СПОСОБ ОЦЕНКИ ЭФФЕКТИВНОСТИ ЛЕЧЕНИЯ ХРОНИЧЕСКИХ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ПРОЦЕССОВ ДЫХАТЕЛЬНОЙ СИСТЕМЫ Российский патент 2013 года по МПК G01N33/48 G01N33/53 

Изобретение относится к пульмонологии, оториноларингологии, иммунологии и может быть использовано для оценки эффективности лечения хронических воспалительных процессов дыхательной системы.

В настоящее время существует значительная трудность в оценке эффективности лечения хронических воспалительных заболеваний дыхательной системы. Во-первых, в связи со сложностью постановки диагноза бронхит, так как рентгенологически он трудно выявляется. Во-вторых, такие воспалительные процессы, как трахеит, трахеобронхит, имеют большое распространение и высокий уровень хронизации; течение данных заболеваний отличается более частыми обострениями и сокращением продолжительности ремиссии. Очень часто воспаление вызвано аутомикрофлорой, резистентность которой к антибиотикам очень велика.

Показано, что при рецидивирующих инфекционно-воспалительных заболеваниях органов дыхания часто выявляется селективный дефицит иммуноглобулина А и наличие длительной гипоглобулинемии (Дранник Г.Н. Клиническая иммунология и аллергология. // М.: Мед. информ. агентство. - 2003. - 603 с.). С другой стороны, у больных хроническим риносинуситом отмечают достоверное увеличение концентрации иммуноглобулинов А и М в сыворотке крови (Коленчукова О.А. Особенности иммунного статуса у лиц с хроническим гайморитом. // Медицинская иммунология. - 2005. - Т.7, №2-3. - С.260-261; Eun-Hwan. Arnmiotic Fluid Inflammatory Cytokines and Intranterme Infection on Preterm Labor with Intoel Hembranes // Korean J. Obstet. Gynecol. - 1998. - Vol.41(2). - P.545-558). Ряд авторов отмечают повышение уровня лизоцима, снижение концентрации маркера железистой секреции лактоферрина и повышение уровня эластазы нейтрофилов в носовых смывах больных хроническим риносинуситом по сравнению со здоровыми лицами (Ященко М.И. Иммунологические аспекты хронических синуситов. // Х съезд оториноларингологов Украины, Судак. Тезисы докладов. - К., 2005. - С.64-65; Хмельницкая Н.М. Оценка иммунного статуса слизистых оболочек при хроническом риносинусите. // Вестник оториноларингологии. - 1998. - №4. - С.47-50).

Известен способ прогнозирования эффективности лечения хронического гнойного риносинусита (заявка на изобретение №2008115387, РФ. Опубл. 20.10.2009). В процессе терапии рекомбинантным интерлейкином-1 у больных определяют наличие низкопродуцирующего аллеля гена цитокина, при подтверждении его наличия гарантируют высокую эффективность лечения. Таким образом, способ апробирован для прогнозирования эффективности лечения только рекомбинантным интерлейкином-1, что является ограничивающим фактором и не позволяет врачу в случае неэффективности лечения назначить пациенту другой препарат. Во-вторых, при осуществлении способа-аналога требуется специально оборудованная ПЦР-лаборатория, что не всегда посильно для стандартных медицинских учреждений. Заявленное нами изобретение отличает доступность, экономичность и простота в постановке исследования.

Существует способ оценки эффективности лечения хронического катарального бронхита (заявка на изобретение №95107868, РФ. Опубл. 10.06.1997). Эффективность лечения оценивают по показателям общей антипротеолитической активности бронхоальвеолярного смыва. При значениях, равных или выше 12 мкг/мг белка на 10 день лечения и 18 мкг/мг белка на 21 день лечения, оценивают лечение как эффективное, а при значениях ниже указанных уровней как неэффективное. Следует подчеркнуть, что возникает необходимость интерпретации результатов не только в зависимости от уровня воспаления, но и в зависимости от применения бронхолитических и разжижающих мокроту лекарственных препаратов. Последние могут увеличивать количество белка в транссудате бронхов.

Прототипом является способ оценки эффективности лечения риносинуситов (патент РФ №2200319. Опубл. 10.03.2003), в котором проводят исследование фагоцитарной активности нейтрофилов в риноцитограммах и в цитограммах промывных жидкостей из воспаленных пазух в динамике. Дополнительно определяют количество деструктированных нейтрофилов, содержащих микроорганизмы, и вычисляют показатель незавершенного фагоцитоза. При значениях показателя менее 50% в риноцитограммах и менее 32% в цитограммах промывных жидкостей эффективность лечения оценивают как высокую. Недостатком является фактическое исключение больных с исходно низким уровнем фагоцитарной защиты, которые составляют большинство при хроническом воспалительном процессе. В отличие от вышеописанного способа предложенное нами изобретение позволяет проанализировать индивидуальную динамику лечения применительно к конкретному больному и своевременно скорректировать тактику лечебных мероприятий.

Поставленная цель достигается тем, что в динамике проводимого лечения у обследуемых лиц в периферической венозной крови определяют относительный уровень активных фагоцитов и абсолютное содержание лимфоцитов CD8+. При увеличении уровня активных фагоцитов на 30% и более и снижении содержания CD8+ не менее чем на 25% от исходного значения лечение оценивается как эффективное.

Заявленный способ осуществляется стандартно следующим образом. Кровь для исследования берется из локтевой вены в объеме 2 мл до 10 часов утра натощак. Для определения фагоцитарной активности нейтрофилов в пробирку, содержащую 100 мкл крови с гепарином, вносим 100 мкл суспензии латекса, перемешиваем и ставим в термостат на 30 мин при температуре 37°С. Мазок крови, нанесенный на предметное стекло, высушиваем, фиксируем смесью Никифорова и окрашиваем по Романовскому-Гимзе. Содержание лимфоцитов CD8+ определяем с помощью непрямой иммуннопероксидазной реакции с использованием моноклональных антител на препаратах лимфоцитов типа «высушенной капли» производства НПЦ МедБиоСпектр г. Москва.

Указанным способом были обследованы 10 человек с хроническими воспалительными процессами органов дыхания, проходивших лечение в медицинской компании «Биокор» г. Архангельска. Обследование проводили с соблюдением основных норм биомедицинской этики. Результаты обработаны с использованием пакета прикладных программ «Statistica 6» («StatSoft», США). Тип исследования ретроспективный, выборки случайные, одномоментные. Генеральная совокупность - жители севера Европейской территории России. Достоверность различий между группами оценивали с помощью параметрического t-критерия Стьюдента для независимых выборок и непараметрического критерия Уилкоксона. Статистическая достоверность присваивалась при значении р<0,05.

Анализ данных показал, что относительное содержание активных фагоцитов у больных с хроническими воспалительными процессами органов дыхания до лечения составляло 40,33±1,3%, после лечения - 61,83±3,78% (р<0,001). Показано, что у людей, страдающих хроническими заболеваниями органов дыхания, отмечается резкое снижение активности фагоцитов. Так, при хроническом бронхите снижается миграционная точность нейтрофилов и количество их псевдоподий (Sapey E. Behavioral and Structural Differences in Migrating Peripheral Neutrophils from Patients with Chronic Obstructive Pulmonary Disease // Am. J. Respir. Crit. Care Med. - 2011. - Vol.183. - P.1176-1186). В ситуации хронического синусита наблюдается угнетение активности фагоцитоза (Шагова B.C., Неровный А.И. Возрастной сравнительный анализ иммунного статуса больных хроническим полипозным синуситом. // Материалы XVII съезда оториноларингологов России. - СПб. 2006. - С.353).

В нашем исследовании установлено, что в периферической венозной крови у лиц с хроническими воспалительными процессами органов дыхания в динамике лечения происходит снижение абсолютного содержания лимфоцитов CD8+ с 0,6±0,06 до 0,37±0,03×10⁹ кл/л (р<0,001), повышенные уровни которых до лечения были обнаружены у 66% больных. Из литературных сведений известно, что при хроническом бронхите регистрируется увеличение концентрации CD8+ в тканях легкого и субэпителиальной зоне бронхиальной биопсии (Saetta М. CD8+ Т-lymphocytes in peripheral airways of smokers with chronic obstructive pulmonary disease // Am. J. Respir. Crit. Care Med. - 1998. - Vol.157. - P. 822-826; O'Shaughnessy T. Inflammation in bronchial biopsies of subjects with chronic bronchitis: inverse relationship of CD8+ T-lymphocytes with FEV1 // Am. J. Respir. Crit. Care Med. - 1997. - Vol.155. - P.852-857). Это свидетельствует о повышенной инфильтрации тканей дыхательных путей цитотоксическими лимфоцитами, что естественно отражается на их содержании в периферической крови.

Частные примеры использования способа

1. Больной К., возраст 36 лет. Диагноз: хронический бронхит. При лабораторном исследовании крови выявлено, что содержание лимфоцитов CD8+ составляет 0,5×10⁹ кл/л. Уровень активных нейтрофилов равняется 42%. При повторном обследовании после лечения концентрация CD8+ достигла 0,31×10⁹ кл/л, а относительное содержание активных фагоцитов - 56%. Таким образом произошло снижение лимфоцитов CD8+ на 38% и увеличение активных нейтрофилов на 33% от исходного уровня. Сделан вывод об эффективности лечения, что подтверждено дальнейшим сокращением клинических проявлений заболевания.

2. Больная 3., возраст 20 лет. Диагноз: аденоидит, синусит, осложненные трахеитом. При проведении дифференциальной диагностики установлено, что содержание лимфоцитов CD8+ составляет 0,55×10⁹ кл/л. Уровень активных нейтрофилов равняется 37%. При повторном обследовании после лечения концентрация CD8+ достигла 0,42×10⁹ кл/л, а относительное содержание активных фагоцитов - 58%. Таким образом произошло снижение лимфоцитов CD8+ на 26% и увеличение активных нейтрофилов на 57% от исходного уровня. Сделано заключение об эффективности проведенного лечения, что подтверждено дальнейшим сокращением клинических проявлений заболевания.

3. Больная Л., возраст 34 года. Диагноз: гнойный тонзиллит, трахеобронхит. При лабораторном исследовании крови выявлено, что содержание лимфоцитов CD8+ составляет 0,64×10⁹ кл/л. Уровень активных нейтрофилов равняется 39%. При повторном обследовании после курса лечения концентрация CD8+ достигла 0,39×10⁹ кл/л, а относительное содержание активных фагоцитов - 66%. Таким образом произошло снижение лимфоцитов CD8+ на 39% и увеличение активных нейтрофилов на 69% от исходного уровня. Сделан вывод об эффективности лечения, что подтверждено дальнейшим сокращением клинических проявлений заболевания.

4. Больной Г., возраст 29 лет. Диагноз: хронический бронхит. При проведении дифференциальной диагностики установлено, что содержание лимфоцитов CD8+ составляет 0,62×10⁹ кл/л. Уровень активных нейтрофилов равняется 46%. При повторном обследовании после лечения концентрация CD8+ достигла 0,52×10⁹ кл/л, а относительное содержание активных фагоцитов - 56%. Следовательно, произошло снижение лимфоцитов CD8+ на 16% и возрастание уровня активных нейтрофилов на 22% от исходного значения. На основании полученных данных было принято решение об увеличении продолжительности курса лечения и изменении схемы приема лекарственных препаратов.

Изобретение относится к пульмонологии, оториноларингологии, иммунологии и может быть использовано для оценки эффективности лечения хронических воспалительных процессов дыхательной системы. Сущность способа: в динамике проводимого лечения у обследуемых лиц в периферической венозной крови определяют относительный уровень активных фагоцитов и абсолютное содержание лимфоцитов CD8+. При увеличении уровня активных фагоцитов на 30% и более и снижении содержания CD8+ не менее чем на 25% от исходного значения лечение оценивается как эффективное. Изобретение позволяет проанализировать индивидуальную динамику лечения применительно к конкретному больному, своевременно скорректировать тактику лечебных мероприятий при хронических воспалительных процессах дыхательной системы. 4 пр.

Способ оценки эффективности лечения хронических воспалительных процессов дыхательной системы, отличающийся тем, что в динамике проводимого лечения у обследуемых лиц в периферической венозной крови определяют относительный уровень активных фагоцитов и абсолютное содержание лимфоцитов CD8+; при увеличении уровня активных фагоцитов на 30% и более и снижении содержания CD8+ не менее чем на 25% от исходного значения лечение оценивается как эффективное.