СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ИНДУЦИРОВАННЫХ 3,4-БЕНЗ(α)ПИРЕНОМ ОПУХОЛЕЙ У СПЛЕНЭКТОМИРОВАННЫХ ЖИВОТНЫХ Российский патент 2013 года по МПК A61K35/28 A61K31/00 G09B23/28 

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальным исследованиям в онкологии, и может быть использовано для усиления действия противоопухолевых препаратов.

Известен «Способ повышения противоопухолевой активности циклофосфана, инкубированного с аутокровью или эритролейкотромбомассой животного» (Солдаткина Н.В. Возможности аутогемохимиотерапии в экспериментальной онкологии и изучение некоторых механизмов ее действия, дис. к.м.н., 2000, 202 с.). Циклофосфан действует разрушающе на опухолевые клетки, но побочное токсическое действие на организм животного-опухоленосителя с саркомой-45 в высокой дозе (170 мг/кг) приводит к торможению опухоли в пределах 61,95%-65,22% - на 4 сутки после 1 введения химиопрепарата и 10,83-15,44% - на 4 сутки после 2 введения химиопрепарата. Интервал между введениями - 5 дней. Увеличение дозы противоопухолевого препарата приводило к массовой гибели животных.

Известен «Способ усиления противоопухолевого действия цитостатиков в сочетании с индометацином» (Юнкер В.М. и др. Модифицирующее действие циклофосфамида и индометацина на развитие метастазов в легких у мышей. См. «Актуальные проблемы химиотерапии опухолей». Сб. материалов сов. АН АМН МЗ СССР, Черноголовка, 1987, с.167-168). Индометацин является одним из ингибиторов синтеза простагландинов. Как утверждают авторы, влияние однократной обработки индометацином ин витро в дозе 10^-6 М спленоцитов животных опухоленосителей (с индуцированной опухолью) приводит к увеличению антиметастатической активности, усиливая противоопухолевое действие цитостатиков. Однако в экспериментальных исследованиях отсутствуют сведения о продолжительности жизни животных после проведения различных вариантов противоопухолевой терапии.

Прототипом нашего изобретения явилось изобретение «Способ повышения противоопухолевой эффективности в эксперименте». Бордюшков Ю.Н., Кирсанова Л.Д. Патент на изобретение №2135178, 27.08.1999. Бюл. №24.

У крыс с саркомой-45, с объемом опухоли около 1 см³, слева под кожу передней брюшной стенки выводилась селезенка. Во время операции в селезенку вводилось 3 мг циклофосфана и внутрибрюшинно 1,5 мг индометацина. Затем каждые 3 дня в селезенку вводилось 10 мг циклофосфана до общей дозы 35 мг и в/брюшинно 1,5 мг индометацина суммарной дозой 6 мг. Контрольная группа получала только циклофосфан внутривенно в той же дозе. Через 22 дня после перевивки величина опухолей в опытной группе животных была в 3 раза меньше, а продолжительность жизни в 3 раза больше по сравнению с контрольной группой животных. Результатом применения циклофосфана в опытной группе было уменьшение опухоли на 80% от ее исходного объема, в то время как у животных контрольной группы опухоль превысила исходный объем до 10%.

Однако известный способ имеет недостатки, в экспериментальном исследовании была использована наиболее щадящая, в плане повреждающего действия на органы и ткани, с меньшей скоростью удельного роста опухолевая модель перевивной саркомы-45; воздействие на животных осуществлялось при условии сохранения органа - селезенки.

Целью изобретения является более длительная продолжительность жизни экспериментальных животных и высокая противоопухолевая эффективность в условиях спленэктомии на индуцированной 3,4-бенз(α)пиреном, более агрессивной опухолевой модели.

Поставленная цель достигается тем, что выделенную селезенку белой беспородной крысы измельчают в 5 мл физиологического раствора в стерильных условиях на льду, полученную жидкость в центрифужной пробирке отстаивают 10 минут, собирают надосадочную жидкость, разделяют на 2 равные части, одну помещают в среду 199 и оставляют в холодильнике при t 4-6°С на 24 часа, другую часть трижды отмывают стерильным физиологическим раствором и центрифугируют при 1,5 тыс. об/мин в течение 5 минут, полученный осадок разводят до нужной концентрации спленоцитов физиологическим раствором, количество взвеси 1 мл на 100 г веса животного, концентрация клеток селезенки - 5-6·10⁹/л, дозировка циклофосфана в 1 день 40 мг/кг, во 2 день - 48 мг/кг, суммарная доза - 88 мг/кг, взвесь спленоцитов с циклофосфаном инкубируют при температуре 37°С в течение 40 минут и осуществляют двукратное, с интервалом 24 часа внутривенное введение клеточных элементов селезенки, инкубированных с химиопрепаратом.

Изобретение «Способ лечения экспериментальных индуцированных 3,4-бенз(α)пиреном опухолей у спленэктомированных животных» является новым, так как оно неизвестно в области экспериментальных исследований в онкологии в разделе усиления действия противоопухолевых препаратов на экспериментальных животных.

Новизна изобретения заключается в том, что способ лечения экспериментальных индуцированных 3,4-бенз(α)пиреном опухолей у спленэктомированных животных включает двукратное с интервалом 24 часа внутривенное введение клеточных элементов селезенки, инкубированной с химиопрепаратом. Дозировка циклофосфана в 1 день - 40 мг/кг, во 2 день - 48 мг/кг, суммарная доза - 88 мг/кг. Количество однократной вводимой взвеси спленоцитов - 1 мл на 100 г животного, концентрация клеток селезенки - 5-6·10⁹/л.

Изобретение является промышленно применимым, так как может быть использовано в здравоохранении, в медицинских учреждениях, научно-исследовательских онкологических институтах и диспансерах, обеспечивающих экспериментальные исследования в онкологии.

Способ лечения экспериментальных индуцированных 3,4-бенз(α)пиреном опухолей у спленэктомированных животных выполняется следующим образом: белым беспородным крысам обоего пола основной группы, массой 180-280 грамм, с индуцированными подкожно 3,4-бенз(α)пиреном опухолями, под эфирным наркозом в стерильных условиях проводилась спленэктомия. Выделенную селезенку измельчали при помощи 2 пинцетов в 5 мл физиологического раствора в стерильных условиях на льду. Полученную жидкость собирали в центрифужную пробирку и давали отстояться 10 минут. Собирали надосадочную жидкость стерильным шприцем и разделяли на 2 равные части. Одну помещали в среду 199 и оставляли в холодильнике при t 4-6°С на 24 часа. Другую трижды отмывали стерильным физраствором и центрифугировали при 1,5 тыс. об/мин в течение 5 минут. Полученный осадок разводили до нужной концентрации спленоцитов физиологическим раствором. К рассчитанному количеству взвеси спленоцитов добавляли рассчитанное количество циклофосфана. В опытах был использован циклофосфан (ОАО "Биохимик", г.Саранск). Количество взвеси - 1 мл на 100 г веса животного; количество циклофосфана - в 1 день - 40 мг/кг, во 2 день - 48 мг/кг. Суммарная доза - 88 мг/ кг. Взвесь спленоцитов с циклофосфаном инкубировали в термостате при температуре 37°С в течение 40 минут. После инкубации препарат вводили в яремную вену крыс. На следующий день все манипуляции со спленоцитами, оставленными в среде 199, повторяли и повторно вводили взвесь клеток с циклофосфаном через 24 часа от 1 введения.

Полученные результаты

У крыс основной группы продолжительность жизни была в 9,0 раз выше, чем у спленэктомированных крыс с индуцированными опухолями после внутривенного введения циклофосфана в тех же дозах (К2), и в 2,1 раза выше, чем у спленэктомированных крыс без введения химиопрепарата (К1),

Средний объем опухоли у крыс после аутоспленохимиотерапии был достоверно ниже контрольного показателя (К1): на 7 сутки от 2 введения цитостатика - в 5,7 раза, на 14 сутки - в 5,8 раза. В остальные сроки наблюдения достоверность отличий между этими группами не наблюдалось из-за уменьшения количества контрольных животных в результате их более ранней гибели, чем в основной группе. Эффективность экспериментальной химиотерапии оценивали по показателю процента торможения роста опухоли (ПТРО) и коэффициенту эффективности химиотерапии (γ), которые позволили более наглядно проследить динамику опухолевого роста в исследованных группах. ПТРО при аутоспленохимиотерапии был минимальным после 1 введения циклофосфана и максимальным на 7-14 сутки от 2 введения химиопрепарата с постепенным уменьшением величины с 21 суток наблюдения. Коэффициент γ, характеризующий эффективность экспериментальной химиотерапии циклофосфана, составил 0,98, что свидетельствовало об одинаковой противоопухолевой эффективности у крыс как с внутривенным введением циклофосфана на физрастворе, так и на клеточных элементах селезенки - перед 2 введением препарата.

Таким образом, полученные данные, свидетельствующие о более высокой продолжительности жизни крыс основной группы, а также высокой противоопухолевой эффективности используемой нами модели экспериментальной аутоспленохимиотерапии, позволяют говорить о целесообразности использования клеточных элементов селезенки в схемах химиотерапии в тех случаях, когда имеет место спленэктомия у онкологических больных.

Технико-экономическая эффективность "Способа лечения экспериментальных индуцированных 3,4-бенз(α)пиреном опухолей у спленэктомированных животных" заключается в высокой противоопухолевой эффективности и увеличении продолжительности жизни крыс. Эффективный клинический результат, полученный в модели экспериментальной аутоспленохимиотерапии, свидетельствует о целесообразности использования клеточных элементов селезенки в схемах химиотерапии в тех случаях, когда имеет место спленэктомия у онкологических больных.

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальным исследованиям в онкологии, и может быть использовано для усиления действия противоопухолевых препаратов. Способ лечения экспериментальных индуцированных 3,4-бенз(α)пиреном опухолей у спленэктомированных животных включает экспериментальное исследование по противоопухолевому воздействию на животных, при этом выделенную селезенку белой беспородной крысы измельчают в 5 мл физиологического раствора в стерильных условиях на льду, полученную жидкость в центрифужной пробирке отстаивают 10 минут, собирают надосадочную жидкость, разделяют на 2 равные части, одну часть помещают в среду 199 и оставляют в холодильнике при t 4-6°С на 24 часа, другую часть трижды отмывают стерильным физиологическим раствором и центрифугируют при 1,5 тыс. об/мин в течение 5 минут, полученный осадок разводят до нужной концентрации спленоцитов физиологическим раствором, количество взвеси 1 мл на 100 г веса животного, концетрация клеток селезенки - 5-6·10⁹/л, дозировка циклофосфана в 1 день 40 мг/кг, во 2 день - 48 мг/кг, суммарная доза - 88 мг/ кг, взвесь спленоцитов с циклофосфаном инкубируют при температуре 37°С в течение 40 минут и осуществляют двукратное с интервалом 24 часа внутривенное введение клеточных элементов селезенки, инкубированных с химиопрепаратом. Изобретение обеспечивает высокую протвоопухолевую эффективность, увеличение продолжительности жизни крыс.

Способ лечения экспериментальных индуцированных 3,4-бенз(α)пиреном опухолей у спленэктомированных животных, включающий экспериментальное исследование по противоопухолевому воздействию на животных, отличающийся тем, что выделенную селезенку белой беспородной крысы измельчают в 5 мл физиологического раствора в стерильных условиях на льду, полученную жидкость в центрифужной пробирке отстаивают 10 мин, собирают надосадочную жидкость, разделяют на 2 равные части, одну часть помещают в среду 199 и оставляют в холодильнике при t 4-6°C на 24 ч, другую часть трижды отмывают стерильным физиологическим раствором и центрифугируют при 1,5 тыс.об. в мин в течение 5 мин, полученный осадок разводят до нужной концентрации спленоцитов физиологическим раствором, количество взвеси 1 мл на 100 г веса животного, концетрация клеток селезенки - 5-6·10⁹/л, дозировка циклофосфана в 1 день 40 мг/кг, 2 день - 48 мг/кг, суммарная доза - 88 мг/кг, взвесь спленоцитов с циклофосфаном инкубируют при температуре 37°С в течение 40 мин и осуществляют двукратное с интервалом 24 ч внутривенное введение клеточных элементов селезенки, инкубированных с химиопрепаратом.