СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ВЫСОКОДИФФЕРЕНЦИРОВАННОГО РАКА ЩИТОВИДНОЙ ЖЕЛЕЗЫ Российский патент 2015 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, хирургии, лабораторной диагностике и может быть использовано в предоперационном периоде для улучшения диагностики высокодифференцированного рака щитовидной железы.

Для дифференциальной диагностики высокодифференцированного рака щитовидной железы и доброкачественных заболеваний щитовидной железы используются онкомаркеры, к их числу относится галектин-3.

Галектин-3 - это β-галактозид - связывающий белок с молекулярной массой 26 кДа, принадлежащий к семейству галектинов и являющийся маркером неопластических процессов [1]. Галектин-3 используют в качестве онкомаркера при иммуноцитохимическом и иммуногистохимическом исследованиях щитовидной железы для дифференциальной диагностики высокодифференцированного рака щитовидной железы [2, 3].

Известен способ определения экспрессии галектина-3 проточным иммуноцитометрическим методом или методом проточной флуороцитометрии в аспирате, полученном при тонкоигольной аспирационной биопсии из узла щитовидной железы [4, 5]. От предложенного нами способа отличие состоит в том, что для определения галектина-3 используется принципиально другой способ, а не метод иммуноферментного анализа.

Известен способ исследования галектина-3 в смыве аспирата, полученного при тонкоигольной аспирационной биопсии из узлов щитовидной железы [6, 7]. Известный способ имеет следующие недостатки: 1) не раскрыта методика выполнения способа; 2) указаны только средние значения галектина-3, но не предложены диагностические значения галектина-3, необходимые для дифференциальной диагностики высокодифференцированного рака и доброкачественных заболеваний щитовидной железы. В представленном виде известный способ [6, 7] не может быть использован в качестве способа диагностики. Этот способ используем в качестве прототипа.

Задача изобретения - создание способа диагностики высокодифференцированного рака щитовидной железы, который позволяет достоверно определить вид заболевания для дальнейшего выбора адекватного метода лечения.

Сущность изобретения заключается в том, что в способе диагностики высокодифференцированного рака щитовидной железы, включающем проведение тонкоигольной аспирационной биопсии узлов щитовидной железы под контролем ультразвукового исследования, пункционную иглу с содержащимся в ней аспиратом промывают двукратно 1 мл изотонического раствора натрия хлорида, затем центрифугируют, отбирают супернатант и методом иммуноферментного анализа определяют галектин-3, причем если содержание галектина-3 ниже 1,0 нг/мл - расценивают как отсутствие высокодифференцированного рака щитовидной железы, в интервале 1,0-1,6 нг/мл - риск высокодифференцированного рака щитовидной железы, выше 1,6 нг/мл диагностируют высокодифференцированный рак щитовидной железы.

Предложенный способ разработан на основании исследования содержания галектина-3 в клеточном аспирате, полученном при тонкоигольной аспирационной биопсии из узлов щитовидной железы у 80 больных. Из них 37 - больные высокодифференцированным раком щитовидной железы и 43 -доброкачественными формами узловых заболеваний (узловой коллоидный зоб, аденомы щитовидной железы). Галектин-3 определяли методом иммуноферментного анализа с использованием автоматизированного анализатора «Multiscan ЕХ» (Финляндия) и набора реагентов для количественного определения человеческого галектина-3 (human Galectin-3 ELISA) фирмы Bender MedSystems (Австрия). В качестве диагностического порога для высокодифференцированного рака щитовидной железы с помощью POC-анализа установлен уровень галектина-3 выше 1,6 нг/мл. Критерием выбора диагностического порога являлся уровень галектина-3 с максимальной суммой чувствительности и специфичности. Чувствительность предложенного способа в диагностике высокодифференцированного рака щитовидной железы составила 59,7%, а специфичность - 90,7%. Площадь под POC-кривой (AUC) составила 0,87±0,04, что с учетом экспертной шкалы для значений AUC, относится к очень хорошим результатам [8]. Применение предложенного способа дополнительно к стандартным методам исследования (УЗИ и цитологическое исследование) позволило повысить показатели чувствительности в дифференциальной диагностике с 83,8% до 94,6%, а специфичности - с 65,1% до 93%. Установлены уровни содержания галектина-3 в смыве аспирата щитовидной железы из пункционной иглы для доброкачественных узловых заболеваний щитовидной железы (одно-многоузловой коллоидный зоб, доброкачественные опухоли) - ниже 1,0 нг/мл, риска высокодифференцированного рака щитовидной железы - в интервале 1,0-1,6 нг/мл и высокодифференцированного рака щитовидной железы - выше 1,6 нг/мл.

Предложенный способ осуществляется следующим образом: 1) выполняют тонкоигольную аспирационную биопсию узлов щитовидной железы под контролем УЗИ и получают клеточный аспират; 2) пункционную иглу (21G), содержащую полученный аспират, промывают двукратно 1 мл изотонического раствора натрия хлорида и полученную смесь помещают в специальную пробирку; 3) центрифугируют и отбирают супернатант; 4) проводят иммуноферментный анализ; 5) анализируют полученные результаты: если значение галектина-3 ниже 1,0 нг/мл - расценивают как отсутствие высокодифференцированного рака; в интервале 1,0-1,6 нг/мл - риск высокодифференцированного рака щитовидной железы; выше 1,6 нг/мл диагностируют высокодифференцированный рак щитовидной железы.

Применение способа может иметь важное диагностическое значение при неопределенном цитологическом диагнозе, к которому относится «фолликулярная опухоль» щитовидной железы, означающий возможность рака или аденомы щитовидной железы без значимых различий между этими заболеваниями, что может привести к неправильному выбору хирургического лечения [9].

Приводим примеры практического осуществления предлагаемого способа.

Пример 1

Больная К., 30 лет (история болезни №3324/10), поступила с жалобами на наличие узлового образования в области шеи. Анамнез заболевания в течение 3 лет. При поступлении состояние удовлетворительное. Функция щитовидной железы - эутиреоз. При пальпации щитовидная железа увеличена, в левой доле определяется узловое образование, плотное, диаметром 3×4 см, смещаемое при глотании. Периферические лимфоузлы шеи не увеличены. УЗИ: Правая доля 17×23×43 мм. Изоэхогенный узел до 8 мм. Левая доля 42×31×53 мм с множественными включениями и кальцинатами. Васкуляризация неоднородная. Заключение УЗИ: узловые образование щитовидной железы. Произведена тонкоигольная пункционная аспирационная биопсия под контролем УЗИ с цитологическим исследованием и исследование методом иммуноферментного анализа содержания галектина-3 в смыве аспирата из пункционной иглы из левой доли щитовидной железы. Цитологический диагноз: фолликулярная опухоль. Галектин-3 в смыве аспирата левой доли - 12,7 нг/мл.

Учитывая высокий уровень содержания галектина-3, равный 12,7 нг/мл (выше 1,6 нг/мл), данные УЗИ и цитологического исследования у больной К. установлен рак щитовидной железы T2N0M0. Больная К. направлена на оперативное лечение. Выполнено адекватное с онкологических позиций хирургическое лечение - экстрафасциальная тиреоидэктомия.

Послеоперационный гистологический диагноз (№278201/10): папиллярный рак щитовидной железы.

Указанный пример свидетельствует, что включение в комплексную диагностику исследования галектина-3 в смыве аспирата щитовидной железы можно даже при неопределенном цитологическом диагнозе, которым является «фолликулярная опухоль», с большей точностью диагностировать рак щитовидной железы в предоперационном периоде и выполнить адекватный объем оперативного лечения.

Пример 2

Больная К., 66 лет (история болезни №714/10), поступила в клинику с жалобами на наличие узлового образования в области правой доли щитовидной железы, затруднение дыхания. Резекция щитовидной железы 18 лет назад. Рецидив узлового зоба выявлен 4 месяца назад. Функция щитовидной железы - гипотиреоз. При пальпации узловых образований в щитовидной железе не определяется. Периферические лимфоузлы шеи не увеличены. УЗИ: в левой доле узловое образование 12×15×6 мм с интранодулярным кровотоком. Правая доля не лоцируется. Заключение УЗИ: узловое образование левой доли щитовидной железы. Произведена тонкоигольная пункционная аспирационная биопсия под контролем УЗИ с цитологическим исследованием и исследование методом иммуноферментного анализа содержания галектина-3 в смыве аспирата из пункционной иглы. Цитологический диагноз: фолликулярная опухоль. Галектин-3 в смыве аспирата - 0 нг/мл.

Учитывая отсутствие галектина-3, результаты УЗИ и цитологического исследования, у больной К. установлено, что рак щитовидной железы отсутствует и имеет место доброкачественное заболевание, наиболее вероятна аденома щитовидной железы. Больная К. направлена на оперативное лечение. Произведена гемитиреоидэктомия.

Послеоперационный гистологический диагноз (№1274/11): фолликулярная аденома щитовидной железы.

Указанный пример показывает, что при отсутствии галектина-3 в смыве аспирата в данном случае позволило предположить аденому, исключив рак щитовидной железы.

Пример 3

Больная Л., 53 года (история болезни №6933/10), поступила с жалобами на узел в проекции щитовидной железы. Анамнез заболевания 8 лет. Функция щитовидной железы - эутиреоз. При пальпации в правой доле щитовидной железы узел до 1,5 см в диаметре, мягко-эластической консистенции, смещаемый при глотании. Периферические лимфатические узлы не увеличены. УЗИ: правая доля 53×21,9×23,3 мм. По передней поверхности гиперэхогенный узел 10,8×15,2×17,0 мм с интра- и перинодулярным кровотоком. Левая доля 48,3×18,3×20,2 мм без узловых образований. Заключение УЗИ: узел правой доли щитовидной железы.

Произведена тонкоигольная пункционная аспирационная биопсия под контролем УЗИ с цитологическим исследованием и исследование методом иммуноферментного анализа содержания галектина-3 из пункционной иглы из правой доли щитовидной железы. Цитологический диагноз: фолликулярная опухоль. Галектин-3 в смыве аспирата из узла правой доли - 1,0 нг/мл.

Учитывая, что уровень содержания в смыве аспирата галектина-3, равный 1,0 нг/мл (в интервале 1,0-1,6 нг/мл), который относится к показателям риска рака, данные УЗИ и цитологического исследования у больной Г. диагностирован рак правой доли щитовидной железы T1N0M0.

Больная Л. направлена на оперативное лечение. Произведена тиреоидэктомия.

Послеоперационный гистологический диагноз (№6848/10): фолликулярный рак правой доли щитовидной железы.

Указанный пример показывает, что при показателе галектина-3 в смыве аспирата, находящемся в интервале онкологического риска, можно диагностировать рак при фолликулярной опухоли щитовидной железы и избрать адекватный метод оперативного лечения.

Техническим результатом использования изобретения является улучшение качества диагностики высокодифференцированного рака щитовидной железы и, как следствие, выбор последующего эффективного лечения.

Список литературы

1. Александрова С.А. Влияние галектина-3 на Fas-опосредованный апоптоз в клетках опухолей щитовидной железы человека / С.А. Александрова, Л. Б. Гинкул, М.Е. Борискова // Вопросы онкологии. - 2008. - Том 54. - №2. - С.4.

2. Коган Е.А. Определение экспрессии галектина-3 в ткани фолликулярных опухолей щитовидной железы / Н.А. Петунина, Т.В. Чернышова, Д.В. Лукьянченко // Клиническая и экспериментальная тиреоидология. - 2011. - Т.7. №1. - С.45-49.

3. Трошина Е.А. Роль молекулярных маркеров в дифференциальной диагностике фолликулярных опухолей щитовидной железы / Н.В. Мазурина, И.А. Абесадзе, П.В. Юшков и др. // Клиническая и экспериментальная тиреоидология. - 2006. - Т.2. - №2. - С.22-26.

4. Фещенко Н.С. Определение экспрессии галектина-3 для улучшения диагностики и совершенствования тактики хирургического лечения высокодифференцированного рака щитовидной железы: Автореф. дис.… канд. мед. наук / Н.С. Фещенко - С-Пб. - 2010. - 12 с.

5. Семенов Д.Ю. Комбинированный анализ выявления мутации гена BRAF и экспрессии галектина - 3 в дооперационной диагностике рака щитовидной железы / Д.Ю. Семенов, М.И. Зарайский, Л.Е. Колоскова, М.Е. Борискова и др. // Клиническая и экспериментальная тиреоидология. - 2011. - Т.7. - №2 - С.49-56.

6. Новые возможности в предоперационной диагностике узловых заболеваний щитовидной железы / О.С. Олифирова, С.В. Кналян, Т.Е. Тальченкова, Н.Н. Трынов // Бюллетень ВСНЦСО РАМН. - Иркутск, 2012. - №4 (86), часть 1. - С.63-67.

7. Результаты исследования онкомаркеров при узловой патологии щитовидной железы / С.В. Кналян, О.С. Олифирова, Н.Н. Трынов, Т.Е. Тальченкова // Журнал «Практическая медицина». - Казань, 2013. - №2(67). - С.149-152.

8. Паклин Н. Логистическая регрессия и POC-анализ - математический аппарат. [Электронный ресурс] - Режим доступа: http://www.basegroup.ru/library/analvsis/regression/logistic/

9. Фолликулярная неоплазия щитовидной железы / Е.А. Трошина, Н.В. Мазурина, И.А. Абесадзе и др. // Проблемы эндокринологии. - 2006. - №1. - С.23-25.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, хирургии, лабораторной диагностике. Изобретение представляет способ диагностики высокодифференцированного рака щитовидной железы, включающий проведение тонкоигольной аспирационной биопсии узлов щитовидной железы под контролем ультразвукового исследования, отличающийся тем, что пункционную иглу с содержащимся в ней аспиратом промывают двукратно 1 мл изотонического раствора натрия хлорида, затем центрифугируют, отбирают супернатант и методом иммуноферментного анализа определяют галектин-3, причем если содержание галектина-3 ниже 1,0 нг/мл - расценивают как отсутствие высокодифференцированного рака щитовидной железы, в интервале 1,0-1,6 нг/мл - риск высокодифференцированного рака щитовидной железы, выше 1,6 нг/мл диагностируют высокодифференцированный рак щитовидной железы. Изобретение обеспечивает улучшение качества диагностики высокодифференцированного рака щитовидной железы. 3 пр.

Способ диагностики высокодифференцированного рака щитовидной железы, включающий проведение тонкоигольной аспирационной биопсии узлов щитовидной железы под контролем ультразвукового исследования, отличающийся тем, что пункционную иглу с содержащимся в ней аспиратом промывают двукратно 1 мл изотонического раствора натрия хлорида, затем центрифугируют, отбирают супернатант и методом иммуноферментного анализа определяют галектин-3, причем если содержание галектина-3 ниже 1,0 нг/мл - расценивают как отсутствие высокодифференцированного рака щитовидной железы, в интервале 1,0-1,6 нг/мл - риск высокодифференцированного рака щитовидной железы, выше 1,6 нг/мл диагностируют высокодифференцированный рак щитовидной железы.