АНТИПРОЛИФЕРАТИВНОЕ СРЕДСТВО Российский патент 2014 года по МПК A61K35/32 A61P13/08 

Изобретение относится к медицине, а именно к созданию лекарственных средств природного происхождения и может быть использовано для лечения доброкачественной гиперплазии предстательной железы (ДГПЖ).

ДГПЖ является одним из наиболее частых заболеваний мужчин пожилого возраста [Аляев Ю.Г., Винаров А.З., Локшин К.Л., Спивак Л.Г. Новое в консервативной терапии больных гиперплазией предстательной железы // Consilium medicum. - 2008. - №4. - С.45-49]. Гистологические признаки ДГПЖ обнаруживаются более чем у 40% мужчин старше 50 лет и 90% мужчин старше 80 лет. Клинические симптомы заболевания диагностируются у большинства мужчин старше 50 лет [Dhingra N., Bhagwat D. Benign prostatic hyperplasia: an overview of existing treatment // Ind. J. Pharmacol. - 2011. - Vol.43, N 1. - P.6-12]. По данным эпидемиологических исследований, проведенных в России, частота ДГПЖ увеличилась с 11,3% среди 40-50-летних до 81,4% у 80-летних мужчин [Рациональная фармакотерапия в урологии / Под ред. Н.А. Лопаткина, Т.С. Перепановой. - М.: Литтерра, 2006. - С.30-42].

Известно применение гомеопатического препарата рододендрона для лечения доброкачественных опухолей [Пат. РФ №2207868]. Его недостатком является необходимость индивидуального подбора дозы для каждого больного, что затрудняет применение в амбулаторной практике.

Известно применение отвара корня солодки голой для лечения хронического простатита [Пат. РФ №2058152]. Недостатками данного средства являются нестойкая при хранении и неудобная для приготовления лекарственная форма, слабый симптоматический эффект при хроническом простатите без терапевтического воздействия на патогенез заболевания, что не исключает возникновение рецидивов.

Известно применение препарата растительного происхождения для лечения простатита и аденомы предстательной железы в виде комплексной терапии, включающей средства для перорального и ректального применения [Пат. РФ №2275929]. Данное средство оказывает противовоспалительное действие, но не тормозит пролиферативные процессы в предстательной железе. Лечебный эффект при доброкачественной гиперплазии предстательной железы наступает только при сочетанном приеме средства внутрь и ректальном введении в форме клизм, что создает неудобства для амбулаторных больных.

Известно лечебно-профилактическое средство «Простанорм» для лечения простатитов, уретритов и других воспалительных заболеваний мочеполовой сферы, включающее корень солодки голой, траву зверобоя продырявленного, траву золотарника канадского, корни с корневищами эхинацеи пурпурной, взятые в равных пропорциях [Пат РФ №2098119]. Это средство также оказывает только противовоспалительный эффект и не обладает антипролиферативным действием при доброкачественной гиперплазии предстательной железы.

Для лечения и профилактики ДГПЖ применяют более 10 групп лекарственных средств, хотя доказана терапевтическая эффективность только α-адреноблокаторов, ингибитора 5α-редуктазы финастерида и растительных средств - экстрактов американской вееролистной пальмы Serenoa repens (пермиксон, простамол) и камерунской сливы Pygeum africanum (трианол) [Рациональная фармакотерапия в урологии / Под ред. Н.А. Лопаткина, Т.С. Перепановой. - М.: Литтерра, 2006. - С.30-42].

В свете сказанного актуальным является поиск препаратов, обладающих комплексным влиянием на регуляторные механизмы, запускающие каскад физиологических изменений, которые приводят к возникновению такой серьезной патологии как ДГПЖ.

Наиболее близким к предлагаемому решению является средство по патенту CN101884759, взятое в качестве прототипа.

Задача изобретения - расширение арсенала средств природного происхождения на основе отечественного сырья, эффективных при лечении ДГПЖ.

Технический результат достигается тем, что в качестве антипролиферативного средства используют липиды пантов марала.

Экстракцию липидов из пантов марала осуществляют смесью растворителей этанол : этилацетат : вода при их соотношении, мас.ч., 1:1:1 и соотношении сырье : экстрагент 1:10 мас.ч. тремя последовательными мацерациями по 4 ч. каждая. Полученный экстракт концентрируют в вакуумном выпарном аппарате и досушивают в испарителе.

Эксперименты проводили на 120 аутбредных белых крысах самцах позднего репродуктивного возраста (8-10 мес) массой 500-550 г, выращенных в конвенциональных условиях в клинике лабораторных животных НИИ фармакологии СО РАМН. Антипролиферативное влияние липидов пантов марала оценивали на модели ДГПЖ, вызванной ежедневным внутрибрюшинным введением сульпирида (эглонил, раствор в ампулах, Sanofi-Winthrop Industrie, Франция) в дозе 40 мг/кг в течение 60 сут. На протяжении эксперимента крысам вводили в желудок липиды пантов марала в виде суспензии на 1% крахмальной слизи в дозах 10, 30, 60 мг/кг. В качестве референтного препарата применяли экстракт Serenoa repens пермиксон (Pierre Fabre Medicament Production, Франция) в дозе 50 мг/кг (по экстракту Serenoa repens). Контрольные животные получали 1% крахмальную слизь. Через 60 сут крыс декапитировали под эфирным наркозом. Взвешивали переднюю, боковую и заднюю доли предстательной железы. Для гистологического исследования боковую и заднюю доли фиксировали 10% нейтральным формалином, депарафинированные срезы окрашивали гематоксилином-эозином. В гомогенатах боковой и задней долей предстательной железы определяли содержание белка, диеновых конъюгатов, скорость образования малонового диальдегида, количество восстановленного глутатиона, активность селензависимой глутатионпероксиазы и супероксиддисмутазы. В плазме крови анализировали содержание пролактина, тестостерона и 5α-дигидротестостерона иммунофлуоресцентным методом (наборы DRG International, США).

Статистическую обработку результатов проводили методом парных сравнений с использованием непараметрического критерия Вилкоксона-Манна-Уитни при вероятности ошибочного вывода, не превышающей 5% (р≤0,05).

Сульпирид, блокируя рецепторы D₂ дофамина в тубероинфундибулярной системе, значительно увеличивает секрецию стимулятора пролиферации предстательной железы пролактина с развитием экспериментальной ДГПЖ. При введении сульпирида в течение 60 сут масса передней доли предстательной железы не изменялась, масса боковой и задней долей и весовые коэффициенты (отношение массы железы к массе тела животных) становились в 1,8-2,1 раза больше, чем у интактных животных (табл.1). При гистологическом исследовании предстательной железы определялись увеличенное число ацинусов с папиллярным разрастанием эпителия в форме сосочков. Строма между ацинусами содержала большое количество гипертрофированных гладких мышц, грубых коллагеновых волокон, была инфильтрирована нейтрофилами, лимфоцитами, макрофагами, тучными клетками. Расширенный просвет ацинусов заполнялся ацидофильной массой и нейтрофилами. В гомогенатах боковой и задней долей предстательной железы в 1,6 раза увеличивалось содержание белка и активировалось перекисное окисление липидов на фоне ингибирования антиперекисной защиты. Содержание диеновых конъюгатов повышалось в 2,1 раза по сравнению с их количеством в норме, продукция малонового диальдегида в присутствии аскорбата ускорялась в 2,2 раза, после добавления NADP·H - в 2,7 раза. Содержание восстановленного глутатиона, активность глутатионпероксидазы и супероксиддисмутазы уменьшались в 1,7-2,2 раза. В сыворотке крови крыс с экспериментальной ДГПЖ содержание пролактина возрастало в 5,8 раза, 5α-дигидротестостерона - в 1,5 раза, количество тестостерона снижалось в 3,2 раза (табл.2).

Липиды пантов марала в дозах 10, 30 и 60 мг/кг и экстракт Serenoa repens в дозе 50 мг/кг эффективно препятствовали прогрессированию экспериментальной ДГПЖ, вызванной инъекциями сульпирида у крыс самцов позднего репродуктивного возраста. В дозе 10 мг/кг липиды пантов марала и экстракт Serenoa repens снижали массу боковой и задней долей предстательной железы в 1,4-1,5 раза, хотя она оставалась в 1,3-1,4 раза больше, чем в норме. В дозах 30 и 60 мг/кг липиды пантов марала уменьшали массу боковой и задней долей в 1,8-2,1 раза, при этом масса становилась такой же, как у интактных животных. Весовые коэффициенты снижались в 1,8-2,1 раза. Антипролиферативное действие липидов пантов марала в дозах 30 и 60 мг/кг превосходило эффект экстракта Serenoa repens (табл.1).

Для углубленного исследования антипролиферативного действия при модели ДГПЖ липиды пантов марала вводили в дозе 30 мг/кг. Под влиянием экспериментальной терапии липидами пантов марала в ткани боковой и задней долей предстательной железы сокращалась площадь эпителиальных структур на фоне расширения просвета ацинусов. Ткань предстательной железы состояла из отдельных железок, разделенных узкими пучками соединительной ткани с гладкомышечными клетками, коллагеновыми и эластическими волокнами нормального строения. Клеточная инфильтрация интерстиция отсутствовала, в ацинусах не определялись лейкоциты. При введении экстракта Serenoa repens сохранялась умеренная лимфоцитарно-макрофагальная инфильтрация. В гомогенатах боковой и задней долей предстательной железы экспериментальная терапия липидами пантов марала сопровождалась снижением содержания белка в 1,5 раза, при действии экстракта Serenoa repens - в значительно меньшей степени, в 1,3 раза (табл.2).

Липиды пантов марала оказывали выраженное антиоксидантное действие. В гомогенатах боковой и задней долей предстательной железы содержание продуктов перекисного окисления липидов и показатели антиперекисной защиты - количество восстановленного глутатиона, активность глутатионпероксидазы и супероксиддисмутазы нормализовались. Содержание диеновых конъюгатов уменьшалось в 2,2 раза, продукция аскорбат- и NADP·H-зависимого малонового диальдегида замедлялась в 1,8-2,1 раза, содержание глутатиона, активность глутатионпероксидазы и супероксиддисмутазы повышались в 1,5-2 раза по сравнению с показателями при модели ДГПЖ. При введении экстракта Serenoa repens интенсивность липопероксидации снижалась в 1,4-1,8 раза, активность антиперекисной защиты возрастала в 1,3-1,5 раза (различия с эффектами липидов пантов марала достоверны только для содержания диеновых конъюгатов). Скорость продукции малонового диальдегида превышала скорость в норме в 1,4-1,5 раза, содержание восстановленного глутатиона, активность глутатионпероксидазы и супероксиддисмутазы оставались сниженными в 1,4 раза (табл.2).

В крови крыс, получавших липиды пантов марала, содержание пролактина снижалось втрое по сравнению с уровнем гормона у крыс, которым вводили только сульпирид, но оно в 1,9 раза превышало норму. При введении экстракта Serenoa repens содержание в крови пролактина уменьшалось в меньшей степени - в 1,5 раза, оставаясь в 3,8 раза выше нормы и вдвое больше, чем при введении липидов пантов марала. Содержание мужских половых гормонов в крови крыс, защищенных липидами пантов марала и экстрактом Serenoa repens, изменялось в одинаковой степени и становилось близким к количеству гормонов у интактных животных - содержание тестостерона повышалось в 2,2-2,6 раза, 5α-дигидротестостерона - снижалось в 1,5-1,7 раза по сравнению с количеством этих гормонов, измеренном при введении одного сульпирида (табл.2).

Таким образом, при модели ДГПЖ, вызванной введением стимулятора секреции пролактина сульпиридом крысам самцам позднего репродуктивного возраста, липиды пантов марала в эффективной дозе 30 мг/кг и экстракт Serenoa repens в дозе 50 мг/кг, препятствовали развитию гиперплазии боковой и задней долей предстательной железы, разрастанию ее эпителия и воспалительной инфильтрации. Оба препарата оказывали выраженное антиоксидантное действие и изменяли в сторону нормы гормональный баланс. При экспериментальной ДГПЖ липиды пантов в большей степени, чем экстракт Serenoa repens, сдерживали увеличение массы боковой и задней долей предстательной железы, продукцию первичных продуктов липопероксидации - диеновых конъюгатов и развитие гиперпролактинемии.

Судя по росту уровня тестостерона и снижению количества 5α-дигидротестостерона, в крови крыс, получавших на фоне инъекций сульпирида липиды пантов марала, этот препарат ингибирует 5α-редуктазу и тормозит восстановление тестостерона в 5α-дигидротестостерон - стимулятор пролиферации ткани предстательной железы. В механизме антипролиферативного эффекта липидов пантов марала большое значение имеет антиоксидантное действие. Продукты липопероксидации стимулируют пролиферацию эпителия и соединительной ткани в предстательной железе.

Таблица 1 Влияние липидов пантов марала в сравнении с действием экстракта Serenoa repens (пермиксон) на массу предстательной железы при модели ее доброкачественной гиперплазии ( $$\overline{\text{X}}\pm \text{S}\overline{\text{x}}$$ ; n=10) Показатель Интактные животные Сульпирид Липиды пантов марала Экстракт Serenoa repens 10 мг/кг 30 мг/кг 60 мг/кг         + сульпирид   Масса крыс, г 510,6±7,5 523,4±8,7 525,7±8,4 512,8±17,6 529,4±19,6 529,6±11,5 Передняя доля предстательной железы масса, мг 191,8±12,7 194,7±10,5 187,1±11,3 184,8±12,2 192,0±18,2 190,9±12,0 весовой коэффициент, мг/г 0,38±0,05 0,37±0,04 0,36±0,03 0,36±0,05 0,35±0,04 0,36±0,02 Боковая доля предстательной железы масса, мг 43,6±2,9 87,9±7,1* 59,2±3,0*⁺ 42,4±4,5⁺ 43,9±4,3⁺ 64,5±3,5*^+# весовой коэффициент, мг/кг 0,08±0,01 0,17±0,02* 0,11±0,02 0,08±0,01⁺ 0,08±0,02⁺ 0,12±0,02 Задняя доля предстательной железы масса, мг 49,6±3,8 96,7±4,8* 62,6±3,7*⁺ 48,3±5,2⁺ 52,6±3,4⁺ 70,2±4,0*^+# весовой коэффициент, мг/кг 0,10±0,02 0,18±0,02* 0,12±0,03 0,09±0,02⁺ 0,10±0,02⁺ 0,13±0,02 Примечание. Р<0,05: по сравнению с показателем * - интактных животных, ⁺ - при введении сульпирида, ^# - при введении липидов пантов марала в дозах 30 и 60 мг/кг.

Таблица 2 Влияние липидов пантов марала на липопероксидацию и содержание гормонов в сравнении с действием экстракта Serenoa repens (пермиксон) при модели доброкачественной гиперплазии предстательной железы ( $$\overline{\text{X}}\pm \text{S}\overline{\text{x}}$$ ; n=10) Показатель Интактные животные Сульпирид Липиды пантов марала Экстракт Serenoa repens       + сульпирид Гомогенат предстательной железы Белок, мг/г ткани 120,7±7,9 197,4±10,3* 129,0±5,9⁺ 156,8±7,3*^+# Диеновые конъюгаты, мкмоль/г ткани 18,6±1,5 38,7±2,7* 17,9±l,6⁺ 26,8±3,4^+# Малоновый диальдегид, нмоль/мг белка·мин: аскорбатзависимый 0,44±0,03 0,98±0,07* 0,55±0,06⁺ 0,63±0,07*⁺ NADP·H-зависимый 0,57±0,06 1,54±0,06* 0,75±0,08⁺ 0,88±0,09*⁺ Восстановленный глутатион, нмоль/мг белка 5,2±0,4 2,4±0,3* 4,8±0,7⁺ 3,5±0,5*⁺ Глутатионпероксидаза, нмоль NADP·H/ г ткани·мин 2528±123 1478±96* 2198±119⁺ 1865±114*⁺ Супероксиддисмутаза, Е/мг белка 0,87±0,07 0,41±0,05* 0,69±0,08⁺ 0,61±0,06*⁺ Сыворотка крови Пролактин, нг/мл 10,9±1,8 62,7±3,3* 21,l±2,5*⁺ 41,7±5,3*^+# Тестостерон, пг/мл 2187±312 673±57* 1765±164⁺ 1460±97⁺ 5α-Дигидротестостерон, пг/мл 179,7±10,9 265,9±23,4* 171,6±13,5⁺ 158,7±17,9⁺ Примечание. Р<0,05: по сравнению с показателем * - интактных животных, ⁺ - при введении сульпирида, ^# - при введении липидов пантов марала.

Изобретение относится к медицине, а именно к средству для лечения доброкачественной гиперплазии предстательной железы. Антипролиферативное средство для лечения доброкачественной гиперплазии предстательной железы, которое содержит липиды пантов марала, полученные экстракцией пантов марала смесью растворителей этанол : этилацетат : вода при определенных условиях. Вышеописанное средство эффективно для лечения доброкачественной гиперплазии предстательной железы. 2 табл.

Антипролиферативное средство для лечения доброкачественной гиперплазии предстательной железы на основе экстрактов из сырья животного происхождения, отличающееся тем, что оно содержит липиды пантов марала, полученные экстракцией смеси растворителей этанол: этилацетат : вода при их соотношении, мас.ч., 1:1:1 и соотношении сырье : экстрагент 1:10.