ИММУНОТЕРАПЕВТИЧЕСКОЕ СРЕДСТВО, ПРЕДНАЗНАЧЕННОЕ ДЛЯ ПЕРВИЧНОЙ ПРОФИЛАКТИКИ ТУБЕРКУЛЕЗА Российский патент 2015 года по МПК A61K39/04 

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Настоящее изобретение относится к применению иммунотерапевтического средства, основанного на фрагментах клеточной стенки вирулентного штамма комплекса Mycobacterium tuberculosis, для получения лекарственного средства, предназначенного для первичной профилактики туберкулеза.

ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Туберкулез является хроническим инфекционным заболеванием, вызываемым бактериями комплекса Mycobacterium tuberculosis (MTB-C), который на настоящий момент включает виды M. tuberculosis, M. bovis, M. microti и M. africanum.

Согласно отчету Всемирной организации здравоохранения за 2008 год ежегодно в мире регистрируется 9000000 новых случаев возникновения заболевания и приблизительно 2000000 человек умирает. Считается, что во всем мире проживает более 2500000,000 инфицированных людей, и что каждый год развивается более 90-100 миллионов новых инфекций.

Существующая вакцина, применяемая для профилактического лечения туберкулеза, основана на бактериях штамма, названного БЦЖ (Бацилла Кальмета-Герена) - аттенуированного варианта M. bovis.

Патентная заявка WO-A-2008/053055 описывает применение иммунотерапевтического средства, включающего фрагменты клеточной стенки вирулентного штамма комплекса Mycobacterium tuberculosis (MTB-C) для получения лекарственного средства для профилактического лечения туберкулеза и для профилактики инфекций, вызываемых M. tuberculosis. Указанное средство обычно вводят заблаговременно по отношению к инфекции. Указанная патентная заявка также отмечает, что указанное выше иммунотерапевтическое средство более эффективно, чем существующая вакцина, основанная на аттенуированном штамме БЦЖ.

На существующем уровне техники описаны различные схемы лечения для контроля (подавления) развития активного туберкулезного процесса у инфицированных людей, т.е. носителей латентной туберкулезной инфекции.

Например, патентная заявка WO-A-03/004520 указывает, что для контроля туберкулезного процесса у инфицированных людей как с еще не развившимся, так и с уже развившимся заболеванием применяют различные лекарственные средства, включая изониазид, в течение длительного периода времени, занимающего несколько месяцев.

Патентная заявка ES-A-2231037 описывает применение иммунотерапевтического средства, включающего фрагменты клеточной стенки вирулентного штамма комплекса Mycobacterium tuberculosis (MTB-C) для получения лекарственного средства для лечения туберкулеза у инфицированных людей в сочетании с другими лекарственными средствами, такими как изониазид и рифампицин. Указанная комбинация повышает эффективность лекарственных средств, поскольку вызывает иммунный ответ в отношении бактерий, находящихся в неактивной стадии метаболизма, что дополнительно снижает риск развития резистентности.

В статье с названием "Documento de consenso sobre el estudio de los contactos en los pacientes tuberculosos", написанной Grupo de Estudio de Contactos at the Unidad de Investigation en Tuberculosis de Barcelona (UITB), опубликованной в Med. Clin. (Bare), 1999112151-156, указано, что программа контроля туберкулеза должна сначала и первостепенно обеспечивать диагностику и раннее лечение пациентов для подтверждения адекватной комплаентности на терапию, и после достижения необходимого уровня ответа комплаентности необходимо осуществлять дальнейшее изучение контактов. Индивидуума, имевшего взаимоотношения с больным туберкулезом, расценивают как "контакт".

Таким образом, тот факт, что механизм передачи латентной туберкулезной инфекции реализуется посредством вдыхания аэрозолей, зараженных M. tuberculosis, означает, что "контакты", проживающие или часто находящихся рядом с больным туберкулезом, особенно в случае легочного и атипичного туберкулеза, составляют группу риска, которую необходимо обследовать.

Таким образом, контроль "контактов" в случае туберкулеза является одним из наиболее эффективных мероприятий для обеспечения контроля эндемического заболевание среди населения. Такая деятельность позволяет классифицировать "контакты" на три группы:

I. Подвергшиеся воздействию, но еще не инфицированные индивидуумы. Туберкулиновая кожная проба (ТКП) отрицательная. Такой человек принадлежит к группе I согласно классификации Американского общества пульмонологов (ATS). Первичная профилактика направлена на предотвращение инфекции у индивидуумов, подвергшихся воздействию возбудителя инфекции, и во многих случаях она помогает избежать инфекции.

II. Индивидуумы с латентной туберкулезной инфекцией, но не больные. Другими словами, группа II классификации ATS. У них возможна положительная реакция на туберкулин (ТКП), означающая высокий риск развития заболевания. Вторичная профилактика, особенно вторичная химиопрофилактика, значительно снижает подобный риск.

III. Заболевшие индивидуумы, принадлежащие к группе III классификации ATS, обычно с первичными формами заболевания и, таким образом, практически или совсем не контагиозные. Химиотерапия может не позволить им стать очагами распространения инфекции.

Первичная профилактика инфекции, которую в настоящее время обычно назначают группе I ATS, фактически представляет собой первичную химиопрофилактику, основанную на схеме ежедневного введения изониазида в дозировке 5 мг/кг, не превышающей 300 мг/сутки. Указанное лечение показано всем индивидуумам любых возрастов с негативной ТКП, проживающим и/или находящимся в тесном контакте с больными легочной формой туберкулеза. В этом случае первичная химиопрофилактика должна проводиться в течение 3 месяцев после потенциального контакта с источником инфекции или после того, как источник перестал быть контагиозным.

В документе "La Tuberculosi a Catalunya: informe", опубликованном правительством Каталонии в 1983 году, указано, что первичная химиопрофилактика направлена на защиту неинфицированных индивидуумов, подвергшихся воздействию возбудителя инфекции, и ее целью является предотвращение инфекции у "контактов". Указанное лечение, таким образом, представляет собой реальную профилактику инфекции, и можно утверждать, что это принято повсеместно.

Однако на современном уровне техники описаны побочные эффекты, вызванные первичной химиопрофилактикой, основанной на длительном введении изониазида. Публикация Martinez et al., "Primary prevention and treatment of latent tuberculosis infection with isoniazid: efficacy of a control program", 1997-2002, Arch. Bronconeumol., 2005, 41(1), 27-33, описывает проблемы гепатотоксичности, связанной с длительностью первичной химиопрофилактики.

Другим недостатком первичной химиопрофилактики является продолжительность лечения, которое может длиться до 12 месяцев. Это означает, что уровень комплаентности у индивидуумов, которым назначено указанное лечение, часто бывает неудовлетворительным.

Таким образом, существует необходимость в первичной профилактике туберкулеза, которая обладает меньшим количеством побочных эффектов и легче переносится.

ОБЪЕКТ ПО ИЗОБРЕТЕНИЮ

Объектом по настоящему изобретению является применение иммунотерапевтического средства, включающего фрагменты клеточной стенки вирулентного штамма MTB-C, для получения лекарственного средства, предназначенного для первичной профилактики туберкулеза.

Иммунотерапевтическое средство, включающее фрагменты клеточной стенки вирулентного штамма MTB-C, для применения при первичной профилактике туберкулеза также является объектом по изобретению.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Патентная заявка ES2231037-A1 описывает способ получения иммунотерапевтического средства, включающего фрагменты клеточной стенки вирулентного штамма комплекса Mycobacterium tuberculosis (MTB-C). Она также описывает композиции, содержащие средство, и его терапевтическое применение для комбинированного лечения туберкулеза в сочетании с другими лекарственными средствами.

Авторы настоящего изобретения установили, что указанное иммунотерапевтическое средство предназначено для получения лекарственного средства для первичной профилактики туберкулеза.

Объектом по настоящему изобретению, таким образом, является применение иммунотерапевтического средства, включающего фрагменты клеточной стенки вирулентного штамма комплекса Mycobacterium tuberculosis (MTB-C) для получения лекарственного средства для первичной профилактики туберкулеза, в котором указанное средство получают способом, включающим следующие стадии:

- культивирование вирулентного штамма MTB-C в течение периода времени, равного или превышающего три недели, с дальнейшей

- гомогенизацией культуры клеток в присутствии неионного поверхностно-активного вещества.

Иммунотерапевтическое средство, включающее фрагменты клеточной стенки вирулентного штамма MTB-C для применения при первичной профилактике туберкулеза также является частью объекта по изобретению, в котором указанное средство получают способом, включающим следующие стадии:

- культивирование вирулентного штамма MTB-C в течение периода времени, равного или превышающего три недели, с дальнейшей

- гомогенизацией культуры клеток в присутствии неионного поверхностно-активного вещества.

В предпочтительном варианте осуществления способ включает следующие дополнительные стадии:

- отделение нефрагментированных клеток и растворенных компонентов посредством центрифугирования,

- подвергание фракции фрагментов клеточной стенки химической или физической обработке с целью инактивации остаточных клеток вирулентного штамма, содержащихся в конечном продукте, и высушивание полученного иммунотерапевтического средства посредством лиофилизации.

Первичная профилактика

В контексте изобретения в качестве первичной профилактики туберкулеза подразумевают лечение с целью профилактики туберкулезной инфекции у индивидуумов, которые подвергались воздействию возбудителя инфекции и у которых не выявлена положительная проба на туберкулин.

Профилактические вакцины от туберкулеза, основанные или на бациллах Кальмета-Герена, или профилактические вакцины, описанные в патентной заявке WO-A-2008/053055, вводят заблаговременно неинфицированным индивидуумам для профилактики инфекций, вызываемых M. tuberculosis.

Объект по данному изобретению направлен на применение иммунотерапевтического средства, включающего фрагменты клеточной стенки вирулентного штамма комплекса Mycobacterium tuberculosis (MTB-C) для получения лекарственного средства, предназначенного для первичной профилактики туберкулеза, которое вводят индивидуумам с риском контактного заражения от инфицированных индивидуумов, и демонстрирующим отрицательный результат при туберкулиновой кожной пробе.

Указанные индивидуумы могут быть вакцинированы ранее любыми из указанных выше вакцин.

В случае, когда индивидуумы ранее вакцинировались, первичная профилактика может помочь предотвратить инфекцию.

Культура вирулентного штамма

В способе получения иммунотерапевтического средства используют вирулентный штамм MTB-C.

Вирулентный штамм может являться любым вирулентным штаммом MTB-C. Один из штаммов, наиболее часто используемых исследователями в данной области, назван H₃₇Rv, который можно легко получить, например, в Национальной коллекции видов культур (NCTC), Лондон, Великобритания (депозитарный номер NC007416).

Вирулентный штамм можно культивировать посредством помещения в питательные среды для культивирования, хорошо известные специалистам в данной области, например в Middlebrook 7H10 или агар 7H11, среду Сатона или среду Проскауэра-Бека.

Культуру вирулентного штамма поддерживают в течение периода времени, равного или превышающего три недели, предпочтительно в пределах 3-4 недель. Температуру культуры предпочтительно поддерживают в пределах 34-38°C.

После окончания культивирования клетки выделяют посредством особой техники, описанной, например, в патентной заявке ES-A-2231037.

Гомогенизация культуры клеток

Живые клетки гомогенизируют в присутствии неионного поверхностно-активного вещества. Тип неионного поверхностно-активного вещества, используемого в процессе гомогенизации, предпочтительно выбирают из группы, состоящей из этоксилированных алкилфенолов, этоксилированных сложных эфиров сорбитана и их смесей.

Более предпочтительно неионное поверхностно-активное вещество выбрано из группы этоксилированных октилфенолов. Более предпочтительно использовать этоксилированные октилфенолы с содержанием оксида этилена в пределах 7-8 молей, которые предлагаются на рынке под коммерческим названием TRITON® X-114.

Содержание неионного поверхностно-активного вещества на стадии гомогенизации предпочтительно находится в пределах 1-10% по массе относительно общего веса гомогената, более предпочтительно 3-6% по массе.

Указанную гомогенизацию предпочтительно проводят в забуференной среде с нейтральным значением pH, например, при pH в пределах 6-8, которое обеспечивается буфером PBS (фосфатно-солевой буфер).

Гомогенизацию можно осуществлять посредством разрушения ультразвуком или посредством использования мелких круглых частиц с диаметром приблизительно 1 мм, например, частиц диоксида кремния или частиц из диоксида кремния-циркония, совместно с механическим гомогенизатором. Можно использовать механический гомогенизатор, например, модели Biospec Beadbeater®.

Посредством процедуры гомогенизации разрушают клетки MTB-C и получают мелкие фрагменты клеточной стенки.

Выделение фрагментов клеточной стенки

В предпочтительном варианте осуществления способ включает стадию отделения фрагментов клеточной стенки.

Гомогенизированную массу, содержащую фрагменты клеточной стенки, подвергают последующей обработке с отделением и удалением нефрагментированных клеток и растворенных компонентов. Можно проводить центрифугирование при различных скоростях и промывание буферным раствором, как описано, например, в патентной заявке ES-A-2231027.

После проведения указанных выше процедур очистки получают осадок, который содержит фрагменты клеточной стенки, используемые для получения лекарственного средства, предназначенного для первичной профилактики.

Инактивация фрагментов клеточной стенки

В предпочтительном варианте осуществления полученный на предыдущей стадии осадок растворяют в буфере PBS и подвергают обычной обработке для достижения полной инактивации клеток MTB-C, которые могут сохранять жизнеспособность после процедуры фрагментации и очистки.

Инактивирующая обработка может представлять собой химический процесс, например, посредством обработки формальдегидом, или физическую обработку, например, посредством автоклавирования или пастеризации.

Пастеризацию предпочтительно проводят при температуре в пределах 60-90°C, более предпочтительно в пределах 60-70°C, и еще более предпочтительно при температуре приблизительно 65°C.

Лиофилизация фрагментов клеточной стенки

В предпочтительном варианте осуществления полученную после инактивирующей обработки взвесь фрагментов клеточной стенки в буфере PBS лиофилизируют для улучшения условий ее хранения. Для этого взвесь частями переносят в ампулы и лиофилизируют обычным способом при температуре в пределах от -15°C до -25°C и под действием вакуума в пределах 0,1-0,5 мбар.

Ампулы, полученные после процесса лиофилизации, содержат иммунотерапевтическое средство, включающее фрагменты клеточной стенки MTB-C, и, как правило, хранятся при очень низких температурах, например при -70°C.

Лекарственное средство для первичной профилактики туберкулеза

Как указано ранее, объектом по изобретению является применение иммунотерапевтического средства, включающего фрагменты клеточной стенки вирулентного штамма MTB-C для получения лекарственного средства, предназначенного для первичной профилактики туберкулеза.

Лекарственное средство для первичного профилактического лечения туберкулеза включает иммунотерапевтическое средство, основанное на фрагментах клеточной стенки и, необязательно, фармацевтически приемлемые растворители, адъюванты и/или эксципиенты.

Лекарственное средство может находиться в виде раствора в фосфатно-солевом буфере, водном растворе, эмульсии или также в виде липосом.

Лекарственное средство предпочтительно находится в виде липосом.

Липосомы можно получать посредством дополнительных липидов и способом, хорошо известным специалисту в данной области, и который описан в патентной заявке ES-A-2231037.

Липосомы, как правило, включают нейтральные и/или отрицательно заряженные фосфолипиды и стероидные спирты.

Могут использоваться фосфолипиды, например фосфатидилхолин, фосфатидилсерин и фосфатидилинозитол.

Основным компонентом липосом обычно является фосфатидилхолин, который можно синтезировать или выделить из природных источников. Широко используемым коммерческим продуктом является соевый лецитин, который представляет собой сложную смесь фосфолипидов, включая фосфатидилхолин.

Используемые при получении липосом стероидные спирты могут включать, помимо прочих, холестерин и соли желчных кислот.

Липосомы предпочтительно получают с использованием смеси соевого лецитина и холата натрия.

Липосомы необязательно могут содержать эксципиенты, улучшающие их стабильность, такие как, например, глицин.

Получаемые липосомы обычно обладают распределением по размерам, при котором 99,9% из них менее 1 мкм.

Липосомы можно подвергать обычному процессу лиофилизации с получением, таким образом, иммунотерапевтического средства в виде лиофилизированных липосом.

Введение лекарственного средства

Лекарственное средство можно вводить в виде однократной дозы или в виде нескольких доз, повторяемых через определенные промежутки времени. Указанное лекарственное средство предпочтительно вводят в виде однократной дозы.

В случае применения нескольких доз предпочтительно применять две дозы с интервалом между ними в пределах 1-5 недель, предпочтительно в пределах 1-3 недель и еще более предпочтительно в пределах 1-2 недель.

Лекарственное средство можно вводить через слизистую оболочку, например, глаза, носовой полости, ротовой полости, желудка, кишечника, влагалища или мочевыводящих путей, или парентеральным способом посредством, например, подкожного, внутрикожного, внутримышечного, внутривенного или внутрибрюшинного введения. Введение парентеральным путем является предпочтительным.

Расчет необходимой дозы зависит от нескольких параметров, включая способ введения и особенности индивидуума, которому назначено лечение, однако доза предпочтительно находится в пределах 1-1000 мкг фрагментов клеточной стенки, более предпочтительно в пределах 5-700 мкг и еще более предпочтительно в пределах 5-300 мкг.

Иммунотерапевтическое средство по изобретению можно вводить в сочетании с другими лекарственными средствами, предназначенными для первичной профилактики туберкулеза, одновременно или поочередно. Указанные лекарственные средства включают изониазид, рифампицин или другие средства, задерживающие рост бактерий туберкулеза. В случае комбинированного введения иммунотерапевтическое средство по изобретению вводят совместно с изониазидом.

Неожиданно было обнаружено, что введение лекарственного средства, включающего иммунотерапевтическое средство, содержащее фрагменты клеточной стенки вирулентного штамма MTB-C, подходит для первичной профилактики туберкулеза у недавно инфицированных мышей, поскольку оно вызывает защитный ответ, более эффективный, чем обыкновенная вакцина БЦЖ у указанных мышей.

Этот результат удивителен, поскольку обычная БЦЖ вакцина и иммунотерапевтическое средство, содержащее фрагменты клеточной стенки, обладают практически идентичным защитным иммунологическим действием, когда их вводят в качестве профилактической вакцины задолго до инфекции, как описано в патентной заявке WO-A-2008/053055.

Однако экспериментальные результаты, включенные в описание настоящего изобретения, демонстрируют различия между двумя лекарственными средствами, если их применяют при первичной профилактике туберкулеза с целью предотвращения контактного заражения у индивидуумов, не инфицированных, но подвергшихся воздействию возбудителя инфекции.

Как описано в примерах, четыре группы мышей инфицировали вирулентным штаммом H₃₇Rv. Через несколько суток после инфекции одной группе вводили дозу указанного иммунотерапевтического средства, второй группе вводили две дозы того же средства, разделенные недельным перерывом, и третьей группе вводили дозу обыкновенной вакцины БЦЖ. Четвертая группа мышей была контрольной и не получала лечения.

Через три недели после инфекции животных умерщвляли и оценивали количество жизнеспособных бактерий, находящихся в легких и селезенке мышей. Было замечено, что количество жизнеспособных бактерий, находящихся в легких и селезенке мышей, которым вводили указанное иммунотерапевтическое средство, было меньшим, чем количество жизнеспособных бактерий у мышей контрольной группы, и меньшим, чем у мышей, вакцинированных обыкновенной вакциной БЦЖ. В частности, у мышей, которым вводили две дозы иммунотерапевтического средства в виде липосом, обнаруживалось наименьшее количество жизнеспособных бактерий среди всех групп.

Несмотря на то, что различия в селезенке среди групп мышей не были достоверно значимыми, следует отметить, что введение иммунотерапевтического средства в виде липосом снижало концентрацию бактерий до такой степени, что популяция бактерий в группе, обработанной двумя дозами средства, полностью исчезала (КОЕ=0) в 4 из 14 случаев, и, таким образом, достигалось значительное стандартное отклонение.

Таким образом, первичная профилактика иммунотерапевтическим средством, основанным на фрагментах клеточной стенки вирулентного штамма MTB-C, защищает индивидуумов от свежих инфекций, вызываемых M. tuberculosis, поскольку стимулирует защитный ответ в отличие от обыкновенной вакцины БЦЖ, которая, как было показано, значительно менее эффективна.

Следующий пример приведен с целью предоставления специалисту в данной области подробного объяснения специфических вариантов осуществления изобретения.

Пример 1

Эффективность иммунотерапевтического средства в качестве первичной профилактики инфекции, вызываемой M. tuberculosis

Иммунотерапевтическое средство, используемое в этом примере, получали способом, описанным в примере 2 патентной заявки ES-A-2231037.

Эффективность иммунотерапевтического средства, основанного на фрагментах клеточной стенки вирулентного штамма MTB-C, оценивали на самках мышей линии C57BL/6 возрастом от 6 до 8 недель и здоровых в отношении специфических патогенных возбудителей.

Мышей разделяли на четыре группы по 14 животных в каждой и подвергали следующему протоколу вакцинации:

1) Без вакцинации (контрольная группа).

2) Подкожно вводили дозу с 260 мкг фрагментов клеточной стенки в виде липосом, полученных по примеру 2 патентной заявки ES-A-2231037, через 4 суток после инфицирования мышей аэрозолем.

3) Подкожно вводили 2 дозы по 260 мкг фрагментов клеточной стенки в виде липосом, полученных по примеру 2 патентной заявки ES-A-2231037, через 4 и 11 суток после инфицирования мышей аэрозолем.

4) Подкожно вводили дозу с 2×10⁶ колониеобразующих единиц Датского штамма БЦЖ (Statens Serum Institute, Denmark) через 4 суток после инфицирования мышей аэрозолем.

Для инфицирования использовали вирулентный штамм Mycobacterium tuberculosis (H₃₇Rv Pasteur), который культивировали в среде Проскауэра-Бека до середины их логарифмического роста и вплоть до использования хранили в аликвотах по 1 мл при температуре -70°C.

В начале эксперимента мышей инфицировали аэрозолем с указанным вирулентным штаммом посредством помещения их в аппарат аэрозольной инфекции Middlebrook, который обеспечивает инокуляцию в легкие мышей приблизительно 10-50 жизнеспособных бактерий.

Количество жизнеспособных бактерий в легких и селезенке определяли через 21 сутки после аэрозольной инфекции животных (3 недели эксперимента) посредством инкубации серийных разведений гомогенатов легкого и селезенки в агаре Middlebrook 7H11 в течение 4 недель при 37°C. Легкое и селезенку гомогенизировали в присутствии 1 мл бидистиллированной воды.

Результаты в таблице I отражают десятичные логарифмы числа обнаруженных в легких колониеобразующих единиц (КОЕ) в мл:

Таблица I Группа мышей Вакцина Log₁₀КОЕ/мл 1 Нет (Контрольная группа) 6,23±0,23 2 Иммунотерапевтическое средство в виде липосом, 1 доза 5,83±0,22 3 Иммунотерапевтическое средство в виде липосом, 2 дозы 5,49±0,56 4 Обыкновенная вакцина БЦЖ 6,14±0,20

Различия в легких между результатами мышей из групп, обработанных и не обработанных заключенным в липосомы иммунотерапевтическим средством, статистически достоверны.

Можно заметить, что в легких мышей группы, вакцинированной заключенным в липосомы иммунотерапевтическим средством, выявлено меньшее количество жизнеспособных бактерий, чем в легких мышей других групп.

Результаты в таблице II отражают десятичные логарифмы числа обнаруженных в селезенке колониеобразующих единиц (КОЕ) в мл:

Таблица II Группа мышей Вакцина Log₁₀КОЕ/мл 1 Нет (Контрольная группа) 4,34±0,62 2 Иммунотерапевтическое средство в виде липосом, 1 доза 3,99±0,66 3 Иммунотерапевтическое средство в виде липосом, 2 дозы 3,30±2,29 4 Обыкновенная вакцина БЦЖ 4,46±0,68

Несмотря на отсутствие статистически достоверных различий в селезенке, необходимо отметить, что введение иммунотерапевтического средства в виде липосом снижало концентрацию бактерий до такой степени, что популяция бактерий в группе, обработанной двумя дозами средства, полностью исчезала (КОЕ=0) в 4 из 14 случаев, и, таким образом, достигалось значительное стандартное отклонение.

Таким образом, первичная профилактика иммунотерапевтическим средством, основанным на фрагментах клеточной стенки вирулентного штамма MTB-C, защищает от свежих инфекций, вызываемых M. tuberculosis, поскольку оно стимулирует защитный ответ по сравнению с низкой эффективностью, продемонстрированной обыкновенной вакциной БЦЖ.

Несмотря на тот факт, что обыкновенная вакцина БЦЖ и иммунотерапевтическое средство, содержащее фрагменты клеточной стенки, обладают практически идентичным защитным иммунологическим действием в тех случаях, когда их вводят в качестве профилактической вакцины задолго до инфекции, как описано в патентной заявке WO-A-2008/053055, результаты из примера 1 показывают разницу между двумя лекарственными средствами в том случае, когда их применяют при первичной профилактике туберкулеза для предотвращения контактного заражения у индивидуумов, неинфицированных, но подвергшихся воздействию возбудителя инфекции.

Настоящее изобретение относится к применению иммунотерапевтического средства, включающего фрагменты клеточной стенки вирулентного штамма Mycobacterium tuberculosis для получения лекарственного средства, предназначенного для первичной профилактики туберкулеза у индивидуумов, подвергшихся воздействию возбудителя инфекции, и у которых не выявлена положительная кожная проба на туберкулин (ТКП). Иммунотерапевтическое средство способно к стимуляции защитного ответа, более эффективного, чем у обыкновенной вакцины БЦЖ, и уменьшает количество жизнеспособных бактерий в легких и селезенке индивидуумов, недавно инфицированных M. tuberculosis. 13 з.п. ф-лы, 2 табл., 1 пр.

1. Применение иммунотерапевтического средства, включающего фрагменты клеточной стенки вирулентного штамма-комплекса Mycobacterium tuberculosis (MTB-C) для получения лекарственного средства для первичной профилактики туберкулеза у индивидуумов, подвергшихся воздействию возбудителя инфекции, и у которых не выявлена положительная кожная проба на туберкулин (ТКП),
в котором указанное средство получают способом, включающим следующие стадии:
- культивирование вирулентного штамма MTB-C в течение периода времени, равного или превышающего три недели, с дальнейшей
- гомогенизацией культуры клеток в присутствии неионного поверхностно-активного вещества.

2. Применение по п. 1, где период культивирования находится в пределах 3-4 недель.

3. Применение по п. 1, где неионное поверхностно-активное вещество выбрано из группы, состоящей из этоксилированных алкилфенолов, этоксилированных сложных эфиров сорбитана и их смесей.

4. Применение по п. 3, где неионное поверхностно-активное вещество выбрано из группы этоксилированных октилфенолов.

5. Применение по п. 4, где неионное поверхностно-активное вещество выбрано из этоксилированных октилфенолов с содержанием оксида этилена в пределах 7-8 молей.

6. Применение по п. 1, где гомогенизацию проводят в забуференной среде в условиях нейтрального значения рН.

7. Применение по п. 1, где способ дополнительно включает следующие стадии:
- отделение нефрагментированных клеток и растворенных компонентов посредством центрифугирования,
- подвергание фракции фрагментов клеточной стенки химической или физической обработке с целью инактивации остаточных клеток вирулентного штамма, содержащихся в конечном продукте, и
- высушивание полученного иммунотерапевтического средства посредством лиофилизации.

8. Применение по п. 1, где лекарственное средство находится в форме липосом.

9. Применение по п. 1, где лекарственное средство вводят в виде однократной дозы или нескольких доз.

10. Применение по п. 9, где лекарственное средство вводят в двух дозах.

11. Применение по п. 10, где дозы вводят раздельно через промежутки времени в пределах 1-5 недель.

12. Применение по п. 1, где лекарственное средство вводят в сочетании с другими лекарственными средствами, предназначенными для первичной профилактики туберкулеза.

13. Применение по п. 12, где лекарственное средство вводят в сочетании с изониазидом.

14. Применение по п. 2, где неионное поверхностно-активное вещество выбрано из группы, состоящей из этоксилированных алкилфенолов, этоксилированных сложных эфиров сорбитана и их смесей.