СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТЕПЕНИ ТЯЖЕСТИ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМЫ Российский патент 2015 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике и предназначено для определения тяжести течения бронхиальной астмы (БА).

К настоящему времени пришло понимание, что степень тяжести БА зависит не только от выраженности симптомов, тяжести бронхиальной обструкции, но и от ответа на терапию. Поэтому современная классификация БА основана на объеме терапии, который требуется для достижения контроля над течением заболевания. При легкой БА контроль достигается при небольшом объеме терапии (низкие дозы ингаляционных глюкокортикостероидов (ИГКС), антилейкотриеновые препараты), а при тяжелой БА контроля достичь так и не удается, несмотря на большой объем медикаментозных назначений и лечебных процедур [Proceedings of the ATS workshop on refractory asthma: current understanding, recommendations and unanswerend questions. American Thoracic Society. Am. J. Respir. Crit. Care Med. 2000; 162:2341-51]. Установлено, что у пациентов с различной степенью тяжести БА отмечается разный ответ на традиционное лечение. По этим причинам актуален вопрос о выборе действительно объективного способа определения степени тяжести БА.

Известен способ определения степени тяжести бронхиальной астмы при помощи исследования функции внешнего дыхания (ФВД), а именно оценки суточных колебаний таких ее показателей, как пиковой объемной скорости выдоха (ПОС) и объема форсированного выдоха за первую секунду (ОВФ₁) (Ходош Э.М. Бронхиальная астма: оценка степени тяжести и оптимизация терапевтического контроля. «Здоровье Украины», №110, январь 2005 г.).

Однако недостатком данного способа является его недостаточная чувствительность и объективность, обусловленная тем, что клеточно-гуморальная картина БА и внешние проявления данного заболевания у одного и того же пациента могут существенно различаться; при определении данным способом степени тяжести течения БА необходимы дополнительные клинико-лабораторные методы исследования.

Из уровня техники также известен способ дифференциальной диагностики тяжелой степени БА, включающий определение вентиляционной функции легких и исследование мононуклеаров, выделенных из венозной крови больного, с последующим расчетом индекса, характеризующего воспалительный процесс. Моноциты культивируют в дендритные клетки, к половине культур добавляют N-этилкарбоксамидоаденозин (NECA). Полученные дендритные клетки собирают и анализируют на содержание мРНК ИЛ-8 при помощи полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией. Выполняют расчет вероятности Р отнесения индивида к группе больных тяжелой степени БА по системе уравнений (патент RU 2497117 С2 от 11.01.2012).

Однако данный способ малоинформативен, поскольку позволяет лишь выявить тяжелую степень БА, кроме того, он является достаточно трудоемким и дорогостоящим.

Наиболее близким к заявленному способу является способ определения степени тяжести БА, основанный на исследовании препарата (мазка) периферической крови, взятой натощак, окрашенного по Романовскому-Гимзе. С помощью прямой световой микроскопии оценивают соотношение эндогенных лейкоцитарных ауторозеток к количеству лейкоцитов, и при выявлении определенных процентных соотношений вышеуказанных параметров диагностируют легкую, среднюю и тяжелую степени БА (патент RU 2469328 С1 от 12.10.2011).

Однако данный способ имеет низкую специфичность, поскольку характер и интенсивность ауторозеткообразования зависит не только от тяжести течения бронхиальной астмы, но и от других заболеваний, например пневмонии (Федорова О.И., Давыдкин И.Л., Гусякова О.А. Эндогенное ауторозеткообразование в периферической крови у больных внебольничной пневмонией различного возраста в условиях крупного промышленного региона. Известия Самарского научного центра РАМН, №5, Т.14, 2012 г.). Кроме того, данный способ обладает ограниченной областью применения, так как определены критерии для его использования только у детей.

Техническим результатом изобретения является устранение указанных недостатков; предлагаемый способ позволяет объективно, точно и доступно определить степень тяжести БА за счет оценки морфотипов сыворотки крови, четко свидетельствующей о легкой степени БА, средней степени БА и тяжелой степени БА.

Для этого в способе определения степени тяжести БА, включающем получение сыворотки крови, подготовку пробы методом краевой дегидратации с последующим исследованием при микроскопии в поляризованном свете и выявлением анизотропных морфотипов, определяют следующие варианты структурирования морфотипов:

1) при выявлении анизотропных морфотипов в виде агрегаций кристалла-сферолита и внедренного в него шаровидного скопления мелких слабоанизотропных гранул, диагностируют легкую степень БА;

2) при выявлении анизотропных морфотипов в виде кристаллов-сферолитов, окруженных рыхло расположенными скоплениями слабоанизотропных гранул диагностируют среднюю степень БА;

3) при выявлении в разных участках аналитической ячейки анизотропных морфотипов, структурированных в виде тонких параллельных линий, и анизотропных морфотипов в виде кристаллов-сферолитов, окруженных рыхло расположенными скоплениями слабоанизотропных гранул, диагностируют тяжелую степень БА.

Любая биологическая жидкость представляет собой сложную систему, в которой все элементы определенным образом взаимосвязаны между собой, то есть структурированы. Перевод жидкости в твердую фазу позволяет осуществить визуализацию ее структуры. Фиксация самоорганизующихся структур биологических жидкостей достигается путем смены фазовых состояний - переводом жидкой среды в твердую фазу. Эти структуры несут в себе большой пласт важнейшей информации о состоянии организма. Сыворотка крови содержит большое количество ассоциированных молекул с неустойчивыми связями. Переход капли сыворотки крови из гидратированного состояния в дегидратированное приводит в интегрированный, устойчивый вид высокодинамичную информацию, которую она содержит в жидкой фазе. Применяя метод краевой дегидратации биологической жидкости, мы получаем локальные самоорганизующиеся структуры - морфотипы. Структура морфотипов сыворотки крови представляет собой суммарный результат многочисленных сложных взаимодействий на молекулярном уровне органических и минеральных веществ эндо- и экзогенного происхождения, позволяющей визуализировать маркеры физиологических и патологических процессов, протекающих в организме. Маркер построен из продуктов жизнедеятельности клеточных структур и представляет собой органоминеральный агрегат, несущий информацию об определенном отклонении состояния организма от нормы. Морфотипы могут быть как полностью изотропными, так и анизотропными, а также нести в себе как анизотропные, так и изотропные структуры (Шабалин В.Н. и др. Морфология биологических жидкостей человека. М.: Хризостом, 2001 г., с. 129-139).

Так, в предлагаемом способе проводят исследование анизотропных морфотипов, образованных группами биологически активных веществ, вырабатываемых клетками воспаления и структурными клетками дыхательных путей, участвующих в патогенезе БА.

Способ осуществляют следующим образом. У пациента строго натощак производят забор периферической крови из вены или мякоти пальца, получают сыворотку крови путем отстаивания в пробирке или после центрифугирования при 3000 об/мин в течение 15 минут. Исследование сыворотки крови методом краевой дегидратации проводят с помощью специальной тест-карты (ТК4) диагностического набора «Литос-система», разрешенного к применению в клинической практике. Техника проведения исследования состоит в следующем: 1) в окна 2-6 ТК4 наносят по 0,02 мл сыворотки крови в виде капель, которые накрывают покровными стеклами, получая, таким образом, аналитические ячейки; 2) заполненную тест-карту выдерживают при температуре 20-25°C и относительной влажности 55-60% в течение 7 суток; 3) проводят поиск анизотропных морфотипов в аналитических ячейках при микроскопии в поляризованном свете при увеличении от ×50 до ×630.

При структурировании сыворотки крови в процессе медленного испарения воды через тонкий зазор между подложкой (предметным стеклом) и покровным стеклом жидкокристаллические структуры («липид-вода», «липид-белок-вода») переходят в кристаллическое состояние и становятся возможными для наблюдения при микроскопии в поляризованном свете.

Так, при легкой степени БА в препарате выявляют анизотропные морфотипы в виде агрегаций кристалла-сферолита (1) и внедренного в него шаровидного скопления мелких изотропных гранул (2) (фиг. 1).

При средней степени БА в препарате выявляют анизотропные морфотипы в виде кристаллов-сферолитов (1), окруженные рыхло расположенными скоплениями слабоанизотропных гранул (2) (фиг. 2).

При тяжелой степени БА в препарате выявляют анизотропные морфотипы, структурированные в виде тонких параллельных линий (фиг. 3), и анизотропные морфотипы в виде кристаллов-сферолитов, окруженных рыхло расположенными скоплениями слабоанизотропных гранул (фиг. 2); причем оба вида структурирования морфотипов могут определяться в разных участках аналитической ячейки.

Возможность практического осуществления способа подтверждается примерами конкретного исполнения.

Пример 1. Больная О., 36 лет, в анамнезе бронхиальная астма. В настоящее время при обращении к врачу имеет жалобы на затрудненное дыхание при физической нагрузке.

Исследование сыворотки крови предлагаемым способом: в аналитической ячейке обнаружены анизотропные морфотипы в виде агрегаций кристалла-сферолита и внедренного в него шаровидного скопления мелких слабоанизотропных гранул (Фиг. 1). Заключение: Слабая степень тяжести бронхиальной астмы.

Заключение по результатам клинического обследования (оценка функции внешнего дыхания, кожно-аллергические пробы) - Бронхиальная астма, слабая степень тяжести.

Пример 2. Больной Р., 48 лет, в анамнезе бронхиальная астма. В настоящее время при обращении к врачу имеет жалобы на затрудненное дыхание в покое и при физической нагрузке, приступы удушья один раз в неделю в ночное время, которые купируются приемом бронхолитиков.

Исследование сыворотки крови предлагаемым способом: в аналитической ячейке обнаружены анизотропные морфотипы в виде кристаллов-сферолитов, окруженных рыхло расположенными скоплениями слабоанизотропных гранул (Фиг. 2). Заключение: Средняя степень тяжести бронхиальной астмы.

Заключение по результатам клинического обследования (оценка функции внешнего дыхания, кожно-аллергические пробы, рентгенография легких) - Бронхиальная астма, средняя степень тяжести.

Пример 3. Больная П., 69 лет, в анамнезе бронхиальная астма. При поступлении в стационар имеет жалобы на одышку в покое, непереносимость физической нагрузки, ночные приступы удушья, при которых терапия бронхолитиками не приносит ожидаемого эффекта.

Исследование сыворотки крови предлагаемым способом: в разных участках аналитической ячейки обнаружены анизотропные морфотипы, структурированных в виде тонких параллельных линий (Фиг. 3), и анизотропных морфотипов в виде кристаллов-сферолитов, окруженных рыхло расположенными скоплениями слабоанизотропных гранул. Заключение: тяжелая степень тяжести бронхиальной астмы.

Заключение по результатам клинического обследования (оценка функции внешнего дыхания, кожно-аллергические пробы, рентгенография легких) - Бронхиальная астма, тяжелая степень.

Предлагаемый способ объективен, точен и доступен, позволяет определить степень тяжести БА за счет оценки специфичных анизотропных морфотипов сыворотки крови.

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и предназначено для определения тяжести течения бронхиальной астмы. Сущность способа заключается в исследовании сыворотки крови методом краевой дегидратации в поляризованном свете. При выявлении анизотропных морфотипов в виде агрегаций кристалла-сферолита и внедренного в него шаровидного скопления мелких слабоанизотропных гранул, диагностируют легкую степень бронхиальной астмы. При выявлении анизотропных морфотипов в виде кристаллов-сферолитов, окруженных рыхло расположенными скоплениями слабоанизотропных гранул, диагностируют среднюю степень тяжести бронхиальной астмы. При выявлении в разных участках аналитической ячейки анизотропных морфотипов, структурированных в виде тонких параллельных линий, и анизотропных морфотипов в виде кристаллов-сферолитов, окруженных рыхло расположенными скоплениями слабоанизотропных гранул, диагностируют тяжелую степень бронхиальной астмы. Способ объективен, точен и доступен, позволяет определить степень тяжести бронхиальной астмы за счет оценки специфичных анизотропных морфотипов сыворотки крови. 3 пр., 3 ил.

Способ определения степени тяжести бронхиальной астмы у пациентов с бронхиальной астмой, включающий микроскопическое исследование крови, отличающийся тем, что исследуют сыворотку крови методом краевой дегидратации в поляризованном свете, и при выявлении анизотропных морфотипов в виде агрегаций кристалла-сферолита и внедренного в него шаровидного скопления мелких слабоанизотропных гранул диагностируют легкую степень бронхиальной астмы; при выявлении анизотропных морфотипов в виде кристаллов-сферолитов, окруженных рыхло расположенными скоплениями слабоанизотропных гранул, диагностируют среднюю степень тяжести бронхиальной астмы; при выявлении в разных участках аналитической ячейки анизотропных морфотипов, структурированных в виде тонких параллельных линий, и анизотропных морфотипов в виде кристаллов-сферолитов, окруженных рыхло расположенными скоплениями слабоанизотропных гранул, диагностируют тяжелую степень бронхиальной астмы.