КОМПОЗИЦИИ, УЛУЧШАЮЩИЕ ПЕРФУЗИЮ В ОБЛАСТИ ИНФАРКТА И СПОСОБЫ ВОССТАНОВЛЕНИЯ СОСУДИСТОГО ПОВРЕЖДЕНИЯ Российский патент 2013 года по МПК A61K35/28 A61P9/10 

Текст описания приведен в факсимильном виде.

Группа изобретений относится к медицине и касается способа восстановления сердечной функции, после острого инфаркта миокарда, включающего повреждение области инфаркта, где способ включает введение субъекту ненабухаемую выделенную популяцию аутогенных мононуклеарных клеток, обогащенную CD34+ клетками, которые содержат субпопопуляцию, по меньшей мере 0,5×10⁶ высокоактивных CD34+ клеток, экспрессирующих CXCR-4, которые обладают CXCR-4 опосредованной хемотаксической активностью и перемещаются в ответ на SDF-1; применения фармацевтической композиции для производства лекарственного средства, восстанавливающего сердечную функцию у субъекта после острого инфаркта миокарда, включающего воспаление в области инфаркта, где фармацевтическая композиция включает указанную выделенную популяцию аутогенных мононуклеарных клеток. Группа изобретений обеспечивает уменьшение повреждений в зоне инфаркта благодаря предупреждению потери кардиомиоцитов после острого инфаркта миокарда посредством улучшения перфузии и предотвращения апоптоза. 2 н. и 76 з.п. ф-лы, 13 пр., 4 ил., 36 табл.

1. Способ восстановления сердечной функции, после острого инфаркта миокарда, включающий повреждение области инфаркта, где способ включает:
(a) получение от субъекта выделенной популяции аутогенных мононуклеарных клеток;
(b) обогащение выделенной популяции аутогенных мононуклеарных клеток CD34+ клетками, без увеличения количества клеток in vitro;
(c) введение субъекту парентерально через катетер стерильной фармацевтической композиции, включающей:
(i) терапевтическое количество ненабухаемого стерильно выделенного хемотаксического продукта гемопоэтических стволовых клеток,
где терапевтическое количество стерильного, выделенного хемотаксического продукта гемопоэтических стволовых клеток является эффективным для улучшения перфузии и сохранения существующих кардиомиоцитов и их функции в области инфаркта,
где терапевтическое количество стерильного выделенного хемотаксического продукта гемопоэтических стволовых клеток включает ненабухаемую, выделенную популяцию аутогенных мононуклеарных клеток, обогащенную CD34+ клетками, которые содержат субпопуляцию, по меньшей мере, 0,5·10⁶ высокоактивных CD34+ клеток, экспрессирующих CXCR-4, которые обладают CXCR-4-опосредованной хемотаксической активностью и перемещаются в ответ на SDF-1;
(ii) стабилизирующее количество сыворотки, эффективное для сохранения CXCR-4-опосредованной хемотаксической активности и гемопоэтической колониеобразующей активности субпопуляции клеток CD34+/CXCR-4+, которые перемещаются в ответ на SDF-1, и
(iii) терапевтически эффективное количество, по меньшей мере, одного совместимого терапевтического средства, содержащего ингибитор ангиотензин-превращающего фермента, бета-адреноблокатор, диуретик, противоаритмическое средство, антиангинальное средство, цитокин, агонист рецептора тирозинкиназы, вазоактивное средство, антикоагулянт, фибринолитическое средство, и гиперхолестеринемическое средство или их комбинацию,
где терапевтически эффективное количество совместимого средства является способным улучшить функцию существующих кардиомиоцитов, чтобы компенсировать потерю функции вследствие гибели кардиомиоцитов,
где по меньшей мере 70% указанных клеток в композиции являются CD34+ клетками, и
в течение по меньшей мере 24 ч после взятия выделенной популяции аутогенных мононуклеарных клеток на стадии (a), при испытании in vitro после прохождения через катетер:
(1) композиция сохраняет CXCR-4-опосредованную хемотаксическую активность субпопуляции высокоактивных клеток CD34+/CXCR-4+, которые обладают CXCR-4-опосредованной хемотаксической активностью, измеренной перед очисткой;
(2) по меньшей мере 70% клеток в композиции являются жизнеспособными; и
(3) клетки в композиции способны образовывать гемопоэтические колонии in vitro,
где стадию введения осуществляют во время выполнения одной или более инфузий.

2. Способ по п.1, где терапевтическое количество хемотаксического продукта гемопоэтических стволовых клеток включает по меньшей мере 10·10⁶ выделенных аутогенных CD34+ гемопоэтических стволовых клеток, которые дополнительно содержат субпопуляцию 0,5·10⁶ высокоактивных CD34+/CXCR-4+ клеток, которые обладают CXCR-4-опосредованной хемотаксической активностью и которые перемещаются в ответ на SDF-1.

3. Способ по п.1, где повреждение в области инфаркта включает по меньшей мере одно из следующего: потерю кардиомиоцитов в результате апоптоза в области инфаркта, неблагоприятное вентрикулярное ремоделирование после острого инфаркта миокарда, прогрессирующее ухудшение функции сердечной мышцы после острого инфаркта миокарда, гипоперфузию по меньшей мере одной ишемической периинфарктной зоны миокардиальной ткани и миокардиальную гибернацию в периинфарктной пограничной зоне.

4. Способ по п.1, дополнительно включающий разделение ненабухаемой выделенной популяции аутогенных мононуклеарных клеток, полученных на (a), на несколько аликвот и замораживание по меньшей мере одной аликвоты при -86°C.

5. Способ по п.1, где обогащенная популяция CD34+ клеток, содержащая субпопуляцию высокоактивных клеток, экспрессирующих CXCR-4 и обладающих CXCR-4-опосредованной хемотаксической активностью в течение по меньшей мере 48 ч после получения выделенной популяции аутогенных мононуклеарных клеток по (a), при испытании in vitro после прохождении через катетер:
(a) клетки композиции способны образовывать гемопоэтические колонии in vitro; и
(b) композиция сохраняет, по меньшей мере, 2% CXCR-4-опосредованной хемотаксической активности субпопуляции высокоактивных CD34+/CXCR-4+ клеток, которые обладают CXCR-4-опосредованной хемотаксической активностью и которые двигаются в ответ на SDF-1.

6. Способ по п.1, где обогащенная популяция CD34+ клеток, содержащая субпопуляцию высокоактивных клеток, экспрессирующих CXCR-4 и обладающих CXCR-4-опосредованной хемотаксической активностью в течение по меньшей мере 72 ч после получения выделенной популяции аутогенных мононуклеарных клеток по (a), при испытании in vitro после прохождения через катетер:
(a) клетки композиции способны образовывать гемопоэтические колонии in vitro; и
(b) композиция сохраняет по меньшей мере 2% CXCR-4-опосредованной хемотаксической активности субпопуляции высокоактивных CD34+/CXCR-4+ клеток, которые обладают CXCR-4-опосредованной хемотаксической активностью и которые двигаются в ответ на SDF-1.

7. Способ по п.1, где в течение по меньшей мере 24 ч после получения выделенной популяции аутогенных мононуклеарных клеток по (а), при испытании in vitro после прохождения через катетер:
композиция сохраняет по меньшей мере 2% CXCR-4-опосредованной хемотаксической активности субпопуляции высокоактивных CD34+/CXCR-4+ клеток, которые обладают CXCR-4-опосредованной хемотаксической активностью.

8. Способ по п.1, где введение осуществляют через катетер интраваскулярно в инфаркт-связанную артерию.

9. Способ по п.1, где введение осуществляют через катетер в миокард.

10. Способ по п.1, где катетером является катетер с регулируемым потоком.

11. Способ по п.1, где катетером является баллонный дилатационный катетер.

12. Способ по п.1, где катетер имеет внутренний диаметр по меньшей мере около 0,36 мм.

13. Способ по п.1, где агонист рецептора тирозинкиназы представляет собой нейрегулин 1.

14. Способ по п.1, где композиция, которой обрабатывают повреждение области инфаркта, более эффективна, чем композиция, состоящая из компонентов (i) плюс (ii) или только из одного компонента (iii).

15. Способ по п.1, где способ улучшает микроциркуляторный кровоток в области инфаркта, уменьшает площадь повреждения области инфаркта, уменьшает массу инфаркта, увеличивает перфузию по меньшей мере в одной периинфарктной зоне ишемической миокардиальной ткани, увеличивает перфузию к гибернирующему миокарду по меньшей мере в одной периинфарктной зоне миокардиальной ткани, или их комбинацию, по сравнению с контрольными случаями.

16. Способ по п.1, где цитокин включает фактор роста эндотелия сосудов, выбранный из группы, состоящей из VEGF-A, VEGF-B, VEGF-C и VEGF-D.

17. Способ по п.1, где совместимое терапевтическое средство включает плацентный фактор роста.

18. Способ по п.1, где совместимое терапевтическое средство включает катехоламин.

19. Способ по п.18, где катехоламином является норэпинефрин.

20. Способ по п.1, где совместимое средство включает эндотелин-1.

21. Способ по п.1, где совместимое средство включает простагландин F_2α.

22. Способ по п.1, где совместимое средство включает ангиотензин II.

23. Способ по п.1, где совместимое средство включает форболовый эфир.

24. Способ по п.1, где совместимое средство включает нейропептид Y.

25. Способ по п.1, где совместимое средство включает активный трансформирующий фактор роста β1.

26. Способ по п.1, где совместимое средство включает G_q белок.

27. Способ по п.1, где совместимое средство включает диацилглицерин.

28. Способ по п.1, где совместимое средство включает салусин-α.

29. Способ по п.1, где совместимое средство включает салусин-β.

30. Способ по п.1, где совместимое средство включает инсулиноподобный фактор роста-1.

31. Способ по п.1, где совместимое средство включает миостатин.

32. Способ по п.1, где совместимое средство включает гранулоцитарный колониестимулирующий фактор.

33. Способ по п.1, где совместимое средство включает макрофагный колониестимулирующий фактор.

34. Способ по п.1, где совместимое средство включает тиазолидинедион.

35. Способ по п.34, где тиазолидинедионом является росиглитазон.

36. Способ по п.1, где совместимое средство включает фактор некроза опухоли - подобный слабый индуктор апоптоза.

37. Применение фармацевтической композиции для производства лекарственного средства, восстанавливающего сердечную функцию у субъекта после острого инфаркта миокарда, включающего воспаление в области инфаркта, где фармацевтическая композиция включает:
(i) терапевтическое количество стерильно выделенного хемотаксического продукта гемопоэтических стволовых клеток,
где терапевтическое количество стерильного, выделенного хемотаксического продукта гемопоэтических стволовых клеток является эффективным для улучшения перфузии и для сохранения существующих кардиомиоцитов и их функции в области инфаркта,
где терапевтическое количество стерильно выделенного хемотаксического продукта гемопоэтических стволовых клеток включает ненабухаемую, выделенную популяцию аутогенных мононуклеарных клеток, обогащенную CD34+ клетками, которые содержат субпопуляцию по меньшей мере 0,5·10⁶ высокоактивных CD34+ клеток, экспрессирующих CXCR-4, которая обладает CXCR-4-опосредованной хемотаксической активностью и перемещается в ответ на SDF-1;
(ii) стабилизирующее количество сыворотки, эффективное для сохранения CXCR-4-опосредованной хемотаксической активности и гемопоэтической колониеобразующей активности субпопуляции клеток CD34+/CXCR-4+, которые перемещаются в ответ на SDF-1, и
(iii) терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного совместимого терапевтического средства, включающего ингибитор ангиотензин-превращающего фермента, бета-адреноблокатор, диуретик, противоаритмическое средство, антиангинальное средство, агонист рецептора тирозинкиназы, вазоактивное средство, антикоагулянт, фибринолитическое средство и гиперхолестеринемическое средство или их комбинацию,
где терапевтически эффективное количество совместимого средства способно улучшить функцию существующих кардиомиоцитов, чтобы компенсировать потерю функции вследствие гибели кардиомиоцитов;
где композиция имеет форму для парентерального введения через катетер; и
где по меньшей мере 70% указанных клеток обогащенной популяции выделенных CD34+ клеток, содержащей субпопуляцию высокоактивных клеток, которые экспрессируют CXCR-4 и которые обладают CXCR-4-опосредованной хемотаксической активностью, при пропускании их через катетер и испытании композиции in vitro, являются CD34+ клетками, в течение по меньшей мере 24 ч после взятия выделенной популяции аутогенных мононуклеарных клеток по (a) при испытании in vitro после пропускания через катетер:
(1) композиция сохраняет CXCR-4-опосредованную хемотаксическую активность субпопуляции высокоактивных CD34+/CXCR-4+ клеток, которые обладают CXCR-4-опосредованной хемотаксической активностью до очистки,
(2) по меньшей мере 70% указанных клеток композиции являются жизнеспособными; и
(3) указанные клетки композиции способны образовывать гемопоэтические колонии in vitro, где по меньшей мере 70% указанных клеток в композиции являются CD34+ клетками, и в течение по меньшей мере 24 ч после взятия выделенной популяции аутогенных мононуклеарных клеток по (a) при испытании in vitro после пропускания через катетер:
(1) композиция сохраняет CXCR-4-опосредованную хемотаксическую активность субпопуляции высокоактивных CD34+/CXCR-4+ клеток, которые обладают CXCR-4-опосредованной хемотаксической активностью до очистки,
(2) по меньшей мере 70% указанных клеток композиции являются жизнеспособными; и
(3) указанные клетки композиции способны образовывать гемопоэтические колонии in vitro,
и применение осуществляют во время выполнения одной или более инфузий, для поддержания соответствующей перфузии.

38. Применение по п.37, где терапевтическое количество хемотаксического продукта гемопоэтических стволовых клеток включает по меньшей мере 10·10⁶ выделенных аутогенных CD34+ клеток, которые содержат субпопуляцию 0,5·10⁶ высокоактивных SDF-1 подвижных CD34+/CXCR-4 клеток, обладающих CXCR-4-опосредованной хемотаксической активностью.

39. Применение по п.37, где композиция более эффективна при лечении воспаления в области инфаркта, чем композиция, состоящая из компонентов (i) плюс (ii) или только одного компонента (iii).

40. Применение по п.37, где воспаление в области инфаркта включает по меньшей мере одно из следующего: потерю кардиомиоцитов в результате апоптоза в области инфаркта, неблагоприятное вентрикулярное ремоделирование после острого инфаркта миокарда, прогрессирующее ухудшение функции сердечной мышцы после острого инфаркта миокарда, гипоперфузию по меньшей мере одной ишемической периинфарктной зоны миокардиальной ткани и миокардиальную гибернацию в периинфарктной пограничной зоне по сравнению с контрольными случаями.

41. Применение по п.37, где источником высокоактивных CD34+ клеток, экспрессирующих CXCR-4, которые обладают CXCR-4-опосредованной хемотаксической активностью и перемещаются в ответ на SDF-1, являются клеточные элементы пунктуата костного мозга.

42. Применение по п.37, где источником высокоактивных CD34+ клеток, экспрессирующих CXCR-4, которые обладают CXCR-4-опосредованной хемотаксической активностью и перемещаются в ответ на SDF-1, является периферическая кровь.

43. Применение по п.41 или 42, где в течение по меньшей мере 48 ч после взятия пунктуата костного мозга или периферической крови при испытании in vitro после пропускания через катетер:
(a) клетки композиции способны образовывать гемопоэтические колонии in vitro; и
(b) композиция сохраняет по меньшей мере 2% CXCR-4-опосредованной хемотаксической активности высокоактивных CD34+/CXCR-4 клеток, которые обладают CXCR-4-опосредованной хемотаксической активностью и перемещаются в ответ на SDF-1.

44. Применение по п.41 или 42, где в течение по меньшей мере 72 ч после взятия пунктуата костного мозга или периферической крови при испытании in vitro после пропускания через катетер:
(a) клетки композиции способны образовывать гемопоэтические колонии in vitro; и
(b) композиция сохраняет по меньшей мере 2% CXCR-4-опосредованной хемотаксической активности высокоактивных CD34+/CXCR-4 клеток, которые обладают CXCR-4-опосредованной хемотаксической активностью и перемещаются в ответ на SDF-1.

45. Применение по п.41 или 42, где в течение по меньшей мере 24 ч после взятия пунктуата костного мозга или периферической крови при испытании in vitro после пропускания через катетер, композиция сохраняет по меньшей мере 2% CXCR-4-опосредованной хемотаксической активности CD34+/CXCR-4+ клеток, которые обладают CXCR-4-опосредованной хемотаксической активностью и перемещаются в ответ на SDF-1.

46. Применение по п.37, где композиция имеет форму для введения через катетер интраваскулярно в инфаркт-связанную артерию.

47. Применение по п.37, где композиция имеет форму для введения через катетер в миокард.

48. Применение по п.37, где терапевтическое количество композиции эффективно в отношении улучшения микроциркуляторного кровотока в области инфаркта по сравнению с контрольными композициями.

49. Применение по п.37, где терапевтическое количество композиции эффективно в отношении увеличения перфузии по меньшей мере одной ишемической периинфарктной зоны миокардиальной ткани по сравнению с контрольными композициями.

50. Применение по п.37, где терапевтическое количество композиции эффективно в отношении увеличения перфузии гибернирующего миокарда по меньшей мере в одной периинфарктной зоне миокардиальной ткани по сравнению с контрольными композициями.

51. Применение по п.37, где терапевтическое количество композиции эффективно в отношении уменьшения области воспаления по сравнению с контрольными композициями.

52. Применение по п.37, где терапевтическое количество композиции эффективно в отношении уменьшения массы инфаркта по сравнению с контрольными композициями.

53. Применение по п.37, где совместимое терапевтическое средство включает агонист рецептора тирозинкиназы нейрегулин 1.

54. Применение по п.37, где цитокин включает фактор роста эндотелия сосудов, выбранный из группы, состоящей из VEGF-A, VEGF-B, VEGF-C и VEGF-D.

55. Применение по п.37, где совместимое терапевтическое средство включает плацентный фактор роста.

56. Применение по п.37, где совместимое терапевтическое средство включает катехоламин.

57. Применение по п.56, где катехоламином является норэпинефрин.

58. Применение по п.37, где совместимое терапевтическое средство включает эндотелин-1.

59. Применение по п.37, где совместимое терапевтическое средство включает простагландин F_2α.

60. Применение по п.37, где совместимое терапевтическое средство включает ангиотензин II.

61. Применение по п.37, где совместимое терапевтическое средство включает форболовый эфир.

62. Применение по п.37, где совместимое терапевтическое средство включает нейропептид Y.

63. Применение по п.37, где совместимое терапевтическое средство включает активный трансформирующий фактор роста β1.

64. Применение по п.37, где совместимое терапевтическое средство включает G_q белок.

65. Применение по п.37, где совместимое терапевтическое средство включает диацилглицерин.

66. Применение по п.37, где совместимое терапевтическое средство включает салусин-α.

67. Применение по п.37, где совместимое терапевтическое средство включает салусин-β.

68. Применение по п.37, где совместимое терапевтическое средство включает инсулиноподобный фактор роста-1.

69. Применение по п.37, где совместимое терапевтическое средство включает миостатин.

70. Применение по п.37, где совместимое терапевтическое средство включает гранулоцитарный колониестимулирующий фактор.

71. Применение по п.37, где совместимое терапевтическое средство включает макрофагный колониестимулирующий фактор.

72. Применение по п.37, где совместимое терапевтическое средство включает тиазолидинедион.

73. Применение по п.72, где тиазолидинедионом является росиглитазон.

74. Применение по п.37, где совместимое терапевтическое средство включает фактор некроза опухоли - подобный слабый индуктор апоптоза.

75. Способ по п.1, где цитокин представляет собой по меньшей мере одно, выбранное из группы, состоящей из фактора роста эндотелия сосудов (VEGF), плацентарного фактора роста (PIGF), гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (G-CSF) и макрофагного колониестимулирующего фактора (M-CSF).

76. Применение по п.37, где цитокин представляет собой по меньшей мере одно, выбранное из группы, состоящей из фактора роста эндотелия сосудов (VEGF), плацентарного фактора роста (PIGF), гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (G-CSF) и макрофагного колониестимулирующего фактора (M-CSF).

77. Применение по п.41 или 42, где ненабухаемая популяция аутогенных мононуклеарных клеток, выделенных из пунктуата костного мозга или периферической крови, может быть разделена на множество аликвот и заморожена при -86°C.

78. Применение по п.77, где по меньшей мере одна из множества аликвот замороженной ненабухаемой, выделенной популяции аутогенных мононуклеарных клеток, после размораживания способна к тому, чтобы быть обогащенной CD34+ клетками, и в течение по меньшей мере 24 ч после разморозки аликвоты, замороженная и размороженная ненабухаемая, выделенная популяция аутогенных мононуклеарных клеток, обогащенная CD34+ клетками, при пропускании через катетер и испытании in vitro:
(1) сохраняет CXCR-4-опосредованную хемотаксическую активность субпопуляции высокоактивных CD34+/CXCR-4+ клеток, которые обладают CXCR-4-опосредованной хемотаксической активностью и перемещаются в ответ на SDF-1,
(2) по меньшей мере 70% указанных клеток представляют собой CD34+ клетки;
(3) по меньшей мере 70% указанных клеток являются жизнеспособными;
(4) указанные клетки способны образовывать гемопоэтические колонии in vitro.

79. Способ по п.1, где субъектом является субъект, подвергнутый реваскуляризации.