Средство для лечения эндометрита у коров Российский патент 2021 года по МПК A61K31/496 A61K36/484 A61K47/10 A61P15/00 

Предлагаемое средство относится к области ветеринарии и предназначено для лечения эндометрита у коров.

Эндометрит у коров - это заболевание послеродового периода, вызванное контаминацией родополовых путей самки условно-патогенной микрофлорой.

Для лечения эндометритов широко применяются этиотропные средства на основе антибиотиков, сульфаниламидов, производных нитрофуранов, которые, обладают антибактериальным действием. В ветеринарной гинекологии для внутриматочного применения применяют следующие лекарственные формы: твердые в виде таблеток, суппозиториев и палочек и жидкие в виде растворов и суспензий [Полянцев Н.И. Ветеринарное акушерство и биотехника репродукции животных / Н.И. Полянцев, В.В. Подберезный. - Ростов-на-Дону: «Феникс», 2001. - С. 338-339].

Недостатками твердых лекарственных форм являются: узкий спектр антимикробного действия, длительность применения, высокая стоимость и невозможность их введения на протяжении всего курса лечения животного с эндометритом вследствие сужения цервикального канала, соединяющего влагалище с полостью матки.

Известен препарат «ВАИ» для лечения эндометритов у коров, содержащий ихтиол 5,0-7,0, фракцию N 2 антисептика стимулятора Дорогова, 7,0-9,0; витамин А 0,41-1,81; масло растительное - остальное (Патент РФ 2065747. кл. А61K, А61Р, 1996).

Недостатком данного препарата является его низкая антибактериальная активность.

Известен препарат, состоящий из окситетрациклина гидрохлорида, стрептоцида, фурацилина, диметилглицеролатов кремния, глицеролатов кремния, ксантановой смолы как стабилизатора и дистиллированной воды как растворителя, при этом препарат состоит из компонентов при соотношении, мас. %: окситетрациклина гидрохлорид (95%) - 4,77-5,83; стрептоцид - 0,416-0,508; фурацилин - 0,166-0,204; диметилглицеролаты кремния (СН₃)₂Si(С₃Н₇О₃)₃⋅С₃ Н₈O₃ - 2,25-2,75; глицеролаты кремния Si(C₃H₇O₃)₄⋅6С₃ Н₈O₃ - 2,25-2,75; ксантановая смола - 0,225-0,275; дистиллированная вода - остальное (Патент РФ 2589902. кл. А61K, А61Р, 2016).

Недостатком данного средства является то, что в его состав входит 3 вида антибактериальных препаратов, что может привести к выработке множественной резистентности микроорганизмов к этим компонентам.

Известен препарат для стимуляции родовой деятельности, профилактики и лечения задержания последа и послеродовых эндометритов у коров, который включает на 1000 мл дистиллированной воды 0,05 г карбахолина, 70 г ихтиола, 5 г кристаллической глюкозы и 1 г фенола. Способ лечения острых послеродовых эндометритов у коров включает введение указанного препарата в количестве 20 мл, предварительно подогретого до температуры тела животного, глубоко в ягодичные мышцы 4-8 раз с интервалом 24-48 часов (Патент РФ 2251424. кл. А61K, А61Р, 2005).

Недостатком данного препарата является наличие у него только миотонического действия по типу неспецифической терапии на гладкую мускулатуру матки, и отсутствия при этом антибактериального действия.

Известно средство для лечения послеродовых эндометритов у коров в виде суппозиториев, содержащих корень солодки и лозеваль, а также вспомогательное вещество - воду, при следующих соотношениях исходных компонентов, мас. %: корень солодки 59-60, лозеваль 29-30, вода остальное (Патент РФ 2251418. кл. А61K, А61Р, 2005).

Недостатком данного средства является форма выпуска в виде суппозиториев, которые невозможно применять через неделю после отела вследствие сужения цервикального канала.

Известно средство для лечения эндометритов у коров в форме суппозиториев - "Глицеррицид", содержащее тилан (тилозин), фуразолидон, корень солодки, экстракт пижмы и глицерин при следующем соотношении исходных компонентов, мас.%: тилан - 7,0-7,5; норсульфазол - 7,0-7,5; фуразолидон - 7,0-7,5; корень солодки (Radix Glycyrrizac) - 39,0-40,0; экстракт пижмы (Herba Tanaceti) - 33,0-35,0; глицерин - остальное (Патент РФ 2170086. кл. А61K, А61Р, 2001).

Недостатком данного средства является невозможность введения суппозиториев на протяжении всего курса лечения животного с эндометритом вследствие сужения цервикального канала, соединяющего влагалище с полостью матки, а также применение одновременно трех антимикробных компонентов, что может привести к выработке множественной резистентности микроорганизмов.

Наиболее близким по технической сущности и достигаемому положительному эффекту и принятое авторами за прототип является средство для лечения и профилактики эндометрита у животных, обладающее противовоспалительным и антибактериальным действием, состоящее из метронидазола 4,0; ципрофлоксацина 2,0 и доксициклина 1,0; тавегила 2,5; новокаина 5,0; дистиллированной воды - остальное (Патент РФ 2537146. кл. А61K, А61Р, 2014).

Недостатком данного средства является применение нескольких антимикробных компонентов, что может привести к выработке множественной резистентности микроорганизмов.

Техническим результатом является получение средства для лечения эндометрита у коров, обладающее противовоспалительным, антибактериальным и регенеративным действиями

Технический результат достигается тем, что средство для лечения эндометритов у коров, включающее ципрофлоксацин и дистиллированную воду, согласно изобретнию дополнительно содержит отвар корня солодки на дистиллированной воде с растворенным в нем ципрофлоксацином и фенол при следующем соотношении компонентов, мас.%:

ципрофлоксацин 0,2-0,3 корень солодки 1-2 фенол 0,1 дистиллированная вода остальное

Сущность изобретения поясняется чертежами, где на фиг. 1 представлен график зависимости антимикробной активности препарата к некоторым представителям микрофлоры, вызывающей эндометрит, на фиг. 2 – фото, на котором изображена рана после первых суток использования средства; на фиг. 3 - фото - та же рана, после трех суток лечения.

Новизна заявленного технического решения заключается в том, что средство позволяет повысить процент выздоровления животных с острыми послеродовыми эндометритами, так как препарат обладает способностью стимулировать процесс регенерации тканей и высокой антимикробной активностью.

Корень солодки содержит набор биологически активных веществ: глицирризин, глюкозу, белковые, дубильные, эмульгирующие вещества. Корень солодки обладает смягчительным, обволакивающим и регенерирующим действием.

Ципрофлоксацин - Синтетический антибактериальный препарат широкого спектра действия из группы фторхинолонов. Ципрофлоксацин нарушает синтез ДНК, рост и деление бактерий; вызывает выраженные морфологические изменения (в т.ч. клеточной стенки и мембран) и быструю гибель бактериальной клетки. Низкая токсичность для клеток макроорганизма объясняется отсутствием в них ДНК-гиразы. На фоне применения ципрофлоксацина не происходит параллельной выработки устойчивости к другим антибактериальным ЛС, не принадлежащим к группе ингибиторов ДНК-гиразы, что делает его высокоэффективным по отношению к бактериям, устойчивым, например к аминогликозидам, пенициллинам, цефалоспоринам, тетрациклинам.

Фенол - химическое вещество органического происхождения, принадлежит к группе ароматических углеводородов и в количестве 0,5-0,1% от объема препарата фенол используют для его консервирования.

Приготовление средства для лечения эндометрита у коров, заключается в следующем: готовят отвар из корня солодки: к 5 л дистиллированной воды добавляют 50 г корня солодки и кипятят 10 мин, затем процеживают и охлаждают до 30°С и добавляют 10 г ципрофлоксацина при постоянном перемешивании. Охлаждение отвара корня солодки обусловлено тем, что при температуре ниже 30°С происходит не полное растворение ципрофлоксацина, что влияет на эффективность действия препарата, а при более высокой температуре, наоборот эффективность ципрофлоксацина снижается из-за потери его свойств. При этом препарат изменяет цвет (кофе с молоком). Затем добавляют 5 г фенола для консервирования лекарственного средства. Содержание фенола в готовом препарате составляет 0,1%.

Рабочее название используемого средства на основе отвара корня солодки с ципрофлоксацином для лечения эндометрита у коров - Фитафлокс.

Полученное средство применяют внутриматочно в дозе 100 мл с помощью шприца Жане через день до выздоровления, но не более 7 введений с интервалом не более 48 часов.

Оценку острой токсичности проводили способом перорального введения средства подопытным животным (крысам) путем однократного внутрижелудочного введения с помощью шприца и зонда. Концентрация действующих веществ в 1 мл соответствовала прописи. Крысам первой группы препарат вводили внутрижелудочно в дозе 8 мл. Крысы второй группы служили контролем, животным этой группы вводили 0,9% раствор натрия хлорида, в объеме тестируемого препарата вводимого животным.

Для определения субхронической токсичности были подобраны животные по принципу парных аналогов, которые содержались в идентичных условиях кормления и содержания. В опыте участвовало 20 половозрелых беспородных белых крыс массой 150-180 г. Крысам первой группы (n=10) испытуемый препарат давался в свободном доступе вместо воды в течение 14 дней. Вторая группа животных (n=10) служила контролем. За животными вели пристальное наблюдение, учитывая их поведение, общее состояние и аппетит.

В результате определения острой токсичности токсических явлений и гибели у лабораторных животных за весь период наблюдения не отмечали.

При изучении субхронической токсичности также не наблюдалось каких-либо изменений в поведении, общем состоянии и аппетите. Животные вели себя так же, как и животные из второй контрольной группы. На протяжении всего срока эксперимента гибели животных не наблюдалось.

Изучение параметров массы тела и внутренних органов крыс при изучении субхронической токсичности показало, что многократное применение препарата per os отрицательно не влияло на показатели клинического гомеостаза организма крыс. На протяжении опыта при применении препарата в течение 14 дней и после 10-дневного восстановительного периода во всех подопытных группах не было отмечено гибели животных.

Статистического достоверного различия в привесах крыс опытной и контрольной группы не наблюдается.

Результаты изменений коэффициента массы внутренних органов крыс представлены в таблице 1.

Как следует из данных, представленных в таблице 1, введение per os тестируемого препарата в течение 14 дней белым крысам в изученных дозах не оказывает статистически достоверного влияния на показатели относительной массы внутренних органов на протяжении всего опыта.

При патологоанатомическом изучении внутренних органов крыс опытной группы каких-либо изменений в их структуре не наблюдалось.

Слизистая оболочка рта, носа и глаз блестящая, бледно-розового цвета. Кожа ушных раковин бледно-розового цвета. Кожные покровы эластичные, бледно-розовые. Подкожная клетчатка хорошо развита, бледно-розового цвета. Скелетные мышцы кровенаполнены, розового цвета, умеренной влажности, хорошо развиты. При вскрытии грудной и брюшной полостей расположение внутренних органов было анатомически правильным. Серозные оболочки полостей имели ярко-розовый цвет, гладкую и блестящую поверхность. Слизистая гортани бледно-розовая, складчатая, блестящая. Слизистая пищевода гладкая, блестящая, бледно-розовая. Слизистая оболочка желудка и кишечника серо-розового цвета без изъявлений и кровоизлияний. Печень не увеличена, блестящая. Капсула почки легко снималась, мозговое и корковое вещество хорошо различимо на разрезе.

Подчелюстные лимфоузлы бледно-розового цвета, гладкие, блестящие, упругой консистенции. Кольца трахеи белого цвета.

Сердце округлой формы, упругой консистенции. Миокард на разрезе ярко-красного цвета, умеренной плотности. Перикард и эпикард гладкие, блестящие. Клапаны сердца тонкие, гладкие, блестящие.

Просвет трахеи и бронхов свободен. Легкие обычной формы с поверхностью розовато-красного цвета, гладкие, блестящие, упругой консистенции. На разрезе выражена дольчатость, легочная ткань бледно-розового цвета.

Результаты исследований биохимических показателей крови опытных крыс отражены в таблице 2

В результате исследования сенсибилизирующего и раздражающего действия были получены следующие результаты: инсоляция средства в нижний отдел конъюнктивального мешка не вызывает покраснения конъюнктивы после введения, не отмечалось помутнения роговицы глаза, радужная оболочка была без видимых изменений, также не отмечали хематоз (отек конъюнктивы) и выделений из глаз. Во второй серии опыта определяли раздражающее действие методом накожных аппликаций.

За сутки до проведения исследований выстригали шерсть на участках площадью примерно 10×15 см по обеим сторонам спины для аппликации и наблюдения.

Наносили 0,5 мл исследуемого средства на кожу и фиксировали повязкой. Наблюдение за реакцией кожи осуществляют при естественном или близком к естественному искусственном освещении.

При однократном воздействии регистрировали состояние каждого участка кожи, где проводили аппликации, через 1, 24, 48 и 72 ч после удаления образцов.

В ходе исследования не отмечалось у подопытных животных образование эритемы и отека кожи, в результате чего индекс первичного раздражения равен нулю.

Изучение сенсибилизирующего действия препарата методом максимального сенсибилизирующего воздействия. Исследование проводили на морских свинках. За животными вели наблюдение, отмечая наличие на коже в области аппликаций средства отека, эритемы и др. Нами было отмечено, что спустя 24, 48 и 72 часа после провокационной пробы и снятия повязки положительных реакций кожи (отек, эритема, пузырь) не выявлено. Таким образом, средство не обладает раздражающим и сенсибилизирующим воздействием на ткани в зоне его применения.

Также нами были проведены опыты по определению ранозаживляющего действию разработанного средства.

Суть метода заключается в определении характера и скорости заживления раны путем регистрации темпов уменьшения площади раневой поверхности во времени.

Для проведения опыта использовались лабораторные кролики.

За сутки до проведения исследований выстригали шерсть на участках площадью примерно 10×15 см. Подготовленный участок обрабатывали 70° этиловым спиртом, проводили местную анестезию 2%-м раствором новокаина, скальпелем наносили 2-3 линейных разреза по трафарету, веретенообразной формы, 40×15 мм и глубиной 1,5-20 мм. Расстояние между разрезами было не менее 5 см. Первый разрез (левый) обрабатывали опытным средством, второй - контрольным.

В результате проведенного опыта было установлено, что данное средство обладает высоким регенеративным эффектом. В среднем площадь заживления раны составляла 20,4% в сутки.

В ходе проведения эмбриотоксического действия тестируемого препарата самкам белых крыс per os вводили исследуемое средство. Так как исследуемое средство будет применяться внутриматочно коровам только в послеродовой период не более 5-7 раз, для оценки эмбриотоксичности его вводили с 3 по 6, с 9 по 12 и с 16 по 19 дни беременности в дозе 5 мл на 1 крысу (n=10) Контрольной группе (n=10) препараты не вводили. За состоянием и поведением беременных животных вели наблюдение в течение всего опыта. На 20 день беременности по 5 самок опытных и контрольной групп подвергали эвтаназии и проводили вскрытие. Подсчитывали количество желтых тел, живых и мертвых плодов.

В результате было установлено, что беременность у всех животных проходила без патологических изменений, что отражалось в поведении, потреблении корма и воды, а также состоянии волосяного покрова и слизистых оболочек. Динамика массы тела белых крыс, которым вводили опытный препарат и животных контрольной группы, была положительной и не имела достоверно значимых отличий.

Тестируемый препарат в терапевтической дозе не оказывает влияния на плодовитость крыс

Количество желтых тел и мест имплантаций на одну самку в среднем по группам практически не отличается. Не установлено достоверных различий по показателям пред- и постимплантационной гибели. Однако общая эмбриональная смертность у крыс опытных групп была несколько ниже, чем в группе контроля.

Наружный осмотр плодов под микроскопом не выявил наличия каких-либо аномалий или задержки развития плодов у подопытных животных. Размер и вес крысят опытных и контрольных групп не имели достоверных различий.

Таким образом, проведенные исследования на острую токсичность показали, что средство относится к IV классу опасности по ГОСТ 12.1.007-76. Средство не обладает раздражающим, сенсибилизирующим и эмбриотоксическим действием.

Для доказательства эффективности средства для лечения эндометрита у коров были проведены опыты в УОХ «Кубань» ФГБОУ ВО «Кубанский государственный аграрный университет имени И.Т. Трубилина».

Отработка дозы разработанного средства проводилась на коровах больных острым гнойно-катаральным эндометритом. Для этого было создано 2 группы (n=20). Коровам первой группы препарат вводили внутриматочно в дозе 50 мл. Коровам второй группы средство применяли в дозе 100 мл. Средство применяли через день до получения терапевтического эффекта.

В результате были получены следующие данные. В первой группе терапевтический эффект составил 40%. Количество введения средства составило 7 введений с интервалом не более 48 часов. 60% животных в дальнейшем были переведены на другую схему лечения.

Во второй группе терапевтический эффект составил 70% и количество введений средства - 5 Анализ течения заболевания показал, что после 2-3 введения средства увеличивалась сократительная функция матки. При этом нами было отмечено, что увеличивалась экссудация и слизь изменяла свою консистенцию. Она становилась прозрачной и более тягучей. Однако только после 4-5 введения препарата матка сокращалась до небеременного состояния. Проведенные лабораторные исследования антимикробной активности средства указывают на то, что препарат по отношению к S. aureus, St. xylosus и Ps. aeruginosa обладает МБцК (минимальная бактерицидная концентрация) 7,8 мг, а к Е. coli и P. vulgaris 15,6 и 31,2 мг соответственно. При этом МБсК (минимальная бактериостатическая концентрация) тестируемого средства по отношению к S. aureus и Е. coli, St. xylosus составляет 31,2 мг, а к P. vulgaris - 62,5 мг.

Результаты исследований свидетельствуют о том, что разработанное средства обладает высокой антимикробной активностью и широким спектром действия, что свидетельствует о целесообразности его применения для лечения послеродовых заболеваний у коров.

По проведенным исследованиям терапевтическая эффективность заявляемого средства Фитафлокс составляет 85%, что на 15% выше, чем при применении аналогичного препарата. В качестве препарата-аналога использовали Эндометрамаг-К (https://www.vidal.ru/veterinar/endometramag-k-28159).

Исследования проводили на коровах голштинской породы в послеродовом периоде, заболевших острым послеродовым эндометритом. Коровы были разделены на 2 группы по принципу пар-аналогов по 20 голов в каждой группе. Коровам опытной группы применяли препарат фитафлокс, коровам контрольной группы - Эндометрамаг К.

Анализ течения заболевания показал, что после 2-3 введения препарата Фитафлокс увеличивалась сократительная функция матки. При этом нами было отмечено, что увеличивалась экссудация и слизь изменяла свою консистенцию. Она становилась прозрачной и более тягучей. Однако только после 4-5 введения препарата матка сокращалась до небеременного состояния. В результате проведенного лечения было установлено, что эффективность средства Фитафлокс составила 85% (после курса лечения при 4-5 кратном применении Фитафлокса выздоровление наступило у 17 коров), при этом эффективность Эндометрамага К составила 70% (выздоровление наступило у 14 коров) при этом среднее количество введений препарата составило 6-7. коров, у которых после 7 введений препарата не наступило выздоровление, перевели на другой курс лечения, применяемый в хозяйстве.

В виду того, что действующим веществом является отвар корня солодки на дистиллированной воде с растворенным ципрофлоксацином, то в примерах приведено разное содержание корня солодки и ципрофлоксацина.

Пример 1: Для приготовления средства соединили компоненты в следующем процентном соотношении: сделали отвар из корня солодки: к 5 л дистиллированной воды добавили 50 г корня солодки и кипятили 10 мин, затем остудили до 30°С и добавили 10 г ципрофлоксацина при постоянном перемешивании. При этом средство изменило цвет (кофе с молоком). Затем добавили 5 г фенола для консервирования лекарственного средства. Содержание фенола в готовом средстве составило 0,1%.

Определили раздражающее действие полученного средства методом накожных аппликаций (ГОСТ 31926-2013 Средства лекарственные для ветеринарного применения. Методы определения безвредности). Полученное средство применяли при лечении эндометрита у 20 коров за 5 дней выздоровело 17 коров, эффективность терапии составила 85,0%.

Пример 2: Для приготовления средства соединили компоненты в следующем процентном соотношении: сделали отвар из корня солодки: к 5 л дистиллированной воды добавили 70 г корня солодки и кипятили 10 мин, затем остудили до 30°С и добавили 10 г ципрофлоксацина при постоянном перемешивании. При этом средство изменило цвет (кофе с молоком). Затем добавили 5 г фенола для консервирования лекарственного средства. Содержание фенола в готовом средстве составило 0,1%.

Определили раздражающее действие полученного средства методом накожных аппликаций (ГОСТ 31926-2013 Средства лекарственные для ветеринарного применения. Методы определения безвредности). Полученное средство применяли при лечении эндометрита у 14 коров за 5 дней выздоровело 12 коров, эффективность терапии составила 85,7%.

Изобретение относится к области ветеринарии и может быть использовано для получения средства для лечения эндометрита у коров. Средство для лечения эндометрита содержит отвар корня солодки на дистиллированной воде с растворенным в нем ципрофлоксацином и фенол при следующем соотношении компонентов, мас.%: ципрофлоксацин - 0,2-0,3; корень солодки - 1-2; фенол - 0,1, дистиллированная вода - остальное. Использование данного средства позволяет увеличить сократительную функцию матки животного, а также полученное средство обладает высоким регенеративным противовоспалительным и антибактериальным эффектом. 3 ил., 2 табл., 2 пр.

Средство для лечения эндометрита у коров, включающее ципрофлоксацин и дистиллированную воду, отличающееся тем, что дополнительно содержит отвар корня солодки на дистиллированной воде с растворенным в нем ципрофлоксацином и фенол при следующем соотношении компонентов, мас.%:

ципрофлоксацин 0,2-0,3 корень солодки 1-2 фенол 0,1 дистиллированная вода остальное