ЖИДКОСТЬ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ООЦИСТ КОКЦИДИЙ, ЦИСТ БАЛАНТИДИЙ И ЖИАРДИЙ, ЯИЦ ГЕЛЬМИНТОВ РАЗНЫХ КЛАССОВ, КЛЕЩЕЙ, НАСЕКОМЫХ, ИХ ОТДЕЛЬНЫХ СТАДИЙ РАЗВИТИЯ Российский патент 2013 года по МПК G01N33/48 A61D99/00 

Изобретение относится к ветеринарии, медицине и предназначено для выявления ооцист кокцидий, цист балантидий и жиардий (лямблий), яиц гельминтов разных классов (нематоды, трематоды и цестоды), клещей, насекомых, их отдельных стадий развития из соскобов с животных, птиц, из субстратов, из объектов внешней среды и фекальных масс, путем их осаждения и флотации.

Известны растворы для выявления ооцист простейших и яиц гельминтов: насыщенный раствор поваренной соли NaCl; раствор аммиачной селитры - нитрата аммония NH₄NO₃; жидкость Дарлинга (прототип), представляющая собой смесь глицерина и насыщенного раствора соли NaCl в соотношении 1:1. (1. Практическая паразитология, под ред. проф. Д.В.Виноградова-Волжинского Л. 1977; 2. Справочник ветеринарного лаборанта под ред. В.Я.Антонова, М., Колос, 1981; 3. Котельников Г.А. Гельминтологические исследования животных и окружающей среды. Справочник, М., 1984; 4. Практикум по диагностике инвазионных болезней сельскохозяйственных животных. Под ред. М.Ш.Акбаева. М., Колос, 1994; 5. Ларионов С.В., Давыдов Ю.М., Бычкова Л.В. Практикум по паразитологии. Саратов, ФГОУ ВПО «Саратовский ГАУ», 2003).

Однако рассмотренные растворы не являются достаточно эффективными для требуемых исследований, так как яйца некоторых трематод - фасциол и парамфистом не всплывают, растворы не позволяют выделять клещей, насекомых, их отдельные стадии развития из соскобов с животных и птиц, из субстратов, из объектов внешней среды и из фекальных масс. Кроме того, кристаллизация соли в пленке жидкости на предметном стекле затрудняет обнаружение яиц гельминтов, и делает невозможным обнаружение ооцист простейших.

Исследование фекалий с помощью жидкости Дарлинга осуществляется следующим образом: осадок фекальных масс перемешивают с жидкостью и центрифугируют 2 мин со скоростью вращения 1500 об/мин, что приводит к флотации. Яйца гельминтов всплывают на поверхностную пленку в пробирке, с которой их снимают копрологической петлей для обнаружения ооцист простейших, яиц гельминтов из фекальных масс.

Жидкость Дарлинга позволяет проводить копрологические исследования, но относительная плотность жидкости Дарлинга (1,20-1,22 г/мл) не позволяет применять ее при диагностике трематодозов.

Задача изобретения - создание жидкости с многофункциональными возможностями для диагностики ооцист кокцидий, цист балантидий и жиардий, яиц гельминтов разных классов, клещей, насекомых, их отдельных стадий развития из соскобов с животных, птиц, из субстратов, из объектов внешней среды и фекальных масс, путем их осаждения и флотации.

Технический результат поставленной задачи достигается тем, что в жидкость для диагностики ооцист кокцидий, цист балантидий и жиардий, яиц гельминтов разных классов, клещей, насекомых, их отдельных стадий развития входят следующие компоненты: первый - вода - 48% и натрия хлорид - 25%, второй: также в виде жидкости, содержащей: лаурилсульфат натрия - 16,3%, (насыщенный раствор соли), полиэтиленгликоль - 10%, бензоат натрия - 0,7%, при этом первый и второй компоненты смешивали между собой в соотношении 1:1. Жидкость для диагностики ооцист кокцидий, цист балантидий и жиардий, яиц гельминтов разных классов, клещей, насекомых, их отдельных стадий развития гомогенная, опалесцирующая, полупрозрачная, сиропообразной консистенции.

Готовую жидкость переливали в колбу, этикетировали и использовали следующим образом. Сначала центрифугированием субстратов, объектов внешней среды, фекальных масс получали осадок, содержащий ооцист кокцидий, цист балантидий и жиардий (лямблий), яйца гельминтов разных классов (нематоды, трематоды и цестоды), клещей, насекомых, их отдельных стадий развития из соскобов с животных, птиц, который перемешивали с готовой жидкостью. Полученную смесь вновь центрифугировали 4-5 мин со скоростью вращения центрифуги 1500 об/мин, что приводило к флотации объектов исследования, которые находились в верхнем слое жидкости пробирки. Для микроскопирования объекты исследования снимали копрологической петлей с поверхностной пленки жидкости.

За счет разницы относительной плотности жидкости для диагностики ооцист кокцидий, цист балантидий и жиардий, яиц гельминтов разных классов, клещей, насекомых, и их отдельных стадий развития (1,33-1,36 г/л) и объектов исследования они всплывали и находились в ее верхнем слое. Выделение ооцист кокцидий, цист балантидий и жиардий (лямблий), яиц гельминтов разных классов (нематоды, трематоды и цестоды), клещей, насекомых, их отдельных стадий развития из соскобов с животных, птиц, из субстратов, из объектов внешней среды и фекальных масс, путем их осаждения и флотации проводили по общепринятой методике с использованием созданной жидкости. Эффективность исследований достигала 100%.

Практическая апробация осуществлялась в звероводческих и животноводческих хозяйствах Ленинградской области. В клинике Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины проводилось обследование животных: собак, кошек, пушных зверей, крупного рогатого скота.

При обследовании животных, которым были поставлены предварительные диагнозы: саркоптоз, отодектоз, хориоптоз, демодекоз, псороптоз, хейлетиеллез, бовиколез, в каждом отдельном случае делали традиционный соскоб, но помещали его в пробирку с жидкостью для диагностики ооцист кокцидий, цист балантидий и жиардий, яиц гельминтов разных классов, клещей, насекомых, и их отдельных стадий развития.

Далее смесь центрифугировали 4-5 мин при вращении 1500 об/мин, затем копрологической петлей снимали верхнюю пленку, помещали ее на предметное стекло и микроскопировали, при этом в 100% случаев лабораторным исследованием подтверждали предварительный диагноз, устанавливая окончательный. Субстраты, собранные в животноводческих помещениях и звероводческих хозяйствах (пыль, скопление грязи, жиропот, смесь помета и шерсти и т.д.) исследовали по уже отработанной методике с использованием созданной жидкости и в 100% случаев обнаруживали всех вышеперечисленных паразитов. В табл.1 и 2 приведены результаты апробации.

Таблица 1 Результаты диагностики арахноэнтомозов при использовании жидкости для диагностики ооцист кокцидий, цист балантидий и жиардий, яиц гельминтов разных классов, клещей, насекомых, и их отдельных стадий развития. Группа живот. (n) Болезни Саркоптоз, % пораж. Отодектоз, % пораж. Хориоптоз, % пораж. Демодекоз, % пораж. Псороптоз, % пораж. Хейлетиоз, % пораж. Бовиколез, % пораж. Собаки (n=150) 12 24 0 42 0 10 0 Кошки (n=210) 18,6 80 0 0 0 1,4 0 Песцы (n=320) 45 55 0 0 0 0 0 КРС* (n=180) 1,1 0 38,9 30,6 39 0 20 Примечание: * - у крупного рогатого скота было выявлено сочетанное проявление хориоптоза, демодекоза и бовиколеза.

Таблица 2 Результаты выявления гельминтозов и протозоозов при использовании жидкости для диагностики ооцист кокцидий, цист балантидий и жиардий, яиц гельминтов разных классов, клещей, насекомых, и их отдельных стадий развития. Группа животных (n) Болезни Аскаридатозы, % пораж. Трихоцефалезы, % пораж. Трематодозы, % пораж. Стронгилятозы, % пораж. Протозоозы, % пораж. Собаки (n=150) 68,6 2,85 0 5,7 38,6 Кошки (n=210) 30 0 4 0 50 Песцы (n=320) 72 0 5 2 40 КРС (n=180) 1,2 10 50 24 20 Примечание: Во всех исследованных группах у отдельных животных была выявлена сочетанная инвазия.

В отличие от известных жидкостей, созданная жидкость для диагностики ооцист кокцидий, цист балантидий и жиардий, яиц гельминтов разных классов, клещей, насекомых, и их отдельных стадий развития позволяет обследовать субстраты (например, пыль), находящиеся в звероводческих и животноводческих помещениях. Для этой цели брали навески образцов субстратов по 1 г, смешивали с созданной жидкостью и центрифугировали 4-5 мин при 1500 об/мин, затем копрологической петлей снимали верхний слой, помещали на предметное стекло и проводили микроскопию.

Таким образом, результаты вышеизложенных опытов позволили сделать заключение: использование созданной жидкости в диагностических исследованиях позволили 100% подтвердить диагнозы во всех случаях, путем выявления ооцист кокцидий, цист балантидий и жиардий (лямблий), яиц гельминтов разных классов (нематоды, трематоды и цестоды), клещей, насекомых, их отдельных стадий развития из соскобов с животных, птиц, из субстратов, из объектов внешней среды и фекальных масс. Кроме того, по сравнению с вышеуказанными и другими известными жидкостями (жидкость Дарлинга), созданная жидкость является оригинальной композицией и обладает рядом преимуществ:

1. Экспресс-диагностикум для лабораторных исследований;

2. Позволяет использовать ее при подтверждении диагнозов не только на гельминтозы и кишечные протозоозы, но и на саркоптоидозы, демодекозы и некоторые энтомозы, т.е. увеличивает спектр определяемых болезней;

3. Действие компонентов позволяет очищать соскобы и пробы фекальных масс от сопутствующих артефактов, затрудняющих просмотр препаратов при микроскопии;

4. Компоненты, входящие в состав жидкости, не кристаллизуются;

5. Жидкость позволяет усилить эффект четкости объекта в микроскопе;

6. В состав жидкости входит бензонат натрия, что препятствует развитию бактериальной микрофлоры, поэтому приготовленную жидкость можно хранить более 30 дней;

7. Жидкость в предлагаемой композиции не токсична для людей;

8. Жидкость не требует особых условий хранения и транспортировки, при дневном свете не теряет своих свойств, сохраняет гомогенность;

9. Жидкость можно использовать extempore после ее приготовления.

Изобретение относится к ветеринарии, медицине и предназначено для выявления ооцист кокцидий, цист балантидий и жиардий, яиц гельминтов разных классов, клещей, насекомых и их отдельных стадий развития. Жидкость содержит следующие компоненты: первый компонент, включающий воду - 48% и натрия хлорид - 25%, второй компонент, включающий лаурилсульфат натрия - 16,3%, насыщенный раствор соли, полиэтиленгликоль - 10% и бензоат натрия - 0,7%. Первый и второй компоненты смешивали между собой в соотношении 1:1. Жидкость является гомогенной, опалесцирующей, полупрозрачной, сиропообразной консистенции. Жидкость в предлагаемой композиции не токсична для людей, не требует особых условий хранения, увеличивает спектр определяемых болезней. 2 табл.

Жидкость для диагностики ооцист кокцидий, цист балантидий и жиардий, яиц гельминтов разных классов, клещей, насекомых, их отдельных стадий развития содержит следующие компоненты: первый - вода - 48% и натрия хлорид - 25%, второй - также в виде жидкости, содержащей: лаурилсульфат натрия - 16,3%, насыщенный раствор соли, полиэтиленгликоль - 10%, бензоат натрия - 0,7%, при этом первый и второй компоненты смешивали между собой в соотношении 1:1, при этом жидкость является гомогенной, опалесцирующей, полупрозрачной, сиропообразной консистенции.