СПОСОБ ИММУНОПРОФИЛАКТИКИ РЕСПИРАТОРНЫХ БОЛЕЗНЕЙ ТЕЛЯТ Российский патент 2012 года по МПК A61K36/28 A61K36/484 A61K39/12 A61P11/00 

Изобретение относится к ветеринарии, касается профилактики инфекционных болезней молодняка сельскохозяйственных животных и может быть использовано для профилактики респираторных болезней телят, протекающих по типу смешанных инфекций.

Респираторные болезни телят, совпадающие с возрастным иммунодефицитом, поражают до 50% нарождающихся животных и являются причиной потери до 40% от числа заболевших с учетом гибели и вынужденного убоя. Возбудителями таких инфекций являются вирусы, относящиеся к семействам герпесвирусов (вирус инфекционного ринотрахеита), парамиксовирусов (вирусы парагриппа-3 и респираторно-синтициальный вирус), тогавирусов (вирус диареи - болезни слизистых), аденовирусов, рота- и коронавирусов и т.д. Это так называемые "малые" инфекции, которые у здоровых животных с нормальным функционированием иммунной системы протекают бессимптомно без выраженных клинических признаков, или животные вообще не переболевают данными инфекциями. Особенно тяжело болеют животные, когда в патологический процесс вовлекается два и более вируса, то есть возникает смешанная инфекция. Течение респираторных болезней развивается в две фазы: первая - вирусная фаза, вторая - бактериальная. При тяжелом течении вирусной фазы инфекции наряду с поражением чувствительных клеток наступает значительное угнетение клеточного и гуморального звеньев иммунитета. Особенностью распространения вирусов инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, респираторно-синцитиальной инфекции является то, что данные возбудители у молодняка до 1 месяца могут вызывать энтериты, у более старших животных - респираторные болезни, а у взрослых половозрелых коров и быков - нарушение воспроизводительной функции. Кроме того, вирус парагриппа-3 широко распространен у телят старше месячного возраста при нарушениях технологии выращивания, т.е. при стрессовых воздействиях на организм, вызывая поражения дыхательных путей, а рота- и коронавирусы у новорожденных телят вызывают тяжело протекающие энтериты. По тропизму все вышеназванные возбудители могут репродуцироваться в клетках респираторного и желудочно-кишечного трактов, половых органах, иммунокомпетентных клетках, что обусловливает их высокую контагиозность и тяжесть течения болезни.

Одним из пусковых механизмов поражения животных инфекционными заболеваниями в условиях современной промышленной технологии является снижение иммунологической реактивности организма, которая вызывается рядом факторов - недоразвитостью иммунной системы молодняка (первичный иммунодефицит), пищевыми токсикозами, недостаточным и несбалансированным по различным компонентам кормлением, а также сильным стрессовым воздействием, так называемым "технологическим стрессом". Эти факторы отрицательно отражаются на иммунной системе и обменных процессах организма животных, что приводит к значительному снижению устойчивости к инфекционным заболеваниям, особенно к заболеваниям, возбудителями которых являются условно-патогенные микроорганизмы и вирусы. Угнетенная иммунная система под воздействием вышеуказанных факторов не в состоянии противостоять вирусам-возбудителям даже с невысокой патогенностью. Вирусы-возбудители респираторных инфекций крупного рогатого скота каждый в отдельности, но особенно в ассоциациях, в свою очередь, угнетают отдельные звенья иммунной системы - как клеточные, так и гуморальные. Наряду с угнетением иммунной системы поражаются чувствительные клетки дыхательных путей и желудочно-кишечного тракта, которые являются хорошим субстратом для размножения условно-патогенной микрофлоры. Таким образом, вирусы, нарушая защитный барьер слизистых, способствуют их колонизации бактериальными патогенами, поэтому любая инфекция в организме животного развивается чаще всего не в моно-, а в ассоциированном варианте с другими.

Для лечения и профилактики респираторных болезней используются многочисленные антибиотики. Создано уже более 30 тысяч наименований и постоянно создаются их новые модификации. Однако в подавляющем большинстве случаев антибиотикотерапия назначается на эмпирической основе, которая не всегда приносит должного терапевтического эффекта. Это становится вполне объяснимым, если учесть, что на вирусы антибиотики вообще не оказывают губительного действия. Микроорганизмы же быстро адаптируются и в дальнейшем беспрепятственно вызывают бактериальные осложнения. Кроме того, при длительном применении антибиотиков происходит их кумуляция в организме животных, что способствует возникновению вторичного иммунодефицитного состояния.

Поиск средств защиты от ассоциированного комплекса вирусно-бактериальных возбудителей, вызывающих респираторную патологию, ведется в трех направлениях: 1) пассивной иммунизации специфическими гипериммунными сыворотками; 2) активной иммунизации живыми ослабленными или инактивированными вакцинами; 3) повышения неспецифической резистентности организма введением иммунотропных препаратов.

Иммунизация телят специфическими гипериммунными сыворотками требует значительных затрат и времени /1/. Кроме того, они могут быть контаминированы многочисленными возбудителями, в частности вирусом лейкоза крупного рогатого скота. Пассивная иммунизация может быть преодолена высоковирулентными вирусами инфекционного ринотрахеита в ассоциации с аденовирусной и респираторно-синцитиальной инфекциями.

Известны способы иммунопрофилактики вирусных респираторных болезней телят с применением ассоциированных вакцин, например живой аттенуированной вакцины «ТРИВАК» (ВИЭВ) /2/ или эмульсионной инактивированной вакцины (ВНИИЗЖ) /3/. Применение живых или инактивированных вакцин не предотвращает латенции вирулентных вирусов в организме животных.

Использование многочисленных иммунотропных препаратов также представляет серьезную проблему для животноводства. Так, длительное применение иммуностимуляторов, иммуномодуляторов или иммунокорректоров вызывает активацию Т- и В-клеточного иммунитета. Это может приводить в дальнейшем к запуску опухолевой трансформации клеток, механизм которой тот же, что и активация клеток иммунной системы (Агеенко А.И., 1992).

Наибольший протективный эффект достигается при комбинированном использовании вакцинации и средств неспецифической иммунопрофилактики /3/. В комплексную систему неспецифической иммунопрофилактики входят фитоадаптогены с иммуностимулирующим эффектом, например производные элеутерококка, корня солодки /4/, эхинацеи пурпурной /5/.

Технический результат - повышение эффективности иммунопрофилактики.

Технический результат достигается сочетанием вакцинации и неспецифической иммунопрофилактики с использованием настойки травы и соцветий эхинацеи пурпурной в смеси с травой гармалы обыкновенной, цветов липы мелколистной и корней солодки голой, взятых в равном количестве.

Используемые ингредиенты широко применяются в фитотерапии. В предлагаемом сборе собраны все необходимые вещества, сочетанное использование которых оказывает эффективное воздействие на организм животного при респираторных болезнях.

Заявленный сбор обладает бронхолитическим действием, способствует отхождению мокроты, обладает противовоспалительным и успокаивающим действием, проявляет противовирусную и антимикробную активность, способствует восстановлению функций бронхолегочной системы, обладает детоксикационными свойствами, регулирует обменные процессы и повышает резистентность организма.

Трава и соцветия эхинацеи пурпурной обладают иммуномодулирующей активностью, подавляют активность гиалуронидазы - фермента, способствующего повышению проницаемости для вирусов и микробов, увеличивают противомикробную активность лейкоцитов, макрофагов и нейтрофилов крови и повышают синтез защитных антител и эндогенного интерферона.

Трава гармалы обыкновенной обладает выраженной антимикробной активностью, подтвержденной фармакологическими исследованиями, обеспечивает бронхолитическое действие сбора, способствует отхождению мокроты.

Цветы липы мелколистной обладают иммуномодулирующими эффектами, которые проявляются в действии на гуморальные и клеточные механизмы иммунитета, миграцию лимфоцитов, синтез интерферона и систему комплемента, и противовоспалительным действием.

Корни и корневища солодки голой обеспечивают бронхолитическое и противовоспалительное действие сбора. Кроме того, они усиливают исцеляющие действия других трав, входящих в сбор.

Химический состав лечебно-профилактического средства представлен комплексом биологически активных веществ, обеспечивающих его высокий фармакотерапевтический эффект. Доминирующими биологически активными веществами являются: фенольные соединения, флавоноиды, полисахариды, алкалоиды, дубильные вещества, витамины, микроэлементы, главными из которых можно считать цинк, селен и железо.

Флавоноиды (содержат все компоненты) ингибируют фермент катехол-орто-метилтрансферазу и обеспечивают адаптационно-трофическую функцию организма за счет адренопролонгирующего эффекта. Флавоноиды обладают Р-витаминной (капилляроукрепляющей) активностью. В суммарном противовоспалительном эффекте флавоноидов имеет значение их непосредственное действие на клеточные и тканевые мембраны - снижение их проницаемости, уплотнение мембран лизосом, ингибирование гиалуронидазы, антагонистическое действие по отношению к медиаторам воспаления.

Полисахариды (содержат все компоненты) оказывают противовоспалительное, иммунокорригирующее действие. Они стимулируют неспецифический иммунитет и фагоцитоз, деятельность макрофагов и нейтрофилов, а также бактерицидную функцию клеток.

Фенольные соединения (содержат все компоненты) оказывают противомикробное действие, механизм которого обусловлен их способностью сорбироваться компонентами цитоплазматической мембраны бактерий, образовывать прочные водородные связи с белками и повреждать мембрану, в частности повышая ее проницаемость для ионов (прежде всего, калия) и важных метаболитов, теряемых клеткой, а также для воды, поступающей извне и способствующей лизису.

78% от общего количества алкалоидов, содержащихся в траве гармалы обыкновенной, составляет пеганин. Фармакологические исследования показали, что 1%-ный и 10%-ный настои травы гармалы обыкновенной обладают высокой противостафилококковой активностью, а 0,25%-ый раствор пеганина - высокой антимикробной активностью.

Дубильные вещества (солодка голая - до 9,46%, липа мелколистная - не менее 8,0%), проявляя мембраностабилизирующий эффект, восстанавливают процессы репарации в гепатоцитах и улучшают работу антиоксидантной системы печени.

Витамины (витамин С - цветы липы мелколистной, эхинацея пурпурная; витамин Е - солодка голая, витамин А - эхинацея пурпурная) участвуют во всех процессах обмена веществ, повышают устойчивость организма к заболеваниям, оказывают противовоспалительное действие, способствуют дезинтоксикации организма.

Микроэлемент цинк (липа мелколистная - 29 мкг/г, солодка голая - 0,33 мкг/г, гармала обыкновенная - 0,78 мкг/г) участвует в организме в иммунных процессах, селен (солодка голая - 12,14 мкг/г, гармала обыкновенная - 1,0 мкг/г, липа мелколистная - 0,13 мкг/г) является мощным антиоксидантом, а железо (эхинацея пурпурная - 48 мг/100 г, липа мелколистная - 0,2 мг/г, гармала обыкновенная - 0,14 мг/г, солодка голая - 0,7 мг/г) - основным структурным компонентом гемоглобина крови и гемсодержащих ферментов.

Высокая эффективность сбора достигается благодаря сочетанию целого комплекса биологически активных веществ, вследствие чего наблюдается взаимное усиление полезных фармакологических свойств каждого отдельного компонента. Так, комбинация витаминов А, С и цинка стимулирует синтез антител, сочетание флавоноидов и дубильных веществ обеспечивает гепатозащитное действие, а сочетание флавоноидов и фенологликозидов усиливает детоксикационную функцию печени. Сбор обладает выраженным противовоспалительным, антимикробным, противовирусным, бронхолитическим и адаптогенным действиями.

Настойка из измельченной растительной смеси травы и соцветий эхинацеи пурпурной, травы гармалы обыкновенной, цветов липы мелколистной и корней солодки голой готовится фармакопейным способом в соотношении сырья к извлекателю 1:10. В качестве извлекателя используют этиловый спирт концентрацией 70%. Лекарственное сырье измельчают до частиц размером 1-3 мм, смешивают в равных количествах, навеску сырья помещают в стеклянный сосуд, добавляют расчетное количество этилового спирта концентрацией 70%, выдерживают 7 суток в темном месте при температуре 18-20°С. Затем спиртовую настойку процеживают через холст или два слоя марли, отжимая сырье, фильтруют.

Пример: в стеклянный сосуд поместили 500 г лекарственного сырья (равные количества из травы и соцветий эхинацеи пурпурной, травы гармалы обыкновенной, цветов липы мелколистной и корней солодки), добавили 5,0 кг этилового спирта концентрацией 70%, поставили в темное место и выдерживали при температуре 18-20°С в течение 7 суток, после чего процедили через холст, отжимая сырье, и профильтровали.

Способ осуществляется следующим образом.

Клинически здоровых телят 60-дневного возраста иммунизируют двукратной инъекцией ассоциированной вакциной против ПГ-3, ИРТ, ВД-БС (доза вакцины - 2,0 мл, интервал между инъекциями - 21 день) и дополнительно внутрь применяют 70% спиртовую настойку из измельченной растительной смеси равных количеств травы и соцветий эхинацеи пурпурной, травы гармалы обыкновенной, цветов липы мелколистной и корней солодки голой в виде 7-8% водного раствора, приготовленного на кипяченой охлажденной воде, в дозе 1,5-2,0 мл/кг живой массы животного в течение 15 дней.

Эффективность способа профилактики респираторных болезней телят полиэтиологической природы определяли в научно-производственных опытах в условиях хозяйства, длительно неблагополучного по респираторным болезням, обусловленным воздействием на организм ассоциаций вирусов, патогенной и условно патогенной микрофлоры на фоне нарушения условий содержания и кормления стельных коров и телят. Вирусологическими и бактериологическими исследованиями подтверждена этиологическая роль вирусов ПГ-3, ИРТ, ВД-БС, пастерелл, сальмонелл, протея и эшерихий. Заболеваемость - 60-80%, летальность - до 20%.

Сущность способа поясняется примерами.

Пример 1. Профилактическую эффективность в зависимости от дозы определяли на 4 группах клинически здоровых телят 60-дневного возраста. Телят всех групп иммунизировали внутримышечными в области средней трети шеи двукратными инъекциями с интервалом в 21 день между инъекциями эмульсионной инактивированной вакциной против парагриппа-3, инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи - болезни слизистых в дозе 2,0 мл. Телятам первых трех групп (опытных) в течение 15 дней дополнительно внутрь за 20-30 минут до кормления применяли 70% спиртовую настойку из измельченной растительной смеси равных количеств травы и соцветий эхинацеи пурпурной, травы гармалы обыкновенной, цветов липы мелколистной и корней солодки голой в виде 7% водного раствора, приготовленного на кипяченой охлажденной воде, в дозах 1,5, 2,0 и 2,5 мл/кг живой массы животного соответственно. Животные четвертой группы дополнительно препаратов не получали и служили контролем. Эффективность профилактики оценивали по основным клиническим показателям (таблица 1).

Таблица 1 Эффективность иммунопрофилактики респираторных болезней телят в зависимости от дозы средства неспецифической профилактики Показатели Группы животных опытные контрольная иммунизация внутримышечными в области средней трети шеи двукратными инъекциями с интервалом в 21 день между инъекциями эмульсионной инактивированной вакциной против парагриппа-3, инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи - болезни слизистых в дозе 2,0 мл. 70% спиртовую настойку из измельченной растительной смеси равных количеств травы и соцветий эхинацеи пурпурной, травы гармалы обыкновенной, цветов липы мелколистной и корней солодки голой в виде 7% водного раствора, в дозе, мл/кг живой массы препаратов не применяли 1,5 2,0 2,5 Количество животных, гол. 25 26 24 18 Заболело, гол.(%) 2(8) 2(7,7) 2(8,3) 2(16,7) Пало, гол.       2 Эффективность, % 92,0 92,3 91,7 83,3

Повышение эффективности профилактики респираторных болезней телят в первой и второй группах по сравнению с контрольной группой на 8,7 и 9,0% соответственно подтвердили обоснованность заявленной дозы средства неспецифической иммунопрофилактики.

До вакцинации, через 21 день после вакцинации и 21 день после ревакцинации у телят второй опытной и контрольной групп исследовали кровь для оценки иммунного статуса и уровня естественной резистентности. Иммунный статус оценивали по относительному и абсолютному числу Т- и В-лимфоцитов (определяли по методу Н.И. Блинова, 1985), содержанию основных классов иммуноглобулинов IgG, IgM (определяли по методу Манчини и др., 1965) и уровню вируснейтрализующих антител к вирусам ПГ-3, ИРТ, ВД-БС в реакции непрямой гемагглютинации; естественную резистентность - по показателям функциональной активности нейтрофилов крови (определяли в реакции восстановления тетразолия по А.Н.Маянскому и др., 1979), бактерицидной активности сыворотки крови (определяли по методу О.В.Смирновой и Т.А.Кузьминой, 1966) и лизоцимной активности сыворотки крови (определяли по методу О.В.Бухарина и др., 1970). Результаты представлены в таблице 2.

Как видно из таблицы 2, средство неспецифической профилактики в соответствии с изобретением повышало поствакциональный иммунитет в результате активации клеточного и гуморального звеньев иммунитета. Так, на 21 день после вакцинации относительное и абсолютное число Т-лимфоцитов крови телят опытной группы увеличилось на 18,8 и 26,7% соответственно по сравнению с 4,8 и 6,6% в контрольной группе; относительное и абсолютное содержание В-лимфоцитов крови телят опытной группы повысилось на 21,5 и 97,6% соответственно по сравнению с 6,2 и 19,0% в контрольной группе. Установлено достоверное повышение функциональной активности нейтрофилов крови телят опытной группы как в индуцированном, так и спонтанном тестах. У телят опытной группы на 21 день после вакцинации отмечались протективные титры антител к вирусам ПГ-3, ИРТ и ВД-БС, в контрольной группе сравнимый уровень антител был достигнут на 21 день после ревакцинации.

Пример 2. Сравнительную эффективность профилактики респираторных болезней телят заявленным и известным способами определяли на клинически здоровых телятах 60-дневного возраста. По принципу аналогов формировали 4 группы телят. Телят трех групп иммунизировали внутримышечными в области средней трети шеи двукратными инъекциями с интервалом в 21 день между инъекциями эмульсионной инактивированной вакциной против парагриппа-3, инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи - болезни слизистых в дозе 2,0 мл. Телятам первой и второй групп в течение 15 дней дополнительно внутрь за 20-30 минут до кормления применяли 70% спиртовую настойку из измельченной растительной смеси равных количеств травы и соцветий эхинацеи пурпурной, травы гармалы обыкновенной, цветов липы мелколистной и корней солодки голой в виде 7% водного раствора, приготовленного на кипяченой охлажденной воде, в дозе 2,0 мл/кг живой массы животного и 70% спиртовую настойку эхинацеи пурпурной в виде 7% водного раствора в дозе 2,0 мл/кг живой массы соответственно. Телятам четвертой группы внутримышечно инъецировали гипериммунную сыворотку, содержащую специфические антитела к вирусам ПГ-3 и ИРТ в титрах не ниже 1:1280 и 1:256 соответственно в дозе 1,0 мл/кг живой массы трехкратно с интервалом в 10 дней. Эффективность оценивали по основным клиническим показателям. Результаты представлены в таблице 3.

Пример 3. Сравнительную эффективность профилактики респираторных болезней телят заявленным и известным способами определяли на клинически здоровых телятах 60-дневного возраста. По принципу аналогов формировали 4 группы телят. Телят трех групп иммунизировали внутримышечными в области средней трети шеи двукратными инъекциями с интервалом в 21 день между инъекциями живой аттенуированной вакциной против парагриппа-3, инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи - болезни слизистых «ТРИВАК» (ВИЭВ) в дозе 2,0 мл. Телятам первой и второй групп в течение 15 дней дополнительно внутрь за 20-30 минут до кормления применяли 70% спиртовую настойку из измельченной растительной смеси равных количеств травы и соцветий эхинацеи пурпурной, травы гармалы обыкновенной, цветов липы мелколистной и корней солодки голой в виде 7% водного раствора, приготовленного на кипяченой охлажденной воде, в дозе 2,0 мл/кг живой массы животного и 70% спиртовую настойку эхинацеи пурпурной в виде 7% водного раствора в дозе 2,0 мл/кг живой массы соответственно. Телятам четвертой группы внутримышечно инъецировали гипериммунную сыворотку, содержащую специфические антитела к вирусам ПГ-3 и ИРТ в титрах не ниже 1:1280 и 1:256 соответственно в дозе 1,0 мл/кг живой массы трехкратно с интервалом в 10 дней. Эффективность оценивали по основным клиническим показателям. Результаты представлены в таблице 4.

Как видно из таблиц 3 и 4, заявленный способ обеспечивал оптимальный профилактический эффект, который выражался в снижении числа заболевших телят и более легкой форме переболевания.

Снижение заболеваемости свидетельствовало об усилении резистентности, что указывало на повышение адаптационного уровня. После выздоровления телята опытных групп хорошо развивались, у них восстанавливались реакции на внешние раздражители, они были подвижны и активны.

Полученные клинические данные подтвердили достижение заявленного технического результата - повышение профилактической эффективности на фоне естественного вирусоносительства активацией защитных механизмов по всем регистрируемым параметрам. Так, повышение уровней иммуноглобулинов G и М указывает на стимуляцию гуморального иммунитета, а усиление функциональной активности клеток Т- и В-лимфоцитов способствует повышению напряженности и длительности иммунитета.

Источники информации, принятые во внимание:

1. Урбан В.П., Найманов И.Л. Болезни молодняка в промышленном животноводстве. - М.: Колос, 1984. - С.192-196.

2. Патент РФ №2111011 С1, А61К 39/295, А61К 39/155, А61К 39/265.

3. Патент РФ №2378014 С1, А61К 39/295, C12N 7/00, А61Р 31/12.

4. Коровина Н.А., Заплатников А.Л. Часто болеющие дети и современные возможности иммунопрофилактики острых респираторных инфекций // Трудный пациент. Педиатрия. - 2006. - №9. - С.29-32.

5. Заплатников А.Л. Иммунопрофилактика и иммунотерапия острых респираторных инфекций // Лечащий врач. - 2006. - №9.- С.50-56.

6. Gwaetney J.M.Jr. Rhinoviruses: in Evans A.S., Kalow R.A. Viral infections of human epidemiology and control, 4^th ed. New York: Plenum, 1997.

Изобретение относится к ветеринарии. Способ иммунопрофилактики респираторных болезней телят включает иммунизацию ассоциированной вакциной против вирусов парагриппа-3, инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи - болезни слизистых в сочетании с применением в качестве средства неспецифической профилактики спиртовой настойки растительного сырья, причем в качестве растительного сырья используют смесь равных количеств травы и соцветий эхинацеи пурпурной, травы гармалы обыкновенной, цветов липы мелколистной и корней солодки голой, которую заливают этиловым спиртом 70% концентрации при соотношении 1:10, выдерживают в темном месте при температуре 18-20°С в течение 7 суток, полученную настойку назначают внутрь в виде 7-8% водного раствора в дозе 1,5-2,0 мл/кг живой массы животного в течение 15 дней, причем иммунизируют телят 60-дневного возраста. Изобретение обеспечивает повышение эффективности иммунопрофилактики. 4 табл., 3 пр.

Способ иммунопрофилактики респираторных болезней телят, включающий иммунизацию ассоциированной вакциной против вирусов парагриппа-3, инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи - болезни слизистых в сочетании с применением в качестве средства неспецифической профилактики спиртовой настойки растительного сырья, отличающийся тем, что в качестве растительного сырья используют смесь равных количеств травы и соцветий эхинацеи пурпурной, травы гармалы обыкновенной, цветов липы мелколистной и корней солодки голой, которое заливают этиловым спиртом 70% концентрации при соотношении 1:10, выдерживают в темном месте при температуре 18-20°С в течение 7 суток, причем настойку назначают внутрь в виде 7-8% водного раствора в дозе 1,5-2,0 мл/кг живой массы животного в течение 15 дней, причем иммунизируют телят 60-дневного возраста.