СПОСОБ КОРРЕКЦИИ ЭНДОТЕЛИАЛЬНОЙ ДИСФУНКЦИИ ПРИ ADMA-ПОДОБНОЙ МОДЕЛИ ГЕСТОЗА В ЭКСПЕРИМЕНТЕ Российский патент 2014 года по МПК G09B23/28 A61B17/132 A61M1/10 

Изобретение относится к экспериментальной медицине.

По известным литературным источникам - эндотелиальная дисфункция лежит в основе патогенеза гестоза. Одним из путей коррекции эндотелиальной дисфункции является увеличение концентрации оксида азота (NO), который относится к основным фактором вазодилатации и индукторам ангиогенеза (Марков, X.М. Молекулярные механизмы дисфункции сосудистого эндотелия / X.М. Марков // Кардиология. - 2005. - Т.45, №12).

Известен способ улучшения показателей выживаемости ишемизированных тканей (изолированного кожного лоскута на ножке) в условиях редуцированного кровообращения (RU №2429547, публ. 20.09.2011), который заключается в том, что в эксперименте у лабораторной крысы перед выкраиванием кожного лоскута проводят дистантное прекондиционирование путем десятиминутного пережатия бедренной артерии. Затем в течение 30 минут осуществляют реперфузию. Способ позволяет увеличить площадь здоровой ткани в условиях редуцированного кровообращения без использования лекарственных средств.

Наиболее близким к заявленному решению является способ коррекции эндотелиальной дисфункции у беременных крыс с помощью L-аргинина - субстрата для синтеза NO, согласно описанию экспериментальных исследований в статье: «Фармакологическая коррекция L-аргинином «ADMA-eNOS-ассоциированных мишеней» при экспериментальной преэклампсии» (Кубанский научный медицинский вестник №1, 2010 г., стр.85-92). Опыты проводились на белых крысах-самках (беременных, 14-16-е сутки) линии Wistar массой 250-300 г. Неселективный блокатор NO-синтазы N-нитро-L-аргинин-метиловый эфир (L-NAME) вводился внутрибрюшинно в дозе 25 мг/кг/сут однократно в течение 7 дней. На фоне такого моделирования для коррекции эндотелиальной дисфункции беременным крысам-самкам вводят внутрижелудочно L-аргинин в дозе 200 мг/кг/сут однократно в течение 7 дней, начиная с 14-16-го дня беременности.

Основным недостатком способа является то, что L-аргинин является эндогенным субстратом для образования NO и прямым конкурентом ADMA, поэтому повышение его концентрации приводит только к увеличению количества образуемого NO и активации эндотелиальной NO-синтазы. Помимо увеличения активности эндотелиальной NO-синтазы и синтеза NO в развитии резистентности к плацентарной ишемии ведущее место отводится аденозину, брадикинину, опиоидным пептидам, пептиду, относящемуся к гену кальцитонина, протеинкиназе и др., которые играют важную роль в механизме эндотелиопротективного действия дистантного ишемического прекондиционирования. Поэтому результаты коррекции эндотелиальной дисфункции у беременных животных с использованием только L-аргинина неудовлетворительны.

Задачей изобретения является создание способа коррекции эндотелиальной дисфункции при ADMA-подобной модели гестоза, включающий однократное воспроизведение 10-минутного дистантного ишемического эпизода задней конечности, обладающего противоишемическим действием.

Задача решается с помощью предлагаемого способа коррекции эндотелиальной дисфункции при ADMA-подобной модели гестоза в эксперименте, включающего воспроизведение модели гестоза у крыс линии Wistar ежедневным в течение 7 дней, начиная с 14 дня беременности, внутрибрюшинным введением N-нитро-L-аргинин-метилового эфира в дозе 25 мг/кг, причем, для коррекции моделируемой патологии используется однократное воспроизведение 10-минутного дистантного ишемического эпизода задней конечности на 21 день беременности за 90 минут до проведения сосудистых проб путем пережатия бедренной артерии с последующей реперфузией.

Использование предлагаемого способа приводит к выраженной коррекции эндотелиальной дисфункции при моделируемой патологии. Наблюдаемая коррекция эндотелиальной дисфункции связана с механизмами, лежащими в основе феномена раннего ишемического прекондиционирования, которые приводят к увеличению выработки аденозина, брадикинина и др., именно в результате чего проявляется эндотелиопротективное действие однократного дистантного ишемического эпизода конечности при ADMA-подобной модели гестоза в эксперименте. В способе не используются экзогенные вещества, обладающие побочными эффектами.

Способ осуществляется следующим образом.

Опыты проводят на белых беременных крысах самках линии Wistar массой 250-300 г. N-нитро-L-аргинин метиловый эфир (L-NAME) вводится внутрибрюшинно в дозе 25 мг/кг/сут в течение 7 дней (с 14 по 20 день беременности). Ишемию задней конечности воспроизводили на 21 день беременности однократно за 90 минут до проведения сосудистых проб путем 10-минутным пережатием бедренной артерии с последующей реперфузией. Пережатие бедренной артерии осуществляли наложением манжеты на проксимальную треть бедра. Контролем правильности наложения манжеты служило отсутствие пульса на артериях голени.

На 21 день беременности, спустя 90 минут после воспроизведения эпизода ишемии, под наркозом (хлоралгидрат 300 мг/кг) вводят катетер в правую сонную артерию для регистрации показателей артериального давления (АД), болюсное введение фармакологических агентов осуществляют в правую бедренную вену. Регистрируют систолическое артериальное давление (САД), диастолическое артериальное давление (ДАД). Проводят сосудистые пробы на эндотелийзависимую вазодилатацию (ЭЗВ) - внутривенное введение ацетилхолина (АХ) в дозе 40 мкг/кг, и эндотелийнезависимую вазодилатацию (ЭНЗВ) - внутривенное введение нитропруссида натрия (НП) в дозе 30 мкг/кг с расчетом коэффициента эндотелиальной дисфункции (КЭД):

$$КЭД=\frac{S{}_{АД\text{ НП}}}{\text{S}{}_{\text{АД АХ}}}$$ ,

где КЭД - коэффициент эндотелиальной дисфункции; S_{АД НП} - площадь треугольника над кривой восстановления АД при проведении функциональной пробы с введением нитропруссида натрия, S_{АД АХ} - площадь треугольника над кривой восстановления АД при проведении функциональной пробы с введением ацетилхолина в дозе 40 мкг/кг (патент №2301015 от 20.06.2007 г. (Бюл. №17).

При статистической обработке данных рассчитывается среднее значение, величина стандартного отклонения. Различия считаются достоверными при р<0,05.

Пример конкретного выполнения

Блокада NO-синтазы, вызванная 7-дневным введением L-NAME беременным крысам, приводила к нарушению взаимоотношений вазодилатирующих и вазоконстрикторных механизмов регуляции сосудистого тонуса, о чем свидетельствуют результаты сосудистых проб на эндотелийзависимое расслабление (ацетилхолин) и эндотелийнезависимое (нитропруссид натрия) и увеличение КЭД с 1,28±0,23 у интактных беременных животных до 3,06±0,32 (р<0,05).

Однократное воспроизведение 10 минутной ишемии задних конечностей на 21 день беременности за 90 минут до проведения сосудистых проб путем пережатия бедренной артерии с последующей реперфузией приводило к достоверному снижению КЭД до 1,52±0,09, что в два раза меньше, чем в группе животных с введением L-NAME (р<0,05).

Таким образом, полученные результаты убедительно свидетельствуют о выраженной коррекции эндотелиальной дисфункции в условиях моделирования ADMA-подобного L-NAME-индуцированного гестоза у беременных крыс воспроизведением 10-минутного дистантного ишемического эпизода задней конечности.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии, и может быть использовано для изучения механизмов коррекции эндотелиальной дисфункции у беременных. Способ включает воспроизведение модели гестоза у крыс линии Wistar ежедневным в течение 7 дней с 14 дня беременности внутрибрюшинным введением N-нитро-L-аргинин-метилового эфира в дозе 25 мг/кг. После этого проводят однократное воспроизведение 10-минутного дистантного ишемического эпизода задней конечности на 21 день беременности путем пережатия бедренной артерии с последующей реперфузией. Через 90 минут проводят сосудистые пробы с расчетом коэффициента эндотелиальной дисфункции. Способ позволяет изучать NO - не обусловленные механизмы защитного эффекта при коррекции эндотелиальной дисфункции в специфических условиях эксперимента. 1 пр.

Способ коррекции эндотелиальной дисфункции при ADMA-подобной модели гестоза в эксперименте, включающий воспроизведение модели гестоза у крыс линии Wistar ежедневным в течение 7 дней с 14 дня беременности внутрибрюшинным введением N-нитро-L-аргинин-метилового эфира в дозе 25 мг/кг, отличающийся тем, что для коррекции моделируемой патологии используется однократное воспроизведение 10-минутного дистантного ишемического эпизода задней конечности на 21 день беременности за 90 мин до проведения сосудистых проб путем пережатия бедренной артерии с последующей реперфузией.