ПОЛИСПЕЦИФИЧЕСКАЯ ГИПЕРИММУННАЯ СЫВОРОТКА ПРОТИВ РОТА-, КОРОНАВИРУСНОГО ГАСТРОЭНТЕРИТА И ЭШЕРИХИОЗНОЙ ДИАРЕИ ПОРОСЯТ Российский патент 2012 года по МПК A61K39/395 C07K14/08 

Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии и биотехнологии, в частности к производству и применению биологического препарата, предназначенного для специфической терапии и пассивной иммунопрофилактики рота-, коронавирусного гастроэнтерита и эшерихиозной диареи поросят.

Практика работы свиноводческих комплексов как в нашей стране, так и за ее пределами показывает, что большой экономический ущерб хозяйствам наносят болезни желудочно-кишечного тракта новорожденных поросят. Заболевания обусловлены нарушениями параметров микроклимата в помещениях, нерациональным кормлением и содержанием супоросных свиноматок, а также возбудителями различных инфекционных заболеваний вирусной и бактериальной природы. Установлено, что важную этиологическую роль в возникновении диареи поросят играют ротавирусы, коронавирусы (вирус трансмиссивного гастроэнтерита свиней) и эшерихии коли (Куриленко А.Н. Колибактериоз молодняка. - Ветеринария с.-х. животных. - 2005. - №10. - С.58-63; Рахманов A.M., Яременко Н.А. Инфекционные болезни поросят и их иммунопрофилактика в современных условиях. - Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях: Матер, междунар. научн.-практ. конф. Воронеж, 2002. - С.31-33; Спиридонов Г.Н., Рафиков Р.К., Пожидаева Е.В. Смешанные вирусно-бактериальные энтериты новорожденных поросят и закономерности их проявления. - Матер. науч.-производст. конф. по проблемам ветеринарии и животноводства. - Казань. - 1995. - С.63; Шахов А.Г. Этиология и профилактика желудочно-кишечных и респираторных болезней телят и поросят.- Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях: Матер. междунар. научн.-практ. конф. Воронеж, 2002. - С.3-8: Ястребов А.С., Бычковский A.M., Савельева Т.А. Роль рота- и коронавирусов в этиологии острых гастроэнтеритов новорожденных поросят - Тез. докл. конф.: Профилактика и меры борьбы с болезнями молодняка с.-х. животных. - Минск. - 1990. - С.37-38). Рота-, коронавирусная инфекция у поросят часто протекает в смешанной форме с эшерихиозом. При этом наступает тяжелая болезнь с явлениями дегидратации и смертельным исходом через 12-24 ч. По данным многих исследователей в таких случаях заболеваемость поросят составляет 70-90%, а отход достигает 80-90% от числа заболевших.

В настоящее время главным направлением борьбы с указанными болезнями является активная иммунизация свиноматок для обеспечения колостральной защиты новорожденных поросят от данных инфекций. С этой целью в Российской Федерации разработаны различные моновалентные и ассоциированные вакцины, которые с успехом применяются в различных регионах (Байбиков Т.З., Пузанкова О.С., Кукушкин С.А., Рахманов A.M., Толокнов А.С. Полиштаммовая эмульсионная инактивированная вакцина ВНИИЗЖ для иммунопрофилактики трансмиссивного гастроэнтерита. - Матер. междунар. научн.-практ. конф.: Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях. - Воронеж. - 2002. - С.122-124; Гаффаров Х.З., Иванов А.В., Непоклонов А.В., Равилов А.З. Моно- и смешанные инфекционные диареи новорожденных телят и поросят.- Казань: ФЭН. - 2002. - 592 с; Русалиев B.C., Гневашев В.М., Прунтова О.В. Бактериальные вакцины в свиноводстве. - Ветеринария с.-х. животных. -2005. - №12. - С.21-23; Сергеев В.А., Алипер Т.И., Непоклонов Е.А. Вирусные гастроэнтериты свиней - Ветеринария. - 2006. - №2. - С.23-28). Антитела, полученные с молозивом матери, обеспечивают защиту поросят от заболеваний до тех пор, пока у них не выработаются собственные механизмы иммунитета. По различным причинам некоторые животные после рождения не получают в необходимом количестве эту естественную защиту, что связано с недостаточным поступлением антител с молозивом матери, несвоевременным и недостаточным получением молозива или нарушением механизма абсорбции иммуноглобулинов молозива кишечником новорожденных. В этой связи разработка полиспецифической гипериммунной сыворотки против основных возбудителей диареи поросят является весьма актуальной. В настоящее время биопредприятиями Российской Федерации выпускаются несколько видов гипериммунных сывороток для специфической профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний поросят: «Сыворотка антиадгезивная, антитоксическая против эшерихиоза сельскохозяйственных животных», «Поливалентная антитоксическая сыворотка против паратифа и колибациллеза телят, ягнят, овец и птиц», «Поливалентная антитоксическая сыворотка против паратифа телят, поросят, ягнят, овец и птиц» и др. (Справочник ветеринарных препаратов под редакцией П.П.Достоевского. - Киев. - Урожай. - 1986. - С.248-250. Каталог лекарственных средств для животных, Торговый дом «Биопром». - М. - 2005. - С.191).

Наиболее близким аналогом является сыворотка антиадгезивная, антитоксическая против эшерихиоза сельскохозяйственных животных, содержащая комплекс антител против соматических 09, 078, 0141, белковых адгезивных К88, К99, 987Р, F41, полисахаридных капсульных К30, К80, К87 антигенов и консервант фенол (патент RU №2043772 C1, A61K 39/108, K 39/40, за 1995 г.).

Основным недостатком этой сыворотки является узкий ее спектр действия из-за отсутствия в ее составе специфических антител против основных возбудителей этой формы патологии - против ротавируса и вируса трансмиссивного гастроэнтерита свиней. Следовательно, она не позволяет получить лечебно-профилактический эффект при смешанных формах инфекционной диареи поросят. Кроме того, эта сыворотка, полученная на волах-продуцентах, часто вызывает осложнение у поросят после ее введения в виде анафилактического шока.

Целью изобретения является разработка способа получения полиспецифической гипериммунной сыворотки против рота-, коронавирусного гастроэнтерита и эшерихиозной диареи поросят, обеспечивающей лечение и профилактику смешанных вирусно-бактериальных диарей поросят, а также снижение реактогенности сыворотки. Поставленная цель достигается гипериммунизацией свиней-продуцентов инактивированными рота-, коронавирусными антигенами в культуральной среде, антигенами E.coli, содержащими соматические и адгезивные антигены (К88, К99, 987Р) в физиологическом растворе, ТЛ-, ТС-анатоксины E.coli в среде культивирования (бульон Хоттингера) при следующем соотношении их компонентов в двух различных иммуногенах (в 1 л антигена):

1. Вирусный антиген:

антиген ротавируса свиней с содержанием специфического белка 10-12 мг/см³, см³ - 490,0-500,0;

антиген коронавируса (ТГС) свиней с содержанием специфического белка 10-12 мг/см³, см³ - 490,0-500,0;

формалин, см³ - 4,0-5,0.

2. Эшерихиозный антиген:

соматический и адгезивный антиген К88 с концентрацией 10-15 млрд. м.к. в 1 см³, см³ - 230,0-250,0;

соматический и адгезивный антиген К99 с концентрацией 10-15 млрд. м.к. в 1 см³, см³ - 230,0-250,0;

соматический и адгезивный антиген 987Р с концентрацией 10-15 млрд. м.к. в 1 см³, см³ - 230,0-250,0;

формалин, см³ - 4,0-5,0

ТС- и ТЛ-анатоксины штаммов Е. coli К88, К99 и ПЛ-3 в соотношении 1:1:1 соответственно в культуральной среде с титрами в РДП 1:8-1:16, л. - до 1.

Предлагаемые наборы антигенов позволяют получить высокоэффективную лечебно-профилактическую сыворотку с широким спектром действия (против ротавирусной диареи, коронавирусного гастроэнтерита и эшерихиозной диареи поросят). Применяемые для гипериммунизации штаммы вирусов изысканы и являются производственными при изготовлении поливалентной сыворотки. В качестве иммунизирующего антигена применяют любые из производственных или местных штаммов Е. coli, активно продуцирующие термостабильные и термолабильные токсины, а также адгезивные антигены К88, К99 и 987Р.

Пример 1. Способ изготовления вирусных антигенов для гипериммунизации свиней-продуцентов заключается в следующем.

Ротавирус свиней (штамм "Пугачевский-92") культивируется в роллерных трехлитровых бутылях или 1,5-литровых матрасах с выросшей однослойной перевиваемой культурой клеток почки эмбриона свиньи (линия СПЭВ) на комбинированной ростовой среде, состоящей из гидролизата лактальбумина (ГЛА) - 45%, среды 199 - 45%, сыворотки крупного рогатого скота - 10% и антибиотиков. Культура выращивается в течение 3-4 суток при посевной концентрации 100-120 тыс. клеток в 1 см³ среды. Перед внесением в культуру вирус активизируется трипсином (0,6 см³ 0,25%-ного трипсина на 100 см³ вирусной суспензии в течение 30-35 мин при 37-38°С) и добавляется в поддерживающую среду без сыворотки из расчета 5 см² на 500 см среды, а также добавляется 3%-ный раствор глутамина 5 см² на 100 см² среды и антибиотики. Ростовая среда сливается, вносится в бутыли с культурой поддерживающая среда с вирусом в количестве 350-370 см³ и инкубируется при 37-38°С в течение 24-48 часов. Цитопатогенное действие вируса характеризуется формированием зернистых округлившихся клеток, отторгающихся от стекла, и образованием пустот в монослое. Сбор культуральной вирусной суспензии производится в период выраженного цитопатогенного эффекта - максимального накопления вируса. Для освобождения вируса вирусную культуральную суспензию трехкратно замораживают при минус 18-20°С и оттаивают при 36-37°С. Полученную вирусную суспензию осветляют центрифугированием в течение 40 минут при 3000 об/мин и концентрируют путем обратного осмоса до содержания специфического белка в суспензии 10-12 мг/см³.

Вирус трансмиссивного гастроэнтерита свиней (штамм "ВГНКИ-5") культивируется в перевиваемой культуре клеток почки эмбриона свиньи -линия ППК, выращенной в роллерных трехлитровых бутылях на комбинированной среде, состоящей из среды 199-45%, ГЛА - 45% и эмбриональной сыворотки крупного рогатого скота - 10%. Монослой культуры формируется на 3-4 сутки при посевной концентрации 120-130 тыс. клеток на 1 см³ среды. Для расплодки коронавируса ростовая среда сливается и вносится в бутыли с культурой клеток поддерживающая среда (среда 199-50% и ГЛА - 50%) в количестве 350-370 см³, в которую предварительно вносится вирус из расчета 15-20 см³ на 500 см³ среды, 0,25%-ный трипсин 3 см³, 3%-ный раствор глутамина - 5 см³ и антибиотики. Бутыли инкубируются в роллерной установке при 37-38°С в течение 3-4 дней. Через 72-96 часового выращивания проявляется цитопатогенное действие вируса. Цитопатогенное действие характеризуется гранулированием цитоплазмы, распадом изолированных клеток, образованием симпластов с последующей дегенерацией. Сбор культуральной жидкости производится в период выраженного цитопатогенного эффекта. Для освобождения вируса вирусную культуральную суспензию трехкратно замораживают при минус 18-20°С и оттаивают при плюс 36-37°С. Полученную вирусную суспензию осветляют центрифугированием в течение 40 минут при 3000 об/мин и концентрируют путем обратного осмоса до содержания специфического белка в суспензии 10-12 мг/см³. Полученные вирусные антигены консервируют формалином, добавляя его в вирусные суспензию до 0,4-0,5% конечной концентрации.

Полученные рота-, коронавирусные суспензии, содержащие не менее 10-12 мг/см³ специфического белка, объединяют в равных соотношениях и используют для гипериммунизации свиней-продуцентов.

Пример 2. Способ получения эшерихиозных антигенов.

В качестве производственных штаммов при получении гипериммунной сыворотки используют производственные энтеротоксигенные штаммы Е. coli: «ПЛ-6» - синтезирующий адгезивный антиген К88, «КВ-1» - синтезирующий адгезивный антиген К99, «УК-2» - синтезирующий адгезивный антиген 987Р, вызывающие гибель белых мышей в течение 24 ч после внутрибрюшинного заражения в дозе 500 млн. м.к.

Для получения бактериальной массы Е. coli используют мясопептонный агар (для штаммов «ПЛ-6» и «УК-2») и среду Минка (для штамма «КВ-1»). С этой целью указанные питательные среды разливают в матры по 300 см³ и стерилизуют при 0,5 атм. (110°С) в течение 15 минут. После застывания сред делают посев указанных культур по 3,0 см³ 10 млрд. суспензии. Посевы выдерживают в термостате при температуре 37-38°С. Через 24 часа выросшие колонии культур Е. coli смывают 0,85%-ным стерильным раствором хлорида натрия, готовят суспензию в концентрации 15 млрд. м.к. в 1 см³ по бактерийному или оптическому стандарту мутности ГИСК им. Тарасевича. Инактивацию бактериальной взвеси осуществляют формалином. Для этого в взвесь добавляют формалин до 0,5% конечной концентрации и выдерживают 4-5 суток в термостате при температуре 37-38°С. Затем проверяют полноту инактивации путем посева на соответствующие питательные среды.

Для получения анатоксина каждый штамм Е. coli засевают отдельно в реактор с бульоном Хоттингера, выращивают 5-7 суток при температуре 37-38°С. Определяют концентрацию ТЛ-, ТС-токсинов в реакции диффузионной преципитации. Титр ТЛ-, ТС-токсинов в культуральной жидкости должен быть не менее 1:4-1:8. Затем к культуре добавляют формалин до 0,4-0,5% и выдерживают при температуре 37-38°С в течение 10-12 суток, затем добавляют 6%-ную гидроокись алюминия до 10%-ной концентрации, выдерживают 3 суток и удаляют 2/3 общего объема надосадочной жидкости, устанавливают рН 7,2-7,4.

Пример 3. Гипериммунизация свиней-продуцентов. Свиней, предназначенных для гипериммунизации, карантинируют и подвергают исследованию и необходимой обработке против инфекционных болезней согласно действующей инструкции о порядке заготовки и санитарной обработки животных, используемых для производства биопрепаратов. К эксплуатации допускают животных 10 мес.возраста с живой массой 140-150 кг.

Для гипериммунизации используют полиантигены, состоящие из рота-, коронавирусов и эшерихий коли, содержащие адгезивные антигенгы К88, К99 и 987Р.

Гипериммунизацию животных проводят по схеме, приведенной в таблице 1. Смесь рота-, коронавирусных антигенов вводится внутримышечно в нарастающих дозах в область шеи с одной стороны, эшерихиозный антиген внутримышечно с другой стороны шеи.

Пример 4. Взятие и обработка крови.

Производственное взятие крови разрешается при наличии антител в сыворотке крови продуцентов к ротавирусу в титрах не менее 1:12800 в ИФА, к коронавирусу - не менее 1:12800 в ИФА, к эшерихиям, продуцирующим адгезивные антигены К88, К99, 987Р - не менее 1:3200 в РА, к термостабильному и термолабильному анатоксину Е.coli - не менее 1:4 в РДП и при условии, если общая температура тела животных не превышает 39°С, а также после предварительной выдержки животных на голодной диете в течение 12 ч при неограниченном водопое.

Кровь для получения сыворотки берут у свиней-продуцентов в убойном цехе мясокомбината при помощи закрытой системы, исключающей контакт крови с атмосферным воздухом. Система включает в себя полый нож длиной 40 см, диаметром 1,6 см из нержавеющей стали, соединенный герметично через силиконовый шланг и резиновую пробку с 10-литровой бутылью, которая сообщается с атмосферным воздухом через ватный фильтр. Предварительно в бутыли наливают 100 см³ 5%-ного раствора натрия хлорида, после чего система монтируется и автоклавируется при 1,5 атм. в течение 40 минут. Взятие крови у животных производится непосредственно из сердца. После наполнения бутыли кровью примерно наполовину шланг перекрывается зажимом и нож вынимается из сердца. Бутыли с кровью в вертикальном положении оставляют при комнатной температуре на 1-2 ч до образования плотного сгустка, после чего их размещают под углом 30° в холодильную камеру при температуре 2-4°С. Отстой сыворотки продолжается 48-72 ч. Сыворотку из бутылей отсасывают над пламенем горелки при помощи изогнутой стеклянной трубки длиной 45-50 см, диаметром 1 см, которая посредством силиконового шланга соединена с емкостью, в которую собирают сыворотку. В емкости для сбора сыворотки создается отрицательное давление отсасывающим компрессором. Эта система также стерильна, закрытого типа. Собранную сыворотку сначала пропускают через глубинные фильтры EKS 1 или EKS 2, консервируют 5%-ным раствором фенола до концентрации его в общем объеме сыворотки 0,5%. После этого сыворотку перекачивают в отстойник и выдерживают 2-2,5 месяца при 2-4°С. Затем сыворотку пропускают через мембранные миллипоровые фильтры с убывающим размером пор (от 1,2 до 0,22 мкм) и разливают в стеклянные флаконы по 100-200 см³, закрывают резиновыми пробками, обкатывают алюминиевыми колпачками, этикетируют.

Пример 5. Контроль сыворотки на внешний вид, стерильность, безвредность и активность.

Для определения внешнего вида, цвета, наличия посторонних примесей, неразбивающихся хлопьев, герметичности укупорки все флаконы с сывороткой встряхивают, просматривают в проходящем свете и переворачивают пробками вниз.

Стерильность проверяют путем высева сыворотки на МПА, МПБ, Сабура, регенерированную среду Китта-Тароцци. Посевы выдерживают при 37-38°С. Через 48 ч из жидких сред делают пересевы на МПА, МПБ, МППБ под вазелиновым маслом. Первичные посевы выдерживают 10, вторичные - 8 суток. Роста на питательных средах не должно быть.

Безвредность сыворотки проверяют на 10 белых мышах, которым препарат вводят подкожно в дозе 0,5 см³. Сыворотку считают безвредной, если все животные остаются клинически здоровыми в течение 10 суток. Активность сыворотки проверяют на 40 белых мышах массой 15-18 г, из которых 20 животным вводят подкожно 0,5 см³ препарата, а другие 20 мышей служат контролем. Через 24 ч после введения сыворотки всех животных заражают внутрибрюшинно подтитрованной смертельной дозой культур вирусов и эшерихий, продуцирующих адгезивные антигены К88, К99 и 987Р. Сыворотку считают активной при выживании не менее 15 подопытных и гибели 18-20 контрольных мышей в течение 2 суток.

Оценку эффективности полиспецифической гипериммунной сыворотки проводят в остром опыте на новорожденных поросятах.

Профилактические свойства сыворотки испытывают на 10 поросятах, разделенных на 2 группы (табл.3). Животным опытной группы (5 гол.) с профилактической целью сразу после рождения вводят внутримышечно полиспецифическую сыворотку в дозе 5 см³. Поросятам контрольной группы (5 гол.) в те же сроки и в той же дозе вводят нормальную свиную сыворотку, серонегативную по отношению к возбудителям диареи. Спустя 30-36 ч после рождения поросят обеих групп заражают перорально смесью культуральных суспензий рота-, коронавирусов, а также энтеропатогенных штаммов эшерихий (К88, К99, 987Р).

Лечебные свойства сыворотки изучают на 10 новорожденных поросятах, разделенных на 2 группы (табл.3). С этой целью поросят обеих групп в первые 1,5-2 ч после рождения перорально заражают смесью культуральных суспензий рота-, коронавирусов, а также энтеропатогенных штаммов эшерихий (К88, К99, 987Р). С появлением первых клинических признаков диареи поросятам опытной группы (5 гол.) вводят внутримышечно полиспецифическую сыворотку в дозе 10 см³. Поросятам контрольной группы (5 гол.) при появлении признаков болезни вводят внутримышечно нормальную свиную сыворотку в дозе 10 см³.

Пример 6. Производственное испытание экспериментальных серий полиспецифической гипериммунной сыворотки.

За 2009-2010 г. в лаборатории по изучению болезней молодняка ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» изготовлено 3 серии сыворотки в количестве 87 л. Результаты лабораторного контроля сыворотки показали, что все ее серии были стерильны, безвредны, ареактогенны и обладали выраженными лечебно-профилактическими свойствами. Показатели специфической активности сыворотки представлены в таблице 2.

Оценка лечебно-профилактической эффективности полиспецифической гипериммунной сыворотки проводилась в 2 свиноводческих хозяйствах Республики Татарстан, неблагополучных по рота-, коронавирусному гастроэнтериту и эшерихиозной диареи поросят. С профилактической целью сыворотку вводили новорожденным поросятам внутримышечно в дозе 5-7 см³, с лечебной целью сыворотку применяли также внутримышечно в зависимости от тяжести болезни в дозах от 10 до 15 см³. Результаты производственного испытания сыворотки представлены в таблицах 4 и 5, из которых следует, что полиспецифическая гипериммунная сыворотка обладает выраженными лечебно-профилактическими свойствами. Так, например, в группе поросят, обработанной полиспецифической сывороткой, заболело всего 17,09%, пало 4,97% поросят, тогда как в контрольной (интактной) группе эти показатели составили 82.56% и 31,19% соответственно. При этом сохранность поросят в опытной группе составила 95,03% против 68,81% в контрольной группе. Применение сыворотки в лечебных дозах позволило вылечить 89,32% больных поросят, тогда как в контрольной группе, где в качестве лечебных средств применялись антибиотики и противоэшерихиозная сыворотка, сохранность поросят составила лишь 67,56%, что в 1,32 раза ниже, чем в опытной группе.

Пример 7. Общие сведения, биологические свойства, порядок применения сыворотки против рота-, коронавирусного гастроэнтерита и эшерихиозной диареи поросят.

Общие сведения

Сыворотка представляет собой прозрачную, слегка опалесцирующую жидкость желтовато-красного цвета. На дне флаконов особенно при длительном хранении, выпадает незначительный белковый осадок, который при встряхивании легко разбивается в равномерную взвесь.

Сыворотку расфасовывают по 100 и 200 см³ во флаконы стеклянные соответствующей вместимости, укупоривают резиновыми пробками, обкатывают алюминиевыми колпачками и этикетируют. На этикетке указывают: наименование организации-производителя, ее адрес и товарный знак, название сыворотки, количество во флаконе, дозу и способ применения, условия хранения, номер серии, номер госконтроля, дату изготовления (месяц, год), срок годности, обозначения ТУ, регистрационный номер, надпись «Для животных».

Флаконы с сывороткой упаковывают в ящики из фанеры, для обеспечения целостности флаконы обертывает бумагой или алигнином, в холодное время года - ватой или другими теплоизолирующими материалами. Внутрь каждого ящика вкладывают 3 экз. инструкции по применению сыворотки.

На упаковку с флаконами (транспортная тара) наклеивают этикетку, на которой указывают наименование ведомства, наименование организации-производителя, ее адрес и товарный знак, название препарата, его количества в ящике, объем сыворотки во флаконе, номер серии, номер контроля, дату изготовления (месяц, год), срок годности, обозначение технических условий, регистрационный номер, надпись «Для животных».

Сыворотку транспортируют и хранят в сухом, защищенном от света месте при температуре от 4 до 8° С. Срок годности препарата 2 года со дня изготовления при соблюдении условий транспортировки и хранения.

Сыворотку с нарушенной целостностью флакона и подвергшихся замораживанию, без этикеток, наличием посторонних примесей, а также не использованную в день вскрытия флакона, выбраковывают.

Биологические свойства

Сыворотка получена из крови свиней-продуцентов, гипериммунизированных инактивированными антигенами ротавируса, вируса трансмиссивного гастроэнтерита свиней и эшерихий коли, продуцирующими адгезивные антигены К88, К99 и 987Р.

У животных, привитых сывороткой, иммунитет формируется через сутки и сохраняется в течение 12-14 дней.

Порядок применения сыворотки.

Сыворотку применяют с профилактической и лечебной целью в угрожаемых и стационарно неблагополучных хозяйствах по рота-, коронавирусной и эшерихиозной диареи поросят

Перед применением флаконы с сывороткой необходимо тщательно встряхивать и подогревать в водяной бане до 37-38°С.

С профилактической целью сыворотку вводят внутримышечно в следующих дозах: поросятам 1-7 дневного возраста - 5-8 см³, старше 7 дневного возраста - 10-15 см³.

С лечебной целью сыворотку применяют внутримышечно в следующих дозах: поросятам 1-7 дневного возраста - 10-12 см³, старше 7 дневного возраста - 15-20 см³. При тяжелом течении болезни сыворотку вводят повторно через 1-3 дня в тех же дозах внутрибрюшинно.

При введении сыворотки необходимо соблюдать правила асептики и антисептики. Место введения сыворотки дезинфицируют 70% раствором этилового спирта. Шприцы и иглы перед применением стерилизуют кипячением, для каждого животного используют отдельную иглу.

Наряду с применением сыворотки необходимо проводить в хозяйстве ветеринарно-санитарные мероприятия, направленные на уничтожение инфекционного начала.

Меры личной профилактики.

При применении сыворотки необходимо соблюдать правила личной гигиены, принятые при работе с лекарственными средствами. В местах работы должна находиться аптечка для оказания первой доврачебной помощи.

В случае попадания сыворотки на открытые участки тела или слизистые оболочки глаз, рта, носа и после окончания работы руки и другие открытые участки тела моют водой с мылом.

Сыворотка по истечении срока годности применению не подлежит.

Сыворотку следует хранить в местах, недоступных для детей.

Таблица 1 Схема гипериммунизации свиней-продуцентов Дни инъекции антигена Дозы антигенов, см³ вирусного эшерихиозного 1 3 3 14 6 6 28 8 8 42 10 10

Таблица 2 Вид антигена Метод исследования Титры специфических антител Серия 1 Серия 2 Серия 3 Ротавирус ИФА 1:12800 1:25600 1:12800 Вирус ТГС ИФА 1:12800 1:12800 1:12800 Е.coli К88 РА 1:6400 1:6400 1:3200 Е.coli К99 РА 1:3200 1:3200 1:3200 Е.coli 987Р РА 1:3200 1:3200 1:3200 ТЛ-токсин РДП 1:8 1:8 1:8 ТС-токсин РДП 1:8 1:16 1:8

Таблица 3 Группы животных Кол-во гол. Доза гипериммунной сыворотки, см³ Результаты опыта не заболело заболело выздоровело пало Профилактические свойства сыворотки Опытная 5 5 5 - - - Контрольная 5 - 1 4 1 3 Лечебные свойства сыворотки Опытная 5 10 - 5 4 1 Контрольная 5 - - 5 1 4

Таблица 4 Результаты испытания профилактической эффективности сыворотки Название хозяйства Опытная группа Контрольная группа Всего голов не заболело заболело пало Всего голов не заболело заболело пало гол. % гол. % гол. % гол. % гол. % гол. % Агрофирма «Вамин-Аксу» 222 171 77,02 51 22,97 16 7,2 89 19 21,34 70 78,65 18 23,59 ООО «Сосна» 240 212 88,4 28 11,6 7 2,9 20 0 0 20 100 16 80 Итого: 462 383 82,9 79 17,09 23 4,97 109 19 17,43 90 82,56 34 31,19

Таблица 5 Результат испытания лечебной эффективности сыворотки Название хозяйства Опытная группа Контрольная группа Всего голов выздоровело пало Всего голов выздоровело пало голов % голов % голов % голов % Агрофирма «Вамин-Аксу» 138 130 94,2 8 5,79 54 42 77,77 12 22,22 ООО «Сосна» 40 29 72,5 11 27,5 20 8 40 12 60 Итого: 178 159 89,32 19 10,67 74 50 67,56 24 32,43

Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии и биотехнологии. Полиспецифическая сыворотка содержит специфические антитела в титрах к ротавирусу не менее 1:12800 в ИФА, к коронавирусу - не менее 1:12800 в ИФА, к E.coli, продуцирующим адгезивные антигены К88, К99, 987Р - не менее 1:3200 в РА, к термостабильному и термолабильному анатоксину Е.coli - 1:4 в РДП. Сыворотка получена путем гипериммунизации свиней-продуцентов поливалентным вирусным антигеном, содержащим смесь культуральных вирусных суспензий ротавируса и вируса трансмиссивного гастроэнтерита свиней с концентрацией 10-12 мг/см³ специфического белка внутримышечно и поливалентным антигеном эшерихий, содержащим инактивированные суспензии клеток Е.coli с адгезивными антигенами К88, К99 и 987Р с концентрацией каждого штамма 10-15 млрд. м.к. в 1 см³ физиологического раствора, анатоксины в среде культивирования с титром в РДП 1:4-1:8 внутримышечно с последующим взятием крови, отделением и консервированием сыворотки. Полиспецифическую сыворотку применяют с профилактической и лечебной целью в угрожаемых и стационарно неблагополучных хозяйствах по рота-, коронавирусной и эшерихиозной диареи поросят. У животных, привитых полиспецифической сывороткой, иммунитет формируется через сутки и сохраняется в течение 12-14 дней. Изобретение может быть использовано в ветеринарии. 5 табл., 7 пр.

Полиспецифическая гипериммунная сыворотка против рота-, коронавирусного гастроэнтерита и эшерихиозной диареи поросят, отличающаяся тем, что содержит специфические антитела в титрах: к ротавирусу - не менее 1:12800 (в ИФА), к коронавирусу - не менее 1:12800 (в ИФА), к эшерихиям, продуцирующим адгезивные антигены К88, К99, 987Р - не менее 1:3200 (в РА), к термостабильному и термолабильному анатоксину E.coli - не менее 1:4 (в РДП), полученная путем гипериммунизации свиней-продуцентов поливалентным вирусным антигеном, содержащим смесь культуральных вирусных суспензий ротавируса и вируса трансмиссивного гастроэнтерита свиней с концентрацией 10-12 мг/см³ специфического белка внутримышечно и поливалентным антигеном эшерихий, содержащим инактивированные суспензии клеток E.coli с адгезивными антигенами К88, К99 и 987Р с концентрацией каждого штамма 10-15 млрд м.к. в 1 см³ физиологического раствора, анатоксины в среде культивирования с титром в РДП 1:4-1:8 внутримышечно с последующим взятием крови, отделением и консервированием сыворотки.