ПРОФИЛАКТИЧЕСКОЕ ИЛИ ТЕРАПЕВТИЧЕСКОЕ ВЕЩЕСТВО ПРИ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ БОЛЕЗНЯХ КИШЕЧНИКА Российский патент 2012 года по МПК A61K31/55 A61K31/4192 A61P29/00 A61P1/04 

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ

Настоящая заявка основана на предшествующей японской патентной заявке № 2007-326543 (поданной 18 декабря 2007 года), содержание которой полностью включено в описание изобретения, и заявляет об ее эффекте.

УРОВЕНЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Область изобретения

Настоящее изобретение относится к профилактическому или терапевтическому средству для лечения воспалительной болезни кишечника, такой как язвенный колит и болезнь Крона. В частности, настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции для предупреждения или лечения воспалительных болезней кишечника, которая содержит 7,8-диметокси-4(5H),10-диоксо-1H-1,2,3-триазоло[4,5-c][1]бензоазепин, его пролекарство или его фармацевтически приемлемую соль, или 2-(1-изопропоксикарбонилокси-2-метилпропил)-7,8-диметокси-4(5H),10-диоксо-2H-1,2,3-триазоло[4,5-c][1]бензоазепин или его фармацевтически приемлемую соль.

Уровень техники

Воспалительная болезнь кишечника (далее в настоящем изобретении называемая "ВБК") означает идиопатический хронический неспецифический энтерит персистирующего типа, а именно распространенные заболевания, включающие язвенный колит, болезнь Крона (Koji Uraushibara, Mamoru Watanabe: "Definition and Epidemiology of Inflamatory Bowel Diseases"; Inflamatory Bowel Diseases, стр. 9-15, 2005, Ed. Norihumi Hibi; Saishin-Igaku (ссылка 1). Считается, что при ВБК в слизистой оболочке кишечника по ряду причин разрушаются иммунные механизмы, что вызывает чрезмерную реакцию энтеробактериальной флоры и бактериальных компонентов, в силу чего развивается энтерит и поддерживается состояние энтерита. Вместе с тем, не определена этиология заболевания. Известно, что при язвенном колите и болезни Крона, которые являются основными заболеваниями, входящими в понятие ВБК, неоднократно наступает активная фаза с выраженными симптомами, такими как образование язвы и кровотечение, и фаза ремиссии, при которой наблюдается отсутствие или улучшение симптоматики, и предполагается, что указанные заболевания могут рецидивировать более 10-20 лет.

Ключевой механизм ВБК до настоящего времени полностью не раскрыт.

Для объяснения ключевого механизма ВБК ранее предлагались теории аллергии и инфекции, но сейчас ВБК считается аутоиммунным заболеванием, и проводятся исследования, подтверждающие аутоиммунную теорию, которые включают, например, изучение явления повышения титра антинейтрофильных антител IgG в крови, сопровождающего указанную болезнь (Hibi N., Introduction Japanese J. Clin. Med., 63 (5): 741-743, 2005 (ссылка 2); Keiichi Mitsuyama, Makoto Toyonaga, и Michio Sata, "Pathology and Pathphysiology of Inflamatory Bowel Diseases"; Inflamatory Bowel Diseases, стр. 28-36, 2005, Ed. Norihumi Hibi; Saishin-Igaku (ссылка 3)). С другой стороны, исследователи Ishizaka и др. в 1966 году подтвердили присутствие антитела IgE, которое обуславливает аллергию, и показали, что аллергическая реакция представляет собой реакцию высвобождения гистамина, медиатором которой является антиген-специфическое антитело IgE (Mechanism of Body and Allergy, 1998 Shuichi Ueno, Nippon Jitsugyo Publishing (ссылка 4); и Ishizaka K., Ishizaka T, and Hornbrook MM. Physico-Chemical Properties of Human Reaginic Antibody IV: Presence of a Unique Immunoglobulin as a Carrier of Reaginic Activity. Journal of Immunology, 97 (1): 75-85, 1966 (ссылка 5)). Таким образом, возникло отрицание аллергической теории ВБК, утверждавшей об отсутствии продукции антиген-специфического антитела IgE. Также была подтверждена неэффективность при ВБК динатрия хромогликата, который общепринято одобрен в трех регионах в качестве типичного ингибитора высвобождения гистамина: в Японии, в Соединенных Штатах Америки и в Европе (ДНХГ; Akihide Koda, "History and Present Situation of Anti-allergic Agents", стр. 32-39, 1988, Ed. Terumasa Miyamoto, Hiroshi Baba and Minoru Okuda, Life Science Co., Ltd. (ссылка 6)). (Crotty В and Jewell DP. Drug therapy of ulcerative colitis. Br. J. Clin. Pharmc. 34(3): 189-198, 1992 (Reference 7); Binder V, Elsborg L, Greibe J, Hendriksen C, Hoj L, Jensen KB, Kristensen E, Madsen JR., Marner B, Riis P, and Willumsen L. Disodium cromoglycate in the treatment of ulcerative colitis and Crohn's disease. 22 (1): 55-60, 1981 (Reference 8); and, Buckell NA, Gould SR, Day DW, Lennard-Jones JE, and Edwards AM. Controlled trial of disodium cromoglycate in chronic persistent ulcerative colitis. Gut, 19 (12): 1140-1143. 1978 (Reference 9)).

Учитывая указанные обстоятельства, в общем в настоящее время по клиническим и теоретическим исследованиям признано, что аллергическая реакция очень редко участвует в ключевом механизме ВБК.

Дополнительно, согласно недавним сообщениям, сходный с ВБК воспалительный энтерит спонтанно развивается у мышей, нокаутных по гену ИЛ-2 (интерлейкина-2) и у мышей, нокаутных по ИЛ-10 (Ma A, Datta М., Margosian E, Chen K и Horak I. T-cells, but not B-cells are required for bowel inflammation in interleukin-2-deficient mice, J. Exp. Med. 182 (5): 1567-1572, 1995 (ссылка 10); и Kuhn R, Lohler J, Rennick D, Rajewsky K and Muller W. Interleukin-10-deficient mice develop chronic enterocolitis. Cell, 75 (2): 263-274, 1993 (ссылка 11)). О роли патологической T-клеточной иммунной реакции в манифестации заболевания свидетельствует то, что дефект ИЛ-2, обладающего активностью Т-клеточной пролиферации, или ИЛ-10, как обычного ингибирующего цитокина, вызывает энтерит, сходный с ВБК. Таким образом, в здоровом кишечнике предотвращается возникновение энтерита посредством пролиферации и активации Т-клеток, подавляющих иммунный ответ против веществ, распознаваемых как чужеродные, которые включают белки, поступающие из пищи, и чужеродные организмы из нормальной бактериальной флоры. Вместе с тем, предполагается, что в силу некоторых причин в слизистой оболочке кишечника возникает локальное нарушение специфической иммунной системы, поэтому иммунная реакция не контролирует чужеродные организмы, например кишечную бактериальную флору, иммунный ответ на которую изначально подавлен (Ohkusa T, Nomura T and Sato N., The Role of bacterial infection in the pathogenesis of inflammatory in the pathogenesis of inflammatory bowel disease, International Medidcine, 43 (7): 534-539, 2004 (ссылка 12)), и таким образом развивается ВБК. В целом считается, что иммунная патология, связанная с Т-клетками, в значительной степени вовлечена в ключевой механизм ВБК, как описано выше. (Tadao Baba, Inflammatory bowel diseases, Recent Trend. Matsushita Medical Journal 39 (1): 1-14, 2000 (ссылка 13)).

Цель лечения ВБК состоит в наступлении ремиссии (уменьшении симптомов в активной фазе) и предотвращении рецидива. Несмотря на отсутствие полного согласия в руководствах по лечению ВБК в рассматриваемых странах, терапевтическое лечение, обычно рекомендуемое в японских, американских и британских руководствах, является следующим:

А именно 5-аминосалициловая кислота (5-АСК) или сульфасалазин, в зависимости от типа, локализации и степени тяжести заболевания конкретного больного, применяется в качестве стандартного терапевтического средства для лечения больных ВБК в легкой и средней степени тяжести. 5-АСК представляет собой продукт расщепления сульфасалазина и считается активной субстанцией сульфасалазина. Больным со средней и тяжелой формой в дополнение к 5-АСК и сульфасалазину вводят стероиды пероральным или ректальным путем. В тяжелых случаях ремиссия достигается внутривенной инъекцией стероида или иммунного ингибитора циклоспорина. В последние годы также проводят лечение анти-ФНО антителом (к фактору некроза опухолей). 5-АСК и сульфасалазин рекомендованы для предотвращения рецидива после наступления ремиссии. Кроме того, для профилактики рецидива рекомендованы иммунодепрессанты, такие как азатиопурин (АЗА) или 6-меркаптопурин (6-МП).

Вместе с тем, широко применяемые для лечения ВБК 5-АСК и сульфасалазин часто проявляют недостаточный терапевтический эффект у больных со средней и тяжелой формой заболевания. В таких случаях при тяжелой форме ремиссии достигают применением иммунного ингибитора, например стероидов или циклоспорина, для контроля патологических реакций, обусловленных главным образом Т-клетками, от которых зависит состояние и степень тяжести болезней. Хирургическую резекцию толстой кишки проводят у больных в рефракторном состоянии, у которых трудно достичь ремиссии указанными препаратами. Известно, что, если после достижения ремиссии, то есть после улучшения состояния воспаления пищеварительного тракта, не проводится профилактическое лечение рецидива, ВБК рецидивирует или обостряется у 70% больных. Поэтому терапевтические руководства также рекомендуют поддерживать состояние ремиссии (поддержка ремиссии) путем продолжения профилактического лечения рецидива. Для поддержки ремиссии (предотвращения рецидива) рекомендовано введение 5-АСК или сульфасалазина, поэтому АЗА или 6-МП применяют в случае отсутствия удовлетворительных эффектов при лечении 5-АСК или сульфасалазином. Вместе с тем, для начала действия АЗА и 6-MP необходимо несколько месяцев, таким образом, остается задача для решения проблемы их эффективности.

Кроме того, терапевтические вещества, такие как стероиды, циклоспорин, АЗА или 6-МП, имеют сильные системные побочные эффекты, и таким образом существуют ограничения для их применения. В качестве примера, в дополнение к побочным эффектам, таким как иммунная недостаточность, стероиды подавляют остеогенез или рост, особенно у больных в пубертатном периоде; циклоспорины вызывают нарушения почек; АЗА и 6-МП вызывают симптомы, подобные гриппу, и тяжелые побочные эффекты, такие как подавление деятельности костного мозга и патологии печени. Дополнительно, имеются сообщения о тератогенном эффекте стероидов, циклоспорина, АЗА и 6-МП в экспериментах на животных, и таким образом не установлена их безопасность при беременности и кормлении грудью, что ограничивает их введение пациентам женского пола в возрасте ближе к двадцати годам, которые предрасположены к развитию ВБК.

Учитывая вышеописанные обстоятельства, в терапевтической практике существует потребность в разработке нового лекарства для профилактического лечения воспалительных болезней кишечника, которые могут безопасно и надежно вызывать ремиссию и применяться для поддерживающей терапии в течение длительного периода времени.

2-(1-изопропоксикарбонилокси-2-метилпропил)-7,8-диметокси-4(5H),10-диоксо-2H-1,2,3-триазоло[4,5-c][1]бензоазепин (упоминаемый далее в настоящем изобретении как "соединение А") и 7,8-диметокси-4(5H),10-диоксо-1H-1,2,3-триазоло[4,5-c][1]бензоазепин, (упоминаемый далее в настоящем изобретении как "соединение B") имеют структуры, представленные следующими формулами:

(Соединение A)

(Соединение B)

Известно, что соединение A является пролекарством соединения B и быстро превращается в соединение B в организме после проникновения через различные слизистые оболочки, включающие в себя слизистые пищеварительного тракта, таким образом проявляя ингибирующее действие на высвобождение гистамина (см. патенты WO 95/18130 (JP 3290664-B, USP 5686442)). Также было показано, что при пероральном введении соединение A обладает в семь раз лучшей абсорбирующей способностью по сравнению с соединением B (см. патенты WO 99/16770 (JP 3188482-B, USP 6372735)).

Вместе с тем, указанные литературные источники относятся к терапевтическим или профилактическим средствам против аллергических заболеваний и не относятся или не указывают на воспалительные болезни кишечника (ВБК), которые считаются слабо связанными с аллергическими заболеваниями, или к способам их профилактики или лечения. Таким образом, в этих примерах отсутствует безусловное раскрытие.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Авторы настоящего изобретения неожиданно выявили, что оба из соединений A и соединений B обладают мощным эффектом для профилактики и лечения воспалительных болезней кишечника (ВБК), и, в частности, проявляют сильное профилактическое и терапевтическое действие также в тяжелых случаях резистентности к общепринятым терапевтическим средствам. В таких ситуациях, когда аллергическая реакция очень редко вовлечена в ключевой механизм ВБК, как описано выше, соединение A и соединение B имеют выдающиеся выраженные профилактические и терапевтические эффекты, которые действуют при ВБК. Возникло неожиданное предложение, что соединение A и соединение B проявляют профилактические и терапевтические эффекты, которые действуют при ВБК на основе другого механизма реакции, независимо от их противоаллергического действия, что также подтверждено в описанных ниже примерах. Было также подтверждено, что каждое из лекарственных средств, применяемых при лечении ВБК, обладает по меньшей мере одним из действий: эффективностью в каррагинин-индуцированной модели воспаления у крыс; ингибированием продукции цитокина из лейкоцитов селезенки. Конкретно, общеизвестным фактом является эффективность сульфасалазина и стероидов в каррагинин-индуцированной модели воспаления (Cronstein BN, Montesinos MC, and Weissman G.) Салицилаты и сульфасалазин, в отличие от глюкокортикоидов, препятствуют накоплению лейкоцитов аденозин-зависимым механизмом, который не зависит от ингибирования синтеза простагландина и p105 NF-κB, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 25 мая 1999 года, 96 (11): 6377-6381 (ссылка 14)), и указанные стероиды и иммунодепрессанты ингибируют выработку цитокина в иммуноцитах, таких как Т-клетки. С другой стороны, было подтверждено, что соединение A или соединение B не действуют в каррагинин-индуцированной модели воспаления и не влияют на продукцию цитокина Т-клетками селезенки. Таким образом, в настоящем изобретении подтверждено, что механизм проявления эффективного профилактического и терапевтического действия при ВБК у соединения A и соединения B отличается от механизма действия общепринятых терапевтических средств. Эти факты также были выявлены авторами настоящего изобретения. Кроме того, соединение A и соединение B имеют меньше побочных эффектов, наблюдаемых у общепринятых профилактических и терапевтических веществ, и считаются очень полезными для профилактики и лечения ВБК. Эти результаты представляют собой основу настоящего изобретения.

Таким образом, целью настоящего изобретения является новое профилактическое и терапевтическое вещество против воспалительных болезней кишечника, которое эффективно для профилактики и лечения воспалительных болезней кишечника и имеет немногочисленные побочные эффекты.

Фармацевтическая композиция для профилактики или лечения воспалительных болезней кишечника (ВБК) согласно настоящему изобретению содержит 7,8-диметокси-4(5H),10-диоксо-1H-1,2,3-триазоло[4,5-c][1]-бензоазепин (соединение B), его пролекарство или фармацевтически приемлемую соль.

Также фармацевтическая композиция для профилактики или лечения воспалительных болезней кишечника (ВБК) согласно настоящему изобретению содержит 2-(1-изопропоксикарбонилокси-2-метилпропил)-7,8-диметокси-4(5H),10-диоксо-2H-1,2,3-триазоло[4,5-c][1]бензоазепин (соединение A) или его фармацевтически приемлемую соль.

Согласно предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения фармацевтическую композицию для профилактики или лечения воспалительных болезней кишечника (ВБК) вводят перорально.

Согласно другому предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения фармацевтическая композиция дополнительно содержит фармацевтически приемлемый носитель.

Согласно одному предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения термин "профилактика" в фармацевтической композиции для профилактики или лечения ВБК означает предотвращение рецидива воспалительных болезней кишечника.

Согласно более предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения в отношении фармацевтической композиции воспалительная болезнь кишечника представляет собой язвенный колит или болезнь Крона.

Способ профилактики или лечения воспалительной болезни кишечника (ВБК) согласно настоящему изобретению содержит введение млекопитающему профилактически или терапевтически эффективного количества 7,8-диметокси-4(5H),10-диоксо-1H-1,2,3-триазоло[4,5-c][1] бензоазепина, его пролекарства или его фармацевтически приемлемой соли.

Согласно другому предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения способ содержит введение млекопитающему профилактически или терапевтически эффективного количества 2-(1-изопропоксикарбонилокси-2-метилпропил)-7,8-диметокси-4(5H),10-диоксо-2H-1,2,3-триазоло[4,5-c][1]бензоазепина или его фармацевтически приемлемой соли.

Дополнительно, согласно настоящему изобретению, рассматривается применение 7,8-диметокси-4(5H),10-диоксо-1H-1,2,3-триазоло[4,5-c][1]бензоазепина, его пролекарства или его фармацевтически приемлемой соли для изготовления профилактического или терапевтического вещества против воспалительных болезней кишечника (ВБК).

Согласно другому дополнительному предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения, рассматривается применение 2-(1-изопропоксикарбонилокси-2-метилпропил)-7,8-диметокси-4(5H),10-диоксо-2H-1,2,3-триазоло[4,5-c][1]-бензоазепина или его фармацевтически приемлемой соли для изготовления профилактического или терапевтического вещества против воспалительных болезней кишечника (ВБК).

Дополнительно, другими словами, можно считать, что настоящее изобретение рассматривает:

(1) профилактическое или терапевтическое вещество против воспалительных болезней кишечника, который содержит 2-(1-изопропоксикарбонилокси-2-метилпропил)-7,8-диметокси-4(5H),10-диоксо-2H-1,2,3-триазоло[4,5-c][1]бензоазепин или его фармацевтически приемлемую соль; и

(2) профилактическое или терапевтическое вещество против воспалительных болезней кишечника, которое содержит 7,8-диметокси-4(5H),10-диоксо-1H-1,2,3-триазоло[4,5-c][1]бензоазепин или его фармацевтически приемлемую соль.

Согласно настоящему изобретению можно получать профилактическую или терапевтическую фармацевтическую композицию против воспалительных болезней кишечника, которая обладает немногочисленными побочными эффектами и проявляет мощный профилактический и терапевтический эффекты, в том числе при тяжелых формах, которые резистентны к общепринятым терапевтическим средствам.

В этой связи можно сказать, что "промышленная пригодность" в настоящем изобретении состоит в возможности получения полезного препарата, который эффективен для профилактики и лечения воспалительных болезней кишечника и имеет немногочисленные побочные эффекты.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

Фигура 1 показывает результаты анализа терапевтического действия рассматриваемых веществ на сокращение толстой кишки с помощью декстрана сульфата натрия ДСН в тестовом примере 4 из раздела примеров (###: P<0,005 по сравнению с интактной группой (t-тест Стьюдента), **: P<0,01 по сравнению с группой с введением растворителя (тест множественного сравнения Данетта)).

Фигура 2 показывает (###: P<0,005 по сравнению с интактной группой (t-тест Стьюдента), ***: P<0,005, *: P<0,05 по сравнению с группой с введением растворителя (тест множественного сравнения Данетта)).

Фигура 3 показывает результаты анализа терапевтического эффекта ухудшения фекальных показателей рассматриваемых веществ в тестовом примере 4 из раздела примеров (###: P<0,005 по сравнению с интактной группой (t-тест Стьюдента), ***: p<0,005 по сравнению с группой, которой вводили растворитель (тест множественного сравнения Стила (Steel)).

Фигура 4 показывает результаты анализа терапевтического эффекта ухудшения показателей рассматриваемых веществ по сравнению с интактной группой в макроанализе в тестовом примере 4 из раздела примеров (##: P<0,01, **: P<0,01 по сравнению с группой, которой вводили растворитель (U-тест Манна-Уитни (Mann-Whitney)).

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Действующие компоненты

Действующий компонент настоящего изобретения 7,8-диметокси-4(5H),10-диоксо-1H-1,2,3-триазоло[4,5-c][1]бензоазепин (соединение B) является общеизвестным соединением, и его можно получать согласно способу, описанному в разделе способов изготовления соединения, и в примере 43 из патента WO 95/18130.

Действующий компонент настоящего изобретения может представлять собой пролекарство соединения В или фармацевтически приемлемую соль указанного соединения или его пролекарство. Поэтому пролекарство соединения B является таким типом соединения, в котором можно модифицировать 1,2,3-триазольную группу соединения B и которое можно получать согласно способу, описанному в патенте WO 99/16770.

Действующий компонент настоящего изобретения 2-(1-изопропоксикарбонилокси-2-метилпропил)-7,8-диметокси-4(5H),10-диоксо-2H-1,2,3-триазоло[4,5-c][1]бензоазепин (соединение A) представляет собой общеизвестное соединение, и его можно получать согласно способу, описанному в разделе способов изготовления соединения, и в примере 20 из патента WO 95/18130.

Действующие компоненты настоящего изобретения соединение A или соединение B можно превращать в их фармацевтически приемлемые соли, и такие соли можно использовать в качестве действующих компонентов. Фармацевтически приемлемые соли соединения A и соединения B включают в себя приемлемые в медицинской практике нетоксичные соли. Такие нетоксичные соли предпочтительно включают в себя соли щелочных металлов или щелочноземельных металлов, например натриевую соль, калиевую соль и кальциевую соль; соли галоводородных кислот, такие как соль фтористоводородной кислоты, соль хлористоводородной кислоты, соль бромистоводородной кислоты и соль йодистоводородной кислоты; соли неорганических кислот, такие как соли азотной кислоты, соли перхлорной кислоты, соли серной кислоты и соли фосфорной кислоты; соли органических кислот, такие как соль метансульфоновой кислоты, соль фумаровой кислоты, соль янтарной кислоты, соль лимонной кислоты, соль виннокаменной кислоты, соль щавелевой кислоты и соль малеиновой кислоты; и соли аминокислот, такие как соль глутаминовой кислоты и соль аспарагиновой кислоты.

Фармацевтическая композиция

Известно, что действующие компоненты настоящего изобретения соединение A и соединение B обладают вышеописанным противоаллергическим действием.

Вместе с тем, в настоящем изобретении подтверждено, что:

(i) указанные соединения не имеют какого-либо прямого ингибирующего эффекта на Т-клеточную продукцию цитокинов, которые считаются основными клетками воспалительных болезней кишечника (ВБК) (тестовый пример 8), и

(ii) соединение A не обладает эффективностью в нестероидных противовоспалительных веществах (таких как индометацин), в сульфасалазине или в каррагинин-индуцированной модели воспаления, с помощью которой можно точно выявить эффективность стероидов (тестовый пример 2).

Дополнительно, как описано выше, обычный противоаллергический агент динатрия хромогликат ДНХГ неэффективен при ВБК. Авторам настоящего изобретения не известны какие-либо факты одобрения назначения при лечении ВБК противоаллергического препарата, обладающего сходным с ДНХГ действием ингибирования высвобождения гистамина, или антагониста гистаминовых рецепторов.

В этой связи можно предположить, что соединение A и соединение B слабо связано с механизмом действия известного терапевтического вещества против ВБК и что указанные соединения, даже имея противоаллергическое действие, обладают незначительным неспецифичным противовоспалительным эффектом. Также известно, как описано выше, что указанные профилактические и терапевтические эффекты при ВБК слабо связаны с аллергической реакцией. Можно сказать, что для специалиста в данной области техники было чрезвычайно трудно в таких ситуациях ожидать и предполагать проявление эффективного профилактического или терапевтического действия самого по себе. Поэтому предполагается, что профилактический или терапевтический эффект соединения A и соединения B при ВБК, который обнаружен согласно настоящему изобретению, является неожиданным и характерным действием соединения A и соединения B.

Согласно нижеприведенному описанию примеров было подтверждено, что после профилактического перорального введения одного из действующих компонентов настоящего изобретения соединения А крысам с моделью ВБК, индуцированной декстраном сульфата натрия (ДСН), область поражения прямой кишки уменьшалась в более значительной степени, чем при лечении сульфасалазином, который считается обычным терапевтическим средством в клинической практике. Соединение А также проявляло одинаковую со стероидом (преднизолоном) или более высокую эффективность, и без каких-либо побочных эффектов. С другой стороны, в качестве побочного эффекта наблюдалось значительное сдерживание повышения веса в группе, получавшей преднизолон (тестовый пример 3). Другими словами, было подтверждено, что соединение A в действительности обладает профилактическим действием против ВБК.

Модель ВБК представляет собой животную модель, которая соответствует степени тяжести болезни от умеренной до тяжелой и в которой только сульфасалазин проявлял очень незначительную ингибирующую тенденцию. Это хорошо согласуется с клиническими результатами.

Дополнительно, при подготовке хронической модели ВБК, индуцированной ДСН, и при пероральном введении, соответственно, соединения A или соединения B фактически подтвердились терапевтическое действие против ВБК и дозо-зависимая реакция (тестовый пример 4). Таким образом, как показано в тестовом примере 4, в значительной степени и дозо-зависимым образом патологические состояния сдерживались при введении соединения A, и в той же значительной степени сдерживались при введении соединения В, при условии, что соединение A или соединение B вводили на третий день и после трех дней введения ДСН (тестовый пример 5). Также, при лечении иммунно-супрессивным препаратом циклоспорином сдерживание повышения веса было интенсивным и приводило к ухудшению общей симптоматики, также не было достигнуто каких-либо терапевтических эффектов при лечении 5-АСК при тех же состояниях. Данные результаты явно предполагают, что соединение A и соединение B могут быть безопасными и мощными пероральными препаратами против ВБК.

В качестве патологических моделей ВБК, в дополнение к ДСН-индуцированной модели, широко используют модель, индуцированную 2,4,6-тринитробензолсульфоновой кислотой (ТНБС). Изучение терапевтического эффекта и дозо-зависимой реакции соединения A на ТНБС-индуцированной модели ВБК показало дозо-зависимое улучшение показателей у соединения А при язвах толстой кишки на второй день и через два дня после воздействия ТНБС (тестовый пример 6). Наблюдалось значительное (P<0,01) сдерживание повышения веса (побочный эффект) при лечении преднизолоном, используемым в качестве соединения положительного контроля, при этом такое сдерживание не выявлено в группе, получавшей соединение А.

Дополнительно была подтверждена высокая безопасность соединений A и B, используемых в настоящем изобретении, поскольку не наблюдалось каких-либо отклонений при повторном пероральном постоянном введении соединений в течение 26 недель (тестовый пример 7).

Таким образом, действующие компоненты настоящего изобретения проявляют превосходный профилактический или терапевтический эффект против воспалительных болезней кишечника (ВБК), предпочтительно при пероральном введении. Поэтому настоящее изобретение рассматривает профилактическую или терапевтическую фармацевтическую композицию против ВБК, которая содержит соединение B, его пролекарства или его фармацевтически приемлемые соли, или соединение A или его фармацевтически приемлемые соли.

Термин "воспалительные болезни кишечника" (ВБК) в настоящем изобретении относится к неспецифическому энтериту идиопатического хронического персистирующего типа, то есть к таким обычным заболеваниям, как язвенный колит и болезнь Крона. При этом, согласно общей клинической классификации, в понятие ВБК не входит инфекционный энтерит, псевдомембранозный энтерит, вызванный антибиотиками, ишемический энтерит или пептическая язва, или энтерит, связанный с общими аллергическими реакциями. Таким образом, согласно предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения, воспалительной болезнью кишечника являются язвенный колит или болезнь Крона.

Термин "профилактика" или "предотвращение" в настоящем изобретении означает полное или частичное предотвращение воспалительных болезней кишечника или их симптомов у млекопитающих, в частности у людей, и включает в себя, например, предотвращение или сдерживание рецидива воспалительных болезней кишечника у пациентов, которые ранее были больными и проходили лечение.

Дополнительно, термин "терапия" или "лечение" в настоящем изобретении означает полное или частичное лечение воспалительных болезней кишечника или их симптомов, или дальнейшего злокачественного перерождения, возникающего у млекопитающих, в частности у людей. Для примера, термин "терапия" может включать в себя сдерживание симптоматики заболевания, то есть торможение или отсрочку развития, улучшение симптоматики заболевания, то есть регресс болезни или симптома или прекращение развития симптома.

Фармацевтическую композицию согласно настоящему изобретению можно вводить перорально или парентерально (например, внутривенным, внутримышечным, ректальным и трансдермальным путем), и можно применять в разных лекарственных формах, подходящих для перорального или парентерального введения людям и другим млекопитающим, кроме людей.

В качестве примера, композицию настоящего изобретения можно изготовлять в виде лекарственной формы (или рецептуры), включающей в себя пероральные препараты, такие как таблетка, капсула, гранулы, порошок, пилюля, тонкодисперсные порошки, пастилки, сироп и эмульсию; инъекционные препараты, такие как внутривенные и внутримышечные формы; интраректальные формы, суппозитории на жировой основе, водорастворимые суппозитории; пасты, такие как мазь, и тому подобное, в зависимости от применения. Указанные препараты можно изготовлять общепринятыми способами с помощью обычно используемых фармацевтически приемлемых носителей, таких как среда для лекарства, наполнитель, связующее вещество, увлажняющее вещество, дезинтегрирующее вещество, сурфактант, влагоудерживающее вещество, диспергирующее вещество, буфер, регулятор уровня pH, вещество для консервации, хелатирующее вещество, вещество, ускоряющее растворение, консервант, модификатор, смягчающее вещество, стабилизатор и тому подобное. Возможные для использования нетоксичные добавки включают в себя, например, лактозу, фруктозу, глюкозу, крахмал, желатин, магния карбонат, синтетический магния силикат, тальк, магния стеарат, метилцеллюлозу, карбоксиметилцеллюлозу или их соли, гидроксипропилметилцеллюлозу, поливиниловый спирт, поливинилпирролидон, полиакриловую кислоту и их соли, гуммиарабик, оливковое масло, пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, сироп, вазелин, глицерин, этанол, лимонную кислоту, натрия хлорид, натрия сульфит, фосфатный буфер, цитратный буфер, тартратный буфер, ацетатный буфер, натрия фосфат, гидроокись натрия, гидроокись аммония, соляную кислоту, уксусную кислоту, фосфорную кислоту, бензалкония хлорид, бензетония хлорид, сложные эфиры p-гидроксибензойной кислоты, такие как метил-p-гидроксибензоат или этил-p-гидроксибензоат, и тому подобное.

Дозу фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению можно соответственно менять в зависимости от содержания действующих компонентов и вводить нуждающимся пациентам профилактически или терапевтически эффективное количество действующих компонентов для предотвращения или лечения воспалительных болезни кишечника.

В этой связи понятие "профилактически или терапевтически эффективное количество" относятся к количеству, необходимому для целевого проявления профилактического или терапевтического эффекта при воспалительных болезнях кишечника у больных, и указанное количество можно определять индивидуально с учетом возраста, массы тела, пола пациента, его заболеваний, степени выраженности симптомов и т.п.

При использовании в настоящем изобретении соединения A его содержание в фармацевтической композиции может варьироваться в зависимости от его лекарственной формы и обычно имеет концентрацию от 1 до 70% веса, предпочтительно от 5 до 30% веса. Конкретные способы изготовления фармацевтической композиции приведены далее в разделе «Примеры препаратов». Дозы для профилактики и лечения ВБК определяют, соответственно, с учетом способа применения, возраста, пола пациента, степени выраженности симптомов и т.п., и обычно дозы для взрослых находятся в примерном диапазоне от 0,1 до 2000 мг в день, предпочтительно около 10-1000 мг, более предпочтительно примерно от 25 до 500 мг, которые можно вводить однократно или порциями несколько раз в день.

При использовании в настоящем изобретении соединения В его содержание в фармацевтической композиции может варьироваться в зависимости от его лекарственной формы и обычно имеет концентрацию от 1 до 70% веса, предпочтительно от 5 до 30% веса. Конкретные способы изготовления фармацевтической композиции приведены далее в разделе «Примеры препаратов». Дозы для профилактики и лечения ВБК определяют, соответственно, с учетом способа применения, возраста, пола пациента, степени выраженности симптомов и т.п., и обычно дозы для взрослых находятся в примерном диапазоне от 0,1 до 2000 мг в день, предпочтительно около 10-1000 мг, более предпочтительно примерно от 25 до 500 мг, которые можно вводить однократно или порциями несколько раз в день.

ПРИМЕРЫ

Далее в настоящем изобретении показаны следующие примеры, которые не предназначены ограничивать объем изобретения.

Тестовый пример 1: Тест на превращение соединения А в соединение B

Самцам крыс породы Вистар в возрасте 8 недель (приобретенным в фирме Japan SLC, Inc) в условиях голода перорально в дозе 1 мг/кг вводили соединение А, меченное 14C, и с помощью высокоэффективной жидкостной радиохроматографии (радио-ВЭЖХ) определяли количество соединения B в плазме, моче и желчи.

В результате соединение A в плазме не было обнаружено через 15 минут после перорального введения соединения A, но обнаружено соединение B в качестве основного метаболита. Также не обнаружено соединения A в моче, собранной в течение 24 часов после введения соединения A, но в качестве основного метаболита обнаружено соединение B. Также соединение A не было обнаружено в желчи, собранной в течение 8 часов после введения соединения A, но в качестве основного метаболита обнаружено соединение B.

Описанные выше результаты подтверждают, что соединение A при поступлении в организм почти полностью метаболизировалось в соединение B.

Тестовый пример 2: Действие соединения A и индометацина на каррагинин-индуцированный отек лап у крыс

Самцам крыс Вистар в возрасте 7 недель (n=5) (приобретенным в фирме Japan SLC, Inc) в правые задние лапы подкожно вводили 0,1 мл 1% λ-каррагинина, чтобы вызвать реакцию отека лапы. Перорально, за 15 и 60 минут до введения каррагинина вводили, соответственно, соединение А в дозах от 1 до 25 мг/кг и индометацин в дозе 5 мг/кг.

Оценку эффективности проводили по объему отека правой задней лапы через три часа после введения каррагинина, когда реакция отека лапы достигала максимума.

Полученные результаты показаны в таблице 1.

По результатам выявлено, что соединение А не проявляло ингибирующего действия в любых дозах, при этом индометацин показывал значительный (p<0,01) ингибирующий эффект.

Таблица 1
Действие соединения A и индометацина на каррагинин-индуцированный отек лап у крыс Группа Объем отека (мл) Контроль 0,82±0,03 Соединение A, 1 мг/кг 0,87±0,04 Соединение A, 5 мг/кг 0,89±0,04 Соединение A, 25 мг/кг 0,67±0,05 Индометацин, 5 мг/кг 0,48±0,04** Среднее значение±стандартная ошибка SE **: P<0,01 по сравнению с контрольной группой

Тестовый пример 3: Оценка эффективности на острой модели крыс при ВБК, индуцированной 3% декстраном сульфата натрия (ДСН), (профилактическое действие)

Одной из наиболее полезных моделей ВБК является модель ВБК, индуцированной 3% декстраном сульфата натрия (ДСН).

Развитие ВБК вызывали путем свободного доступа самцов крыс Вистар в возрасте 7 недель (n=8) (приобретенных в фирме Japan SLC, Inc) к поглощению 3% раствора ДСН. В течение 7 дней после начала приема ДСН наблюдали показатели мягкости фекалий и наличия крови по следующим критериям и получали результаты оценки мягкости фекалий и наличия крови как показатели фекалий отдельного животного.

Критерии:

- Оценка мягкости фекалий (от 0 до 3)

[0: не обнаружено какой-либо патологии (НП),

1: немного мягкие,

2: мягкие,

3: диарея]

- Оценка наличия крови (от 0 до 3)

[0: не обнаружено какой-либо патологии (НП),

1: кровь в фекалиях,

2: ярко-красная кровь, прилипшая к фекалиям,

3: мелена (кровавый понос)]

Через 8 дней после воздействия ДСН внутривенно вводили 1% краситель Эванс голубой в физиологическом растворе в количестве 1 мл на крысу и через 30 минут после этого введения животное умерщвляли для резекции толстой кишки. После фиксации 4% формалиновым буфером в течение 20 минут участка толстой кишки длиной 7-8 см от ануса кишку продольно вскрывали со стороны брыжейки для фотосъемки ректального участка. Зону язвы высчитывали по анализу изображения.

В агатовой ступке приготавливали в виде суспензии соединение А (10 мг/кг/в день), или сульфасалазин (100 мг/кг/в день), или преднизолон (1 мг/кг/в день) в качестве контрольного соединения, которые вводили перорально два раза в день в дозе 5 мл/кг каждой крысе, начиная со дня перед введением ДСН до дня перед вскрытием. При этом в качестве растворителя использовали 1% раствор гидроксипропилметилцеллюлозы (ГПМЦ), который вводили в дозе 5 мл/кг в группе, получавшей растворитель.

Полученные результаты показаны в таблицах 2 и 3.

Более конкретно, в таблице 2 показаны результаты эффективности (степень ингибирования) по оценке фекалий в модели ВБК (среднее значение ± стандартная ошибка) в каждой рассматриваемой группе, и в таблице 3 показаны результаты размеров язвы в модели ВБК (среднее значение ± стандартная ошибка) и действие по ее уменьшению (степень ингибирования) в каждой рассматриваемой группе.

Таблица 2
Эффект уменьшения зоны язвы в ДСН-индуцированной модели ВБК (степень ингибирования)   Оценка фекалий Степень ингибирования (%) Интактная группа (без лечения) 8,6±3,6   Группа введения растворителя 452,9±60,9 0,0 Группа введения сульфазалина (100 мг/кг) 407,0±30,9 8,2 Группа введения преднизолона (1 мг/кг) 337,5±34,1 26,1 Группа введения соединения А (10 мг/кг) 291,3±37,0* 36,4 *P<0,05 по сравнению с группой введения растворителя

Таблица 3
Эффективность по оценке показателей фекалий в ДСН-индуцированной модели ВБК (степень ингибирования)   Оценка фекалий Степень ингибирования (%) Интактная группа (без лечения) 0±0   Группа введения растворителя 3,38±0,68 0,0 Группа введения сульфазалина (100 мг/кг) 2,63±0,50 22,2 Группа введения преднизолона (1 мг/кг) 2,00±0,42 40,7 Группа введения соединения А (10 мг/кг) 2,00±0,53 40,7

Тестовый пример 4: Оценка эффективности соединения А в ДСН-индуцированной крысиной хронической модели ВБК (терапевтический эффект)

В ДСН-индуцированной модели изучали терапевтический эффект введения соединения A.

Развитие колита вызывали путем свободного доступа самцов крыс Вистар в возрасте 7 недель (приобретенных в фирме Japan SLC, Inc) к поглощению 3% раствора ДСН в течение 3 дней и затем, начиная с 4 дня теста, вызывали развитие хронической ВБК путем свободного доступа к поглощению 1% раствора ДСН.

Соединение А (2, 20 мг/кг/в день), 5-аминосалициловая кислота в качестве контроля (5-АСК: 200 мг/кг/в день) и циклоспорин А(Ци-A: 25 мг/кг/в день) вводили животным, начиная с 4 дня теста до дня вскрытия (n=от 8 до 20).

Свойства фекалий у отдельных животных отслеживали до дня перед вскрытием и по тем же критериям, приведенным в тестовом примере 3, для оценки фекалий определяли показатели мягкости фекалий и наличие крови.

Также в день вскрытия внутривенно вводили 1% краситель Эванс голубой в физиологическом растворе в количестве 1 мл на крысу и через 30 минут после этого введения животное умерщвляли для резекции толстой кишки. После фиксации 4% формалиновым буфером в течение 20 минут участка толстой кишки длиной 7-8 см от ануса кишку продольно вскрывали со стороны брыжейки для фотосъемки ректального участка и измерения веса прямой кишки. Состояние и размер эрозивного поражения ректального участка высчитывали по следующим критериям на основе данных макроанализа.

Критерии:

Показатели макроанализа (0-5)

[0: норма,

1: образование эрозии малых размеров,

2: образование незначительных эрозий, без кровотечения,

3: умеренное образование эрозий и слабое кровотечение в малой степени,

4: значительное образование эрозий и кровотечение в малой степени,

5: значительное образование эрозий и обширное кровотечение]

Полученные результаты показаны в фигурах 1, 2, 3 и 4.

Более конкретно, фигура 1 показывает результаты анализа терапевтического действия рассматриваемых лекарств на сокращение толстой кишки при воздействии ДСН, фигура 2 показывает результаты анализа терапевтического действия рассматриваемых лекарств на увеличение веса прямой кишки, фигура 3 показывает результаты изучения терапевтического действия рассматриваемых лекарств на ухудшение показателей фекалий в день перед вскрытием и фигура 4 показывает результаты изучения терапевтического действия рассматриваемых лекарств на увеличение показателей макронаблюдения, соответственно, со средними значениями ± стандартной ошибкой.

Полученные результаты подтвердили значительный положительный эффект (P<0,01) на сокращение толстой кишки при введении соединения А (20 мг/кг/в день), наблюдаемый в группе с введением растворителя (фигура 1), и значительный положительный эффект (P<0,005, P<0,05) на заметное увеличение веса прямой кишки, наблюдаемый в группе с введением растворителя, показанный при введении соединения А (2, 20 мг/кг/в день) (фигура 2).

Дополнительно, значительный эффект (P<0,005) улучшения показателей фекалий в день перед вскрытием подтвержден введением соединения А (2, 20 мг/кг/в день) (фигура 3).

Кроме того, при макроанализе показателей как результат их оценки в категориальном тесте (U-тест) и сегментационном тесте (тест Фишера) подтверждено, что значительный положительный эффект (P=0,0006: категориальный тест, P=0,0003: сегментационный тест) наблюдался в группе с введением соединения (20 мг/кг/в день), и тенденция ингибирования (P=0,0509: категориальный тест, P=0,1161: сегментационный тест), наблюдалась в группе с введением 2 мг/кг (фигура 4).

Описанные выше результаты подтверждают дозозависимый характер терапевтического эффекта соединения А в хронической модели ВБК. С другой стороны, значительные ингибирующие эффекты не были выявлены ни по одному из оцениваемых показателей в случае иммунно-супрессивного препарата Ци-A и противовоспалительного препарата 5-АСК.

Тестовый пример 5: Оценка эффективности соединения B в ДСН-индуцированной крысиной хронической модели ВБК (оценка терапевтического эффекта)

Терапевтический эффект соединения B при пероральном введении изучали тем же образом, как показано в тестовом примере 4, за исключением того, что вместо соединения А применяли соединение B (20 мг/кг/в день) (n=12).

По результатам показатели фекалий в группе с введением растворителя в день перед вскрытием были значительно (P<0,01) увеличены до 1,9±0,25, при этом в группе с введением соединения В было выявлено значительное (P<0,05) их снижение до 0,9±0,24 и также ингибирующий эффект был выявлен при макрооценке показателей.

Тестовый пример 6: Оценка эффективности в крысиной модели ВБК, индуцированной тринитробензолсульфоновой кислотой (ТНБС) (терапевтический эффект)

ТНБС-индуцированная модель как модель ВБК на животных широко используется в качестве модели болезни Крона. В этой связи ТНБС-индуцированная модель на крысах использовали для исследования терапевтического эффекта соединения A.

Самцам крыс линии SD в возрасте 8 недель (приобретенным в фирме Charles River Laboratories Japan, Inc) интраректально вводили ТНБС для развития энтерита и разделяли на группы через 2 дня после введения ТНБС, чтобы начать введение лекарств. Два раза в день перорально вводили растворитель, соединение А (в дозах 2, 20, 50 мг/кг/в день), или преднизолон (6 мг/кг/в день) и крыс вскрывали через 8 дней после введения для проведения макроанализа показателей. Оценку показателей проводили способом, описанном в таблице 4 согласно способу оценки исследователей Jhonh L. Wallace et al. (Gastroenterology 1989; 96: 29-36).

Кроме того, иссекали участок толстой кишки длиной 10 см для измерения веса кишечника во влажном состоянии. Результаты оценки показателей показаны в таблице 5 и результаты измерения веса влажной кишки показаны в таблице 6.

По данным результатам в группе с введением растворителя было выявлено значительное увеличение показателей в макроанализе и повышение веса влажной толстой кишки. Напротив, значительное (P<0,05) улучшение показателей и тенденция повышения веса влажной толстой кишки наблюдались в группа введения соединения А (50 мг/кг). В группах с низкими дозами (2, 10 мг/кг) также наблюдалась тенденция улучшения показателей. С другой стороны, значительное сдерживание (P<0,01) увеличения веса наблюдалось в группе положительного контроля с введением преднизолона. В этой связи значительного сдерживания повышения веса в группе введения соединения А не наблюдалось.

Таблица 4 Значение показателя Критерий 0 Отсутствие застоя, отсутствие кровотечения, отсутствие язв 1 Локальный застой, кровотечение, отсутствие язв 2 Язва с вовлечением застоя или гипертрофии стенки кишки 3 Язва с вовлечением воспаления (единичная) 4 Язвы на двух или больше участках, воспаление или географическая язва (ширина язвы: меньше 1 см) 5 Язвы на двух или больше участках, воспаление или географическая язва (ширина язвы: 1 см или больше) 6 Для оценки кишки добавить 1 пункт на 1 см язвы, которая превышает 2 см в длину ~ Добавить 1 пункт на 1 см язвы, измеряемой горизонтально

Таблица 5
Действие на количество язв толстой кишки в ТНБС-индуцированной модели ВБК Группа Доза Количество случаев Количество язв толстой кишки Группа без лечения - 6 0,0±0,0 Группа с введением растворителя - 11 4,5±0,3## Группа с введением соединения А - 1 мг/кг×2 1 мг/кг×2 10 3,5±0,4 Группа с введением соединения А - 5 мг/кг×2 5 мг/кг×2 10 3,5±0,5 Группа с введением соединения А - 25 мг/кг×2 25 мг/кг×2 11 3,3±0,3* Группа с введением преднизолона - 3 мг/кг×2 3 мг/кг×2 9 3,0±0,5b ##: P<0,01; группа без лечения по сравнению с группой введения растворителя в тесте Манна-Уитни *: P<0,05; группа с введением растворителя по сравнению с группой введения соединения А в тесте Стила b: P<0,05; группа с введением растворителя по сравнению с группой введения преднизолона в тесте Манна-Уитни

Таблица 6
Действие на вес толстой кишки во влажном состоянии в ТНБС-индуцированной модели ВБК Группа Доза Количество случаев Количество язв толстой кишки Группа без лечения - 6 0,70±0,03 Группа с введением растворителя - 11 1,42±0,09** Группа с введением соединения А - 1 мг/кг×2 1 мг/кг×2 10 1,31±0,08 Группа с введением соединения А - 5 мг/кг×2 5 мг/кг×2 10 1,27±0,08 Группа с введением соединения А - 25 мг/кг×2 25 мг/кг×2 11 1,20±0,04 Группа с введением преднизолона - 3 мг/кг×2 3 мг/кг×2 9 1,05±0,09bb ##: P<0,01; группа без лечения по сравнению с группой введения растворителя в тесте Манна-Уитни bb: P<0,01; группа с введением растворителя по сравнению с группой введения преднизолона в тесте Стила

Тестовый пример 7: Изучение перорального введения крысам соединения А в течение 26 недель (тест безопасности)

Самкам и самцам крыс линии SD в возрасте 6 недель(n=15) (приобретенным в фирме Charles River Laboratories Japan, Inc) перорально вводили растворитель (гидроксиметилцеллюлозу) или соединение А (в дозе 100, 300, 1000 мг/кг/в день) и продолжали введение на протяжении 26 недель.

В результате не было выявлено нарушения общего состояния, изменения веса, усвоения пищи и гистопатологии ни в одной группе, получавшей разные дозы.

По данным результатам был вычислен уровень отсутствия проявляющихся нежелательных эффектов (NOAEL) соединения А, составляющий 1000 мг/кг/в день или больше.

Тестовый пример 8: Изучение прямого действия активации Т-клеток с помощью соединения В

В ДСН-индуцированной модели изучали терапевтический эффект введения соединения A.

Самцов крыс линии Balb/c в возрасте 7 недель (приобретенных в фирме Japan SLC, Inc) сенсибилизировали суспензией геля гидроокиси алюминия и овальбумина, которую вводили интраперитонеально или подкожно в обе паховые области на 1 и 14 дни, и извлекали селезенку на 21 день для приготовления суспензии спленоцитов. После удаления эритроцитов к суспендированным в культуральной среде спленоцитам добавляли соединение В (10 мкМ) и овальбумин и смесь инкубировали при 37ºС в атмосфере 5% СО2.

После инкубирования в течение 6 часов в супернатанте проводили количественное определение ИЛ-4 и через 24 часа количественно определяли ИЛ-2, ИЛ-5 и ИФН-γ (интерферон-γ) с помощью твердофазного иммуноферментного анализа ELISA (набор для ELISA производства фирмы ENDOGEN).

В результате выявлено повышение уровней ИЛ-4, ИЛ-2, ИЛ-5 и ИФН-γ в контрольной группе и в этой связи отсутствие ингибирования продукции указанных цитокинов соединением В. В то же время преднизолон практически полностью ингибировал ИЛ-2, ИЛ-5 и ИФН-γ, кроме ИЛ-4.

По вышеописанным результатам предполагается, что фармацевтическая композиция, содержащая соединение А и соединение В в качестве действующих компонентов, в действительности обладает более мощным действием против ВБК, чем сульфасалазин или 5-АСК, и действует настолько эффективно, как преднизолон, или эффективнее. Дополнительно, считается, что пероральный препарат, содержащий соединение А и соединение В в качестве действующих компонентов, обладает не только профилактическим действием, но также имеет терапевтический эффект. Также считается, что, поскольку повышение веса очевидно сдерживается в группе с введением преднизолона и в группе с введением циклоспорина и не наблюдается побочных эффектов, таких как сдерживание повышения веса в группах, получавших соединение А и соединение В, пероральное лекарственное средство, содержащее в качестве действующих компонентов соединение А и соединение В, имеет высокую безопасность.

Примеры производства лекарств: Пример рецептуры профилактической или терапевтической композиции против воспалительных болезней кишечника

Ниже приведены примеры изготовления фармацевтической композиции для профилактики или лечения воспалительных болезней кишечника согласно настоящему изобретению и рецептуры для изготовления указанных композиций.

Пример рецептуры 1: Таблетки

Таблица 7 Соединение А 2,5 г Гипромеллоза 0,5 г Лактоза 11,5 г 6% ГПЦ (гидроксипропилцеллюлоза) лактоза 8 г Картофельный крахмал 2 г Магния стеарат 0,5 г Всего 25 г

Пример рецептуры 2: Капсулы

Таблица 8 Соединение А 2,5 г Гипромеллоза 0,5 г Картофельный крахмал 4 г Магния стеарат 0,5 г Всего 25 г

Пример рецептуры 3: Состав для клизмы

Таблица 9 Соединение А 1 мг/мл Трис(гидроксиметил)аминометан 1,2 мг/мл Натрия карбокиметилцеллюлоза) лактоза 15 мг/мл Хлористоводородная кислота q.v. Магния стеарат 0,5 г Уровень рН 7,0

Предложены: фармацевтическая композиция для профилактики или лечения воспалительных болезней кишечника (ВБК), содержащая 7,8-диметокси-4(5Н),10-диоксо-1Н-1,2,3-триазоло[4,5-с][1]-бензоазепин, или его пролекарство, предпочтительно 2-(1-изопропоксикарбонилокси-2-метилпропил)-7,8-диметокси-4(5Н),10-диоксо-2Н-1,2,3-триазоло[4,5-с][1]бензоазепин, или его фармацевтически приемлемую соль; соответствующие способ профилактики или лечения ВБК и применение перечисленных соединений для изготовления профилактического или терапевтического вещества против ВБК. Показана эффективность заявленной фармацевтической композиции, более мощная, чем сульфасалазина и преднизолона по указанному назначению, в сочетании с высокой безопасностью. Показаны немногочисленные побочные эффекты соединений, отсутствие ингибирования продукции ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-5, ИФН-гамма, отсутствие сдерживания повышения веса в результате лечения. Фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению может проявлять мощное профилактическое и терапевтическое действие даже при тяжелой форме заболевания при резистентности к общепринятым терапевтическим средствам. 3 н. и 25 з.п. ф-лы, 4 ил., 9 табл.

1. Фармацевтическая композиция для профилактики или лечения воспалительных болезней кишечника (ВБК), содержащая 7,8-диметокси-4(5Н),10-диоксо-1Н-1,2,3-триазоло[4,5-с][1]-бензоазепин, его пролекарство или фармацевтически приемлемую соль.

2. Фармацевтическая композиция по п.1, содержащая 2-(1-изопропок-сикарбонилокси-2-метилпропил)-7,8-диметокси-4(5Н), 10-диоксо-2Н-1,2,3-триазоло[4,5-с][1]бензоазепин или его фармацевтически приемлемую соль в качестве пролекарства.

3. Фармацевтическая композиция по п.1, которую вводят перорально.

4. Фармацевтическая композиция по п.1, которая дополнительно содержит фармацевтически приемлемый носитель.

5. Фармацевтическая композиция по п.2, которая дополнительно содержит фармацевтически приемлемый носитель.

6. Фармацевтическая композиция по п.3, которая дополнительно содержит фармацевтически приемлемый носитель.

7. Фармацевтическая композиция по любому из пп.1-6, где профилактика означает предотвращение рецидива воспалительных болезней кишечника.

8. Фармацевтическая композиция по п.7, где воспалительная болезнь кишечника представляет собой язвенный колит или болезнь Крона.

9. Способ предупреждения или лечения воспалительной болезни кишечника (ВБК), который включает введение млекопитающему профилактически или терапевтически эффективного количества 7,8-диметокси-4(5Н), 10-диоксо-1Н-1,2,3-триазоло[4,5-с][1] бензоазепина, его пролекарства или его фармацевтически приемлемой соли.

10. Способ по п.9, в котором вводимое соединение представляет собой 2-(1-изопропоксикарбонилокси-2-метилпропил)-7,8-диметокси-4(5Н), 10-диоксо-2Н-1,2,3-триазоло[4,5-с][1]бензоазепин или его фармацевтически приемлемую соль.

11. Способ по п.9, в котором введение осуществляют пероральным путем.

12. Способ по п.10, в котором введение осуществляют пероральным путем.

13. Способ по п.9, включающий введение эффективного количества соединения вместе с фармацевтически приемлемым носителем.

14. Способ по п.10, включающий введение эффективного количества соединения вместе с фармацевтически приемлемым носителем.

15. Способ по п.11, включающий введение эффективного количества соединения вместе с фармацевтически приемлемым носителем.

16. Способ по п.12, включающий введение эффективного количества соединения вместе с фармацевтически приемлемым носителем.

17. Способ по любому из пп.9-16, в котором предупреждение означает предотвращение рецидива воспалительных болезней кишечника.

18. Способ по п.17, в котором воспалительная болезнь кишечника представляет собой язвенный колит или болезнь Крона.

19. Применение 7,8-диметокси-4(5Н), 10-диоксо-1Н-1,2,3-триазоло[4,5-с][1]-бензоазепина, его пролекарства или фармацевтически приемлемой соли для изготовления профилактического или терапевтического вещества против воспалительных болезней кишечника.

20. Применение по п.19, где соединение представляет собой 2-(1-изопро-поксикарбонилокси-2-метилпропил)-7,8-диметокси-4(5Н), 10-диоксо-2Н-1,2,3-триазоло[4,5-с][1]бензоазепин или его фармацевтически приемлемую соль.

21. Применение по п.19, где профилактическое или терапевтическое средство представляет собой терапевтическое средство для перорального введения.

22. Применение по п.20, где профилактическое или терапевтическое средство представляет собой терапевтическое средство для перорального введения.

23. Применение по п.19, где профилактическое или терапевтическое средство дополнительно содержит фармацевтически приемлемый носитель.

24. Применение по п.20, где профилактическое или терапевтическое средство дополнительно содержит фармацевтически приемлемый носитель.

25. Применение по п.21, где профилактическое или терапевтическое средство дополнительно содержит фармацевтически приемлемый носитель.

26. Применение по п.22, где профилактическое или терапевтическое средство дополнительно содержит фармацевтически приемлемый носитель.

27. Применение по любому из пп.19-26, где предупреждение означает предотвращение рецидива воспалительных болезней кишечника.

28. Применение по п.27, где воспалительная болезнь кишечника представляет собой язвенный колит или болезнь Крона.