АНТИПРОЛИФЕРАТИВНОЕ СРЕДСТВО Российский патент 2013 года по МПК A61K35/10 A61P35/00 

Изобретение относится к медицине, а именно к созданию лекарственных средств природного происхождения, и может быть использовано для лечения доброкачественной гиперплазии предстательной железы (ДГПЖ).

ДГПЖ является одним из наиболее частых заболеваний мужчин пожилого возраста [Аляев Ю.Г., Винаров А.З., Локшин К.Л., Спивак Л.Г. Новое в консервативной терапии больных гиперплазией предстательной железы // Consilium medicum. - 2008. - №4. - С.45-49]. Гистологические признаки ДГПЖ обнаруживаются более чем у 40% мужчин старше 50 лет и 90% мужчин старше 80 лет. Клинические симптомы заболевания диагностируются у большинства мужчин старше 50 лет [Dhingra N., Bhagwat D. Benign prostatic hyperplasia: an overview of existing treatment // Ind. J. Pharmacol. - 2011. - Vol.43, N 1. - P.6-12]. По данным эпидемиологических исследований, проведенных в России, частота ДГПЖ увеличилась с 11,3% среди 40-50-летних до 81,4% у 80-летних мужчин [Рациональная фармакотерапия в урологии. / Под ред. Н.А.Лопаткина, Т.С.Перепановой. - М.: Литтерра, 2006. - С.30-42].

Известно применение гомеопатического препарата рододендрона для лечения доброкачественных опухолей [Пат. РФ №2207868]. Его недостатком является необходимость индивидуального подбора дозы для каждого больного, что затрудняет применение в амбулаторной практике.

Известно применение отвара корня солодки голой для лечения хронического простатита [Пат. РФ №2058152]. Недостатками данного средства являются нестойкая при хранении и неудобная для приготовления лекарственная форма, слабый симптоматический эффект при хроническом простатите без терапевтического воздействия на патогенез заболевания, что не исключает возникновение рецидивов.

Известно применение препарата растительного происхождения для лечения простатита и аденомы предстательной железы в виде комплексной терапии, включающей средства для перорального и ректального применения [Пат. РФ №2275929]. Данное средство оказывает противовоспалительное действие, но не тормозит пролиферативные процессы в предстательной железе. Лечебный эффект при доброкачественной гиперплазии предстательной железы наступает только при сочетанном приеме средства внутрь и ректальном введении в форме клизм, что создает неудобства для амбулаторных больных.

Известно лечебно-профилактическое средство «Простанорм» для лечения простатитов, уретритов и других воспалительных заболеваний мочеполовой сферы, включающее корень солодки голой, траву зверобоя продырявленного, траву золотарника канадского, корни с корневищами эхинацеи пурпурной, взятые в равных пропорциях [Пат РФ №2098119]. Это средство также оказывает только противовоспалительный эффект и не обладает антипролиферативным действием при доброкачественной гиперплазии предстательной железы.

Для лечения и профилактики ДГПЖ применяют более 10 групп лекарственных средств, хотя доказана терапевтическая эффективность только α-адреноблокаторов, ингибитора 5α-редуктазы финастерида и растительных средств - экстрактов американской вееролистной пальмы Serenoa repens (пермиксон, простамол) и камерунской сливы Pygeum africanum (трианол) [Рациональная фармакотерапия в урологии. / Под ред. Н.А.Лопаткина, Т.С.Перепановой. - М.: Литтерра, 2006. - С.30-42]. Пермиксон выбран нами в качестве прототипа.

Пермиксон является импортным лекарственным средством, проявляет недостаточно выраженную антипролиферативную активность, для получения терапевтического эффекта требуется проведение нескольких курсов терапии.

В свете сказанного актуальным является поиск препаратов, обладающих комплексным влиянием на регуляторные механизмы, запускающие каскад физиологических изменений, которые приводят к возникновению такой серьезной патологии как ДГПЖ.

Задача изобретения - расширение арсенала средств природного происхождения на основе отечественного сырья, эффективных при лечении ДГПЖ.

Технический результат достигается тем, что в качестве антипролиферативного средства используют липиды торфа.

Липиды торфа - вещества от темно-бурого до почти черного цвета, не растворимы в воде, растворяются в гексане, бензоле, бензине, ацетоне, этаноле, метаноле, диэтиловом и петролейном эфирах, еще лучше - в хлороформе, содержат фосфолипиды, каротиноиды хлорофиллы, стерины, жирные кислоты.

Средство получают следующим образом.

Торф верховой влажностью 25-30% измельчают в шаровых мельницах планетарного или виброцентробежного типов, обеспечивающих ускорение воздействующих тел, например шаров, 300 м/с². Время пребывания сырья в зоне обработки составляет 1-4 минуты. Механическую обработку проводят в воздушной среде. Измельченный торф экстрагируют смесью этилового спирта и хлороформа при соотношении 1:1 в течение 1 ч, фильтруют, упаривают и сушат в вакууме. В полученных липидах определяют содержание жирных кислот и β-ситостерина.

Пример 1. Торф верховой влажностью 25-30% экстрагируют смесью этилового спирта и хлороформа при соотношении 1:1 в течение 1 ч, фильтруют, упаривают и сушат в вакууме. В полученных липидах определяют содержание липидов, жирных кислот и β-ситостерина (табл.1).

Пример 2. Торф верховой влажностью 25-30% измельчают в шаровой мельнице планетарного типа, обеспечивающей ускорение воздействующих тел, например шаров, 300 м/с². Время пребывания сырья в зоне обработки составляет 1 минуты. Механическую обработку проводят в воздушной среде. Измельченный торф экстрагируют смесью этилового спирта и хлороформа при соотношении 1:1 в течение 1 ч, фильтруют, упаривают и сушат в вакууме. Содержание липидов, жирных кислот и β-ситостерина незначительно повышается по сравнению с примером №1, (табл.1).

Пример 3. Торф верховой влажностью 25-30% измельчают в шаровой мельнице планетарного типа, обеспечивающей ускорение воздействующих тел, например шаров, 300 м/с². Время пребывания сырья в зоне обработки составляет 2 минуты. Механическую обработку проводят в воздушной среде. Измельченный торф экстрагируют смесью этилового спирта и хлороформа при соотношении 1:1 в течение 1 ч, фильтруют, упаривают и сушат в вакууме. Содержание липидов возросло почти в 2 раза и существенно повысился выход жирных кислот и β-ситостерина по сравнению с примером №1 (табл.1).

Пример 4. Торф верховой влажностью 25-30% измельчают в шаровой мельнице планетарного типа, обеспечивающей ускорение воздействующих тел, например шаров, 300 м/с². Время пребывания сырья в зоне обработки составляет 4 минуты. Механическую обработку проводят в воздушной среде. Измельченный торф экстрагируют смесью этилового спирта и хлороформа при соотношении 1:1 в течение 1 ч, фильтруют, упаривают и сушат в вакууме. Содержание липидов, жирных кислот и β-ситостерина возросло по сравнению с примером №1, но снизилось по сравнению с примером №3 (табл.1).

Эксперименты по антипролиферативному действию липидов торфа проводили на 120 аутбредных белых крысах самцах позднего репродуктивного возраста (8-10 мес) массой 500-550 г, выращенных в конвенциональных условиях в клинике лабораторных животных НИИ фармакологии СО РАМН. Антипролиферативное влияние липидов торфа оценивали на модели ДГПЖ, вызванной ежедневным внутрибрюшинным введением сульпирида (эглонил, раствор в ампулах, Sanofi-Winthrop Industrie, Франция) в дозе 40 мг/кг в течение 60 сут [9, 11]. На протяжении эксперимента крысам вводили в желудок липиды торфа в виде суспензии на 1% крахмальной слизи в дозах 10, 30, 60 мг/кг. В качестве референтного препарата применяли экстракт Serenoa repens пермиксон (Pierre Fabre Medicament Production, Франция) в дозе 50 мг/кг (по экстракту Serenoa repens) [19]. Контрольные животные получали 1% крахмальную слизь. Через 60 сут крыс декапитировали под эфирным наркозом. Взвешивали переднюю, боковую и заднюю доли предстательной железы. Для гистологического исследования боковую и заднюю доли фиксировали 10% нейтральным формалином, депарафинированные срезы окрашивали гематоксилином-эозином. В гомогенатах боковой и задней долей предстательной железы определяли содержание белка, диеновых конъюгатов, скорость образования малонового диальдегида, количество восстановленного глутатиона, активность селензависимой глутатионпероксиазы и супероксиддисмутазы. В плазме крови анализировали содержание пролактина, тестостерона и 5α-дигидротестостерона иммунофлуоресцентным методом (наборы DRG International, США).

Статистическую обработку результатов проводили методом парных сравнений с использованием непараметрического критерия Вилкоксона-Манна-Уитни при вероятности ошибочного вывода, не превышающей 5% (p≤0,05).

Сульпирид, блокируя рецепторы D₂ дофамина в тубероинфундибулярной системе, значительно увеличивает секрецию стимулятора пролиферации предстательной железы пролактина с развитием экспериментальной ДГПЖ. При введении сульпирида в течение 60 сут масса передней доли предстательной железы не изменялась, масса боковой и задней долей и весовые коэффициенты (отношение массы железы к массе тела животных) становились в 1,8-2,1 раза больше, чем у интактных животных (табл.2). При гистологическом исследовании предстательной железы определялись увеличенное число ацинусов с папиллярным разрастанием эпителия в форме сосочков. Строма между ацинусами содержала большое количество гипертрофированных гладких мышц, грубых коллагеновых волокон, была инфильтрирована нейтрофилами, лимфоцитами, макрофагами, тучными клетками. Расширенный просвет ацинусов заполнялся ацидофильной массой и нейтрофилами. В гомогенатах боковой и задней долей предстательной железы в 1,6 раза увеличивалось содержание белка и активировалось перекисное окисление липидов на фоне ингибирования антиперекисной защиты. Содержание диеновых конъюгатов повышалось в 2,1 раза по сравнению с их количеством в норме, продукция малонового диальдегида в присутствии аскорбата ускорялась в 2,2 раза, после добавления NADP·H - в 2,7 раза. Содержание восстановленного глутатиона, активность глутатионпероксидазы и супероксиддисмутазы уменьшались в 1,7-2,2 раза. В сыворотке крови крыс с экспериментальной ДГПЖ содержание пролактина возрастало в 5,8 раза, 5α-дигидротестостерона - в 1,5 раза, количество тестостерона снижалось в 3,2 раза (табл.2).

Липиды торфа в дозах 10, 30 и 60 мг/кг и экстракт Serenoa repens в дозе 50 мг/кг эффективно препятствовали прогрессированию экспериментальной ДГПЖ, вызванной инъекциями сульпирида у крыс самцов позднего репродуктивного возраста. В дозе 10 мг/кг липиды торфа и экстракт Serenoa repens снижали массу боковой и задней долей предстательной железы в 1,3-1,4 раза, хотя она оставалась в 1,4-1,5 раза больше, чем в норме. В дозах 30 и 60 мг/кг липиды торфа уменьшали массу боковой и задней долей в 1,8-2 раза, при этом масса становилась такой же, как у интактных животных. Весовые коэффициенты снижались в 1,8-2 раза. Антипролиферативное действие липидов торфа в дозах 30 и 60 мг/кг превосходило эффект экстракта Serenoa repens (табл.2).

Для углубленного исследования антипролиферативного действия при модели ДГПЖ липиды торфа вводили в дозе 30 мг/кг. Под влиянием экспериментальной терапии липидами торфа в ткани боковой и задней долей предстательной железы сокращалась площадь эпителиальных структур на фоне расширения просвета ацинусов. Ткань предстательной железы состояла из отдельных железок, разделенных узкими пучками соединительной ткани с гладкомышечными клетками, коллагеновыми и эластическими волокнами нормального строения. Клеточная инфильтрация интерстиция отсутствовала, в ацинусах не определялись лейкоциты. При введении экстракта Serenoa repens сохранялась умеренная лимфоцитарно-макрофагальная инфильтрация. В гомогенатах боковой и задней долей предстательной железы экспериментальная терапия липидами торфа сопровождалась снижением содержания белка в 1,6 раза, при действии экстракта Serenoa repens - в значительно меньшей степени, в 1,3 раза (табл.3).

Липиды торфа оказывали выраженное антиоксидантное действие. В гомогенатах боковой и задней долей предстательной железы содержание продуктов перекисного окисления липидов и показатели антиперекисной защиты - количество восстановленного глутатиона, активность глутатионпероксидазы и супероксиддисмутазы нормализовались. Содержание диеновых конъюгатов уменьшалось в 1,7 раза, продукция аскорбат- и NADP·H-зависимого малонового диальдегида замедлялась в 2-2,3 раза, содержание глутатиона, активность глутатионпероксидазы и супероксиддисмутазы повышались в 1,5-2 раза по сравнению с показателями при модели ДГПЖ. При введении экстракта Serenoa repens интенсивность липопероксидации снижалась в 1,4-1,8 раза, активность антиперекисной защиты возрастала в 1,3-1,4 раза (различия с эффектами липидов торфа недостоверны). Скорость продукции малонового диальдегида превышала скорость в норме в 1,4-1,5 раза, содержание восстановленного глутатиона, активность глутатионпероксидазы и супероксиддисмутазы оставались сниженными в 1,4 раза (табл.3).

В крови крыс, получавших липиды торфа, содержание пролактина снижалось в 2,6 раза по сравнению с уровнем гормона у крыс, которым вводили только сульпирид, но оно в 2,2 раза превышало норму. При введении экстракта Serenoa repens содержание в крови пролактина уменьшалось в меньшей степени - в 1,5 раза, оставаясь в 3,8 раза выше нормы и в 1,7 раза больше, чем при введении липидов торфа. Содержание мужских половых гормонов в крови крыс, защищенных липидами торфа и экстрактом Serenoa repens, изменялось в одинаковой степени и становилось близким к количеству гормонов у интактных животных - содержание тестостерона повышалось в 2,2-2,7 раза, 5α-дигидротестостерона - снижалось в 1,6-1,7 раза по сравнению с количеством этих гормонов, измеренном при введении одного сульпирида (табл.3).

Таким образом, при модели ДГПЖ, вызванной введением стимулятора секреции пролактина сульпиридом крысам самцам позднего репродуктивного возраста, липиды торфа в эффективной дозе 30 мг/кг и экстракт Serenoa repens в дозе 50 мг/кг, препятствовали развитию гиперплазии боковой и задней долей предстательной железы, разрастанию ее эпителия и воспалительной инфильтрации. Оба препарата оказывали выраженное антиоксидантное действие и изменяли в сторону нормы гормональный баланс. При экспериментальной ДГПЖ липиды в большей степени, чем экстракт Serenoa repens, сдерживали увеличение массы боковой и задней долей предстательной железы и развитие гиперпролактинемии.

Судя по росту уровня тестостерона и снижению количества 5α-дигидротестостерона, в крови крыс, получавших на фоне инъекций сульпирида липиды торфа, этот препарат ингибирует 5α-редуктазу и тормозит восстановление тестостерона в 5α-дигидротестостерон - стимулятор пролиферации ткани предстательной железы. В механизме антипролиферативного эффекта липидов торфа большое значение имеет антиоксидантное действие, так как продукты липопероксидации стимулируют пролиферацию эпителия и соединительной ткани в предстательной железе.

Предложенное средство по лечебному действию превосходит прототип не менее чем в 1,5 раза.

Таблица 1 Выход липидов и экстрактивных веществ из торфа № Время механообработки, мин Выход липидов, % Содержание, % мас.       жирных кислот β-ситостерин 1 0 3,6 18,1 18,1 2 1 4,3 20,3 20,3 3 2 6,1 25,3 25,3 4 4 5,2 21,4 21,4

Таблица 2 Влияние липидов торфа в сравнении с действием экстракта Serenoa repens (пермиксон) на массу предстательной железы при модели ее доброкачественной гиперплазии ( ; n=10) Показатель Интактные животные Сульпирид Липиды торфа Экстракт Serenoa repens 10 мг/кг 30 мг/кг 60 мг/кг + сульпирид Масса крыс, г 510,6±7,5 523,4±8,7 517,5±6,4 508,9±12,6 521,7±9,6 529,6±11,5 Передняя доля предстательной железы масса, мг 191,8±12,7 194,7±10,5 197,9±10,9 179,1±7,2 183,7±12,6 190,9±12,0 весовой коэффициент, мг/г 0,38±0,05 0,37±0,04 0,38±0,03 0,35±0,05 0,35±0,04 0,36±0,02 Боковая доля предстательной железы масса, мг 43,6±2,9 87,9±7,1^* 61,4±3,1^*+ 43,4±4,7⁺ 45,7±4,4⁺ 64,5±3,5^*+# весовой коэффициент, мг/кг 0,08±0,01 0,17±0,02^* 0,12±0,02 0,08±0,01⁺ 0,09±0,02⁺ 0,12±0,02 Задняя доля предстательной железы масса, мг 49,6±3,8 96,7±4,8^* 72,6±4,2^*+ 47,6±5,9⁺ 53,7±3,3⁺ 70,2±4,0^*+# весовой коэффициент, мг/кг 0,10±0,02 0,18±0,02^* 0,14±0,03 0,09±0,01⁺ 0,10±0,02⁺ 0,13±0,02 Примечание. Р<0,05: по сравнению с показателем ^* - интактных животных, ⁺ - при введении сульпирида, ^# - при введении липидов торфа в дозах 30 и 60 мг/кг.

Таблица 3 Влияние липидов торфа на липопероксидацию и содержание гормонов в сравнении с действием экстракта Serenoa repens (пермиксон) при модели доброкачественной гиперплазии предстательной железы ( ; n=10) Показатель Интактные животные Сульпирид Липиды торфа Экстракт Serenoa repens + сульпирид Гомогенат предстательной железы Белок, мг/г ткани 120,7±7,9 197,4±10,3^* 124,4±6,8⁺ 156,8±7,3^*+# Диеновые конъюгаты, мкмоль/г ткани 18,6±1,5 38,7±2,7^* 23,4±2,2⁺ 26,8±3,4⁺ Малоновый диальдегид, нмоль/мг белка·мин: аскорбатзависимый 0,44±0,03 0,98±0,07^* 0,48±0,06⁺ 0,63±0,07^*+ NADP·H-зависимый 0,57±0,06 1,54±0,06^* 0,68±0,07⁺ 0,88±0,09^*+ Восстановленный глутатион, нмоль/мг белка 5,2±0,4 2,4±0,3^* 4,4±0,3⁺ 3,5±0,5^*+ Глутатионпероксидаза, нмоль NADP·H/г ткани·мин 2528±123 1478±96^* 2223±109⁺ 1865±114^*+ Супероксиддисмутаза, E/мг белка 0,87±0,07 0,41±0,05^* 0,81±0,07⁺ 0,61±0,06^*+ Сыворотка крови Пролактин, нг/мл 10,9±1,8 62,7±3,3^* 24,5±2,1^*+ 41,7±5,3^*+# Тестостерон, пг/мл 2187±312 673±57^* 1834±131⁺ 1460±97⁺ 5α-Дигидротестостерон, пг/мл 179,7±10,9 265,9±23,4^* 167,4±17,2⁺ 158,7±17,9⁺ Примечание. Р<0,05: по сравнению с показателем ^* - интактных животных, ⁺ - при введении сульпирида, ^# - при введении липидов торфа.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к антипролиферативному средству для лечения доброкачественной гиперплазии предстательной железы (ДГПЖ). Антипролиферативное средство для лечения доброкачественной гиперплазии предстательной железы на основе природного сырья представляет собой липиды верхового торфа, полученные путем измельчения верхового торфа в шаровых мельницах планетарного или виброцентробежного типов, экстракции измельченного торфа смесью этилового спирта и хлороформа, фильтрации, упаривания и сушки, при определенных условиях. Вышеописанное средство позволяет расширить арсенал средств природного происхождения на основе отечественного сырья, эффективных при лечении ДГПЖ. 3 табл., 4 пр.

Антипролиферативное средство для лечения доброкачественной гиперплазии предстательной железы на основе природного сырья, характеризующееся тем, что представляет собой липиды верхового торфа, полученные путем измельчения верхового торфа влажностью 25-30% в шаровых мельницах планетарного или виброцентробежного типов при 300 м/с² 1-4 мин в воздушной среде, экстракции измельченного торфа смесью этилового спирта и хлороформа при соотношении 1:1 в течение 1 ч, фильтрации, упаривании и сушки.