СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ИСХОДА ОСТРОГО ВИРУСНОГО ГЕПАТИТА В Российский патент 2008 года по МПК G01N33/50 

Изобретение относится к области медицины, а именно к инфекционным заболеваниям, и может быть использовано при стационарном лечении больных острым вирусным гепатитом В.

Известен способ прогнозирования исхода острого вирусного гепатита В (ОВГВ) у подростков, основанный на определении комплекса сывороточных концентраций иммуноглобулинов А, М, Е и ряда цитокинов [1]. При уровнях концентраций IgA ниже 1,0 г/л, IgM ниже 0,8 г/л, IgE ниже 200 кЕ/л, фактора некроза опухоли-α ниже 140 пг/мл, интерлейкина-1β ниже 1000 пг/мл, интерлейкина-8 ниже 170 пг/мл, интерлейкина-4 ниже 100 пг/мл и γ-интерферона ниже 100 пг/мл в сыворотке крови у больных подростков прогнозируют развитие хронического вирусного гепатита В.

Недостатком известного способа является необходимость определения широкого спектра цитокинов, что делает метод дорогостоящим. Кроме того, данный метод имеет узкую область применения, так как предназначен для прогноза исхода ОВГВ только у подростков, в то время как основным контингентом заболевших являются взрослые люди [2, 3].

Задачей изобретения является создание информативного экономичного метода прогнозирования исхода ОВГВ, применимого для взрослых больных.

Сущность изобретения состоит в том, что проводят исследование функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов крови больных ОВГВ. Определяют индекс относительной интенсивности хемилюминесценции (ОХЛ-индекс), представляющий собой отношение максимума интенсивности хемилюминесценции нейтрофильных гранулоцитов крови у больных ОВГВ к максимуму интенсивности хемилюминесценции нейтрофильных гранулоцитов крови в норме. При ОХЛ-индексе выше 3,98 прогнозируют развитие хронических форм вирусного гепатита В, а при ОХЛ-индексе, равном или ниже 3,98, прогнозируют благоприятный исход ОВГВ.

Нейтрофильные гранулоциты характеризуются высокой мобилизационной активностью и способностью к быстрому и точному отражению изменений гомеостаза [4, 5, 6]. Связано это с тем, что нейтрофильные гранулоциты не только сами синтезируют широкий спектр различных цитокинов, но и имеют на своей поверхности рецепторы ко многим биологически активным веществам, которые синтезируются в организме. Нейтрофильные гранулоциты являются одной из основных клеточных популяций, осуществляющих элиминацию вируса гепатита В. Кроме того, активированные нейтрофильные гранулоциты сами становятся мощными эффекторами и одним из пусковых механизмов каскадных реакций, обеспечивающих развитие воспаления и иммунного ответа на инфекционный агент. Функциональная активность нейтрофильных гранулоцитов связана с генерацией активных форм кислорода и азота, а одним из методов, позволяющих оценить кислородзависимую биоцидность нейтрофильных гранулоцитов, является хемилюминесцентный анализ.

Способ выполняют следующим образом.

Из венозной крови больного ОВГВ выделяют нейтрофильные гранулоциты. Для этого к 5 мл крови с гепарином добавляют 1 мл полиглюкина. Смесь инкубируют в течение 30 мин при 37°С для ускорения осаждения эритроцитов. Полученный лейкоцитарный супернатант дважды отмывают в растворе Хенкса без фенолового красного по 10 мин при 400 g. Супернатант сливают, оставшиеся нейтрофильные гранулоциты разводят в 1 мл раствора Хенкса и получают взвесь. Подсчитывают количество нейтрофильных гранулоцитов в камере Горяева и с помощью раствора Хенкса доводят концентрацию клеток до 5,5 млн/мл. Для проведения хемилюминесцентного анализа используют следующие реактивы: донорскую сыворотку (группа крови АВ, резус-фактор отрицательный), раствор Хенкса (без фенолового красного), люминол в концентрации 100 мкг/мл. Готовят пробу: 200 мкл взвеси нейтрофильных гранулоцитов, 20 мкл донорской сыворотки, 240 мкл раствора Хенкса и 50 мкл люминола. Хемилюминесцентный анализ пробы выполняют с помощью хемилюминесцентного анализатора, например "CL3604", в течение 90 мин. Регистрацию результатов и управление хемилюминесцентным анализатором осуществляют через компьютер. Получают кривую хемилюминесценции. Определяют максимум интенсивности хемилюминесценции. Находят отношение полученного максимума интенсивности хемилюминесценции у обследуемого больного (I_факт) к величине максимума интенсивности хемилюминесценции, предварительно полученной при обследовании здоровых людей (I_норм) и равной 6251 отн.ед. ОХЛ-индекс определяют по формуле:

где:

ОХЛ-индекс - индекс относительной интенсивности хемилюминесценции;

I_факт - максимум интенсивности хемилюминесценции обследуемого больного (отн.ед.);

I_норм - максимум интенсивности хемилюминесценции здоровых людей (отн.ед.). I_норм =6251 отн.ед.

При ОХЛ-индексе выше 3,98 прогнозируют развитие хронических форм вирусного гепатита В, а при ОХЛ-индексе, равном или ниже 3,98, прогнозируют благоприятный исход ОВГВ.

Предложенный способ апробирован на 77 больных ОВГВ инфекционного отделения городской больницы №6 г.Красноярска.

Способ можно продемонстрировать на следующих примерах.

Пример 1. Больная П., 25 лет. Находилась на стационарном лечении в инфекционном отделении МСЧ №6 г.Красноярска с 21.04.2003 по 04.06.2003. При поступлении жалобы на тошноту, слабость, тянущие боли в правом подреберье, пожелтение кожных покровов. Объективно: Желтушность кожных покровов, иктеричность склер. Печень плотная, на 3 см ниже реберной дуги, умеренно болезненная при пальпации, симптомов раздражения брюшины нет. Температура 37,2°С. Клинический анализ крови: эритроцитов 3,5×10¹² кл/л, гемоглобин 120 г/л, цветной показатель 1,0, СОЭ 7 мм/час, лейкоциты 4,6×10⁹ кл/л, формула - эозинофилов 1, палочкоядерных 6, сегметоядерных 43, лимфоцитов 38, моноцитов 12. Положительная реакция мочи на билирубин. Биохимические показатели крови: билирубин 119,3 мкмоль/л, прямой - 57,3 мкмоль/л, непрямой - 62,0 мкмоль/л, АлАТ - 4,8 ммоль/(л·ч), АсАТ - 2,5 ммоль/(л·ч). Щелочная фосфатаза 238,8 ммоль/(с·ч). Иммунологические тесты определения антител к возбудителям сифилиса и ВИЧ - отрицательно. Иммунологические тесты определения антител к возбудителям вирусных гепатитов А, С и дельта-инфекции - отрицательно. HBsAg(+), IgM HBc(+), IgG HBc(+), HBeAg(+), ДНК ВГВ(+).

Диагноз: острый вирусный гепатит В, средней степени тяжести.

Проведено исследование заявляемым способом. Результаты:

Максимум интенсивности хемилюминесценции I_факт =24984 отн.ед.

ОХЛ-индекс =24984 отн.ед./6251 отн.ед. =4,00

Прогноз: исходом острого вирусного гепатита В будет развитие хронического гепатита В.

Больная получила курс симптоматической терапии.

Повторные обследования, проведенные 01.08.2003 и 25.11.2003, подтвердили прогноз. При нормализации клинических и биохимических показателей сохраняются HBsAg(+) и ДНК ВГВ(+).

Таким образом, сохраняется состояние вирусоносительства после перенесенного острого вирусного гепатита В. Диагноз: хронический вирусный гепатит В.

Пример 2. Больной К., 63 г. Находился на стационарном лечении в инфекционном отделении МСЧ №6 г.Красноярска с 21.09.2004 по 24.11.2004. При поступлении жалобы на слабость, быструю утомляемость, дискомфортные ощущения в правом подреберье и подложечной области. Отмечает наличие парентерального вмешательства, проведенное за 2 месяца до поступления в стационар. Объективно: кожа нормальной окраски, незначительная иктеричность склер и слизистых, гепато- и спленомегалия, ахолии кала и потемнения мочи не отмечено. Температура 36,6°С. Клинический анализ крови: эритроциты 4,2×10¹² кл/л, гемоглобин 135 г/л, цветной показатель 1,0, СОЭ 9 мм, лейкоциты 7,0×10⁹ кл/л, формула: эозинофилы 5, палочкоядерные 0, сегментоядерные 75, лимфоциты 12, моноциты 8. Биохимические показатели крови: билирубин 38,0 мкмоль/л, прямой 19,0 мкмоль/л, непрямой 19,0 мкмоль/л, АлАТ 5,16 ммоль/(л·ч), АсАТ 1,66 ммоль/(л·ч). Иммунологические тесты определения антител к возбудителям сифилиса и ВИЧ - отрицательно. Иммунологические тесты определения антител к возбудителям вирусных гепатитов А, С и дельта-инфекции - отрицательно. HBsAg(+), IgM HBc(+), IgG HBc(+), HBeAg(+), ДНК ВГВ(+).

Диагноз: острый вирусный гепатит В, средней степени тяжести.

Проведено исследование заявляемым способом. Результаты:

Максимум интенсивности хемилюминесценции I_факт =47761 отн.ед.

ОХЛ-индекс =47761 отн.ед./6251 отн.ед. =7,64

Прогноз: исходом острого вирусного гепатита В будет развитие хронического гепатита В.

Больной получил курс симптоматической терапии.

Повторные обследования, проведенные 20.12.2004 и 19.03.2005, подтвердили прогноз. При нормализации клинических и биохимических показателей сохраняются HBsAg(+) и ДНК ВГВ(+).

Таким образом, сохраняется вирусоносительство вируса гепатита В после перенесенного острого вирусного гепатита В. Диагноз: хронический вирусный гепатит В.

Пример 3. Больной Н., 42 г. Находился на стационарном лечении в инфекционном отделении МСЧ №6 г.Красноярска с 12.03.2004 по 23.04.2004. При поступлении жалобы на слабость, снижение работоспособности, пожелтение кожных покровов, боли в правом подреберье. Объективно: желтушность кожных покровов, иктеричность склер. Печень плотная, на 4 см ниже реберной дуги, умеренно болезненная при пальпации, симптомов раздражения брюшины нет. Спленомегалия. Температура 37,2°С. Клинический анализ крови: эритроциты 3,8×10¹² кл/л, гемоглобин 129 г/л, цветной показатель 1,0, лейкоциты 7,2×10⁹ кл/л, СОЭ 5 мм, формула: эозинофилы 2, палочкоядерные 4, сегментоядерные 47, лимфоциты 42, моноциты 5. Биохимические показатели крови: билирубин 181,2 мкмоль/л, прямой 133,9 мкмоль/л, непрямой 47,3 мкмоль/л, АлАТ 5,46 ммоль/(л·ч), АсАТ 2,04 ммоль/(л·ч). Положительная тимоловая проба - 10,3 ед. Иммунологические тесты определения антител к возбудителям сифилиса и ВИЧ - отрицательно. Иммунологические тесты определения антител к возбудителям вирусных гепатитов А, С и дельта-инфекции - отрицательно. HBsAg(+), IgM HBc(+), IgG HBc(+), HBeAg(-), ДНК ВГВ(+).

Диагноз: острый вирусный гепатит В, тяжелая форма с холестатическим компонентом.

Проведено исследование заявляемым способом. Результаты:

Максимум интенсивности хемилюминесценции I_факт =7491 отн.ед.

ОХЛ-индекс =7491 отн.ед./6251 отн.ед. =1,20

Прогноз: благоприятный исход острого вирусного гепатита В.

Больной получил курс симптоматической терапии.

Повторные обследования, проведенные 22.06.2004 и 06.10.2004, подтвердили прогноз. При нормализации клинических и биохимических показателей - HbsAg(-) и ДНК ВГВ(-). Наблюдалось выздоровление больного с элиминацией вируса гепатита В из организма.

Пример 4. Больная К., 39 лет. Находилась на стационарном лечении в инфекционном отделении МСЧ №6 г.Красноярска с 19.06.2004 по 19.07.2004. При поступлении жалобы на слабость, тошноту, желтуху, обесцвеченный кал. Объективно: желтушность кожных покровов, иктеричность склер. Печень плотная, на 4 см ниже реберной дуги, умеренно болезненная при пальпации, симптомов раздражения брюшины нет. Температура 36,6°С. Клинический анализ крови: эритроциты 3,0×10¹² кл/л, гемоглобин 120 г/л, цветной показатель 1,0, лейкоциты 5,8·10⁹ кл/л, СОЭ 5 мм, формула: эозинофилы 1, палочкоядерные 4, сегментоядерные 49, лимфоциты 42, моноциты 4. Биохимические показатели крови: билирубин 140,9 мкмоль/л, прямой 95,1 мкмоль/л, непрямой 45,8 мкмоль/л, АлАТ 5,45 ммоль/(л·ч), АсАТ 1,84 ммоль/(л·ч). Положительная тимоловая проба - 6,5 ед. Иммунологические тесты определения антител к возбудителям сифилиса и ВИЧ - отрицательно. Иммунологические тесты определения антител к возбудителям вирусных гепатитов А, С и дельта-инфекции - отрицательно. HBsAg(+), IgM HBc(+), IgG HBc(+), HBeAg(+), ДНК ВГВ(+).

Диагноз: острый вирусный гепатит В, тяжелая форма с холестатическим компонентом.

Проведено исследование заявляемым способом. Результаты:

Максимум интенсивности хемилюминесценции I_факт =5416 о.е.

ОХЛ-индекс =5416 отн.ед./6251 отн.ед. =0,87

Прогноз: благоприятный исход острого вирусного гепатита В.

Больная получила курс симптоматической терапии.

Повторные обследования, проведенные 30.09.2004 и 15.01.2005, подтвердили прогноз. При нормализации клинических и биохимических показателей - HBsAg(-) и ДНК ВГВ(-). После перенесенного острого вирусного гепатита В наблюдалось выздоровление больной с элиминацией вируса из организма.

Таким образом, исследование функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов крови больных ОВГВ в первые дни попадания их в стационар позволяет осуществлять ранний прогноз исхода ОВГВ и своевременно корректировать лечение данной категории больных. Метод является информативным и недорогим.

Источники информации

1. Шилова И.В., Горячева Л.Г. и др. Способ прогнозирования течения и исходов острых вирусных гепатитов В и С у подростков. RU 2268470 С2, опубл. 20.01.2006.

2. Соринсон С.Н. Вирусные гепатиты. - СПб.: ТЕЗА, 1997. - 306 с.

3. Maddrey W.C. Hepatitis В: an important public health issue // J. Med. Virol. - 2000. - Vol.61, №3. - P.362-366.

4. Дамбаева С.В., Мазуров Д.В., Голубева Н.М., Пинегин Б.В. Влияние некоторых иммуномодуляторов на функциональную активность фагоцитарных клеток периферической крови доноров // Иммунология. - 2000. - №6. - С.15-20.

5. Нестерова И.В., Колесникова Н.В. Цитокиновая регуляция и функционирующая система нейтрофильных гранулоцитов // Гематология и трансфузиология. - 1999. - №2. - С.43-45.

6. Тотолян А.А., Фрейдлин И.С. Клетки иммунной системы. - СПб.: Наука. - 2000. - 231 с.

Изобретение относится к области медицины, а именно к инфекционным заболеваниям. Сущность способа заключается в том, что с помощью хемилюминесцентного анализа исследуют функциональную активность нейтрофильных гранулоцитов крови больного острым вирусным гепатитом В (ОВГВ), определяют индекс относительной интенсивности хемилюминесценции (ОХЛ-индекс), представляющий собой отношение максимума интенсивности хемилюминесценции нейтрофильных гранулоцитов крови у больного ОВГВ к максимуму интенсивности хемилюминесценции нейтрофильных гранулоцитов крови в норме. При значении ОХЛ-индекса выше 3,98 прогнозируют развитие хронических форм вирусного гепатита В. При ОХЛ-индексе, равном или ниже 3,98, прогнозируют благоприятный исход ОВГВ. Использование способа позволяет осуществлять ранний прогноз исхода ОВГВ и назначать оптимальную терапию.

Способ прогнозирования исхода острого вирусного гепатита В (ОВГВ), основанный на исследовании крови, отличающийся тем, что с помощью хемилюминесцентного анализа исследуют функциональную активность нейтрофильных гранулоцитов крови, определяют индекс относительной интенсивности хемилюминесценции (ОХЛ-индекс), представляющий собой отношение максимума интенсивности хемилюминесценции нейтрофильных гранулоцитов крови больного ОВГВ к максимуму интенсивности хемилюминесценции нейтрофильных гранулоцитов крови в норме, и при значении ОХЛ-индекса выше 3,98 прогнозируют развитие хронических форм вирусного гепатита В, а при значении ОХЛ-индекса, равного или ниже 3,98, прогнозируют благоприятный исход ОВГВ.