретения

В одном из своих аспектов настоящее изобретение относится к соединениям “лекарственное средство-линкер-лиганд”, имеющим формулу Ia:

L--(A_a--W_w--Y_y-D)_P (Ia)

или к их фармацевтически приемлемым солям или сольватам,

где: L представляет собой лигандный компонент;

-А_а-W_w-Y_y- представляет собой линкерный компонент (LU), где в указанном линкерном компоненте:

-А- представляет собой удлиняющий компонент;

а равно 0 или 1,

каждый из -W- независимо представляет собой аминокислотный компонент,

w равно целому числу от 0 до 12,

-Y- означает спейсерный компонент,

у равно 0, 1 или 2;

р составляет в пределах от 1 примерно до 20; и

-D представляет собой компонент “лекарственное средство”, имеющее формулы D_E и D_F;

где в каждом положении независимо:

R² выбран из Н и С₁-С₈алкила;

R³ выбран из Н, С₁-С₈алкила, С₃-С₈карбоцикла, арила, С₁-С₈алкиларила, С₁-С₈алкил-(С₃-С₈карбоцикла), С₃-С₈гетероцикла и С₁-С₈алкил-(С₃-С₈гетероцикла);

R⁴ выбран из Н, С₁-С₈алкила, С₃-С₈карбоцикла, арила, С₁-С₈алкиларила, С₁-С₈алкил-(С₃-С₈карбоцикла), С₃-С₈гетероцикла и С₁-С₈алкил-(С₃-С₈гетероцикла);

R⁵ выбран из Н и метила;

или R⁴ и R⁵, взятые вместе, образуют карбоциклическое кольцо и имеют формулу -(CR^aR^b)_n-, где R^a и R^b независимо выбраны из Н, С₁-С₈алкила и С₃-С₈карбоцикла, а n выбран из 2, 3, 4, 5 и 6;

R⁶ выбран из Н и С₁-С₈алкила;

R⁷ выбран из Н, С₁-С₈алкила, С₃-С₈карбоцикла, арила, С₁-С₈алкиларила, С₁-С₈алкил-(С₃-С₈карбоцикла), С₃-С₈гетероцикла и С₁-С₈алкил-(С₃-С₈гетероцикла);

каждый из R⁸ независимо выбран из Н, ОН, С₁-С₈алкила, С₃-С₈карбоцикла и О-(С₁-С₈алкила);

R⁹ выбран из Н и С₁-С₈алкила;

R¹⁰ выбран из арила или С₃-С₈гетероцикла;

Z представляет собой О, S, NH или -NR¹², где R¹² представляет собой С₁-С₈алкил;

R¹¹ выбран из Н, С₁-С₂₀алкила, арила, С₃-С₈гетероцикла, -(R¹³O)_m-R¹⁴ или (R¹³O)_m-СН(R¹⁵)₂;

m равно целому числу от 1 до 1000;

R¹³ представляет собой С₂-С₈-алкил;

R¹⁴ представляет собой Н или С₁-С₈алкил;

каждый из R¹⁵ независимо представляет собой Н, СООН, -(СН₂)_n-N(R¹⁶)₂, (СН₂)_n-SO₃H или -(СН₂)_n-SO₃-С₁-С₈алкил;

каждый из R¹⁶ независимо представляет собой Н, С₁-С₈алкил или -(СН₂)_n-СООН, где n равно целому числу от 0 до 6; и

R¹⁸ выбран из -С(R⁸)₂-С(R⁸)₂-арила, -С(R⁸)₂-С(R⁸)₂-(С₃-С₈-гетероцикла) и -С(R⁸)₂-С(R⁸)₂-(С₃-С₈-карбоцикла).

В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к лекарственным соединениям формулы Ib:

или к их фармацевтически приемлемым солям или сольватам,

где: R² выбран из водорода и С₁-С₈алкила;

R³ выбран из водорода, С₁-С₈алкила, С₃-С₈карбоцикла, арила, С₁-С₈алкиларила, С₁-С₈алкил-(С₃-С₈карбоцикла), С₃-С₈гетероцикла и С₁-С₈алкил-(С₃-С₈гетероцикла);

R⁴ выбран из водорода, С₁-С₈алкила, С₃-С₈карбоцикла, арила, С₁-С₈алкиларила, С₁-С₈алкил-(С₃-С₈карбоцикла), С₃-С₈гетероцикла и С₁-С₈алкил-(С₃-С₈гетероцикла), где R⁵ выбран из Н и метила, либо R⁴ и R⁵, взятые вместе с атомом углерода, с которым они связаны, образуют кольцо формулы -(CR^aR^b)_n-, где R^a и R^b независимо выбраны из Н, С₁-С₈алкила и С₃-С₈карбоцикла, а n выбран из 2, 3, 4, 5 и 6;

R⁶ выбран из Н и С₁-С₈алкила;

каждый из R⁸ независимо выбран из Н, ОН, С₁-С₈алкила, С₃-С₈карбоцикла и О-(С₁-С₈алкила);

R⁹ выбран из Н и С₁-С₈алкила;

R¹⁰ выбран из арильной группы или С₃-С₈гетероцикла;

Z представляет собой -О-, -S-, -NH- или -NR¹², где R¹² представляет собой С₁-С₈алкил;

R¹¹ выбран из Н, С₁-С₂₀алкила, арила, С₃-С₈гетероцикла, -(R¹³O)_m-R¹⁴ или (R¹³O)_m-СН(R¹⁵)₂;

m равно целому числу от 1 до 1000;

R¹³ представляет собой С₂-С₈-алкил;

R¹⁴ представляет собой Н или С₁-С₈алкил;

каждый из R¹⁵ независимо представляет собой Н, СООН, -(СН₂)_n-N(R¹⁶)₂, (СН₂)_n-SO₃H или -(СН₂)_n-SO₃-С₁-С₈алкил;

каждый из R¹⁶ независимо представляет собой Н, С₁-С₈алкил или -(СН₂)_n-СООН, и

n равно целому числу от 0 до 6.

Соединения формулы (Ib) могут быть использованы для лечения рака, аутоиммунного заболевания или инфекционного заболевания у пациента, либо они могут быть использованы в качестве промежуточного соединения для синтеза конъюгатов “лекарственное средство-линкер”, “лекарственное средство-линкер-лиганд” и “лекарственное средство-лиганд”, в которых указанное лекарственное средство является отщепляемым компонентом.

В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к композициям, включающим эффективное количество конъюгата “лекарственное средство-линкер-лиганд” и фармацевтически приемлемый носитель или наполнитель.

В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, включающим эффективное количество соединения “лекарственное средство-линкер” и фармацевтически приемлемый носитель или наполнитель.

В еще одном своем аспекте настоящее изобретение относится к композициям, включающим эффективное количество конъюгата “лекарственное средство-лиганд”, содержащего компонент “лекарственное средство”, отщепляемый от указанного конъюгата “лекарственное средство-лиганд”, и фармацевтически приемлемый носитель или наполнитель.

В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к способам лизиса или ингибирования размножения опухолевых клеток или раковых клеток, включающим введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества конъюгата “лекарственное средство-лиганд”, содержащего компонент “лекарственное средство”, отщепляемый от указанного конъюгата “лекарственное средство-лиганд”.

В еще одном своем аспекте настоящее изобретение относится к способам лечения рака, включающим введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества соединения “лекарственное средство-линкер”.

В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к способам лечения рака, включающим введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества конъюгата “лекарственное средство-лиганд”, содержащего компонент “лекарственное средство”, отщепляемый от указанного конъюгата “лекарственное средство-лиганд”.

В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к способам лизиса или ингибирования репликации клетки, которая экспрессирует аутоиммунное антитело, где указанный способ включает введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества соединения “лекарственное средство-линкер”.

В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к способам лизиса или ингибирования репликации клетки, которая экспрессирует аутоиммунное антитело, где указанный способ включает введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества конъюгата “лекарственное средство-линкер-лиганд”.

В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к способам лизиса или ингибирования репликации клетки, которая экспрессирует аутоиммунное антитело, где указанный способ включает введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества конъюгата “лекарственное средство-лиганд”, содержащего компонент “лекарственное средство”, отщепляемый от указанного конъюгата “лекарственное средство-лиганд”.

В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к способам лечения аутоиммунного заболевания, включающим введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества конъюгата “лекарственное средство-лиганд”, содержащего компонент “лекарственное средство”, отщепляемый от указанного конъюгата “лекарственное средство-лиганд”.

В еще одном своем аспекте настоящее изобретение относится к способам лечения инфекционного заболевания, включающим введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества соединения “лекарственное средство-линкер”.

В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к способам лечения инфекционного заболевания, включающим введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества конъюгата “лекарственное средство-лиганд”, содержащего компонент “лекарственное средство”, отщепляемый от указанного конъюгата “лекарственное средство-лиганд”.

В еще одном своем аспекте настоящее изобретение относится к способам лизиса размножения опухолевых клеток или раковых клеток, включающим введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества соединения “лекарственное средство-линкер”.

В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к способам предотвращения размножения опухолевых клеток или раковых клеток, включающим введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества конъюгата “лекарственное средство-лиганд”, содержащего компонент “лекарственное средство”, отщепляемый от указанного конъюгата “лекарственное средство-лиганд”.

В еще одном своем аспекте настоящее изобретение относится к способам профилактики рака, включающим введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества соединения “лекарственное средство-линкер”.

В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к способам профилактики рака, включающим введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества конъюгата “лекарственное средство-лиганд”, содержащего компонент “лекарственное средство”, отщепляемый от указанного конъюгата “лекарственное средство-лиганд”.

В еще одном своем аспекте настоящее изобретение относится к способам предотвращения размножения клеток, экспрессирующих аутоиммунное антитело, где указанные способы включают введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества соединения “лекарственное средство-линкер”.

В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к способам предотвращения размножения клеток, экспрессирующих аутоиммунное антитело, где указанные способы включают введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества конъюгата “лекарственное средство-линкер-лиганд”.

В еще одном своем аспекте настоящее изобретение относится к способам профилактики аутоиммунного заболевания, включающим введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества соединения “лекарственное средство-линкер”.

В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к способам профилактики аутоиммунного заболевания, включающим введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества конъюгата “лекарственное средство-лиганд”, содержащего компонент “лекарственное средство”, отщепляемый от указанного конъюгата “лекарственное средство-лиганд”.

В еще одном своем аспекте настоящее изобретение относится к способам профилактики инфекционного заболевания, включающим введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества соединения “лекарственное средство-линкер”.

В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к способам профилактики инфекционного заболевания, включающим введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества конъюгата “лекарственное средство-лиганд”, содержащего компонент “лекарственное средство”, отщепляемый от указанного конъюгата “лекарственное средство-лиганд”.

В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к лекарственному соединению, которое может быть использовано в качестве промежуточного соединения для синтеза соединения “лекарственное средство-линкер”, содержащего компонент “лекарственное средство”, отщепляемый от указанного конъюгата “лекарственное средство-лиганд”.

В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к соединению “лекарственное средство-линкер”, которое может быть использовано в качестве промежуточного соединения для синтеза конъюгата “лекарственное средство-линкер-лиганд”.

В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к соединениям формулы Ia':

Ab--(A_a--W_w--Y_y--D)_P (Ia')

или к их фармацевтически приемлемым солям или сольватам,

где: Ab-представляет собой антитело, включая антитело, которое связывается с CD30, CD40, CD70 и антигеном Lewis-Y;

А представляет собой удлиняющий компонент;

а равно 0 или 1,

каждый из -W- независимо представляет собой аминокислотный компонент,

w равно целому числу от 0 до 12,

Y означает спейсерный компонент,

у равно 0, 1 или 2,

р составляет в пределах от 1 примерно до 20; и

D представляет собой компонент “лекарственное средство”, выбранный из соединений формул D_E и D_F;

где в каждом положении независимо:

R² выбран из Н и С₁-С₈алкила;

R⁵ выбран из Н и метила;

R⁶ выбран из Н и С₁-С₈алкила;

каждый из R⁸ независимо выбран из Н, ОН, С₁-С₈алкила, С₃-С₈карбоцикла и О-(С₁-С₈алкила);

R⁹ выбран из Н и С₁-С₈алкила;

R¹⁰ выбран из арила или С₃-С₈гетероцикла;

Z представляет собой О, S, NH или -NR¹², где R¹² представляет собой С₁-С₈алкил;

R¹¹ выбран из Н, С₁-С₂₀алкила, арила, С₃-С₈гетероцикла, -(R¹³O)_m-R¹⁴ или (R¹³O)_m-СН(R¹⁵)₂;

m равно целому числу от 1 до 1000;

R¹³ представляет собой С₂-С₈-алкил;

R¹⁴ представляет собой Н или С₁-С₈алкил;

каждый из R¹⁵ независимо представляет собой Н, СООН, -(СН₂)_n-N(R¹⁶)₂, (СН₂)_n-SO₃H или -(СН₂)_n-SO₃-С₁-С₈алкил;

каждый из R¹⁶ независимо представляет собой Н, С₁-С₈алкил или -(СН₂)_n-СООН, и

R¹⁸ выбран из -С(R⁸)₂-С(R⁸)₂-арила, -С(R⁸)₂-С(R⁸)₂-(С₃-С₈-гетероцикла) и -С(R⁸)₂-С(R⁸)₂-(С₃-С₈-карбоцикла); и

n равно целому числу от 0 до 6.

В одном из вариантов изобретения Ab не является антителом, которое связывается с рецептором ErbB или которое связывается с одним или с несколькими рецепторами (1)-(35), таким как:

(1) BMPR1B (рецептор белка морфогенеза кости типа IB, Genbank рег. № NM_001203);

(2) Е16 (LAT1, SLC7A5, Genbank рег. № NM_003486);

(3) STEAP1 (шестидоменный трансмембранный эпителиальный антиген предстательной железы, Genbank рег. № NM_012449);

(4) 0772Р (СА125, MUC16, Genbank рег. № AF361486);

(5) MPF (MPF, MSLN, SMR, мегакариоцитарный потенцирующий фактор, мезотелин, Genbank рег. № NM_005823);

(8) PSCA hlg (2700050C12Rik, C530008O16Rik, кДНК RIKEN 2700050C12, кДНК гена RIKEN 2700050C12, Genbank рег. № AY358628);

(9) ETBR (рецептор эндотелина типа В, Genbank рег. № AY275463);

(10) MSG783 (RNF124, гипотетический белок FLJ20315, Genbank рег. № NM_017763);

(12) TrpM4 (BR22450, FLJ20041, TRPM4, TRPM4B, потенциал-зависимый катионный канал транзиентного рецептора, член 4 подсемейства М, Genbank рег. № NM_017636);

(13) CRIPTO (CR, CR1, CRGF, CRIPTO, TDGF1, фактор роста, происходящий от тератокарциномы, Genbank рег. № NP_003203 или NM_003212);

(14) CD21 (CR2 (рецептор комплемента 2), или C3DR (C3d/рецептор вируса Эпштейна-Барра), или Hs.73792, Genbank рег. № M26004);

(15) CD79b (IGb (бета-белок, связанный с иммуноглобулином), В29, Genbank рег. № NM_000626);

(16) FcRH2 (IFGP4, IRTA4, SPAP1A (фосфатазный якорный белок 1а, содержащий домен SH2), SPAP1B, SPAP1C, Genbank рег. № NM_030764);

(17) HER2 (Genbank рег. № M11730);

(18) NCA (Genbank рег. № М18728);

(19) MDP (Genbank рег. № BC017023);

(20) IL20Rα (Genbank рег. № AF184971);

(21) Brevican (Genbank рег. № AF229053);

(22) Ephb2R (Genbank рег. № NM_004442);

(23) ASLG659 (Genbank рег. № AX092328);

(24) PSCA (Genbank рег. № AJ297436);

(25) GEDA (Genbank рег. № AY260763);

(26) BAFF-R (Genbank рег. № NP_443177.1);

(27) CD22 (Genbank рег. № NP-001762.1);

(30) HLA-DOB (бета-субъединица молекулы МНС класса II (антиген Ia), которая связывается с пептидами и презентирует их CD4⁺-Т-лимфоцитам, Genbank рег. № NP_002111.1);

(32) CD72 (антиген CD72 линии В-клеточной дифференцировки, Lyb-2, Genbank рег. № NP_001773.1);

В еще одном своем аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, включающим эффективное количество конъюгата “лекарственное средство-линкер-антитело” и фармацевтически приемлемый носитель или наполнитель.

В еще одном своем аспекте настоящее изобретение относится к композициям, включающим эффективное количество конъюгата “лекарственное средство-антитело”, где указанное лекарственное средство (часть) отщепляется от указанного конъюгата “лекарственное средство-антитело”, и фармацевтически приемлемый носитель или наполнитель.

В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к способам лизиса или ингибирования размножения опухолевых клеток или раковых клеток, включающим введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества конъюгата “лекарственное средство-антитело”, содержащего компонент “лекарственное средство”, отщепляемый от указанного конъюгата “лекарственное средство-антитело”.

В еще одном своем аспекте настоящее изобретение относится к способам лечения рака, включающим введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества конъюгата “лекарственное средство-линкер -антитело”.

В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к способам лечения рака, включающим введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества конъюгата “лекарственное средство-антитело”, содержащего компонент “лекарственное средство”, отщепляемый от указанного конъюгата “лекарственное средство-антитело”.

В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к способам лизиса или ингибирования репликации клетки, которая экспрессирует аутоиммунное антитело, где указанный способ включает введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества конъюгата “лекарственное средство-линкер-антитело”.

В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к способам лизиса или ингибирования репликации клетки, которая экспрессирует аутоиммунное антитело, где указанный способ включает введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества конъюгата “лекарственное средство-антитело”, содержащего компонент “лекарственное средство”, отщепляемый от указанного конъюгата “лекарственное средство-антитело”.

В еще одном своем аспекте настоящее изобретение относится к способам лечения аутоиммунного заболевания, включающим введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества конъюгата “лекарственное средство-антитело”, содержащего компонент “лекарственное средство”, отщепляемый от указанного конъюгата “лекарственное средство-антитело”.

В еще одном своем аспекте настоящее изобретение относится к способам лечения инфекционного заболевания, включающим введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества конъюгата “лекарственное средство-линкер-антитело”.

В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к способам лечения инфекционного заболевания, включающим введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества конъюгата “лекарственное средство-антитело”, содержащего компонент “лекарственное средство”, отщепляемый от указанного конъюгата “лекарственное средство-антитело”.

В еще одном своем аспекте настоящее изобретение относится к способам предотвращения размножения опухолевых клеток или раковых клеток, включающим введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества конъюгата “лекарственное средство-линкер-антитело”.

В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к способам предотвращения размножения опухолевых клеток или раковых клеток, включающим введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества конъюгата “лекарственное средство-антитело”, содержащего компонент “лекарственное средство”, отщепляемый от указанного конъюгата “лекарственное средство-антитело”.

В еще одном своем аспекте настоящее изобретение относится к способам профилактики рака, включающим введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества конъюгата “лекарственное средство-антитело”, содержащего компонент “лекарственное средство”, отщепляемый от указанного конъюгата “лекарственное средство-антитело”.

В еще одном своем аспекте настоящее изобретение относится к способам профилактики аутоиммунного заболевания, включающим введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества конъюгата “лекарственное средство-линкер-антитело”.

В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к способам профилактики аутоиммунного заболевания, включающим введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества конъюгата “лекарственное средство-антитело”, содержащего компонент “лекарственное средство”, отщепляемый от указанного конъюгата “лекарственное средство-антитело”.

В еще одном своем аспекте настоящее изобретение относится к способам профилактики инфекционного заболевания, включающим введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества конъюгата “лекарственное средство-линкер-антитело”.

В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к способам профилактики инфекционного заболевания, включающим введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества конъюгата “лекарственное средство-антитело”, содержащего компонент “лекарственное средство”, отщепляемый от указанного конъюгата “лекарственное средство-антитело”.

В одном из своих аспектов настоящее изобретение относится к конъюгатам “лекарственное средство-линкер-антитело” (также называемым конъюгатами “антитело-лекарственное средство”), имеющим формулу Ic:

Ab--(A_a--W_w--Y_y--D)_P (Ic)

или к их фармацевтически приемлемым солям или сольватам,

где: Ab-представляет собой антитело, которое связывается с одним или несколькими антигенами (1)-(35), такими как:

(1) BMPR1B (рецептор белка морфогенеза кости типа IB, Genbank рег. № NM_001203);

(2) Е16 (LAT1, SLC7A5, Genbank рег. № NM_003486);

(3) STEAP1 (шестидоменный трансмембранный эпителиальный антиген предстательной железы, Genbank рег. № NM_012449);

(4) 0772Р (СА125, MUC16, Genbank рег. № AF361486);

(5) MPF (MPF, MSLN, SMR, мегакариоцитарный потенцирующий фактор, мезотелин, Genbank рег. № NM_005823);

(6) Napi3b (NAPI-3B, NpTIIb, SLC34A2, член 2 семейства растворимых носителей 34 (фосфат натрия), натрий-зависимый фосфат-переносящий белок 3b типа II, Genbank рег. № NM_006424);

(8) PSCA hlg (2700050C12Rik, C530008O16Rik, кДНК RIKEN 2700050C12, кДНК гена RIKEN 2700050C12, Genbank рег. № AY358628);

(9) ETBR (рецептор эндотелина типа В, Genbank рег. № AY275463);

(10) MSG783 (RNF124, гипотетический белок FLJ20315, Genbank рег. № NM_017763);

(13) CRIPTO (CR, CR1, CRGF, CRIPTO, TDGF1, фактор роста, происходящий от тератокарциномы, Genbank рег. № NP_003203 или NM_003212);

(14) CD21 (CR2 (рецептор комплемента 2), или C3DR (C3d/рецептор вируса Эпштейна-Барра), или Hs.73792, Genbank рег. № M26004);

(15) CD79b (IGb (бета-белок, связанный с иммуноглобулином), В29, Genbank рег. № NM_000626);

(16) FcRH2 (IFGP4, IRTA4, SPAP1A (фосфатазный якорный белок 1а, содержащий домен SH2), SPAP1B, SPAP1C, Genbank рег. № NM_030764);

(17) HER2 (Genbank рег. № M11730);

(18) NCA (Genbank рег. № М18728);

(19) MDP (Genbank рег. № BC017023);

(20) IL20Rα (Genbank рег. № AF184971);

(21) Brevican (Genbank рег. № AF229053);

(22) Ephb2R (Genbank рег. № NM_004442);

(23) ASLG659 (Genbank рег. № AX092328);

(24) PSCA (Genbank рег. № AJ297436);

(25) GEDA (Genbank рег. № AY260763);

(26) BAFF-R (Genbank рег. № NP_443177.1);

(27) CD22 (Genbank рег. № NP-001762.1);

(32) CD72 (антиген CD72 линии В-клеточной дифференцировки, Lyb-2, Genbank рег. № NP_001773.1);

А представляет собой удлиняющий компонент;

а равно 0 или 1,

каждый из -W- независимо представляет собой аминокислотный компонент,

w равно целому числу от 0 до 12,

Y означает спейсерный компонент,

у равно 0, 1 или 2;

р составляет в пределах от 1 примерно до 20; и

D представляет собой лекарственное средство, выбранное из соединений формул D_E и D_F;

где: волнистая линия в формулах D_E и D_F означает сайт ковалентного связывания с А, W или Y и где в каждом положении независимо:

R² выбран из Н и С₁-С₈алкила;

R⁵ выбран из Н и метила;

R⁶ выбран из Н и С₁-С₈алкила;

R⁷ выбран из Н и С₁-С₈алкила, С₃-С₈карбоцикла, арила, С₁-С₈алкиларила, С₁-С₈алкил-(С₃-С₈карбоцикла), С₃-С₈гетероцикла и С₁-С₈алкил-(С₃-С₈гетероцикла);

каждый из R⁸ независимо выбран из Н, ОН, С₁-С₈алкила, С₃-С₈карбоцикла и О-(С₁-С₈алкила);

R⁹ выбран из Н и С₁-С₈алкила;

R¹⁰ выбран из арила или С₃-С₈гетероцикла;

Z представляет собой О, S, NH или -NR¹², где R¹² представляет собой С₁-С₈алкил;

R¹¹ выбран из Н, С₁-С₂₀алкила, арила, С₃-С₈гетероцикла, -(R¹³O)_m-R¹⁴ или (R¹³O)_m-СН(R¹⁵)₂;

m равно целому числу от 1 до 1000;

R¹³ представляет собой С₂-С₈-алкил;

R¹⁴ представляет собой Н или С₁-С₈алкил;

каждый из R¹⁵ независимо представляет собой Н, СООН, -(СН₂)_n-N(R¹⁶)₂, (СН₂)_n-SO₃H или -(СН₂)_n-SO₃-С₁-С₈алкил;

каждый из R¹⁶ независимо представляет собой Н, С₁-С₈алкил или -(СН₂)_n-СООН, и

R¹⁸ выбран из -С(R⁸)₂-С(R⁸)₂-арила, -С(R⁸)₂-С(R⁸)₂-(С₃-С₈-гетероцикла) и -С(R⁸)₂-С(R⁸)₂-(С₃-С₈-карбоцикла); и

n равно целому числу от 0 до 6.

В другом аспекте изобретения антитело в конъюгате “антитело-лекарственное средство” (ADC) согласно изобретению специфически связывается с рецептором, кодируемым геном ErbB2.

В другом аспекте изобретения антитело в конъюгате “антитело-лекарственное средство” представляет собой гуманизованное антитело, выбранное из huMAb4D5-1, huMAb4D5-2, huMAb4D5-3, huMAb4D5-4, huMAb4D5-5, huMAb4D5-6, huMAb4D5-7 и huMAb4D5-8 (трастузумаб).

В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к изделию, содержащему соединение в виде конъюгата “антитело-лекарственное средство” согласно изобретению; контейнер и вкладыш, вложенный в упаковку, или этикетку на упаковке, указывающие, что данное соединение может быть использовано для лечения раковой опухоли, характеризующейся сверхэкспрессией рецептора ErbB2.

В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к способу лечения рака у млекопитающего, где указанный рак характеризуется сверхэкспрессией рецептора ErbB2 и не поддается или плохо поддается лечению анти-ErbB2 антителом и где указанный способ включает введение указанному млекопитающему терапевтически эффективного количества конъюгата “антитело-лекарственное средство” согласно изобретению.

В другом аспекте настоящего изобретения значительное количество указанной молекулы лекарственного средства не отщепляется от антитела до тех пор, пока указанное соединение-конъюгат “антитело-лекарственное средство” не проникнет в клетку, имеющую на своей поверхности рецептор, являющийся специфичным для данного антитела, присутствующего в указанном конъюгате “антитело-лекарственное средство”, и указанная молекула лекарственного средства отщепляется от указанного антитела лишь тогда, когда конъюгат “антитело-лекарственное средство” проникнет в указанную клетку.

В другом аспекте настоящего изобретения биодоступность соединения-конъюгата “антитело-лекарственное средство” или внутриклеточного метаболита указанного соединения в организме млекопитающего является лучше, чем биодоступность лекарственного соединения, содержащего молекулу лекарственного средства, присутствующего в соединении-конъюгате “антитело-лекарственное средство”, или лучше, чем биодоступность аналога соединения, не содержащего молекулу лекарственного средства.

В другом аспекте настоящего изобретения указанная молекула лекарственного средства представляет собой молекулу, которая в организме млекопитающего подвергается внутриклеточному отщеплению от антитела, являющегося компонентом данного соединения или внутриклеточного метаболита данного соединения.

В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей эффективное количество соединения-конъюгата “антитело-лекарственное средство” согласно изобретению или его фармацевтически приемлемой соли и фармацевтически приемлемый разбавитель, носитель или наполнитель. Указанная композиция может дополнительно содержать терапевтически эффективное количество химиотерапевтического агента, такого как тубулин-образующий ингибитор, ингибитор топоизомеразы и ДНК-связывающий агент.

В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к способу лизиса или ингибирования пролиферации опухолевых или раковых клеток, включающему обработку опухолевых или раковых клеток определенным количеством соединения-конъюгата “антитело-лекарственное средство” согласно изобретению или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата, которое является эффективным для лизиса или ингибирования пролиферации указанных опухолевых или раковых клеток.

В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к способу ингибирования пролиферации клеток, включающему обработку клеток млекопитающего, присутствующих в среде для культивирования клеток, соединением-конъюгатом “антитело-лекарственное средство” согласно изобретению, где указанное соединение-конъюгат “антитело-лекарственное средство” проникает в клетку, а затем лекарственное средство отщепляется от указанного соединения-конъюгата “антитело-лекарственное средство”, в результате чего происходит ингибирование пролиферации клеток.

В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к способу лечения рака, включающему введение пациенту композиции, содержащей соединение-конъюгат “антитело-лекарственное средство” и фармацевтически приемлемый разбавитель, носитель или наполнитель.

В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к анализу для обнаружения раковых клеток, включающему:

(а) обработку клеток соединением-конъюгатом “антитело-лекарственное средство” согласно изобретению и

(b) определение степени связывания соединения-конъюгата “антитело-лекарственное средство” с указанными клетками.

Для лучшего понимания настоящего изобретения ниже приводится подробное описание примеров его осуществления, проиллюстрированного на прилагаемом графическом материале и схемах. Представленное ниже обсуждение носит лишь описательный, иллюстративный и репрезентативный характер и не должно рассматриваться как ограничение объема прилагаемой ниже формулы изобретения.

Краткое описание графического материала

На фиг.1 проиллюстрирован эффективный анализ in vivo, проводимый с помощью введения одной дозы сАС10-mcMMAF в подкожные ксенотрансплантаты ALCL Karpas-299.

На фиг.2 проиллюстрирован эффективный анализ in vivo, проводимый путем введения одной дозы сАС10-mcMMAF в подкожный L540cy. Это исследование проводили на 4 мышах группы, не подвергаемой обработке, и на 10 мышах в каждой группе обработки.

На фиг.3а и 3b проиллюстрирована in vivo эффективность cBR96-mcMMAF в подкожном L2987. Заштрихованные треугольники на фиг.3а и стрелки на фиг.3b указывают на дни проведения терапии.

На фиг.4а и 4b проиллюстрирована in vitro активность конъюгатов “антитело сАС10-лекарственное средство”, направленная против CD30⁺-клеточных линий.

На фиг.5а и 5b проиллюстрирована in vitro активность конъюгатов “антитело cBR96-лекарственное средство”, направленная против Le^y+-клеточных линий.

На фиг.6а и 6b проиллюстрирована in vitro активность конъюгатов “антитело c1F6-лекарственное средство”, направленная против CD70⁺-клеточных линий карциномы почек.

На фиг.7 проиллюстрирован in vitro анализ на пролиферацию клеток с использованием клеток SK-BR-3, обработанных конъюгатами “антитело-лекарственное средство” (ADC): -●- трастузумаб-МС-vc-РАВ-MMAF, 3,8 MMAF/Ab, -o-трастузумаб-МС-MMAF, 4,1 MMAF/Ab, и -Δ-трастузумаб-МС-MMAF, 4,8 MMAF/Ab, измеренные в относительных единицах флуоресценции (RLU) по отношению к концентрации ADC (мкг/мл). Н=трастузумаб, где Н присоединен посредством цистеина [cys].

На фиг.8 проиллюстрирован in vitro анализ на пролиферацию клеток с использованием клеток ВТ-474, обработанных ADC: -●- трастузумаб-МС-vc-РАВ-MMAF, 3,8 MMAF/Ab, -o-трастузумаб-МС-MMAF, 4,1 MMAF/Ab, и -Δ- трастузумаб-МС-MMAF, 4,8 MMAF/Ab.

На фиг.9 проиллюстрирован in vitro анализ на пролиферацию клеток с использованием клеток MCF-7, обработанных ADC: -●- трастузумаб-МС-vc-РАВ-MMAF, 3,8 MMAF/Ab, -o-трастузумаб-МС-(N-Me)-vc-PAB-MMAF, 3,9 MMAF/Ab, и -Δ- трастузумаб-МС-MMAF, 4,1 MMAF/Ab.

На фиг.10 проиллюстрирован in vitro анализ на пролиферацию клеток с использованием клеток MDA-MB-468, обработанных ADC: -●- трастузумаб-МС-vc-РАВ-MMAE, 4,1 MMAE/Ab, -o- трастузумаб-МС-vc-РАВ-MMAE, 3,3 MMAE/Ab, и -Δ- трастузумаб-МС-vc-РАВ-MMAF, 3,7 MMAF/Ab.

На фиг.11 проиллюстрировано исследование по выведению концентраций из плазмы после введения Н-МС-vc-РАВ-MMAF-TEG и Н-МС-vc-РАВ-MMAF крысам Sprague-Dawley: вводимая доза составляла 2 мг ADC на кг массы тела крысы. Концентрации общего антитела и ADC измеряли в зависимости от времени (Н=трастузумаб).

На фиг.12 проиллюстрировано исследование по выведению концентраций из плазмы после введения Н-МС-vc-MMAE собакоподобным обезьянам в различных дозах: 0,5; 1,5; 2,5; 3,0 мг/кг в дни 1 и 21. Концентрации общего антитела и ADC измеряли в зависимости от времени (Н=трастузумаб).

На фиг.14 проиллюстрировано изменение среднего объема опухоли в зависимости от времени у бестимусных “голых” мышей с аллотрансплантатами опухолей молочной железы MMTV-HER2 Fo5, которым на день 0 вводили: 10 мг/кг (660 мкг/м²) трастузумаб-МС-ММАЕ и 1250 мкг/м² трастузумаб-МС-vc-РАВ-ММАЕ.

На фиг.15 проиллюстрировано изменение среднего объема опухоли в зависимости от времени у бестимусных “голых” мышей с аллотрансплантатами опухолей молочной железы MMTV-HER2 Fo5, которым на день 0 вводили: носитель и 650 мкг/м² трастузумаб-МС-MMAF.

На фиг.16 проиллюстрировано изменение среднего объема опухоли в зависимости от времени у бестимусных “голых” мышей с аллотрансплантатами опухолей молочной железы MMTV-HER2 Fo5, которым на день 0 вводили: носитель и 350 мкг/м² четырех конъюгатов трастузумаб-МС-MMAF, где отношение MMAF/трастузумаб (Н) составляло 2, 4, 5,9 и 6.

На фиг.17 проиллюстрировано изменение средней массы тела, с величиной ошибки, для групп животных (крыс) (среднее ± ср. кв. от.) после введения носителя, трастузумаб-МС-val-cit-MMAF, трастузумаб-МС(Ме)-val-cit-РАВ-MMAF, трастузумаб-МС-MMAF и трастузумаб-МС-val-cit-РАВ-MMAF.

На фиг.18 проиллюстрировано изменение средней массы тела для групп животных (крыс) (среднее ± ср. кв. от.) после введения 9,94 мг/кг Н-МС-vc-MMAF, 24,90 мг/кг Н-МС-vc-MMAF, 10,69 мг/кг Н-МС(Ме)-vc-РАВ-MMAF, 26,78 мг/кг Н-МС(Ме)-vc-РАВ-MMAF, 10,17 мг/кг Н-МС-MMAF, 25,50 мг/кг Н-МС-MMAF и 21,85 мг/кг Н-МС-vc-РАВ-MMAF. Н=трастузумаб. В каждом конъюгате линкер МС связан посредством цистеина трастузумаба.

На фиг.19 проиллюстрировано изменение средней массы тела, с величиной ошибки, для групп крыс Sprague-Dawley (среднее ± ср. кв. от.) после введения трастузумаб(Н)-МС-MMAF в дозах 2105, 3158 и 4210 мкг/м². В каждом конъюгате линкер МС связан посредством цистеина трастузумаба.

4. Подробное описание репрезентативных вариантов осуществления изобретения

4.1. Определения и сокращения

Если это не оговорено особо, то используемые здесь термины и выражения имеют следующие значения.

Используемый заявителями термин “торговые знаки” независимо означает защищенный торговым знаком готовый продукт, непатентованное лекарственное средство и активный(е) ингредиент(ы) продукта, защищенный(ые) торговым знаком.

Используемый здесь термин “антитело” применяется в самом широком смысле, а в частности охватывает интактные моноклональные антитела, поликлональные антитела, мультиспецифические антитела (например, биспецифические антитела), образованные, по меньшей мере, из двух интактных антител, и фрагменты антител, при условии, что они обладают нужной биологической активностью. Антитело представляет собой белок, который генерируется иммунной системой и который способен распознавать специфический антиген и связывается с этим антигеном. Что касается структуры антитела, то оно обычно представляет собой Y-образный белок, состоящий из четырех аминокислотных цепей, двух тяжелых и двух легких цепей. Каждое антитело имеет, главным образом, две области: вариабельную область и константную область. Вариабельная область, расположенная на концах ветвей Y, связывается и взаимодействует с антигеном-мишенью. Эта вариабельная область включает гипервариабельную область (комплементарность-определяющую область, CDR), которая распознает специфический сайт связывания на конкретном антигене и связывается с ним. Константная область, расположенная на “хвосте” Y, распознается иммунной системой и взаимодействует с этой иммунной системой (Janeway C. Travers, P., Walport M. Shlomchik (2001) Immuno Biology, 5th Ed., Garland Publishing, New York). Антиген-мишень обычно имеет множество сайтов связывания, так называемых эпитопов, распознаваемых CDR на множестве антител. Каждое антитело, которое специфически связывается с другим эпитопом, имеет структуру, отличающуюся от структуры другого антитела. Таким образом, один антиген может иметь более чем одно соответствующее ему антитело.

Используемый здесь термин “антитело” также означает полноразмерную молекулу иммуноглобулина или иммунологически активную часть полноразмерной молекулы иммуноглобулина, то есть молекулы, содержащей антигенсвязывающий сайт, который иммуноспецифически связывается с антигеном представляющей интерес мишени или ее части, где указанными мишенями являются, но не ограничиваются ими, раковые клетки или клетки, которые продуцируют аутоиммунные антитела, ассоциированные с аутоиммунным заболеванием. Описанными здесь иммуноглобулинами могут быть молекулы иммуноглобулина любого типа (например, IgG, IgE, IgM, IgD и IgA), класса (например, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 и IgA2) или подкласса. Иммуноглобулины могут происходить от молекул любых видов. Однако в одном из аспектов изобретения иммуноглобулином является человеческий, мышиный или кроличий иммуноглобулин. В другом аспекте изобретения указанными антителами являются поликлональные, моноклональные, биспецифические, человеческие, гуманизованные или химерные антитела, одноцепочечные антитела, Fv-, Fab-, F(ab')-, F(ab')₂-фрагменты, фрагменты, продуцируемые библиотекой экспрессируемых Fab-фрагментов, антиидиотипические (анти-Id) антитела, CDR и эпитоп-связывающие фрагменты любого из вышеперечисленных антител, которые иммуноспецифически связываются с антигенами раковых клеток, вирусными антигенами или микробными антигенами.

Используемый здесь термин “моноклональное антитело” означает антитело, полученное от популяции, в основном, гомогенных антител, то есть отдельных антител, входящих в данную популяцию и являющихся идентичными за исключением возможных природных мутаций, которые могут присутствовать в небольших количествах. Моноклональные антитела являются в высокой степени специфическими и направлены против одной антигенной детерминанты. Кроме того, в отличие от препаратов поликлональных антител, которые включают различные антитела, направленные против различных детерминант (эпитопов), каждое моноклональное антитело направлено против одной детерминанты на антигене. Помимо своей специфичности, моноклональные антитела обладают тем преимуществом, что они могут быть синтезированы так, чтобы они не содержали примесей других антител. Термин “моноклональный” указывает на тип антитела, полученного, по существу, от гомогенной популяции антител, но этот термин не означает, что данное антитело должно быть продуцировано каким-либо конкретным методом. Так, например, моноклональные антитела согласно изобретению могут быть получены с помощью гибридомной технологии, впервые описанной Kohler et al. (1975) Nature 256:495, или методами рекомбинантных ДНК (см. патент США № 4816567). “Моноклональные антитела” могут быть также выделены из фаговых библиотек антител методами, описанными, например, Clackson et al. (1991) Nature 352:624-628 и Marks et al. (1991) J. Mol. Biol. 222:581-597.

Используемые здесь моноклональные антитела включают, в частности, “химерные” антитела, в которых часть тяжелой и/или легкой цепи идентична или гомологична соответствующим последовательностям антител, происходящих от конкретного вида или принадлежащих к конкретному классу или подклассу антител, а остальная(ые) цепь(и) идентична(ы) или гомологична(ы) соответствующим последовательностям антител, происходящих от другого вида или принадлежащих к другому классу или подклассу антител, а также включают фрагменты таких антител, при условии, что они обладают нужной биологической активностью (патент США № 4816567 и Morrison et al. (1984) Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 81:6851-6855).

Для продуцирования моноклональных антител (MAb) были применены различные методы. В гибридомной технологии, применяемой к клонированным клеточным линиям, которые продуцируют антитело одного типа, используются клетки различных видов, включая мышей, хомячков, крыс и человека. Другой метод получения MAb предусматривает применение техники генной инженерии, включая методы рекомбинантных ДНК. Моноклональными антителами, полученными такими методами, являются, среди прочих, химерные антитела и гуманизованные антитела. Химерное антитело объединяет области, кодируемые ДНК и происходящие от более чем одного вида. Так, например, химерное антитело может происходить от вариабельной области мышиного антитела и константной области человеческого антитела. Гуманизованное антитело происходит преимущественно от человеческого антитела, даже если оно содержит области не-человеческого антитела. Подобно химерному антителу, гуманизованное антитело может содержать полностью человеческую константную область. Однако, в отличие от химерного антитела, его вариабельная область может частично происходить от человеческого антитела. Не-человеческие синтетические части гуманизованного антитела часто происходят от CDR мышиных антител. В любом случае эти области играют решающую роль в распознавании антителом специфического антигена и в его связывании с этим антигеном.

Как уже отмечалось, могут быть использованы мышиные антитела. Хотя мышиные антитела могут быть использованы в диагностике и в непродолжительных курсах терапии, однако их введение человеку в течение длительного периода времени приводит к увеличению риска продуцирования у человека нежелательного иммуногенного ответа. Таким ответом является вырабатывание человеческого антимышиного антитела (НАМА), которое продуцируется в том случае, когда человеческая иммунная система распознает мышиное антитело как чужеродное и атакует его. НАМА-ответ может вызывать токсический шок или даже приводить к смерти.

Химерные и гуманизованные антитела позволяют снижать вероятность НАМА-ответа путем минимизации не-человеческих частей введенных антител. Кроме того, химерные и гуманизованные антитела имеют то преимущество, что они активируют вторичные иммунные ответы у человека, такие как антитело-зависимая клеточная цитотоксичность.

“Фрагменты антител” содержат часть интактного антитела, а предпочтительно его антигенсвязывающую или вариабельную область. Примерами фрагментов антител являются Fab-, Fab'-, F(ab')₂ и Fv-фрагменты; диатела; линейные антитела; одноцепочечные молекулы антител и мультиспецифические антитела, происходящие от фрагмента(ов) антитела.

“Интактное” антитело представляет собой антитело, содержащее антигенсвязывающую вариабельную область, а также константный домен легкой цепи (CL) и константные домены тяжелой цепи, СН1, СН2 и СН3. Константные домены могут представлять собой константные домены нативной последовательности (например, константные домены человеческой нативной последовательности) или их варианты аминокислотных последовательностей.

Интактное антитело может иметь одно или несколько “эффекторных” функций”, которые означают биологические активности, приписываемые Fc-области (Fc-области нативной последовательности или Fc-области варианта аминокислотной последовательности) антитела. Примерами эффекторных функций антител являются связывание с C1q; комплемент-зависимая цитотоксичность; связывание с Fc-рецептором; антитело-зависимая клеточно-опосредуемая цитотоксичность (ADCC); фагоцитоз; ингибирование рецепторов клеточной поверхности (например, В-клеточного рецептора; BCR) и т.п.

Интактные антитела, в зависимости от аминокислотной последовательности константного домена их тяжелых цепей, могут быть отнесены к различным “классам”. Существует пять главных классов интактных антител: IgA, IgD, IgE, IgG и IgM, и некоторые из этих классов могут быть подразделены на “подклассы” (изотипы), например IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA и IgA2. Константные домены тяжелой цепи, которые соответствуют различным классам антител, называются α, δ, ε, γ и µ соответственно. Структуры субъединиц и трехмерные конфигурации иммуноглобулинов различных классов хорошо известны.

Используемые здесь термины “ErbB2” и “HER2” являются взаимозаменяемыми и означают человеческий белок HER2, описанный, например, Semba et al. Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 82:6497-6501 (1985) и Yamamoto et al. (1986) Nature, 319:230-234 (Genbank рег. № Х03363). Термин “erbB2” означает ген, кодирующий человеческий ErbB2, а “neu” означает ген, кодирующий крысиный p185^neu. Предпочтительным ErbB2 является человеческий ErbB2 с нативной последовательностью.

Антитела против рецепторов ErbB являются коммерчески доступными и могут быть получены из различных источников, включая, например, Santa Cruz Biotechnology, Inc., California, USA.

“Лиганд ErbB” означает полипептид, который связывается с рецептором ErbB и/или активирует этот рецептор. Лигандом ErbB может быть человеческий лиганд ErbB, имеющий нативную последовательность, такой как эпидермальный фактор роста (EGF) (Savage et al. (1972) J. Biol. Chem. 247:7612-7621); трансформирующий фактор роста-альфа (TGF-α) (Marquardt et al. (1984) Science 223:1079-1082); амфирегулин, также известный как шванома или аутокринный фактор роста кератиноцитов (Shoyab et al. (1989) Science 243:1074-1076; Kimura et al. Nature, 348:257-260 (1990) и Cook et al. Mol. Cell. Biol. 11:2547-2557 (1991)); бетацеллюлин (Shing et al. Science, 259:1604-1607 (1993) & Sasada et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., 190:1173 (1993)); гепарин-связывающий эпидермальный фактор роста (HB-EGF) (Higashiyama et al., Science, 251:936-939 (1991)); эпирегулин (Toyoda et al., J. Biol. Chem. 270:7495-7500 (1995) & Komurasaki et al. Oncogene, 15:2841-2848 (1997)); герегулин (см. ниже); нейрегулин-2 (NRG-2) (Caraway et al. Nature 387:512-516 (1997)); нейрегулин-3 (NRG-3) (Zhang et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 94:9562-9567 (1997)); нейрегулин-4 (NRG-4) (Harari et al., Oncogene 18:2681-89 (1999)) или крипто (CR-1) (Kannan et al., J. Biol. Chem. 272(6):3330-3335 (1997)). Лигандами ErbB, которые связываются с EGFR, являются EGF, TGF-α, амфирегулин, бетацеллюлин, HB-EGF и эпирегулин. Лигандами ErbB, которые связываются с ErbB3, являются герегулины. Лигандами ErbB, способными связываться с ErbB4, являются бетацеллюлин, эпирегулин, HB-EGF, NRG-2, NRG-3, NRG-4 и герегулины. Лигандом ErbB может быть также синтетический лиганд ErbB. Такой синтетический лиганд может быть специфичным к конкретному рецептору ErbB, либо он может распознавать конкретные комплексы рецепторов ErbB. Примером синтетического лиганда является синтетический герегулин/химера “EGF-бирегулин” (см., например, работу Jones et al. (1999) FEBS Letters, 447:227-231, которая вводится в настоящее описание посредством ссылки).

“Герегулин” (HRG) означает полипептид, кодируемый продуктом гена герегулина, описанного в патенте США № 5641869 или Marchionni et al., Nature, 362:312-318 (1993). Примерами герегулинов являются герегулин-α, герегулин-β1, герегулин-β2 и герегулин-β3 (Holmes et al. Science, 256:1205-1210 (1992) и патент США № 5641869); фактор дифференцировки neu (NDF) (Peles et al. Cell 69:205-216 (1992)); фактор, индуцирующий рецептор ацетилхолина (ARIA) (Falls et al. (1993) Cell 72:801-815); факторы роста глиальных клеток (GGF) (Marchionni et al., Nature 362:312-318 (1993)); фактор, происходящий от афферентных и мотонейронов (SMDF) (Ho et al., J. Biol. Chem. 270:14523-14532 (1995)); γ-герегулин (Shaefer et al., Oncogene, 15:1385-1394 (1997)). Указанный термин включает биологически активные фрагменты и/или варианты аминокислотных последовательностей нативного полипептида HRG, такие как фрагмент EGF-подобного домена (например, HRGβ1177-244).

“Гетероолигомер ErbB” представляет собой нековалентно связанный олигомер, включающий, по крайней мере, два различных рецептора ErbB. “Димер ErbB” представляет собой нековалентно связанный олигомер, включающий, по крайней мере, два различных рецептора ErbB. Такие комплексы могут образовываться в том случае, если клетка, экспрессирующая два или более рецепторов ErbB, подвергается воздействию лиганда ErbB. Олигомеры ErbB, такие как димеры ErbB, могут быть выделены путем иммунопреципитации и проанализированы с помощью электрофореза в ПААГ с ДСН, как описано, например, у Sliwkowski et al. J. Biol. Chem., 269(20):14661-14665 (1994). Примерами таких гетероолигомеров ErbB являются комплексы EGFR-ErbB2 (называемые также HER1/HER2), ErbB2-ErbB3 (HER2/HER3) и ErbB3-ErbB4 (HER3/HER4). Кроме того, гетероолигомер ErbB может содержать два или более рецепторов ErbB2, объединенных с другими рецепторами ErbB, такими как ErbB3, ErbB4 или EGFR (ErbB1). В состав такого гетероолигомера могут входить и другие белки, такие как субъединица рецептора цитокинов (например, gp130).

Полипептид с “нативной последовательностью” представляет собой полипептид, который имеет такую же аминокислотную последовательность, как и полипептид, например, природный рецептор опухолеассоциированного антигена. Такие полипептиды с нативной последовательностью могут быть выделены из природных источников, либо они могут быть получены рекомбинантными методами или методами синтеза. Так, например, полипептид с нативной последовательностью может иметь аминокислотную последовательность природного человеческого полипептида, мышиного полипептида или полипептида, происходящего от млекопитающих любого другого вида.

Термин “вариант аминокислотной последовательности” означает полипептиды, имеющие аминокислотные последовательности, которые до некоторой степени отличаются от нативных полипептидных последовательностей. Обычно варианты аминокислотных последовательностей, по меньшей мере, примерно на 70% гомологичны, по меньшей мере, одному связывающемуся с рецептором домену нативного лиганда или, по меньшей мере, одному связывающемуся с лигандом домену нативного рецептора, такому как опухолеассоциированный антиген, а предпочтительно они могут быть, по меньшей мере, примерно на 80%, а более предпочтительно, по меньшей мере, примерно на 90%, гомологичны доменам, связывающимся с таким рецептором или с лигандом. Варианты аминокислотных последовательностей имеют замены, делеции и/или инсерции в некоторых положениях нативной аминокислотной последовательности.

“Идентичность последовательности” определяется как процент остатков в варианте аминокислотной последовательности, которые являются идентичными после выравнивания последовательностей и включения в них пробелов, если это необходимо для достижения максимального процента идентичности последовательностей. Методы и компьютерные программы для такого выравнивания хорошо известны специалистам. Одной из таких компьютерных программ является “Align 2”, разработанная Genentech, Inc. и поданная вместе с документацией для пользователя в Ведомство по охране авторского права, Вашингтон, DC 20559, 10 декабря 1991.

“Антитело-зависимая клеточная цитотоксичность” и “ADCC” означает клеточно-опосредуемую реакцию, при которой неспецифические цитотоксические клетки, которые экспрессируют Fc-рецепторы (FcRs) (например, природные клетки-киллеры (NK), нейтрофилы и макрофаги), распознают связанное антитело на клетке-мишени, что приводит к лизису данной клетки-мишени. Первичные клетки, опосредующие ADCC, то есть NK-клетки, экспрессируют только FcγRIII, тогда как моноциты экспрессируют FcγRI, FcγRII и FcγRIII. Данные экспрессии FcR на гемопоэтических клетках систематизированы в таблице 3 на странице 464 Ravetch & Kinet (1991) Annu. Rev. Immunol. 9:457-92. Для оценки ADCC-активности представляющей интерес молекулы может быть проведен анализ на ADCC in vitro, такой как анализ, описанный в патентах США № 5500362 или 5821337. Подходящими эффекторными клетками для таких анализов являются мононуклеарные клетки периферической крови (МКПК) и природные клетки-киллеры (NK). Альтернативно или дополнительно ADCC-активность представляющей интерес молекулы может быть оценена in vivo, например, на мышиной модели, такой как модель, описанная Clynes et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 95:652-656 (1998).

Термины “Fc-рецептор” или “FcR” используются для описания рецептора, который связывается с Fc-областью антитела. Предпочтительным FcR является человеческий FcR с нативной последовательностью. Кроме того, предпочтительным FcR является FcR, который связывается с антителом IgG (гамма-рецептор), и рецепторы подклассов FcγRI, FcγRII и FcγRIII, включая аллельные варианты и альтернативно сплайсированные формы этих рецепторов. Рецепторами FcγRII являются FcγRIIA (“активирующий рецептор”) и FcγRIIB (“ингибирующий рецептор”), которые имеют аналогичные аминокислотные последовательности, отличающиеся, главным образом, своими цитоплазматическими доменами. Активирующий рецептор FcγRIIA содержит в своем цитоплазматическом домене активирующий мотив иммунорецептора на основе тирозина (ITAM). Ингибирующий рецептор FcγRIIB содержит в своем цитоплазматическом домене ингибирующий мотив иммунорецептора на основе тирозина (ITIM) (см. обзор М. Daeron, Annu. Rev. Immunol., 15:203-234 (1997)). FcR описаны у Ravetch & Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-92 (1991); Capel et al., Immunomethods, 4:25-34 (1994) и de Haas et al., J. Lab. Clin. Med., 126:330-41 (1995). Используемый здесь термин “FcR” также охватывает и другие FcR, включая FcR, которые будут идентифицированы в будущем. Этот термин также включает рецептор, имеющийся у новорожденных, FcRn, который является ответственным за передачу материнских IgG плоду (Guyer et al., J. Immunol., 117:587 (1976) и Kim et al., J. Immunol., 24:249 (1994)).

“Комплемент-зависимая цитотоксичность” или “CDC” означает способность молекулы подвергать лизису мишень в присутствии комплемента. Путь активации комплемента инициируется связыванием первого компонента системы комплемента (C1q) с молекулой (например, с антителом), образующей комплекс с когнатным антигеном. Для оценки активации комплемента может быть проведен анализ на CDC, например, как описано Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods, 202:163 (1996).

Термин “вариабельный” относится к некоторым частям вариабельных доменов, которые имеют значительные отличия в последовательностях различных антител и участвуют в связывании каждого конкретного антитела с его конкретным антигеном, а также определяют специфичность каждого конкретного антитела по отношению к его конкретному антигену. Однако вариабельность неравномерно распределяется по всем вариабельным доменам антител. Она концентрируется в трех сегментах, называемых гипервариабельными областями, присутствующими в вариабельных доменах как легкой, так и тяжелой цепи. Наиболее высококонсервативные части вариабельных доменов называются каркасными областями (FR). Каждый вариабельный домен нативной тяжелой и легкой цепей содержит четыре FR, имеющие, главным образом, β-складчатую конфигурацию и соединенные тремя гипервариабельными областями, которые образуют петли, соединяющие, а в некоторых случаях образующие часть β-складчатой структуры. Гипервариабельные области в каждой цепи удерживаются в непосредственной близости друг от друга посредством FR и, вместе с гипервариабельными областями другой цепи, участвуют в образовании антигенсвязывающего сайта антител (см. Kabat et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD). Константные домены не принимают непосредственного участия в связывании антитела с антигеном, но обладают различными эффекторными функциями, такими как участие антитела в антитело-зависимой клеточной цитотоксичности (ADCC).

Используемый здесь термин “гипервариабельная область” означает аминокислотные остатки антитела, которые являются ответственными за связывание с антигеном. Такая гипервариабельная область обычно содержит аминокислотные остатки, происходящие от “гипервариабельной области” или “CDR” (комплементарность-определяющей области) (например, остатки 24-34 (L1), 50-56 (L2) и 89-97 (L3) в вариабельном домене легкой цепи и 31-35 (Н1), 50-65 (Н2) и 95-102 (Н3) в вариабельном домене тяжелой цепи; Kabat et al., см. выше), и/или остатки, происходящие от “гипервариабельной петли” (например, остатки 26-32 (L1), 50-52 (L2) и 91-96 (L3) в вариабельном домене легкой цепи и 26-32 (Н1), 53-55 (Н2) и 96-101 (Н3) в вариабельном домене тяжелой цепи; Chothia & Lesk (1987) J. Mol. Biol., 196:901-917). Остатки “каркасной области” или “FR” представляют собой остатки вариабельного домена, не являющиеся остатками определенной здесь гипервариабельной области.

В результате гидролиза антител папаином образуются два идентичных антигенсвязывающих фрагмента, называемых “Fab”-фрагментами, каждый из которых имеет один антигенсвязывающий сайт, и один оставшийся “Fc”-фрагмент, название которого указывает на его способность легко кристаллизоваться. Обработка пепсином приводит к образованию F(ab')₂-фрагмента, который имеет два антигенсвязывающих сайта и способен к перекрестному связыванию с антигеном.

“Fv” представляет собой минимальный фрагмент антитела, содержащий полноразмерный антиген-распознающий сайт и антигенсвязывающий сайт. Эта область состоит из димера одного вариабельного домена тяжелой цепи и одного вариабельного домена легкой цепи, жестко связанных друг с другом нековалентной связью. Эта область имеет такую конфигурацию, при которой три гипервариабельные области каждого вариабельного домена взаимодействуют друг с другом таким образом, что образуют антигенсвязывающий сайт на поверхности димера VH-VL. В целом, шесть гипервариабельных областей сообщают антителу специфичность связывания с антигеном. Однако даже один вариабельный домен (или половина Fv, содержащая только три гипервариабельные области, специфичные к антигену) обладает способностью распознавать антиген и связываться с ним, хотя и с меньшей аффинностью, чем весь сайт связывания.

Fab-фрагмент также содержит константный домен легкой цепи и первый константный домен (СН1) тяжелой цепи. Fab'-фрагменты отличаются от Fab-фрагментов тем, что они имеют несколько дополнительных остатков у карбокси-конца СН1-домена тяжелой цепи, включая один или несколько цистеинов, происходящих от шарнирной области антитела. Используемое здесь обозначение Fab'-SH означает Fab', в котором цистеиновый(е) остаток(ки) константных доменов имеет(ют), по меньшей мере, одну свободную тиоловую группу. F(ab')₂-фрагменты антитела по своей природе продуцируются как пары Fab'-фрагментов, между которыми расположены цистеины шарнирной области. Также известны и другие химические связи, соединяющие фрагменты антитела.

“Легкие цепи” антител, происходящих от позвоночных любого вида, могут быть отнесены к одному из двух различных типов цепей, называемых каппа (k) и лямбда (λ), исходя из аминокислотных последовательностей их константных доменов.

“Одноцепочечный Fv-фрагмент” или “scFv-фрагмент” антител включает домены VH и VL антитела, где указанные домены присутствуют в одной полипептидной цепи. Предпочтительно, полипептид Fv, кроме того, содержит полипептидный линкер между доменами VH и VL, который обеспечивает образование scFv со структурой, необходимой для связывания с антигеном. Описание scFv можно найти у Plückthun в работе The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg & Moore eds., Springer-Verlag, New York, p.269-315 (1994).

Термин “диатела” означает небольшие фрагменты антител с двумя антигенсвязывающими сайтами, где указанные фрагменты включают вариабельный домен тяжелой цепи (VH), соединенный с вариабельным доменом легкой цепи (VL) в одной той же полипептидной цепи (VH-VL). Если линкер является слишком коротким для образования пары между двумя доменами на одной и той же цепи, то домены вынуждены спариваться с комплементарными доменами другой цепи и образовывать два антигенсвязывающих сайта. Диатела более подробно описаны, например, в ЕР 404097; в WO 93/11161 и у Hollinger et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 90:6444-6448.

“Гуманизованные формы” не-человеческих антител (например, антител грызунов) представляют собой химерные антитела, которые содержат минимальную последовательность, происходящую от не-человеческого иммуноглобулина. По большей части гуманизованные антитела представляют собой человеческие иммуноглобулины (антитело реципиента), в которых остатки, происходящие от гипервариабельной области данного антитела-реципиента, заменены остатками, происходящими от гипервариабельной области не-человеческого антитела (донорного антитела), такого как мышиное антитело, крысиное антитело, кроличье антитело или антитело приматов, не являющихся человеком, где указанные антитела обладают нужной специфичностью, аффинностью и связывающей способностью. В некоторых случаях остатки каркасной области (FR) человеческого иммуноглобулина заменены соответствующими не-человеческими остатками. Кроме того, гуманизованные антитела могут содержать остатки, не обнаруженные в антителе реципиента или в антителе донора. Эти модификации вводят для улучшения свойств антитела. В общих чертах гуманизованное антитело может содержать, в основном, все или, по меньшей мере, один, а обычно два вариабельных домена, в которых все или почти все гипервариабельные петли соответствуют гипервариабельным петлям не-человеческого иммуноглобулина и все или почти все FR представляют собой FR с человеческой иммуноглобулиновой последовательностью. Гуманизованное антитело также содержит, но необязательно, по меньшей мере, часть константной области иммуноглобулина (Fc), обычно области человеческого иммуноглобулина. Более подробное описание см. у Jones et al. (1986) Nature, 321:522-525; Riechmann et al. (1998) Nature 332:323-329 и у Presta (1992) Curr. Op. Struct. Biol., 2:593-596.

Гуманизованными анти-ErbB2 антителами являются huMAb4D5-1, huMAb4D5-2, huMAb4D5-3, huMAb4D5-4, huMAb4D5-5, huMAb4D5-6, huMAb4D5-7 и huMAb4D5-8 (HERCEPTIN®), описанные в Таблице 3 патента США № 5821337, который полностью вводится в настоящее описание посредством ссылки; и гуманизованные антитела 520С9 (WO 93/21319) и 2С4, описанные ниже.

“Выделенное” антитело представляет собой антитело, которое было идентифицировано и выделено и/или очищено от компонентов его природного окружения. Загрязняющими компонентами его природного окружения являются материалы, негативно влияющие на диагностическую или терапевтическую эффективность антитела, и такими компонентами могут быть ферменты, гормоны и другие белковые или не-белковые растворенные вещества. В предпочтительных вариантах изобретения указанное антитело может быть очищено (1) на более чем 95% по массе антитела, как может быть определено методом Лаури, а более предпочтительно более чем на 99% по массе антитела, (2) до степени, достаточной для введения, по меньшей мере, 15 остатков у N-концевой или внутренней части аминокислотной последовательности, с использованием секвенатора, снабженного центрифужным сосудом, или (3) до гомогенности с помощью электрофореза в ДСН-ПААГ в восстанавливающих или невосстанавливающих условиях с окрашиванием кумасси синим или предпочтительно серебром. Термин “выделенное антитело” включает антитело in situ в рекомбинантных клетках, если отсутствует, по меньшей мере, один природный компонент этого антитела. Однако обычно выделенное антитело может быть получено, по меньшей мере, в одной стадии очистки.

Антитело, которое “связывается” с представляющим интерес антигеном, способно связываться с указанным антигеном с аффинностью, которая является достаточной для того, чтобы это антитело могло быть использовано в целях доставки в клетку, экспрессирующую этот антиген.

Антитело, которое “индуцирует апоптоз”, представляет собой антитело, которое индуцирует запрограммированную клеточную гибель, как было определено по связыванию с аннексином V, фрагментации ДНК, сморщиванию клеток, расширению эндоплазматического ретикулума, фрагментации клеток и/или по образованию мембранных везикул (называемых апоптотическими тельцами). Такой клеткой является опухолевая клетка, например клетка молочной железы, яичника, желудка, эндометрия, слюнной железы, легкого, почек, толстой кишки, щитовидной железы, поджелудочной железы или мочевого пузыря. Для оценки клеточных событий, ассоциированных с апоптозом, существуют различные методы. Так, например, транслокация фосфатидилсерина (PS) может быть определена по связыванию с аннексином; фрагментация ДНК может быть оценена по образованию ДНК-лэддера; а конденсация ядра/хроматина вместе с фрагментацией ДНК может быть оценена по любому увеличению гиподиплоидных клеток.

Термин “нарушение или расстройство” означает любое состояние, симптомы которого могут быть ослаблены в результате лечения согласно изобретению. Такими расстройствами или нарушениями являются хронические и острые расстройства или заболевания, включая патологические состояния, которые могут приводить к развитию у млекопитающего рассматриваемого расстройства или нарушения. Неограничивающими примерами расстройств, подвергаемых лечению в соответствии с настоящим изобретением, являются доброкачественные и злокачественные опухоли; лейкозы и лимфоидные злокачественные опухоли, а в частности рак молочной железы, яичника, желудка, эндометрия, слюнной железы, легкого, почек, толстой кишки, щитовидной железы, поджелудочной железы, предстательной железы или мочевого пузыря; нарушения, связанные с поражением нервных клеток, глиальных клеток, астроцитов, гипоталамических клеток и других железистых клеток, макрофагов, эпителиальных клеток, стромальных клеток и бластоцелиальных клеток, и воспалительные, ангиогенные и иммунологические расстройства или нарушения.

Термин “терапевтически эффективное количество” означает количество лекарственного средства, эффективное для лечения заболевания или расстройства у млекопитающего. В случае рака такое терапевтически эффективное количество лекарственного средства может снижать число раковых клеток и размер опухолевых клеток; ингибировать (то есть замедлять до некоторой степени, а предпочтительно прекращать) инфильтрацию раковых клеток в периферические органы; ингибировать (то есть замедлять до некоторой степени, а предпочтительно прекращать) развитие метастазов опухоли; ингибировать, до некоторой степени, рост опухоли; и/или ослаблять, до некоторой степени, один или несколько симптомов, ассоциированных с раком. Лекарственное средство, до некоторой степени, может предотвращать рост раковых клеток и/или уничтожать раковые клетки, и оно может быть цитостатическим и/или цитотоксическим. Эффективность противораковой терапии может быть оценена, например, путем определения времени до начала прогрессирования заболевания (ТТР) и/или определения скорости ответа (RR).

Термин “значительное количество” означает большую часть, то есть >50% от всей популяции, всего сбора или всего образца.

Термин “внутриклеточный метаболит” означает соединение, образующееся в результате внутриклеточных метаболических процессов или реакций, которым подвергается конъюгат “антитело-лекарственное средство” (ADC). Такими метаболическими процессами или реакциями могут быть ферментативная реакция, такая как протеолитическое расщепление пептидного линкера ADC или гидролиз функциональной группы, такой как гидразоновая группа, сложноэфирная группа или амидная группа. Внутриклеточными метаболитами являются, но не ограничиваются ими, антитела и свободные лекарственные средства, которые подвергаются внутриклеточному расщеплению после доставки в клетку, диффузии в клетке, поглощения клеткой или транспорта в клетку.

Термины “расщепленный внутри клетки” и “внутриклеточное расщепление” относятся к внутриклеточному метаболическому процессу или реакции, которым подвергается конъюгат “лекарственное средство-лиганд”, конъюгат “лекарственное средство-линкер-лиганд”, конъюгат “антитело-лекарственное средство” (ADC) или т.п., в результате чего ковалентная связь, например линкер, между компонентом “лекарственное средство” (D) и антителом (Ab) расщепляется, что приводит к отщеплению свободного лекарственного средства от антитела внутри клетки. Таким образом, молекулы, отщепленные от конъюгата “лекарственное средство-лиганд”, конъюгата “лекарственное средство-линкер-лиганд” или ADC, являются внутриклеточными метаболитами.

Термин “биодоступность” означает системную биодоступность (то есть уровни в крови/плазме) для данного количества лекарственного средства, вводимого пациенту. “Биодоступность” является абсолютным термином, который определяет такие параметры, как время действия (скорость) и общее количество (уровень) лекарственного средства, которое высвобождается из введенной лекарственной формы и поступает в общий кровоток.

Термин “цитотоксическая активность” означает цитолитический, цитостатический или антипролиферативный эффект соединения типа конъюгата “антитело-лекарственное средство” или его внутриклеточного метаболита. Цитотоксическая активность может быть выражена как величина IC₅₀, которая представляет собой концентрацию (молярную или массовую) на единицу объема, при которой выживает половина клеток.

Термины “рак” и “раковый” означают или описывают физиологическое состояние у млекопитающих, которое обычно характеризуется нарушением регуляции клеточного роста. Термин “опухоль” включает одну или несколько раковых клеток. Примерами рака являются, но не ограничиваются ими, карцинома, лимфома, бластома, саркома и лейкоз или лимфоидные злокачественные опухоли. Более конкретными примерами таких раковых опухолей являются плоскоклеточный рак (например, эпителиальный плоскоклеточный рак), рак легких, включая мелкоклеточный рак легких, не-мелкоклеточный рак легких (“НМКРЛ”), аденокарциному легких и плоскоклеточную карциному легких, рак брюшной полости, гепатоцеллюлярный рак, рак желудка, включая рак желудочно-кишечного тракта, рак поджелудочной железы, глиобластома, рак шейки матки, рак яичника, рак печени, рак мочевого пузыря, гепатома, рак молочной железы, рак толстой кишки, рак прямой кишки, рак ободочной кишки, карцинома эндометрия или матки, карцинома слюнной железы, рак почек, рак предстательной железы, рак вульвы, рак щитовидной железы, гепатокарцинома, карцинома заднего прохода, карцинома пениса, а также рак головы и шеи.

“Раковая опухоль, экспрессирующая ErbB2” представляет собой опухоль, на поверхности клеток которой продуцируются определенные уровни ErbB2, достаточные для того, чтобы анти-ErbB2 антитело могло связываться с ErbB2 и оказывало терапевтическое противораковое действие.

Рак, “характеризующийся избыточной активацией” рецептора ErbB2, представляет собой рак, при котором степень активации рецептора ErbB2 в раковых клетках значительно превышает степень активации такого рецептора в не-раковых клетках ткани того же самого типа. Такая избыточная активация может быть результатом сверхэкспрессии ErbB2 рецептора и/или присутствия уровней, превышающих нормальный уровень, лиганда ErbB2, доступного для активации ErbB2-рецептора в раковых клетках. Такая избыточная активация может приводить к появлению злокачественных раковых клеток и/или может быть вызвана раковыми клетками. В некоторых вариантах изобретения может быть проведен диагностический или прогностический анализ рака для того, чтобы определить, происходит ли амплификация и/или сверхэкспрессия ErbB2-рецептора, приводящая к такой избыточной активации ErbB2-рецептора. Альтернативно или дополнительно может быть проведен диагностический или прогностический анализ рака для того, чтобы определить, происходит ли амплификация и/или сверхэкспрессия лиганда ErbB2 в раковой опухоли, которая вызывает избыточную активацию данного рецептора. В субпопуляции таких раковых опухолей избыточная активация данного рецептора может быть обусловлена аутокринным механизмом стимуляции.

Раковая опухоль, “сверхэкспрессирующая” ErbB2-рецептор, представляет собой раковую опухоль, которая, на поверхности своих клеток, имеет значительно более высокие уровни ErbB2-рецептора по сравнению с не-раковыми клетками ткани того же типа. Такая сверхэкспрессия может быть обусловлена амплификацией или повышенной транскрипцией или трансляцией гена. Сверхэкспрессия ErbB2-рецептора может быть определена в диагностическом или прогностическом анализе путем детекции повышенных уровней белка ErbB2, присутствующего на поверхности клетки (например, с помощью иммуногистохимического анализа; ИГХ). Альтернативно или дополнительно могут быть измерены уровни ErbB2-кодирующей нуклеиновой кислоты в клетке, например, путем флуоресцентной гибридизации in situ (FISH; см. WO 98/45479), саузерн-блоттинга или полимеразной цепной реакции (ПЦР), такой как количественная ПЦР в реальном времени (RT-PCR). Сверхэкспрессия лиганда ErbB2 может быть определена в диагностическом анализе путем измерения уровней лиганда (или нуклеиновой кислоты, кодирующей этот лиганд) у пациента, например, путем биопсии опухоли или с помощью различных диагностических анализов, таких как ИГХ, FISH, саузерн-блоттинг, ПЦР или in vivo анализы, описанные выше. Могут быть также проведены исследования на сверхэкспрессию ErbB2-рецептора путем измерения уровня “слущивающегося” антигена (например, внеклеточного домена ErbB2) в биологической жидкости, такой как сыворотка (см., например, патент США № 4933294; WO 91/05264; патент США № 5401638 и Sias et al. (1990) J. Immunol. Methods, 132:73-80). Помимо вышеуказанных анализов, специалистам-практикам известны и различные другие анализы in vivo. Так, например, клетки в организме пациента могут быть обработаны антителом, которое необязательно помечено детектируемой меткой, например радиоактивным изотопом, а связывание антитела с клетками пациента может быть оценено, например, путем внешнего сканирования на радиоактивность или путем анализа биоптата, взятого у пациента, предварительно обработанного антителом.

Опухоли, сверхэкспрессирующие HER2, оценивают по иммуногистохимической шкале, соответствующей числу копий экспрессируемых молекул HER2 на клетку, и такая оценка может быть проведена с помощью биохимического анализа, где баллы этой шкалы означают: 0=0-10000 копий/клетку; 1+=по меньшей мере, примерно 200000 копий/клетку; 2+=по меньшей мере, примерно 500000 копий/клетку; 3+=примерно 1-2 х 10⁶ копий/клетку. Сверхэкспрессия HER2 на уровне 3+, которая приводит к лиганд-независимой активации тирозинкиназы (Hudziak et al. (1987) Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 84:7159-7163), наблюдается приблизительно у 30% пациентов с раком молочной железы, и у этих пациентов наблюдается снижение продолжительности безрецидивного периода и продолжительности жизни в целом (Slamon et al. (1989) Science, 244:707-712; Slamon et al. (1987) Science, 235:177-182).

И наоборот, рак, который “не характеризуется сверхэкспрессией ErbB2-рецептора”, определяется как рак, при котором согласно диагностическому анализу не экспрессируются уровни ErbB2-рецептора, превышающие нормальные уровни этого рецептора, по сравнению с не-раковыми клетками ткани того же типа.

Используемый здесь термин “цитотоксический агент” означает вещество, которое ингибирует или предотвращает функционирование клеток и/или вызывает деструкцию клеток. Этот термин включает радиоактивные изотопы (например, ²¹¹At, ¹³¹I, ¹²⁵I, ⁹⁰Y, ¹⁸⁶Re, ¹⁸⁸Re, ¹⁵³Sm, ²¹²Bi, ³²Р, ⁶⁰C и радиоактивные изотопы Lu), химиотерапевтические агенты и токсины, такие как небольшие молекулы токсинов или ферментативно активные токсины, происходящие от бактерий, грибов, растений или животных, включая их синтетические аналоги и производные. В одном из аспектов изобретения этот термин не включает радиоактивные изотопы.

“Химиотерапевтический агент” представляет собой химическое соединение, которое может быть использовано для лечения рака. Примерами химиотерапевтических агентов являются алкилирующие агенты, такие как тиотепа и циклофосфамид CYTOXAN®; алкисульфонаты, такие как бусульфан, импросульфан и пипосульфан; азиридины, такие как бензодопа, карбоквон, метуредопа и уредопа; этиленимины и метиламеламины, включая альтретамин, триэтиленмеламин, триэтиленфосфорамид, триэтилентиофосфорамид и триметилоломеламин; TLK 286 (TELCYTA^TM); ацетогенины (в частности, буллатацин и буллатацинон); дельта-9-тетрагидроканнабинол (дронабинол, MARINOL®); бета-лапахон; лапахол; колхицины; бетулиновая кислота; камптотецин (включая синтетический аналог топотекан (HYCAMTIN®), СРТ-11 (иринотекан, CAMTOSAR®), ацетилкамптотецин, скополектин и 9-аминокамптотецин); бриостатин; каллистатин; СС-1065 (включая его адозелизиновые, карзелизиновые и бизелезиновые синтетические аналоги); подофилотоксин; подофилиновая кислота; тенипозид; криптофицины (в частности, криптофицин 1 и криптофицин 8); доластатин; дуокармицин (включая его синтетические аналоги, KW-2189 и СВ1-ТМ1); элеутеробин; панкратистатин; саркодиктиин; спонгистатин; азотные аналоги горчичного газа, такие как хлорамбуцил, хлорнафазин, хлорофосфамид, экстрамустин, ифосфамид, мехлоретамин, гидрохлорид оксида мехлоретамина, мелфалан, новембицин, фенестерин, преднимустин, трофосфамид, урациловый аналог горчичного газа; нитрозомочевины, такие как кармустин, хлорозотоцин, фотемустин, ломустин, нимустин и ранимнустин; бифосфонаты, такие как клодронат; антибиотики, такие как энедииновые антибиотики (например, калихеамицин, а в частности калихеамицин гамма II и калихеамицин омега II (см., например, Agnew, Chem. Intl. Ed. Engl., 33: 183-186 (1994)) и антрациклины, такие как аннамицин, AD 32, алькарубицин, даунорубицин, дексразоксан, DX-52-1, эпирубицин, GPX-100, идарубицин, KRN5500, меногарил, динемицин, включая динемицин А, эсперамицин, неокарзиностатиновый хромофор и родственные хромопротеиновые энедииновые антибиотики-хромофоры, аклациномизины, кактиномицин, аутрамицин, азасерин, блеомицины, актиномицины, карабицин, карминомицин, карзинофилин, хромомицины, дактиномицин, деторубицин, 6-диазо-5-оксо-L-норлейцин, доксорубицин ADRIAMYCIN® (включая морфолинодоксорубицин, цианоморфолинодоксорубицин, 2-пирролино-доксорубицин, липосомный доксорубицин и дезоксидоксорубицин), эзорубицин, марцелломицин, митомицины, такие как митомицин С, микофеноловая кислота, ногаламицин, оливомицины, пепломицин, потфиромицин, пуромицин, келамицин, родорубицин, стрептонигрин, стрептозоцин, туберцидин, убенимекс, зиностатин и зорубицин; аналоги фолиевой кислоты, такие как деноптерин, птероптерин и треметрексат; пуриновые аналоги, такие как флударабин, 6-меркаптопурин, тиамиприн и тиогуанин; пиримидиновые аналоги, такие как анцитабин, азацитидин, 6-азауридин, кармофур, цитарабин, дидезоксиуридин, доксифлуридин, эноцитабин и флоксуридин; андрогены, такие как калустерон, пропионат дромостанолона, эпитиостанол, мепитиостан и тестолактон; антиадренергические средства, такие как аминоглютетимид, митотан и трилостан; средство, восполняющее недостаток фолиевой кислоты, такое как фолиновая кислота (лейковорин); ацеглатон; противоопухолевые антагонисты фолатов, такие как ALIMTA®, пеметрексед LY231514, ингибиторы дигидрофолат-редуктазы, такие как метотрексат, антиметаболиты, такие как 5-фторурацил (5-FU) и его пролекарства, такие как UFT, S-1 и капецитабин, ингибиторы тимидилат-синтазы, ингибиторы глицинамид-рибонуклеотид-формилтрансферазы, такие как ралтитрексед (TOMUDEX^RM, TDX); ингибиторы дигидропиримидин-дегидрогеназы, такие как энилурацил; гликозид альдофосфамида; аминолевулиновая кислота; амсакрин; бестрабуцил; бизантрен; эдатраксат; дофофамин; демесольцин; диазиквон; эльфорнитин; ацетат эллиптиния; эпотилон; этоглюцид; нитрат галлия; гидроксимочевина; лентинан; лонидаинин; майтанзиноиды, такие как майтанзин и анзамитоцины; митогуазон; митоксантрон; мопиданмол; нитраэрин; пентостатин; фенамет; пирарубицин; лозоксантрон; 2-этилгидразид; прокарбазин; полисахаридный комплекс PSK® (JHS Natural Products, Eugene, OR); разоксан; ризоксин; сизофиран; спирогерманий; тенаузоновая кислота; триазихон; 2,2',2”-трихлортриэтиламин; трихотецены (в частности, токсин Т-2, верракурин А, роридин А и ангуидин); уретан; виндезин (ELDISINE®, FILDESIN®); дакарбазин; манномустин; митобронитол; митолактол; пипоброман; гацитозин; арабинозид (“Ara-C”); циклофосфамид; тиотепа; таксоиды и таксаны, например паклитаксел TAXOL® (Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N.J.), ABRAXANE^TM, не содержащий кремофора препарат паклитаксела из наночастиц, полученный на основе альбумина (American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, Illinois) и доксетаксел TAXOTERE® (Rhone-Poulenc Rorer, Antony, France); хлоранбуцил; гемцитабин (GEMZAR®); 6-тиогуанин; меркаптопурин; платина; аналоги платины или аналоги, полученные на основе платины, такие как цисплатин, оксалиплатин и карбоплатин; винбластин (VELBAN®); этопозид (VP-16); ифосфамид; митоксантрон; винкристин (ONCOVIN®); винкаалкалоиды; винорелбин (NAVELBINE®); новантрон; эдатрексат; дауномицин; аминоптерин; кселода; ибандронат; ингибитор топоизомеразы RFS 2000; дифторметилорнитин (ДМФО); ретиноиды, такие как ретиноевая кислота; фармацевтически приемлемые соли, оксиды или производные всех вышеуказанных соединений, а также комбинации двух или более вышеуказанных соединений, такие как СНОР, где данная аббревиатура означает комбинацию терапевтических средств, таких как циклофосфамид, доксорубицин, винкристин и преднизолон, и FOLFOX, где данная аббревиатура означает комбинацию терапевтических средств, таких как оксалиплатин (ELOXATIN^TM), 5-FU и лейковорин.

В объем данного термина входят также антигормональные средства, регулирующие или ингибирующие действие гормонов на опухоли, такие как антиэстрогены и селективные модуляторы рецептора эстрогена (SERM), включая, например, тамоксифен (включая тамоксифен NOLVADEX®), ралоксифен, дролоксифен, 4-гидрокситамоксифен, триоксифен, кеоксифен, LY117018, онапристон и торемифен FARESTON®; ингибиторы ароматазы, которые ингибируют фермент ароматазу и регулируют продуцирование эстрогенов в коре надпочечника, такие как 4(5)-имидазолы, аминоглутетимид, ацетат мегестрола MEGASE®, эксеместан AROMASIN®, форместанин, фадрозол, ворозол RIVISOR®, летрозол FEMARA® и анастрозол ARIMIDEX®; и антиандрогены, такие как флутамид, нилутамид, бикалутамид, лейпролид и гозерелин; а также троксацитабин (нуклеозидный цитозиновый аналог 1,3-диоксолана); антисмысловые олигонуклеотиды, а в частности олигонуклеотиды, ингибирующие экспрессию генов путей передачи сигнала, участвующих в пролиферации нежелательных клеток, такие как, например, PKC-альфа, Raf, H-Ras и рецептор эпидермального фактора роста (EGF-R); вакцины, такие как вакцины для генной терапии, например вакцина ALLOVECTIN®, вакцина LEUVECTIN® и вакцина VAXID®; rIL-2 PROLEUKIN®; ингибитор топоизомеразы 1 LURTOTECAN®; rmRH ABARELIX® и фармацевтически приемлемые соли, кислоты или производные всех вышеперечисленных соединений.

Используемый здесь термин “EGFR-лекарственное средство” означает терапевтический агент, который связывается с EGFR и, необязательно, ингибирует активацию EGFR. Примерами таких агентов являются антитела и небольшие молекулы, которые связываются с EGFR. Примерами антител, которые связываются с EGFR, являются MAb 579 (АТСС CRL НВ 8506), MAb 455 (АТСС CRL НВ 8507), MAb 225 (АТСС CRL 8508), MAb 528 (АТСС CRL 8509) (см. патент США № 4943533, Mendelsohn et al.) и их варианты, такие как химерное антитело 225 (С225 или цетуксимаб; ERBITUX®) и реконструированное человеческое антитело 225 (Н225) (см. WO 96/40210, Imclone Systems Inc.); антитела, которые связываются с мутантным EGFR типа II (патент США № 5212290); гуманизованные и химерные антитела, которые связываются с EGFR, как описано в патенте США № 5891996; и человеческие антитела, которые связываются с EGFR, такие как ABX-EGF (см. WO 98/50433, Abgenix). Антитело против EGFR может быть конъюгировано с цитотоксическим агентом, образуя, тем самым, иммуноконъюгат (см., например, ЕР 659439А2, Merck Patent GmbH). Примерами небольших молекул, которые связываются с EGFR, являются ZD1839 или Gefitinib (IRESSA^TM, Astra Zeneca), эрлотиниб-HCl (CP-358774, TARCEVA^TM; Genentech/OSI) и AG1478, AG1571 (SU 5271; Sugen).

“Ингибитор тирозинкиназы” представляет собой молекулу, которая до определенной степени ингибирует тирозинкиназную активность тирозинкиназы, такую как рецептор ErbB2. Примерами таких ингибиторов являются “EGFR-лекарственные средства”, описанные в предыдущем абзаце, а также хиназолины, такие как PD 153035, 4-(3-хлоранилино)хиназолин, пиридопиримидины, пиримидопиримидины, пирролопиримидины, такие как CGP 59326, CGP 60261 и CGP 62706, и пиразолопиримидины, 4-(фениламино)-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидины, куркумин (диферулоилметан, 4,5-бис(4-фторанилино)фталамид), тирфостины, содержащие нитротиофеновые группы; PD-0183805 (Warner-Lambert); антисмысловые молекулы (например, молекулы, которые связываются с ErbB-кодирующей нуклеиновой кислотой); хиноксалины (патент США № 5804396); трифостины (патент США № 5804396); ZD6474 (Astra Zeneca); PTK-787 (Novartis/Schering AG); ингибиторы пэн-ErbB, такие как CI-1033 (Pfizer); Affinitac (ISIS 3521; Isis/Lilly); мезилат иматиниба (Gleevac; Novartis); PKI 166 (Novartis); GW2016 (Glaxo SmithKline); CI-1033 (Pfizer); EKB-569 (Wyeth); Семаксаниб (Sugen); ZD6474 (AstraZeneca); PTK-787 (Novartis/Schering AG); INC-1C11 (Imclone) или соединения, описанные в нижеследующих публикациях патентов и патентных заявок: в патенте США № 5804396; WO 99/09016 (American Cyanamid); WO 98/43960 (American Cyanamid); WO 97/38983 (Warner Lambert); WO 99/06378 (Warner Lambert); WO 99/06396 (Warner Lambert); WO 96/30347 (Pfizer, Inc.); WO 96/33978 (Zeneca); WO 96/3397 (Zeneca) и WO 96/33980 (Zeneca).

Термин “антиангиогенный агент” означает соединение, которое блокирует развитие кровеносных сосудов или в некоторой степени препятствует такому развитию. Таким антиангиогенным фактором может быть, например, небольшая молекула или антитело, которые связываются с фактором роста или с рецептором фактора роста, участвующими в стимуляции ангиогенеза. В одном из вариантов изобретения указанным антиангиогенным фактором является антитело, которое связывается с васкулярным эндотелиальным фактором роста (VEGF).

Термин “цитокин” является общим термином, относящимся к белкам, которые высвобождаются одной клеточной популяцией и которые действуют на другие клетки как межклеточные медиаторы. Примерами таких цитокинов являются лимфокины, монокины и стандартные полипептидные гормоны. Помимо вышеуказанных определений, понятие “цитокины” также включает гормоны роста, такие как человеческий гормон роста, N-метионильный человеческий гормон роста и бычий гормон роста; паратиреоидный гормон; тироксин; инсулин; проинсулин; релаксин; прорелаксин; гликопротеиновые гормоны, такие как фолликулостимулирующий гормон (FSH), тиреоид-стимулирующий гормон (TSH) и лютеинизирующий гормон (LH); фактор роста гепатоцитов, фактор роста фибробластов; пролактин; плацентарный лактоген; фактор некроза опухоли-α и -β; мюллеровский ингибирующий фактор; пептид, ассоциированный с мышиным гонадотропином; ингибин; активин; васкулярный эндотелиальный фактор роста; интегрин; тромбопоэтин (ТРО); факторы роста нервных тканей, такие как NGF-β; тромбоцитарный фактор роста; трансформирующие факторы роста (TGF), такие как TGF-α и TGF-β; инсулиноподобный фактор роста-I или -II; эритропоэтин (EPO); факторы, индуцирующие остеогенез; интерфероны, такие как интерферон-α, -β и -γ; колониестимулирующие факторы (CSF), такие как макрофагальный CSF (M-CSF); гранулоцитарный-макрофагальный CSF (GM-CSF); и гранулоцитарный CSF (G-CSF); интерлейкины (IL), такие как IL-1, IL-1α, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12; фактор некроза опухоли, такой как TNF-α или TNF-β; и другие полипептидные факторы, включая LIF и лиганд кit (KL). Используемый здесь термин “цитокин” включает белки, происходящие от природных источников или от рекомбинантной клеточной культуры, и биологически активные эквиваленты цитокинов с нативной последовательностью.

Используемый в данной заявке термин “пролекарство” означает предшественник или производное фармацевтически активного вещества, которые, по сравнению с родительским лекарственным средством, являются менее цитотоксичными по отношению к опухолевым клеткам и способны ферментативно или гидролитически активироваться или превращаться в более активную зрелую форму. См., например, Wilman, “Prodrugs in Cancer Chemotherapy” Biochemical Society Transactions, 14, p.375-382, 615th Meeting Belfast (1986) и Stella et al. “Prodrugs: A Chemical Approach to Targeted Drug Delivery”, Directed Drug Delivery, Borchardt et al., (ed.), p.247-267, Humana Press (1985). Пролекарствами согласно изобретению являются, но не ограничиваются ими, фосфат-содержащие пролекарства, тиофосфат-содержащие пролекарства, сульфат-содержащие пролекарства, пептид-содержащие пролекарства, лекарственные средства, модифицированные D-аминокислотой, гликозилированные пролекарства, β-лактам-содержащие пролекарства; пролекарства, необязательно содержащие замещенный феноксиацетамид, или пролекарства, необязательно содержащие замещенный фенилацетамид; 5-фторцитозиновые и другие 5-фторуридиновые пролекарства, которые могут быть превращены в более активное цитотоксическое свободное лекарственное средство. Примерами цитотоксических лекарственных средств, которые могут быть дериватизированы с получением пролекарственной формы для ее использования в настоящем изобретении, являются, но не ограничиваются ими, химиотерапевтические агенты, описанные выше.

“Липосома” представляет собой небольшую везикулу, состоящую из липидов различных типов, фосфолипидов и/или поверхностно-активного вещества, которые могут быть использованы для доставки лекарственного средства (например, включая анти-CD30, анти-CD40, анти-CD70 антитела или антитела против Lewis-Y и, необязательно, химиотерапевтический агент) млекопитающему. Компоненты липосомы обычно расположены так, что они образуют бислой, аналогичный липидному бислою в биологических мембранах. Используемый здесь термин “вкладыш в упаковку” означает инструкции, которые обычно вложены в предназначенные для продажи упаковки терапевтических продуктов и в которых имеется информация, касающаяся показаний, способа применения, дозы, способа введения, противопоказаний и/или предупреждений относительно применения таких терапевтических продуктов.

“Выделенная” молекула нуклеиновой кислоты представляет собой молекулу нуклеиновой кислоты, которая идентифицирована и отделена, по меньшей мере, от одной примесной молекулы нуклеиновой кислоты, с которой она обычно ассоциирована в природном источнике нуклеиновой кислоты, кодирующей антитело. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, по своей форме или структуре, отличается от молекулы, встречающейся в природе. Поэтому выделенные молекулы нуклеиновой кислоты отличаются от молекул нуклеиновой кислоты, содержащихся в природных клетках. Однако выделенная молекула нуклеиновой кислоты включает молекулу нуклеиновой кислоты, содержащуюся в клетках, которые обычно экспрессируют антитело, где, например, указанная молекула нуклеиновой кислоты находится в хромосоме в положении, отличающемся от ее положения в природных клетках.

Термин “регуляторные последовательности” означает ДНК-последовательности, необходимые для экспрессии функционально связанной кодирующей последовательности в конкретном организме-хозяине. Регуляторными последовательностями, подходящими для прокариотов, являются, например, промотор, необязательно, операторная последовательность и сайт связывания с рибосомой. Известно, что в эукариотических клетках используются промоторы, сигналы полиаденилирования и энхансеры.

Нуклеиновая кислота является “функционально связанной”, если она находится в функциональной взаимосвязи с другой последовательностью нуклеиновой кислоты. Так, например, ДНК для пре-последовательности или секреторной лидерной последовательности функционально присоединена к ДНК, кодирующей полипептид, если он экспрессируется в форме белка-предшественника, который участвует в секреции полипептида; либо промотор или энхансер функционально присоединен к кодирующей последовательности, если он влияет на транскрипцию последовательности; либо сайт связывания с рибосомой функционально присоединен к кодирующей последовательности, если расположение этого сайта облегчает трансляцию. В общих чертах термин “функционально связанный” означает, что ДНК-последовательности являются смежными, а в случае секреторной лидерной последовательности они являются смежными и находятся в одной и той же рамке считывания. Однако энхансеры не должны быть смежными с присоединяемой последовательностью. Присоединение может быть осуществлено путем лигирования в подходящих рестрикционных сайтах. Если такие сайты отсутствуют, то в соответствии со стандартной практикой могут быть использованы синтетические олигонуклеотидные адаптеры или линкеры.

Используемые здесь термины “клетка”, “клеточная линия” и “клеточная культура” являются взаимозаменяемыми, и все они включают потомство этих клеток. Так, например, слова “трансформанты” и “трансформированные клетки” включают первичные клетки и происходящие от них культуры без указания числа пересевов. Следует отметить, что все потомство не может быть точно идентичным по составу ДНК, что обусловлено искусственно введенными или самопроизвольными мутациями. Эти термины также включают мутантное потомство, которое имеет такую же функцию или биологическую активность, которая была установлена при скрининге исходной трансформированной клетки. Более точное определение этих терминов будет понятно из контекста нижеследующего описания.

Используемый здесь термин “аутоиммунное заболевание” означает заболевания или расстройства, возникающие в собственных тканях индивидуума и направленные против этих тканей, либо сопровождающие их заболевания или их симптомы, либо состояния, развивающиеся на основе этих расстройств. Примерами аутоиммунных заболеваний или расстройств являются, но не ограничиваются ими, артрит (ревматоидный артрит, ювенильный ревматоидный артрит, остеоартрит, псориазный артрит и анкилозирующий спондилит), псориаз, дерматиты, включая атопический дерматит; хроническая идиопатическая крапивница, включая хроническую аутоиммунную крапивницу; полимиозит/дерматомиозит, токсический эпидермальный некроз, системная склеродермия и склероз; реакции, ассоциированные с воспалительным заболеванием кишечника (ВЗК) (болезнь Крона, язвенный колит) и ВЗК с сопровождающей гангренозной пиодермией, узелковой эритемой, первичным склерозирующим холангитом и/или эписклеритом; респираторный дистресс-синдром, включая респираторный дистресс-синдром взрослых (РДСВ); менингит, IgE-опосредованные заболевания, такие как анафилаксический и аллергический ринит, энцефалит, такой как энцефалит Расмуссена; увеит; колит, такой как гистологически диагностированный колит и коллагенозный колит; гломерулонефрит (ГН), такой как мембранный ГН, идиопатический мембранный ГН, мембранный пролиферативный ГН (МПГН), включая гломерулонефрит типа I и типа II и быстро прогрессирующий ГН; аллергические состояния, экзема, астма, состояния, ассоциированные с инфильтрацией Т-клеток и хроническими воспалительными реакциями; атеросклероз; аутоиммунный миокардит; состояния, ассоциированные с нарушением лейкоцитарной адгезии; системная красная волчанка (СКВ), такая как кожная СКВ, волчанка (включая нефрит, церебрит, детская волчанка, не-почечная волчанка, дискоидная волчанка, алопеция); ювенильный сахарный диабет; рассеянный склероз (PC), такой как спинально-офтальмический PC; аллергический энцефаломиелит; иммунные реакции, ассоциированные с острой и замедленной гиперчувствительностью, опосредуемой цитокинами и Т-лимфоцитами; туберкулез; саркоидоз; гранулематоз, включая гранулематоз Вегенера, агранулоцитоз, васкулиты (включая, васкулиты крупных сосудов (включая ревматическую полимиалгию и гигантоклеточный артериит (артрит Такаясу)), васкулиты средних сосудов (включая болезнь Кавазаки и узелковый полиартериит), васкулиты ЦНС и ANCA-ассоциированный васкулит, такой как васкулит или синдром Черга-Штраусса (CSS)); апластическая анемия; положительная анемия Кумбса; анемия Даймонда-Блекфана; иммунная гемолитическая анемия, включая аутоиммунную гемолитическую анемию (АИГА); пернициозная анемия; истинная эритроцитарная аплазия (ИЭА); заболевания, ассоциированные с дефицитом фактора VIII; гемофилия А; аутоиммунная нейтропения; панцитопения; лейкопения; заболевания, ассоциированные с лейкоцитарным диапедезом; воспалительные расстройства ЦНС; синдром поражения множества органов; тяжелая миастения; заболевания, опосредуемые комплексом “антиген-антитело”; болезнь гломерулярных базальных мембран, катализируемая реакцией “антитело-антиген”; синдром, ассоциированный с вырабатыванием антител против фосфолипидов; аллергический неврит; болезнь Бехчета; синдром Каслмана; синдром Гудпасчера; миастенический синдром Ламберта-Итона; синдром Рейно; синдром Сьегрена; синдром Стивенса-Джонсона; отторжение трансплантата твердых органов (включая реакции на предварительное введение высоких титров тест-ангигеновых реактивных антител, на отложение IgA в тканях и на отторжение трансплантата почки, трансплантата печени, трансплантата тонкой кишки, трансплантата сердца и т.п.); реакция “трансплантат против хозяина” (GVHD); буллезный пемфигоид; пузырчатка (включая вульгарную пузырчатку, листовидную пузырчатку и пемфигоид слизистых оболочек, напоминающий пузырчатку); аутоиммунные полиэндокринопатии; болезнь Райтера; синдром “негнущегося человека”; иммунокомплексный нефрит; IgM-полиневропатии или IgM-опосредуемая невропатия; идиопатическая тромбоцитопеническая пурпура (ИТП); тромботическая тромбоцитопеническая пурпура (ТТП); тромбоцитопения (развивающаяся, например, у пациентов с инфарктом миокарда), включая аутоиммунную тромбоцитопению; аутоиммунное заболевание яичек и яичника, включая аутоиммунный орхит и оофорит; первичный гипотереоз; аутоиммунные эндокринные заболевания, включая аутоиммунный тиреоидит, хронический тиреоидит (тиреоидит Хашимото); подострый тиреоидит; идиопатический гипотиреоз; болезнь Аддисона; болезнь Грейвса; аутоиммунные полигландулярные синдромы (или синдромы полигландулярной эндокринопатии); диабет типа I, также называемый инсулинзависимым сахарным диабетом (ИЗСД), включая ИЗСД у детей и синдром Шихана; аутоиммунный гепатит, лимфоидный интерстициальный пневмонит (HIV), облитерирующий бронхоилит (не передающийся), в отличие от NSIP; синдром Гийена-Барре; болезнь Бергера (IgA-нефропатия), первичный билиарный цирроз; кишечные спру (глютеновая энтеропатия); трудноизлечимое спру с обширными очагами герпетиформного дерматита; криоглобулинемия; амилотрофический боковой склероз (АБС; болезнь Луи Герига); ишемическая болезнь сердца; аутоиммунное заболевание внутреннего уха (АЗВУ); аутоиммунное облысение; синдром “пляшущих глаз” (СПГ); полихондрит, такой как трудноизлечимый полихондрит; легочно-альвеолярный протеиноз; амилоидоз; гигантоклеточный гепатит; склерит; моноклональная гаммапатия неясной/неизвестной этиологии (MGUS); периферическая невропатия, паранеопластический синдром; “каналопатии”, такие как эпилепсия, мигрень, аритмия, мышечные расстройства, глухота, слепота, периодический паралич, “каналопатии” ЦНС, аутизм, воспалительная миопатия и очаговый сегментарный гломерулосклероз (ОСГС).

“Алкил” представляет собой С₁-С₁₈углеводород, содержащий нормальный, вторичный, третичный атом углерода или атом углерода в кольце. Примерами являются метил (Ме, -СН₃), этил (Et, -СН₂СН₃), 1-пропил (n-Pr, н-пропил, -СН₂СН₂СН₃), 2-пропил (i-Pr, изопропил, СН₂(СН₃)₂), 1-бутил (n-Bu, н-бутил, -СН₂СН₂СН₂СН₃), 2-метил-1-пропил (i-Bu, изобутил, -СН₂СН(СН₃)₂), 2-бутил (s-Bu, втор-бутил, СН(СН₃)СН₂СН₃), 2-метил-2-пропил (t-Bu, трет-бутил, С(СН₃)₃), 1-пентил (н-пентил, -СН₂СН₂СН₂СН₂СН₃), 2-пентил (-СН(СН₃)СН₂СН₂СН₃), 3-пентил (-СН(СН₂(СН₃)₂), 2-метил-2-бутил (-С(СН₃)₂СН₂СН₃), 3-метил-2-бутил (-СН(СН₃)СН(СН₃)₂), 3-метил-1-бутил (-СН₂СН₂СН(СН₃)₂), 2-метил-1-бутил (-СН₂СН(СН₃)СН₂СН₃), 1-гексил (-СН₂СН₂СН₂СН₂СН₂СН₃), 2-гексил (-СН(СН₃)СН₂СН₂СН₂СН₃), 3-гексил (-СН(СН₂СН₃)(СН₂СН₂СН₃)), 2-метил-2-пентил (-С(СН₃)₂СН₂СН₂СН₃), 3-метил-2-пентил (-СН(СН₃)СН(СН₃)СН₂СН₃), 4-метил-2-пентил (-СН(СН₃)СН₂СН(СН₃)₂), 3-метил-3-пентил (-С(СН₃)(СН₂СН₃)₂), 2-метил-3-пентил (-СН(СН₂СН₃)СН(СН₃)₂), 2,3-диметил-2-бутил (-С(СН₃)₂СН(СН₃)₂), 3,3-диметил-2-бутил (-СН(СН₃)С(СН₃)₃).

“Алкенил” представляет собой С₂-С₁₈углеводород, содержащий нормальный, вторичный, третичный атом углерода или атом углерода в кольце, по меньшей мере, с одной ненасыщенной связью, т.е. углерод-углеродной связью и с sp ²-двойной связью. Примерами являются, но не ограничиваются ими, этилен или винил (-СН=СН₂), аллил (-СН₂СН=СН₂), циклопентенил (-С₅Н₇) и 5-гексенил (-СН₂СН₂СН₂СН₂СН=СН₂).

“Алкинил” представляет собой С₂-С₁₈углеводород, содержащий нормальный, вторичный, третичный атом углерода или атом углерода на кольце, по меньшей мере, с одной ненасыщенной связью, т.е. с углерод-углеродной связью и с sp-тройной связью. Примерами являются, но не ограничиваются ими, ацетилен (-С≡СН) и пропаргил (-СН₂С≡СН).

“Алкилен” представляет собой насыщенный, разветвленный, одноцепочечный или циклический углеводородный радикал, состоящий из 1-18 атомов углерода и имеющий два одновалентных радикальных центра, образованных в результате удаления двух атомов водорода у двух одинаковых или различных атомов углерода исходного алкана. Типичными алкиленовыми радикалами являются, но не ограничиваются ими, метилен (-СН₂-), 1,2-этил (-СН₂СН₂-), 1,3-пропил (-СН₂СН₂СН₂-), 1,4-бутил (-СН₂СН₂СН₂СН₂-) и т.п.

“Алкенилен” представляет собой ненасыщенный, разветвленный, одноцепочечный или циклический углеводородный радикал, состоящий из 2-18 атомов углерода и имеющий два одновалентных радикальных центра, образованных в результате удаления двух атомов водорода у двух одинаковых или различных атомов углерода исходного алкана. Типичными алкениленовыми радикалами являются, но не ограничиваются ими, 1,2-этилен (-СН=СН-).

“Алкинилен” представляет собой ненасыщенный, разветвленный, одноцепочечный или циклический углеводородный радикал, состоящий из 2-18 атомов углерода и имеющий два одновалентных радикальных центра, образованных в результате удаления двух атомов водорода у двух одинаковых или различных атомов углерода исходного алкина. Типичными алкиниленовыми радикалами являются, но не ограничиваются ими, ацетилен (-С≡С-), пропаргил (-СН₂С≡С-) и 4-пентинил (-СН₂СН₂СН₂С≡СН-).

“Арил” представляет собой одновалентный ароматический углеводородный радикал, состоящий из 6-20 атомов углерода и образующийся в результате удаления одного атома водорода у одного атома углерода исходной ароматической системы. Некоторые арильные группы в репрезентативных структурах обозначены как “Ar”. Типичными арильными группами являются, но не ограничиваются ими, радикалы, происходящие от бензола, замещенного бензола, нафталина, антрацена, бифенила и т.п.

“Арилалкил” представляет собой ациклический алкильный радикал, в котором один из атомов водорода, связанных с атомом углерода, обычно концевой атом углерода или sp ³-атом углерода, заменен арильным радикалом. Типичными арилалкильными группами являются, но не ограничиваются ими, бензил, 2-фенилэтан-1-ил, 2-фенилэтен-1-ил, нафтилметил, 2-нафтилэтан-1-ил, 2-нафтилэтен-1-ил, нафтобензил, 2-нафтофенилэтан-1-ил и т.п. Арилалкильная группа содержит от 6 до 20 атомов углерода; так, например, алкильная часть, включая алканильную, алкенильную или алкинильную части арилалкильной группы, имеет 1-6 атомов углерода, а арильная часть имеет 5-14 атомов углерода.

“Гетероарилалкил” представляет собой ациклический алкильный радикал, в котором один из атомов водорода, связанных с атомом углерода, обычно концевой атом углерода или sp ³-атом углерода, заменен гетероарильным радикалом. Типичными гетероарилалкильными группами являются, но не ограничиваются ими, 2-бензимидазолилметил, 2-фурилэтил и т.п. Гетероарилалкильная группа имеет от 6 до 20 атомов углерода; так, например, алкильная часть, включая алканильную, алкенильную или алкинильную части гетероарилалкильной группы, имеет 1-6 атомов углерода, а гетероарильная часть имеет 5-14 атомов углерода и 1-3 гетероатома, выбранных из N, О, Р и S. Гетероарильная часть гетероарилалкильной группы может представлять собой моноцикл, имеющий от 3 до 7 членов на кольце (2-6 атомов углерода), или бицикл, имеющий от 7 до 10 членов на кольце (4-9 атомов углерода и 1-3 гетероатома, выбранных из N, О, Р и S), например бицикло [4,5]-, [5,5]-, [5,6]- или [6,6]-систему.

Термины “замещенный алкил”, “замещенный арил” и “замещенный арилалкил” означают алкил, арил и арилалкил соответственно, в которых один или несколько атомов водорода независимо замещены заместителем. Типичными заместителями являются, но не ограничиваются ими, -Х-, -R, -О^-, -OR, -SR, -S^-, -NR₂, -NR₃, =NR, -СХ₃, -CN, -OCN, -SCN, -N=С=О, -NCS, -NO, -NO₂, =N₂, -N₃, NC(=О)R, С(=О)R, -С(=О)NR₂, -SO₃ ^-, -SO₃H, -S(=О)₂R, -OS(=О)₂OR, -S(=O)₂NR, -S(=О)R, -ОР(=О)(OR)₂, -Р(=О)(OR)₂, -РО₃ ^-, -РО₃Н₂, -С(=О)R, -С(=О)Х, -С(=S)R, -CO₂R, -СО₂ ^-, -С(=S)OR, -С(=О)SR, -С(=S)SR, -С(=О)NR₂, -С(=S)NR₂, -С(=NR)NR₂, где каждый Х независимо представляет собой галоген: F, Cl, Br или I, а каждый R независимо представляет собой Н, С₂-С₁₈алкил, С₆-С₂₀арил, С₃-С₁₄гетероцикл, защитную группу или группу пролекарства. Алкиленовая, алкениленовая и алкиниленовая группы, описанные выше, могут быть также замещены аналогичным образом.

“Гетероарил” и “гетероцикл” представляют собой циклическую систему, в которой один или несколько атомов на кольце представляют собой гетероатомы, например, атомы азота, кислорода и серы. Гетероциклический радикал содержит 1-20 атомов углерода и 1-3 гетероатома, выбранных из N, О, Р и S. Гетероцикл может представлять собой моноцикл, имеющий от 3 до 7 членов на кольце (2-6 атомов углерода и 1-3 гетероатома, выбранных из N, О, Р и S), или бицикл, имеющий от 7 до 10 членов на кольце (4-9 атомов углерода и 1-3 гетероатома, выбранных из N, О, Р и S), например бицикло [4,5]-, [5,5]-, [5,6]- или [6,6]-систему.

Гетероциклы описаны у Paquette, Leo A.; “Principles of Modern Heterocyclic Chemistry” (W.A. Benjamin, New York, 1968), а в частности в главах 1, 3, 4, 6, 7 и 9; в “The Chemistry of Heterocyclic Compounds, A series of Monographs” (John Wiley & Sons, New York, 1950 to present), а в частности в томах 13, 14, 16, 19 и 28; и в J. Am. Chem. Soc. (1960) 82:5566.

Примерами гетероциклов является, например, но не ограничиваются ими, пиридил, дигидропиридил, тетрагидропиридил (пиперидил), тиазолил, тетрагидротиофенил, окисленный серой тетрагидротиофенил, пиримидинил, фуранил, тиенил, пирролил, пиразолил, имидазолил, тетразолил, бензофуранил, тианафталинил, индолил, индоленил, хинолинил, изохинолинил, бензимидазолил, пиперидинил, 4-пиперидонил, пирролидинил, 2-пирролидонил, пирролинил, тетрагидрофуранил, бис-тетрагидрофуранил, тетрагидропиранил, бис-тетрагидропиранил, тетрагидрохинолинил, тетрагидроизохинолинил, декагидрохинолинил, октагидроизохинолинил, азоцинил, триазинил, 6Н-1,2,5-тиадиазинил, 2Н,6Н-1,5,2-дитиазинил, тиенил, тиантренил, пиранил, изобензофуранил, хроменил, ксантенил, феноксантинил, 2Н-пирролил, изотиазолил, изоксазолил, пиразинил, пиридазинил, индолизинил, изоиндолил, 3Н-индолил, 1Н-индазолил, пуринил, 4Н-хинолизинил, фталазинил, нафтеридинил, хиноксалинил, хиназолинил, циннолинил, птеридинил, 4аН-карбазолил, карбазолил, β-карболинил, фенантридинил, акридинил, пиримидинил, фенантролинил, феназинил, фенотиазинил, фуразанил, феноксазинил, изохроманил, хроманил, имидазолидинил, имидазолинил, пиразолидинил, пиразолинил, пиперазинил, индолинил, изоиндолинил, хинуклидинил, морфолинил, оксазолидинил, бензотриазолил, бензизоксазолил, оксиндолил, бензоксазолинил и изатиноил.

Неограничивающими примерами связанных через углерод гетероциклов являются гетероциклы, связанные в положении 2, 3, 4, 5 или 6 пиридина, в положении 3, 4, 5 или 6 пиридазина, в положении 2, 4, 5 или 6 пиримидина, в положении 2, 3, 5 или 6 пиразина, в положении 2, 3, 4 или 5 фурана, тетрагидрофурана, тиофурана, тиофена, пиррола или тетрагидропиррола, в положении 2, 4 или 5 оксазола, имидазола или тиазола, в положении 3, 4 или 5 изоксазола, пиразола или изотиазола, в положении 2 или 3 азиридина, в положении 2, 3 или 4 азетидина, в положении 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 хинолина или в положении 1, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 изохинолина. Более типичными связанными через углерод гетероциклами являются 2-пиридил, 3-пиридил, 4-пиридил, 5-пиридил, 6-пиридил, 3-пиридазинил, 4-пиридазинил, 5-пиридазинил, 6-пиридазинил, 2-пиримидинил, 4-пиримидинил, 5-пиримидинил, 6-пиримидинил, 2-пиразинил, 3-пиразинил, 5-пиразинил, 6-пиразинил, 2-тиазолил, 4-тиазолил или 5-тиазолил.

Неограничивающими примерами связанных через азот гетероциклов являются гетероциклы, связанные в положении 1 азиридина, азетидина, пиррола, пирролидина, 2-пирролина, 3-пирролина, имидазола, имидазолидина, 2-имидазолина, 3-имидазолина, пиразола, пиразолина, 2-пиразолина, 3-пиразолина, пиперидина, пиперазина, индола, индолина, 1Н-индазола; в положении 2 изоиндола или изоиндолина, в положении 4 морфолина и в положении 9 карбазола или β-карболина. Наиболее типичными связанными через азот гетероциклами являются 1-азиридил, 1-азетидил, 2-пирролил, 1-имидазолил, 1-пиразолил и 1-пиперидинил.

“Карбоцикл” представляет собой насыщенное или ненасыщенное моноциклическое кольцо, имеющее 3-7 атомов углерода, или бициклическое кольцо, имеющее 7-12 атомов углерода. Моноциклические карбоциклы имеют 3-6 атомов углерода на кольце, а обычно 5 или 6 атомов углерода на кольце. Бициклические карбоциклы имеют 7-12 атомов углерода на кольце, например, в виде бицикло-[4,5]-, -[5,5]-, -[5,6]- или [6,6]-системы, либо 9 или 10 атомов углерода на кольце, в виде бицикло-[5,6]- или [6,6]-системы. Примерами моноциклических карбоциклов являются циклопропил, циклобутил, циклопентил, 1-циклопент-1-енил, 1-циклопент-2-енил, 1-циклопент-3-енил, циклогексил, 1-циклогекс-1-енил, 1-циклогекс-2-енил, 1-циклогекс-3-енил, циклогептил и циклооктил.

Термины “линкер”, “линкерный компонент” или “связь” означают химическую группу, содержащую ковалентную связь или цепь атомов, которые ковалентно связывают антитело с молекулой лекарственного средства. В различных вариантах изобретения линкер обозначен LU. Линкером является двувалентный радикал, такой как алкилдиил, арилдиил, гетероарилдиил, такие группы, как -(CR₂)_nO(CR₂)_n-, повторяющиеся звенья алкилокси (например, полиэтиленокси, ПЭГ, полиметиленокси) и алкиламино (например, полиэтиленамино, Jeffamine^TM), и двухосновный сложный эфир и амиды, включая сукцинат, сукцинамид, дигликолят, малонат и капроамид.

Термин “хиральный” относится к молекулам, которые не совмещаются наложением с его зеркально отображенным аналогом, а термин “ахиральный” относится к молекулам, которые совмещаются наложением с его зеркально отображенным аналогом.

Термин “стереоизомеры” означает соединения, которые имеют идентичную химическую структуру, но отличаются пространственным расположением атомов или групп.

Термин “диастереомер” означает стереоизомер с одним или несколькими хиральными центрами, молекулы которого не являются зеркальным отображением друг друга. Диастереомеры имеют различные физические свойства, например температуры плавления, точки кипения, спектральные свойства и реакционную способность. Смеси диастереомеров могут быть разделены высокоразрешающими аналитическими методами, такими как электрофорез и хроматография.

Термин “энантиомеры” означает два стереоизомера соединения, зеркальные отображения которых не совмещаются друг с другом.

Определения и обозначения используемых здесь стереохимических терминов в общих чертах приводятся у S.P. Parker, Ed., McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (1984) McGraw-Hill Book Company, New York; и Eliel E.& Wilen, S., Stereochemistry of Organic Compounds (1994) John Wiley & Sons, Inc., New York. Многие органические соединения существуют в оптически активных формах, то есть они способны вращать плоскость плоскополяризованного света. В описании оптически активного соединения префиксы D и L или R и S используются для обозначения абсолютной конфигурации молекулы относительно его (их) хирального(ых) центра(ов). Префиксы d и l или (+) и (-) используются для обозначения знака вращения плоскополяризованного света данным соединением, а (-) или l означает, что данное соединение является левовращающим. Соединение с префиксом (+) или d является правовращающим. Для данной химической структуры эти стереоизомеры являются идентичными, за исключением того, что они являются зеркальным отображением друг друга. Специфический стереоизомер может также называться энантиомером, а смесь таких изомеров часто называется энантиомерной смесью. Смесь 50:50 энантиомеров называется рацемической смесью или рацематом, который может образовываться в том случае, если в химической реакции или в химическом процессе отсутствует стереоселективность или стереоспецифичность. Термины “рацемическая смесь” и “рацемат” означают эквимолярную смесь двух энантиомерных молекул, не обладающих оптической активностью.

Примерами “пациента” являются, но не ограничиваются ими, человек, крыса, мышь, морская свинка, обезьяна, свинья, коза, корова, лошадь, собака, кошка, птица и домашняя птица. В репрезентативном варианте изобретения пациентом является человек.

Термин “арил” означает карбоциклическую ароматическую группу. Примерами арильных групп являются, но не ограничиваются ими, фенил, нафтил и антраценил. Карбоциклическая ароматическая группа или гетероциклическая ароматическая группа могут быть незамещенными или могут быть замещены одной или несколькими группами, включая, но не ограничиваясь ими, -С₁-С₈алкил, -О-(С₁-С₈алкил), арил, -С(О)R', -ОС(О)R', -С(О)OR', -С(О)NH₂, -С(О)NHR', -С(О)N(R')₂, -NHC(О)R', -S(О)₂R', -S(О)R', -ОН, галоген, N₃, -NH₂-, -NH(R'), -N(R')₂ и -CN, где каждый из R' независимо выбран из Н, -С₁-С₈алкила и арила.

Используемый здесь термин “С₁-С₈алкил” означает прямой или разветвленный, насыщенный или ненасыщенный углеводород, имеющий от 1 до 8 атомов углерода. Репрезентативными “С₁-С₈алкильными” группами являются, но не ограничиваются ими, метил, этил, н-пропил, н-бутил, н-пентил, н-гексил, н-гептил, н-октил, н-нонил и н-децил, а разветвленными С₁-С₈алкилами являются, но не ограничиваются ими, изопропил, втор-бутил, изобутил, трет-бутил, изопентил, 2-метилбутил; ненасыщенными С₁-С₈алкилами являются, но не ограничиваются ими, винил, аллил, 1-бутенил, 2-бутенил, изобутиленил, 1-пентенил, 2-пентенил, 3-метил-1-бутенил, 2-метил-2-бутенил, 2,3-диметил-2-бутенил, 1-гексил, 2-гексил, 3-гексил, ацетиленил, пропинил, 1-бутинил, 2-бутинил, 1-пентинил, 2-пентинин, 3-метил-1-бутинил, метил, этил, пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, н-пентил, изопентил, неопентил, н-гексил, изогексил, 2-метилпентил, 3-метилпентил, 2,2-диметилбутил, 2,3-диметилбутил, 2,2-диметилпентил, 2,3-диметилпентил, 3,3-диметилпентил, 2,3,4-триметилпентил, 3-метилгексил, 2,2-диметилгексил, 2,4-диметилгексил, 2,5-диметилгексил, 3,5-диметилгексил, 2,4-диметилпентил, 2-метилгептил, 3-метилгептил, н-гептил, изогептил, н-октил и изооктил. С₁-С₈алкильная группа может быть незамещенной или может быть замещена одной или несколькими группами, включая, но не ограничиваясь ими, -С₁-С₈алкил, -О-(С₁-С₈алкил), -арил, -С(О)R', -ОС(О)R', -С(О)OR', -С(О)NH₂, -С(О)NHR', -С(О)N(R')₂, -NHC(О)R', -SO₃R', -S(О)₂R', -S(О)R', -ОН, галоген, N₃, -NH₂-, -NH(R'), -N(R')₂ и -CN, где каждый из R' независимо выбран из Н, -С₁-С₈алкила и арила.

Термин “С₃-С₈карбоцикл” означает 3-, 4-, 5-, 6-, 7- или 8-членное насыщенное или ненасыщенное неароматическое карбоциклическое кольцо. Репрезентативными С₃-С₈карбоциклами являются, но не ограничиваются ими, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклопентадиенил, циклогексил, циклогексенил, -1,3-циклогексадиенил, -1,4-циклогексадиенил, циклогептил, -1,3-циклогептадиенил, -1,3,5-циклогептатриенил, циклооктил и циклооктадиенил. С₃-С₈карбоциклическая группа может быть незамещенной или может быть замещена одной или несколькими группами, включая, но не ограничиваясь ими, -С₁-С₈алкил, -О-(С₁-С₈алкил)-, арил, -С(О)R', -ОС(О)R', -С(О)OR', -С(О)NH₂, -С(О)NHR', -С(О)N(R')₂, -NHC(О)R', -S(О)₂R', -S(О)R', -ОН, галоген, N₃, -NH₂-, NH(R'), -N(R')₂ и -CN, где каждый из R' независимо выбран из Н, -С₁-С₈алкила и арила.

Термин “С₃-С₈карбоцикло” означает С₃-С₈карбоциклическую группу, определенную выше, где один из атомов водорода карбоциклической группы заменен связью.

Термин “С₁-С₁₀алкилен” означает прямую насыщенную углеводородную группу формулы -(СН₂)_1-10-. Примерами С₁-С₁₀алкилена являются метилен, этилен, пропилен, бутилен, пентилен, гексилен, гептилен, октилен, нонилен и декален.

Термин “арилен” означает арильную группу, которая имеет две ковалентные связи и может присутствовать в орто-, мета- или пара-конфигурациях, как показано в нижеследующих структурах:

где фенильная группа может быть незамещенной или может быть замещена одной-четырьмя группами, включая, но не ограничиваясь ими, -С₁-С₈алкил, -О-(С₁-С₈алкил)-, арил, -С(О)R', -ОС(О)R', -С(О)OR', -С(О)NH₂, -С(О)NHR', -С(О)N(R')₂, -NHC(О)R', -S(О)₂R', -S(О)R', -ОН, галоген, N₃, -NH₂-, -NH(R'), -N(R')₂ и -CN, где каждый из R' независимо выбран из Н, -С₁-С₈алкила и арила.

Термин “С₃-С₈гетероцикл” означает ароматический или неароматический С₃-С₈карбоцикл, в котором один-четыре атома углерода на кольце независимо замещены гетероатомом, выбранным из группы, состоящей из О, S и N. Репрезентативными примерами С₃-С₈гетероцикла являются, но не ограничиваются ими, бензофуранил, бензотиофен, индолил, бензопиразолил, кумаринил, изохинолинил, пирролил, тиофенил, фуранил, тиазолил, имидазолил, пиразолил, триазолил, хинолинил, пиримидинил, пиридинил, пиридонил, пиразинил, пиридазинил, изотиазолил, изоксазолил и тетразолил. С₃-С₈гетероцикл может быть незамещенным, либо он может быть замещен 1-7 группами, включая, но не ограничиваясь ими, -С₁-С₈алкил, -О-(С₁-С₈алкил)-, -арил, -С(О)R', -ОС(О)R', -С(О)OR', -С(О)NH₂, -С(О)NHR', -С(О)N(R')₂, -NHC(О)R', -S(О)₂R', -S(О)R', -ОН, галоген, N₃, -NH₂-, -NH(R'), -N(R')₂ и -CN, где каждый из R' независимо выбран из Н, -С₁-С₈алкила и арила.

Термин “С₃-С₈гетероцикло” означает С₃-С₈гетероциклическую группу, определенную выше, где один из атомов водорода гетероциклической группы заменен связью. С₃-С₈гетероцикло может быть незамещенным или может быть замещен 1-6 группами, включая, но не ограничиваясь ими, -С₁-С₈алкил, -О-(С₁-С₈алкил)-, -арил, -С(О)R', -ОС(О)R', -С(О)OR', -С(О)NH₂, -С(О)NHR', -С(О)N(R')₂, -NHC(О)R', -S(О)₂R', -S(О)R', -ОН, галоген, N₃, -NH₂-, -NH(R'), -N(R')₂ и -CN, где каждый из R' независимо выбран из Н, -С₁-С₈алкила и арила.

Термин “репрезентативное соединение” означает лекарственное соединение или соединение “лекарственное средство-линкер”.

Термин “репрезентативный конъюгат” означает конъюгат “лекарственное средство-лиганд”, в котором лекарственное средство отщепляется от указанного конъюгата “лекарственное средство-лиганд” или конъюгата “лекарственное средство-линкер-лиганд”.

В некоторых вариантах изобретения указанные репрезентативные соединения и конъюгаты присутствуют в выделенной или в очищенной форме. Используемый здесь термин “выделенный” означает компонент, отделенный от других компонентов (а) природного источника, такого как клетка или клеточная культура растения или животного, или (b) синтетической органической химической реакционной смеси. Используемый здесь термин “очищенный” означает, что после выделения данный изолят содержит, по меньшей мере, 95%, а в другом аспекте изобретения, по меньшей мере, 98% репрезентативного соединения или репрезентативного конъюгата по массе изолята.

Примерами “гидроксильных защитных групп” являются, но не ограничиваются ими, метоксиметиловый эфир, 2-метоксиэтоксиметиловый эфир, тетрагидропираниловый эфир, бензиловый эфир, п-метоксибензиловый эфир, триметилсилиловый эфир, триэтилсилиловый эфир, триизопропилсилиловый эфир, трет-бутилдиметилсилиловый эфир, трифенилметилсилиловый эфир, сложный эфир уксусной кислоты, замещенные сложные эфиры уксусной кислоты, пивалоат, бензоат, метансульфонат и п-толуолсульфонат.

Термин “уходящая группа” означает функциональную группу, которая может быть замещена другой функциональной группой. Такие уходящие группы хорошо известны специалистам, и примерами этих групп являются, но не ограничиваются ими, галогенид (например, хлорид, бромид, иодид), метансульфонил (мезил), п-толуолсульфонил (тозил), трифторметилсульфонил (трифлат) и трифторметилсульфонат.

Используемый здесь термин “фармацевтически приемлемая соль” означает фармацевтически приемлемые органические или неорганические соли репрезентативного соединения или репрезентативного конъюгата. Указанные репрезентативные соединения и репрезентативные конъюгаты содержат, по меньшей мере, одну аминогруппу, и эта аминогруппа может образовывать соответствующие кислотно-аддитивные соли. Примерами таких солей являются, но не ограничиваются ими, сульфат, цитрат, ацетат, оксалат, хлорид, бромид, иодид, нитрат, бисульфат, фосфат, кислый фосфат, изоникотинат, лактат, салицилат, кислый цитрат, тартрат, олеат, таннат, пантотенат, битартрат, аскорбат, сукцинат, малеат, гентизинат, фумарат, глюконат, глюкуронат, сахарат, формиат, бензоат, глутамат, метансульфонат, этансульфонат, бензолсульфонат, п-толуолсульфонат и памоат (т.е. 1,1'-метилен-бис-(2-гидрокси-3-нафтоат)). Термин “фармацевтически приемлемая соль” может включать и другую молекулу, такую как ион ацетата, ион сукцината или другой противоион. Такой противоион может представлять собой любую органическую или неорганическую молекулу, которая стабилизирует заряд на исходном соединении. Кроме того, фармацевтически приемлемая соль может иметь в своей структуре более чем один заряженный атом. В случае если множество заряженных атомов являются частью фармацевтически приемлемой соли, то такая соль может иметь множество противоионов. Следовательно, фармацевтически приемлемая соль может иметь один или несколько заряженных атомов и/или один или несколько противоионов.

Термины “фармацевтически приемлемый сольват” или “сольват” означает комплекс одной или нескольких молекул растворителя и соединений настоящего изобретения, например репрезентативного соединения или репрезентативного конъюгата. Примерами растворителей, которые образуют фармацевтически приемлемые сольваты, являются, но не ограничиваются ими, вода, изопропанол, этанол, метанол, ДМСО, этилацетат, уксусная кислота и этаноламин.

Сокращения, используемые в настоящем описании, имеют нижеследующие значения: АЕ означает ауристатин Е; Вос означает N-(трет-бутоксикарбонил), cit означает цитруллин, dap означает долапроин, DCC означает 1,3-дициклогексилкарбодиимид, DCM (ДХМ) означает дихлорметан, DEA означает диэтиламин, DEAD означает диэтилазодикарбоксилат, DEPC означает диэтилфосфорилцианидат, DIAD означает диизопропилазодикарбоксилат, DIEA означает N,N-диизопропилэтиламин, dil означает долаизолейцин, DMAP означает 4-диметиламинопиридин, DME означает диметиловый эфир этиленгликоля (или 1,2-диметоксиэтан), DMF (ДМФ) означает N,N-диметилформамид, DMSO (ДМСО) означает диметилсульфоксид, doe означает долафенин, dov означает N,N-диметилвалин, DNTB означает 5,5'-дитиобис(2-нитробензойную кислоту), DTPA означает диэтилентриаминопентауксусную кислоту, DTT означает дитиотреитол, EDCI означает гидрохлорид 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида, EEDQ означает 2-этокси-1-этоксикарбонил-1,2-дигидрохинолин, ES-MS означает масс-спектрометрию электрораспылением, EtOAc означает этилацетат, Fmoc означает N-(9-флуоренилметоксикарбонил), gly означает глицин, HATU означает гексафторфосфат О-(7-азабензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония, HOBt означает 1-гидроксибензотриазол, HPLC (ВЭЖХ) означает жидкостную хроматографию высокого давления, ile означает изолейцин, lys означает лизин, MeCN (CH₃CN) означает ацетонитрил, MeOH означает метанол, Mtr означает 4-анизилдифенилметил (или 4-метокситритил), nor (нор) означает (1S,2R)-(+)-норэфедрин, РАВ означает п-аминобензил, PBS означает забуференный фосфатом физиологический раствор (рН 7,4), PEG (ПЭГ) означает полиэтиленгликоль, Ph означает фенил, Pnp означает п-нитрофенил, МС означает 6-малеимидокапроил, phe означает L-фенилаланин, PyBrop означает гексафторфосфат бром-трис-пирролидинофосфония, SEC означает эксклюзионную хроматографию, Su означает сукцинимид, TBTU означает тетрафторборат О-бензотриазол-1-ил-N,N,N,N-тетраметилурония, TFA означает трифторуксусную кислоту, TLC (ТСХ) означает тонкослойную хроматографию, UV (УФ) означает ультрафиолетовое излучение, а val означает валин.

Сокращения, используемые в настоящем описании для линкеров, имеют нижеследующие значения: Val-Cit означает валин-цитруллин, дипептидный сайт в расщепляемом протеазой линкере; РАВ означает п-аминобензилкарбамоил; (Ме)vc означает N-метил-валин-цитруллин, где линкерная пептидная связь была модифицирована так, чтобы она предотвращала расщепление этого линкера катепсином В; МС(ПЭГ)₆-ОН означает малеимидокапроил-полиэтиленгликоль; SPP означает N-сукцинимидил-4-(2-пиридилтио)пентаноат, а SMCC означает N-сукцинимидил-4-(N-малеимидометил)циклогексан-1-карбоксилат.

Термины “лечить” или “лечение”, если в контексте описания они не имеют какого-либо иного смысла, означают терапевтическое лечение и профилактические или превентивные меры, которые направлены на предупреждение или замедление (ослабление) у индивидуума нежелательного физиологического изменения или расстройства, такого как развитие или прогрессирование рака. В соответствии с настоящим изобретением благоприятными или желательными клиническими эффектами являются, но не ограничиваются ими, ослабление симптомов, снижение тяжести заболевания, стабильное (то есть не ухудшающееся) состояние, задержка или замедление прогрессирования заболевания, уменьшение или временное облегчение симптомов заболевания и ремиссия (частичная или полная), независимо от того, являются ли эти симптомы детектируемыми или недетектируемыми. Термин “лечение” может также означать увеличение продолжительности жизни по сравнению с ожидаемой продолжительностью жизни при отсутствии лечения. Термин “индивидуумы, нуждающиеся в лечении” относится к индивидуумам, уже страдающим данным состоянием или расстройством, а также к индивидуумам, имеющим предрасположенность к данному состоянию или расстройству, или к индивидуумам, которые нуждаются в предупреждении данного состояния или расстройства.

Что касается рака, то термин “лечение” включает любые или все из нижеперечисленных эффектов, таких как предупреждение роста опухолевых клеток, раковых клеток или опухоли; предотвращение репликации опухолевых клеток или раковых клеток, снижение общей опухолевой массы или уменьшение числа раковых клеток и ослабление одного или нескольких симптомов, ассоциированных с данным заболеванием.

Что касается аутоиммунного заболевания, то термин “лечение” включает любые или все из нижеперечисленных эффектов, таких как предотвращение репликации клеток, ассоциированных с аутоиммунным заболеванием, включая, но не ограничиваясь ими, клетки, продуцирующие аутоиммунное антитело; снижение титра аутоиммунных антител и ослабление одного или нескольких симптомов аутоиммунного заболевания.

Что касается инфекционного заболевания, то термин “лечение” включает любые или все из нижеперечисленных эффектов, таких как предотвращение роста, размножения или репликации патогенов, вызывающих инфекционное заболевание и ослабление одного или нескольких симптомов инфекционного заболевания.

Сокращения, используемые в настоящем описании для цитотоксических лекарственных средств, имеют нижеследующие значения: ММАЕ означает монометил-ауристатин Е (мол. масса (MW 718); MMAF означает N-метилвалин-валин-долаизолейцин-долапроин-фенилаланин (MW 731,5); MMAF-DMEAEA означает MMAF с DMAEA (диметиламиноэтиламином), имеющий амидную связь с С-концевым фенилаланином (MW 801,5); MMAF-TEG означает MMAF с тетраэтиленгликолем, этерифицированным фенилаланином; MMAF-NtBu означает N-трет-бутил, присоединенный в виде амида к С-концу MMAF; AEVB означает валерилбензилгидразон ауристатина Е, связанный кислотным лабильным линкером с С-концом АЕ (MW 732), а AFP означает моноамид п-фенилендиамина с С-концевым фенилаланином ауристатина F (MW 732).

4.2. Соединения согласно изобретению

4.2.1. Соединение формулы (Ia)

В одном из своих аспектов настоящее изобретение относится к конъюгатам “лекарственное средство-линкер-лиганд”, имеющим формулу Ia:

L--(A_a--W_w--Y_y-D)_P (Ia)

или к их фармацевтически приемлемым солям или сольватам,

где: L представляет собой лигандный компонент;

-А_а-W_w-Y_y- представляет собой линкерный компонент (LU), где в указанном линкерном компоненте:

-А- представляет собой удлиняющий компонент;

а равно 0 или 1,

каждый из -W- независимо представляет собой аминокислотный компонент,

w равно целому числу от 0 до 12,

-Y- означает спейсерный компонент,

у равно 0, 1 или 2;

р составляет в пределах от 1 примерно до 20; и

-D представляет собой компонент “лекарственное средство”, имеющий формулы D_E и D_F;

где в каждом положении независимо:

R² выбран из Н и С₁-С₈алкила;

R⁵ выбран из Н и метила;

R⁶ выбран из Н и С₁-С₈алкила;

каждый из R⁸ независимо выбран из Н, ОН, С₁-С₈алкила, С₃-С₈карбоцикла и О-(С₁-С₈алкила);

R⁹ выбран из Н и С₁-С₈алкила;

R¹⁰ выбран из арила или С₃-С₈гетероцикла;

Z представляет собой О, S, NH или -NR¹², где R¹² представляет собой С₁-С₈алкил;

R¹¹ выбран из Н, С₁-С₂₀алкила, арила, С₃-С₈гетероцикла, -(R¹³O)_m-R¹⁴ или (R¹³O)_m-СН(R¹⁵)₂;

m равно целому числу от 1 до 1000;

R¹³ представляет собой С₂-С₈-алкил;

R¹⁴ представляет собой Н или С₁-С₈алкил;

каждый из R¹⁵ независимо представляет собой Н, СООН, -(СН₂)_n-N(R¹⁶)₂, -(СН₂)_n-SO₃H или -(СН₂)_n-SO₃-С₁-С₈алкил;

каждый из R¹⁶ независимо представляет собой Н, С₁-С₈алкил или -(СН₂)_n-СООН;

R¹⁸ выбран из -С(R⁸)₂-С(R⁸)₂-арила, -С(R⁸)₂-С(R⁸)₂-(С₃-С₈-гетероцикла) и -С(R⁸)₂-С(R⁸)₂-(С₃-С₈-карбоцикла); и

где n равно целому числу от 0 до 6.

В другом своем варианте настоящее изобретение относится к лекарственным соединениям формулы Ib:

или к их фармацевтически приемлемым солям или сольватам,

где: R² выбран из водорода и С₁-С₈алкила;

R³ выбран из водорода, С₁-С₈алкила, С₃-С₈карбоцикла, арила, -С₁-С₈алкиларила, С₁-С₈алкил-(С₃-С₈карбоцикла), С₃-С₈гетероцикла и -С₁-С₈алкил-(С₃-С₈гетероцикла);

R⁴ выбран из водорода, -С₁-С₈алкила, -С₃-С₈карбоцикла, -арила, -С₁-С₈алкиларила, -С₁-С₈алкил-(С₃-С₈карбоцикла), С₃-С₈гетероцикла и С₁-С₈алкил-(С₃-С₈гетероцикла), где R⁵ выбран из Н и метила либо R⁴ и R⁵, взятые вместе с атомом углерода, с которым они связаны, образуют кольцо формулы -(CR^aR^b)_n-, где R^a и R^b независимо выбраны из -Н, -С₁-С₈алкила и С₃-С₈карбоцикла, а n выбран из 2, 3, 4, 5 и 6;

R⁶ выбран из Н и -С₁-С₈алкила;

R⁷ выбран из Н, -С₁-С₈алкила, -С₃-С₈карбоцикла, -арила, -С₁-С₈алкиларила, -С₁-С₈алкил-(С₃-С₈карбоцикла), -С₃-С₈гетероцикла и -С₁-С₈алкил-(С₃-С₈гетероцикла);

каждый из R⁸ независимо выбран из Н, ОН, -С₁-С₈алкила, -С₃-С₈карбоцикла и О-(С₁-С₈алкила);

R⁹ выбран из Н и -С₁-С₈алкила;

R¹⁰ выбран из арильной группы или -С₃-С₈гетероцикла;

Z представляет собой -О-, -S-, -NH- или -NR¹², где R¹² представляет собой -С₁-С₈алкил;

R¹¹ выбран из Н, -С₁-С₂₀алкила, -арила, -С₃-С₈гетероцикла, -(R¹³O)_m-R¹⁴ или -(R¹³O)_m-СН(R¹⁵)₂;

m равно целому числу от 1 до 1000;

R¹³ представляет собой -С₂-С₈-алкил;

R¹⁴ представляет собой Н или -С₁-С₈алкил;

каждый из R¹⁵ независимо представляет собой Н, -СООН, -(СН₂)_n-N(R¹⁶)₂, -(СН₂)_n-SO₃H или -(СН₂)_n-SO₃-С₁-С₈алкил;

каждый из R¹⁶ независимо представляет собой Н, -С₁-С₈алкил или -(СН₂)_n-СООН, и

n равно целому числу от 0 до 6.

В еще одном своем варианте настоящее изобретение относится к конъюгатам “лекарственное средство-линкер-лиганд” формулы Ia':

Ab--(A_a--W_w--Y_y--D)_P (Ia')

или к их фармацевтически приемлемым солям или сольватам,

где: Ab представляет собой антитело;

А представляет собой удлиняющий компонент;

а равно 0 или 1,

каждый -W- независимо представляет собой аминокислотный компонент,

w равно целому числу от 0 до 12,

Y означает спейсерный компонент,

у равно 0, 1 или 2,

р составляет в пределах от 1 примерно до 20; и

D представляет собой лекарственное средство, выбранное из соединений формул D_E и D_F:

где в каждом положении независимо:

R² выбран из Н и С₁-С₈алкила;

R⁵ выбран из Н и метила;

R⁶ выбран из Н и С₁-С₈алкила;

каждый из R⁸ независимо выбран из Н, ОН, С₁-С₈алкила, С₃-С₈карбоцикла и О-(С₁-С₈алкила);

R⁹ выбран из Н и С₁-С₈алкила;

R¹⁰ выбран из арила или С₃-С₈гетероцикла;

Z представляет собой О, S, NH или -NR¹², где R¹² представляет собой С₁-С₈алкил;

R¹¹ выбран из Н, С₁-С₂₀алкила, арила, С₃-С₈гетероцикла, -(R¹³O)_m-R¹⁴ или (R¹³O)_m-СН(R¹⁵)₂;

m равно целому числу от 1 до 1000;

R¹³ представляет собой С₂-С₈-алкил;

R¹⁴ представляет собой Н или С₁-С₈алкил;

каждый из R¹⁵ независимо представляет собой Н, СООН, -(СН₂)_n-N(R¹⁶)₂, (СН₂)_n-SO₃H или -(СН₂)_n-SO₃-С₁-С₈алкил;

каждый из R¹⁶ независимо представляет собой Н, С₁-С₈алкил или -(СН₂)_n-СООН;

R¹⁸ выбран из -С(R⁸)₂-С(R⁸)₂-арила, -С(R⁸)₂-С(R⁸)₂-(С₃-С₈-гетероцикла) и -С(R⁸)₂-С(R⁸)₂-(С₃-С₈-карбоцикла); и

n равно целому числу от 0 до 6.

Ab представляет собой антитело, ковалентно связанное с одним или несколькими молекулами лекарственного средства. Антителом Ab является антитело, которое связывается с CD30, CD40, CD70 и антигеном Lewis-Y. В другом варианте изобретения Ab не включает антитело, которое связывается с ErbB-рецептором или с одним или несколькими из рецепторов (1)-(35), такими как: