ПРЕПАРАТ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ И ПРОФИЛАКТИКИ МАСТИТА У КОРОВ Российский патент 2014 года по МПК A61K36/484 A61K31/415 A61K31/395 A61P15/00 A61P29/00 A61P31/04 

Область техники, к которой относится изобретение

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к препарату для лечения и профилактики мастита у коров, и может быть использовано в акушерстве и гинекологии при создании лекарственных средств для лечения и профилактики послеродового острого мастита у коров.

Уровень техники

Известен препарат для лечения маститов у коров, содержащий растительную основу и нашатырный спирт, при этом он дополнительно содержит димексид, а в качестве растительной основы - фуз, полученный в производстве масла из семян тыквы, и носитель типа Аэросил-380 при следующем соотношении исходных компонентов, масс.%:

- 30%-ный раствор димексида - 4-5,

- 0,5%-ный раствор аммиака (нашатырный спирт) - 2-4,

- носитель Аэросил-380 - 2-5,

- фуз - остальное (см. http://naT.RU №2170085, МПК A61K 31/00, A61K 35/78, A61P 15/00 опубл. 10.07.2001 г).

Недостатком данного препарата является невысокая эффективность применения.

Известно химиотерапевтическое средство, применяемое для лечения эндометрита у коров путем внутриматочного введения йодинала, основным действующим веществом которого является молекулярный йод (см. Григорьева Т.Е. Лечение и профилактика эндометрита у коров. М.: Росагропромиздат, 1988, с.40-41).

Недостатком применения йодинала является одностороннее антисептическое действие препарата, при этом на фоне возможного раздражающего действия йода на ткани матки в ней не могут происходить процессы, направленные на быстрое формирование местного локального иммунитета.

Известно средство для профилактики мастита, содержащее поливиниловый спирт и дистиллированную воду, при этом оно дополнительно содержит поливиниловый спирт марки 11/2 и жидкое мыло с дезинфицирующим эффектом «Клиндезин-софт» при следующем соотношении компонентов, масс.%:

- поливиниловый спирт марки ПВС 11/2 - 2,0-6,0,

- «Клиндезин-софт» - 0,7-1,0,

- дистиллированная вода - остальное (см. пат. RU №2352324, МПК A61K 31/00, A61P 31/02, опубл. 20.04.2009 г.).

Недостатком данного средства является то, что данный препарат не оказывает широкого спектра действия, например он неактивен в отношении аэробных Грам+ и Грам- бактерий.

Известен препарат для лечения мастита у коров в лактационный период, содержащий диоксидин, дополнительно содержит ксантановую смолу, лактам тетраметилэндиэтилентетрамина и метилурацил при следующем соотношении компонентов, масс.%:

- ксантановая смола - 0,18,

- лактам тетраметилэндиэтилентетрамина - 3,0,

- метилурацил - 0,5,

- дистиллированная вода - 05,32 (см. пат. RU №2491069, МПК A61K 31/43, A61P 15/14, опубл. 27.08.2013 г.).

Наиболее близким по технической сущности и достигаемому положительному эффекту и принятым авторами за прототип является средство для лечения животных при послеродовом эндометрите, включающее противомикробные и противовоспалительные препараты и полимерную основу, при этом в качестве противомикробных препаратов оно содержит этакридина лактат и цефатоксим, в качестве противовоспалительного препарата - сок алое при следующем соотношении компонентов, масс.%: этакридина лактат 0,6; сок алое 50.4; цефатоксим 2, мочевина 15,0; формалин нейтральный 10; вода дистиллированная 5; глицерин 17,0 (см. http://naT.RU №2367416, МПК A61K 31/047, A61K 1/115, A61K 31/17, A61K 31/473, A61K 36/886, A61P 15/00, опубл. 20.09.2009 г.).

Недостатком данного средства является то, что оно не обладает антигистаминным действием, а именно не снимает спазм гладкой мускулатуры, не уменьшает проницаемости капилляров, так как воспалительный процесс обуславливает повышенную чувствительность к продуктам тканевого распада и антигенам микробной клетки.

Раскрытие изобретения

Задачей предлагаемого изобретения является разработка препарата для лечения и профилактики мастита у коров, обладающего выраженным противомикробным и противовоспалительным широкого спектра действием с одновременным уменьшением реакции организма на гистамин, снятием спазм гладкой мускулатуры и уменьшением проницаемости капилляров.

Технический результат, который может быть получен с помощью предлагаемого изобретения, сводится к выраженному противомикробному и противовоспалительному широкого спектра действию с одновременным уменьшением реакции организма на гистамин, снятию спазма гладкой мускулатуры и уменьшению проницаемости капилляров.

Технический результат достигается с помощью препарата для лечения и профилактики мастита у коров, содержащего противомикробные, противовоспалительные препараты и дистиллированную воду, при этом он дополнительно содержит корень солодки, причем в качестве противомикробного препарата содержит метронидазол, а в качестве противовоспалительного препарата - ципрофлоксацин, при следующем соотношении компонентов, г/л:

- корень солодки 80-85 г;

- метронидазол 3,5-4,0 г;

- ципрофлоксацин 2,0-2,5 г;

- дистиллированная вода - остальное.

Сущность приготовления препарата для лечения и профилактики мастита у коров заключается в следующем.

Корень солодки в количестве 80-85 г заливают 0,5 л дистиллированной воды при температуре 100⁰C, выдерживают в течение 30-35 мин, затем берут по 100 мл дистиллированной воды и растворяют в нем нижеследующие препараты:

- метронидазол, в количестве 3,8-4,0 г предварительно растертый в ступке, растворяют в 100 мл дистиллированной воды;

- ципрофлоксацин, в количестве 2,0-2,5 г предварительно растертый в ступке, растворяют в 100 мл дистиллированной воды, затем все компоненты соединяют и получают 1 литр.

Таким образом, использование в предлагаемом препарате корня солодки, который содержит ликуразид, глицирризиновую кислоту, флавоноиды, слизь и обладает противоспалительным, спазмолитическим и цитопротекторным действием, метронидазол а, который обладает противомикробным и противопротозойным действием, активен в отношении анаэробных микроорганизмов и простейших, некоторых Грам+ микроорганизмов, ципрофлоксацина, который является антибактериальным препаратом группы фторхинолонов 2 поколения широкого спектра действия, действует преимущественно на Грам+ и некоторые Грам- бактерии, и который уменьшает реакцию организма на гистамин, снимает спазм гладкой мускулатуры, оказывает противовоспалительное действие, уменьшая проницаемость капилляров, достигается технический результат, а именно: выраженное противомикробное и противовоспалительное широкого спектра действие с одновременным уменьшением реакции организма на гистамин, снятием спазма гладкой мускулатуры и уменьшением проницаемости капилляров.

Краткое описание чертежей и иных материалов

В таблице 1 дан препарат для лечения и профилактики мастита у коров, органолептические свойства препарата.

В таблице 2, тоже, результаты изучения органолептических и токсикологических свойств препарата в процессе хранения.

В таблице 3, тоже, изучение токсикологических параметров препарата.

В таблице 4, тоже, изучение аллергизирующего действия препарата.

Осуществление изобретения

Примеры конкретного выполнения получения препарата для лечения и профилактики мастита у коров.

Пример 1. Предлагаемый препарат для лечения и профилактики мастита у коров готовят следующим образом.

Корень солодки в количестве 75 г заливают 0,5 л дистиллированной водой при температуре 100°C, выдерживают в течение 25 мин, затем берут по 100 мл дистиллированной воды и растворяют в ней нижеследующие препараты:

- метронидазол, в количестве 3,5 г предварительно растертый в ступке, растворяют в 100 мл дистиллированной воды;

- ципрофлоксацин, в количестве 1,5 г предварительно растертый в ступке, растворяют в 100 мл дистиллированной воды, затем все компоненты соединяют и получают 1 литр.

При этом корень солодки содержит ликуразид, глицирризиновую кислоту, флавоноиды, слизь и обладает противоспалительным, спазмолитическим и цитопротекторным действием;

- метронидазол обладает противомикробным и противопротозойным действием, является антибактериальным препаратом и активен в отношении анаэробных микроорганизмов и простейших, некоторых Грам+ микроорганизмов;

- ципрофлоксацин является антибактериальным препаратом группы фторхинолонов 2 поколения широкого спектра действия, действует преимущественно на Грам+ и некоторые Грам- бактерии.

Полученный препарат испытан для лечения и профилактики острого мастита у коров.

Лечение мастита:

- после сдаивания молока с больной доли вымени коровы внутрицистернально вводят раствор в дозе 50 мл один раз в день до выздоровления. Молоко с больной доли вымени утилизируют;

- проводят воздействие на биологически активные точки (БАТ) импульсным низкочастотным током в области вымени в течение 2 мин с интервалом 12 ч до выздоровления.

Выздоровление коров проходило в течение трех недель.

Профилактика мастита:

- за 5-6 дней перед отелом проводят точечный массаж в области поясницы и таза прибором, например «Вокал-В», воздействуя на биологически активные точки (БАТ) импульсным низкочастотным током в течение 1 мин с интервалом 12 ч в течение 5 дней;

- с первого дня после отела проводят антисептическую обработку сосков вымени предлагаемым препаратом на протяжении 7-ми дней после каждого доения.

- за 5-6 дней перед переводом коровы в общее стадо проводят точечный массаж в области поясницы, таза и вымени прибором, например, «Вокал-В» воздействуя на биологически активные точки (БАТ) импульсным низкочастотным током в течение 1 мин с интервалом 12 ч в течение 5 дней.

Результат: выздоровление коров проходило в течение двадцати одного дня.

Пример 2. Проводят аналогично примеру 1, но берут компоненты в следующих количествах: - корень солодки в количестве 80 г заливают 0,5 л дистиллированной воды при температуре 100°C, выдерживают в течение 30 мин, затем берут по 100 мл дистиллированной воды и растворяют в ней нижеследующие препараты:

- метронидазол, в количестве 3,8 г, предварительно растертый в ступке, растворяют в 100 мл дистиллированной воды;

- ципрофлоксацин, в количестве 2,0 г, предварительно растертый в ступке, растворяют в 100 мл дистиллированной воды, затем все компоненты соединяют, добавляют дистиллированную воду до 1 литра.

Результат: полученный препарат испытан для лечения и профилактики острого мастита у коров, выздоровление коров прошло в течение четырнадцати дней.

Пример 3. Проводят аналогично примеру 1, но берут компоненты при следующем количестве: - корень солодки в количестве 85 г заливают 0,5 л дистиллированной воды при температуре 100°C, выдерживают в течение 35 мин, затем берут по 100 мл дистиллированной воды и растворяют в ней нижеследующие препараты:

- метронидазол, в количестве 4,0 г, предварительно растертый в ступке, растворяют в 100 мл дистиллированной воды;

- ципрофлоксацин, в количестве 2,5 г, предварительно растертый в ступке, растворяют в 100 мл дистиллированной воды, затем все компоненты соединяют, добавляют дистиллированную воду до 1 литра.

Результат: полученный препарат испытан для лечения и профилактики острого мастита у коров, выздоровление коров прошло в течение четырнадцати дней.

Пример 4. Проводят аналогично примеру 1, но берут компоненты при следующем количестве:

- корень солодки в количестве 90 г заливают 0,5 л дистиллированной воды при температуре 100°C, выдерживают в течение 40 мин, затем берут по 100 мл дистиллированной воды и растворяют в ней нижеследующие препараты:

- метронидазол, в количестве 45 г предварительно растертый в ступке, растворяют в 100 мл дистиллированной воды;

- ципрофлоксацин, в количестве 3,0 г предварительно растертый в ступке, растворяют в 100 мл дистиллированной воды, затем все компоненты соединяют, добавляют дистиллированную воду до 1 литра.

Результат: полученный препарат испытан для лечения и профилактики острого мастита у коров, выздоровление коров прошло также в течение четырнадцати дней, но увеличился расход компонентов.

Таким образом, наиболее оптимальными примерами являются примеры 2 и 3, так как препарат с данным количеством компонентов дал положительный результат.

Препарат для лечения и профилактики мастита у коров по предлагаемому изобретению прошел испытания в лаборатории акушерства и гинекологии отдела ветеринарной медицины Ставропольского научно-исследовательского института животноводства и кормопроизводства для лечения и профилактики послеродового острого мастита у коров и представлены примеры испытания препарата: - органолептические свойства препарата (таблица 1);

- результаты изучения органолептических и токсилогических свойств препарата, в процессе хранения (таблица 2);

- определение хронической токсичности препарата, опыты на белых мышах (таблица 3);

- аллергенность предлагаемого препарата (таблица 4).

Пример 5. Физико-химические свойства препарата для лечения и профилактики мастита у коров.

Препарат представляет собой комплексный препарат, не подлежащий длительному хранению. Активными компонентами препарата являются антибактериальные средства ципрофлоксоцин и метронидазол, биологически активные компоненты корня солодки. Препарат получают путем растирания и растворения действующих веществ в отваре корня солодки согласно примера 2 и 3.

Полученный препарат представляет собой мелкодисперсную суспензию коричневатого цвета (см. таблицу 1), со слабым запахом солодки, при хранении расслаивается с образованием осадка темно-коричневого цвета. При изучении стабильности препарата флаконы с препаратом выдерживают 7 суток при комнатной температуре в защищенном от света месте. Ежедневно оценивают органолептические параметры препарата и вводят суспензию в желудок белым мышам (три головы) в тест-дозе 0,6 мл. В результате проведенных исследований установлено, что препарат на вторые сутки хранения изменил цвет на темно-коричневый, произошло ослизнение. Надосадочная жидкость приобрела бурый оттенок. Цвет с третьего дня наблюдения имел специфический запах брожения. При введении лабораторным животным в тест-дозе на третьи сутки исследования наблюдалась диарея, тем не менее, летального исхода не регистрировали.

Таким образом, предлагаемый препарат нестабилен в процессе хранения и его необходимо готовить непосредственно перед применением. В исключительных случаях возможно хранение препарата при температуре 4-6°C не более суток.

Пример 6. Изучение токсикологических параметров препарата.

Определение острой токсичности.

Для определения острой токсичности препарата применяют методику, изложенную в «Методических указаниях по токсикологической оценке новых препаратов для лечения и профилактики незаразных болезней животных», утвержденных В.Т. Самохиным (1987). Опыт проводят на белых беспородных мышах. По принципу аналогов отобрано 48 животных с массой тела 22,0±0,6 г и сформировано 6 групп мышей (n=8), поение и кормление которых было прекращено за 4 часа до начала опыта. Наименьшую токсичную дозу препарата определяют по наиболее токсичному препарату, входящему в его состав - ципрофлоксоцину. Мышам первой группы в желудок с помощью металлического зонда вводят 0,1 мл препарата - 0,25 мг, животным второй группы - 0,2 мл, третьей - 0,3, четвертой - 0,4 мл, пятой - 0,5 мл, шестой - 0,6 мл. После введения препарата корм дают через три часа. Наблюдение за мышами осуществляют в течение 72 часов, учитывают активность, аппетит, состояние шерстного покрова, регистрируют случаи гибели животных.

Мыши первой, второй третьей и четвертой групп в течение 20 минут после введения препарата были незначительно угнетены, сбивались в кучу в углу клетки, далее вели себя активно. После дачи корма ели с аппетитом. На протяжении оставшегося времени наблюдения изменений в поведении и общем состоянии не наблюдалось.

Мыши пятой и шестой групп в течение 5 минут после введения препарата наблюдалась инспираторная одышка, на протяжении 1-1,5 часов мыши были угнетены, шерсть взъерошена, сбивались в углу в кучу, аппетит отсутствовал. Состояние животных нормализовалось в течение 3 часов.

Летальных случаев не наблюдалось ни в одной из групп. Полученные данные позволили отнести предлагаемый препарат к группе малотоксичных препаратов.

Пример 7. Изучение хронической токсичности препарата.

С целью определения хронической токсичности препарата был проведен опыт по ускоренному определению кумулятивного эффекта. Было отобрано 20 белых нелинейных мышей с массой тела 18-25 гр. По принципу аналогов сформированы две группы (n=10). Препарат вводят внутрижелудочно с помощью металлического зонда ежедневно. Мышам контрольной группы таким же способом вводят дистиллированную воду. В течение 4 суток препарат дают в дозе 1000 мг/кг. Следующие четверо суток животные получают препарат из расчета 2000 мг/кг. В течение 9-15 дней опыта доза препарата составляет 4000 мг/кг. С 15 по 20 день мыши получают препарат из расчета 8000 мг/кг.

Наблюдение осуществляют ежедневно на протяжении всего периода опыта. При оценке состояния мышей учитывают габитус животных, их активность, аппетит.

Клиническое состояние животных в течение первого и второго периодов опыта оставалось в пределах нормы, мыши были активны, с аппетитом принимали корм, шерсть гладкая. С 9-го дня опыта было отмечено, что шерсть животных стала взъерошенной, тусклой, реакция на внешние раздражители заторможена, крысы подолгу сидели у кормушки, после чего медленно начинали есть. С 15 дня стала заметна задержка в росте мышей опытной группы по сравнению с мышами контрольной группы, шерсть стала редкой, взъерошенной, мыши подолгу сидели у кормушки, после чего медленно начинали есть, упитанность животных опытной группы была ниже средней. Состояние крыс контрольной группы на протяжении всего периода наблюдения оставалось удовлетворительным.

Суммарная средняя летальная доза при многократном введении составила 88000 мг/кг.

Для определения коэффициента кумуляции используют формулу:

К=LD₅₀ ^x/LD₅₀ ^o, где

К - коэффициент кумуляции;

LD₅₀ ^x - летальная средняя доза при многократном введении;

LD₅₀ ^o - средняя летальная доза при однократном введении.

К_{препарат}=88000/10000-8,8

Коэффициент кумуляции равен 8,8, что относит данный препарат к четвертой группе - слабо выраженная степень кумуляции.

Пример 8. Изучение аллергизирующего действия препарата.

Изучение аллергизирующего действия препарата (см. таблицу) проводят методом накожных аппликаций. Для этого были сформированы 2 группы беспородных кроликов, по 5 особей в каждой. Кроликов первой группы ежедневно сенсибилизируют многократными аппликациями (n=24), препарат в один и тот же участок кожи на боку диаметром 5 см каждые 4 часа в течение четырех дней. Вторую группу (контрольную) сенсибилизируют многократными аппликациями (n=24) лошадиной сыворотки по 0,1 мл каждые 4 часа 4 дня подряд.

Через 72 часа (на 7-ой день) проводят капельные пробы. В опытной группе используют препарат по предлагаемому изобретению, в контрольной - лошадиную сыворотку.

Учет реакции ведут каждые 24 часа, обращая внимание на признаки развития дерматита в местах капельной пробы.

В результате опыта установлено отсутствие аллергизирующего действия препарата.

Пример 9. Местно-раздражающее действие препарата.

Для определения раздражающего действия препарата используют метод конъюнктивальных проб. Для проведения конъюнктивальной пробы используют три морские свинки. Животным однократно на конъюнктиву под верхнее веко левого глаза с помощью стерильной пипетки вводят одну каплю препарата по предлагаемому изобретению. Правый глаз служит контролем, в него инстилируют одну каплю дистиллированной воды. Учет результатов проводят через 30 минут, 1, 3, 6, 12 и 24, 72 часа, регистрируя наличие истечений, гиперемию, плотность, цвет конъюнктивы.

В результате обследования морских свинок спустя 30 минут после введения препарата отмечают незначительную гиперемию конъюнктивы и умеренное слезотечение, что закономерно при введении в конъюнктивальный мешок плохо растворимых веществ. Указанные изменения постепенно исчезают через 2-5 часов. При последующих осмотрах признаков воспалительной реакции, зуда, слезотечения не было.

На основании вышеизложенных результатов делают вывод о том, что препарат по предлагаемому изобретению не обладает местным раздражающим действием.

Пример 10. Определение антимикробных свойств препарата.

Для определения антибактериальной активности препарата используют диско-диффузионный метод. Для изготовления дисков препарат разводят равным количеством дистиллированной воды. Один миллилитр полученной суспензии используют для пропитки 100 дисков фильтровальной бумаги. Далее диски перемещают в стерильную чашку Петри, которую помещают в термостат для просушивания при температуре 37°C.

Посев тест-культуры полевого штамма стафилококка проводят на плотную питательную среду мясо-пептонный агар. После посева в стерильных условиях на поверхность агара помещают диски, пропитанные препаратом по предлагаемому изобретению. Диффузия препарата в агар привела к формированию зоны подавления роста микроорганизмов вокруг дисков. После инкубации чашек в термостате при температуре 37°C в течение 48 часов учитывают результат путем измерения диаметра зоны вокруг диска в миллиметрах, которая составила 24±1,6 мм, на основании чего делают вывод, что комплексный препарат по предлагаемому изобретению достаточно активен в отношении полевого штамма стафилококка.

Предлагаемое изобретение по сравнению с прототипом и другими известными техническими решениями имеет следующие преимущества:

- выраженное противомикробное и противовоспалительное широкого спектра действие;

- уменьшение реакции организма на гистамин;

- снятие спазма гладкой мускулатуры;

- уменьшение проницаемости капилляров;

- высокий лечебный эффект;

- повышение показателей естественной резистентности организма коров.

Препарат для лечения и профилактики мастита у коров

Таблица 1 Органолептические свойства препарата № Наименование показателя Норма по НТД 1 Описание препарата Мелкодисперсная суспензия 2 Прозрачность и цветность Суспензия коричневого цвета, при отстаивании образуется осадок темно-коричневого цвета, надосадочная жидкость мутная, светло-коричневого цвета. 3 Безвредность LD₅₀>10000 мг/кг, 4 класс опасности по ГОСТ 12.1.007-76

Препарат для лечения и профилактики мастита у коров

Таблица 2 Результаты изучения органолептических и токсикологических свойств препарата в процессе хранения Показатель Характеристика (норма) Дни хранения 1 2 3 4 5 6 7 Внешний вид и цвет Суспензия коричневого цвета, при отстаивании образуется осадок темно-коричневого цвета, надосадочная жидкость мутная, светло-коричневого цвета + - - - - - - Запах специфический + + - - - - - Безвредность в тест-дозе на одну мышь, 0,6 мл безвреден + + - - - - - + - соответствует критериальному показателю - - не соответствует критериальному показателю

Препарат для лечения и профилактики мастита у коров

Таблица 3 Изучение токсикологических параметров Номер периода I II III IV Сутки от начала опыта 1-4 5-8 9-15 15-20 Доли от LD₅₀ 0,1 0,2 0,4 0,8 Доза от LD- 1000 2000 4000 8000 Гибель(%) 0 0 0 0 Суммарная доза за период(на 1 кг массы тела) 4000 8000 28000 48000 Суммарная доза(на 1 кг массы тела) 4000 12000 40000 88000

Препарат для лечения и профилактики мастита у коров

Таблица 4 Изучение аллергизирующего действия препарата Препарат № животного Реакция кожи после
капельной пробы 12 48 72 часов часов часа Препарат по предлагаемому изобретению 1 - - - 2 ± - - 3 ± - - Контроль (сыворотка) 1 + ± - 2 + ± ± 3 ±     + инфильтрация и отек кожи при наличии эритемы ± очаговая эритема - видимой реакции нет

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для лечения и профилактики послеродового острого мастита у коров. Препарат содержит противомикробные, противовоспалительные препараты и дистиллированную воду. Дополнительно препарат содержит корень солодки. В качестве противомикробного препарата содержит метронидазол. В качестве противовоспалительного препарата - ципрофлоксацин, при следующем соотношении компонентов, г/л: корень солодки 80-85 г; метронидазол 3,5-4,0 г; ципрофлоксацин 2,0-2,5 г; дистиллированная вода - остальное. Использование заявленного препарата обеспечивает выраженный противомикробный и противовоспалительный эффект с одновременным уменьшением реакции организма на гистамин, снятием спазма гладкой мускулатуры и уменьшением проницаемости капилляров. 4 табл., 10 пр.

Препарат для лечения и профилактики мастита у коров, содержащий противомикробные, противовоспалительные препараты и дистиллированную воду, отличающийся тем, что он дополнительно содержит корень солодки, причем в качестве противомикробного препарата содержит метронидазол, а в качестве противовоспалительного препарата - ципрофлоксацин, при следующем соотношении компонентов, г/л:
- корень солодки 80-85 г;
- метронидазол 3,5-4,0 г;
- ципрофлоксацин 2,0-2,5 г;
- дистиллированная вода - остальное.