ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИГЕРПЕТИЧЕСКОЙ ПОЛИВАКЦИНЫ И ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЫ НА ЕЕ ОСНОВЕ Российский патент 2015 года по МПК A61K39/245 A61K38/21 A61P31/22 

Фармацевтическая композиция для получения антигерпетической поливакцины и лекарственной формы на ее основе (далее - изобретение) относится к области медицины, в частности к созданию поливакцины против вируса герпеса простого и лекарственной формы на ее основе.

Инфекция, обусловленная вирусами простого герпеса, является широко распространенным в мире заболеванием, 90% населения планеты являются носителями вируса простого герпеса (ВПГ).

В России число госпитализированных больных с диагнозом ВПГ ежегодно превышает 2,5 млн человек. К офтальмологам ежегодно обращаются свыше 500 тыс. больных с различными формами офтальмогерпеса и 60% больных от общего числа поражений роговицы. Больные с хроническими поражениями кожных покровов, вызванных вирусами герпеса, а также больные с генитальным герпесом составляют более 10% от всего населения России. Вирусы герпеса также инициируют процессы атеросклероза; они ассоциированы с онкологическими заболеваниями, неблагоприятно, порой фатально, действуют на течение беременности и родов, а также вызывают патологию у плода и новорожденных.

В настоящее время известны следующие химиопрепараты против вирусов герпеса: ацикловир, фамцикловир, фоскарнет, видарабин и др. [Баринский И.Ф., Алимбарова Л.Н. Препараты для лечения хронической герпетической инфекции, Российские аптеки, 2005, 1/71, стр.30-33].

Однако химиопрепараты не всегда достаточно эффективны, поскольку не обладают специфическим действием для профилактики рецидивов герпетических заболеваний. Такой активностью в отношении вирусов простого герпеса 1-го и 2-го типов (ВПГ-1 и ВПГ-2) обладает герпетическая поливакцина, в том числе на основе инактивированных вирионов. Такие вакцины разработаны как в России [Шитикова Г.С.. Перспективы применения герпетической вакцины для лечения заболеваний, обусловленных вирусом простого герпеса. Terra medica: Всероссийский журнал для врачей всех специальностей. - 2007. №6. - С.14-17], так и за рубежом. Они описаны в патентах РФ №№2014084 (1994), 2085582 (1997), 2085583 (1997), 2264819 (2003), а также в патентах США №№4816250 (1989), 5215748 (1993), 5602023 (1997).

Хотя перечисленные в этих работах вакцины и являются специфическими и изготовлены на основе инактивированных и ослабленных штаммов ВПГ-1 и ВПГ-2, но не все они пригодны для профилактики рецидивов заболевания человека. Для успешной борьбы с вирусами герпеса необходимо учитывать гуморальные и клеточные факторы противовирусного иммунитета, состояние иммунной системы, стадию заболевания, форму заболевания (латентная инфекция, обострение хронической формы).

При создании вакцин также актуальным является путь их введения. При подкожном введении могут возникнуть нежелательные побочные реакции. Поэтому были разработаны вакцины для чресслизистого введения, например интраназального (США №20050031587, 2005 г.), вакцинные композиции в форме суппозитория (РФ №2142816, 1999 г.). Однако требуются дополнительные исследования и разработки более эффективных и стабильных форм.

В качестве наиболее близкого аналога может быть выбран патент РФ 2291690, опубл. 20.01.2007. В патенте описана композиция, которая включает вирионный вакцинный антигерпетический препарат, содержащий вирусы простого герпеса серотипов 1 и 2, инактивированные формалином или излучением, иммунокомпетентное вещество и фармацевтически приемлемый носитель. Композиция содержит полиоксидоний, валин, лизин и изолейцин, а также комбинацию, состоящую не менее чем из 2-х аминокислот, выбранных из группы: фенилаланин, лейцин, аланин, реонин, гистидин, аргинин, метионин. Формы композиции: в виде таблетки, драже, гранул, саше или порошка, помещенного в капсулу, в виде раствора, геля, эмульсии, сиропа или линимента, мазь, крем, паста, суппозиторий, имплантат, жевательная таблетка или пастилка.

Задачей настоящего изобретения является создание высокоэффективной вакцины, обеспечивающей снижение числа рецидивов у хронических больных, стабильной при длительном хранении.

Задача решается новой фармацевтической композицией для получения антигерпетической вакцины, включающей вирусный препарат, содержащий вирусы простого герпеса 1-го и 2-го типов, инактивированные формалином или гамма-излучением, интерферон и комбинацию по крайней мере двух незаменимых аминокислот при следующем содержании компонентов:

инактивированные вирусы простого герпеса 1-го и 2-го типов - по 5 млн. бляшкообразующих единиц на 1 мл суспензии;

интерферон - 150-250 тыс. МЕ/мл;

аминокислоты - 0,27 мг/мл.

При создании инактивированных вакцин необходима высокая концентрация антигенов ВПГ-1 и ВПГ-2, что может быть достигнуто при выращивании вирусов на клеточных культурах человеческого происхождения, в частности на диплоидных культурах, таких как MRC-5.

Поэтому в одном из предпочтительных вариантов вирусы простого герпеса 1-го и 2-го типов в указанных концентрациях выращиваются на клетках человеческого происхождения MRC-5.

Интерферон как адъювант известен в области создания вакцин. В настоящем изобретении при введении в заявленном соотношении был достигнут более высокий результат в нормализации клеточного метаболизма при поражении организма ВПГ-1, ВПГ-2, особенно при хронических формах заболевания. Может быть использован интерферон α, β и γ. Особенно предпочтительно использование интерферона α₂.

Незаменимыми аминокислотами являются триптофан, фенилаланин, лизин, треонин, метионин, лейцин, изолейцин, валин, аргинин.

Необязательно композиция может содержать стабилизатор, представляющий собой альбумин человеческий в количестве 0,22-0,24 г на 100 мл.

Наиболее удобной для пациента лекарственной формой является форма суппозитория, что также использовано в изобретении.

В качестве основы, как правило, используют масло какао в количестве до получения стандартного веса свечи от 2 до 6 г. Содержание вакцинной композиции составляет 15-25% от веса готовой лекарственной формы.

Способ приготовления суппозитория на основе фармацевтической композиции, включающей смешивание по стандартной технологии компонентов вакцинной композиции и масла какао. Например, суспензию иммуногенной композиции вводят в предварительно расплавленную и охлажденную до 37°C основу из масла какао и смешивают до гомогенного состояния, после чего выливают в формы и охлаждают.

Примеры осуществления изобретения

Пример 1. Получение композиции

MRC5 клетки культивировали в среде Игла с добавлением 10% фетальной сыворотки или и 10% триптоз-фосфатного бульона во вращающейся бутылке Винчестер (2500 мл). Клетки затем промывали в предварительно нагретой среде Игла для удаления сыворотки, поддерживали в среде, лишенной сыворотки, в течение 24 часов. После 24 часов отмывали в среде Игла и инфицировали вирусом простого герпеса при дозе пять бляшкообразующих единиц на клетку. Проводят адсорбцию вируса в течение одного часа при температуре 37°C, промывают средой и повторно инкубируют. Затем клетки суспендируют в фосфатном буферном солевом растворе в течение времени и температуры, которая будет отделять клеточные ядра от их цитоплазматической фракции, но недостаточно, чтобы разрушить ядра. Полученный препарат центрифугируют при 650 g в течение 10 минут и собирают супернатант. Проводят инактивацию формалином или гамма-излучением. Полученную фракцию затем центрифугируют, очищают.

Очищенную цитоплазматическую фракцию затем подвергают процессу осаждения вирусного белка с удалением нежелательных белков. Полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение одного часа, а затем центрифугируют при низкой скорости, чтобы отделить антиген. Суспензию вирусов смешивают с интерфероном, комбинацией аминокислот.

Пример 2. Исследование иммунодепрессивной активности

Мы исследовали иммунодепрессивную активность ВПГ-1 и ВПГ-2, моделируя этот эффект на культуре других клеток человеческого происхождения - периферических мононуклеарных клетках крови человека. После заражения и соответствующей инкубации выделяли естественные киллеры (ЕК) и определяли их цитотоксичность.

В ходе работы с описанной системой было установлено, что ВПГ-1 и ВПГ-2 подавляют цитотоксическую функцию клеток ЕК только в том случае, если в культуре периферических мононуклеарных клеток находятся моноциты. Удаление последних из системы отменяет развитие вирусиндуцированной супрессии. После внесения моноцитов иммунологический эффект вновь формируется. Таким образом, описанные механизмы действия ВПГ-1 и ВПГ-2 на иммунокомпетентные клетки и иммунный статус подтверждают необходимость включения в комплексную терапию иммунокомпетентных веществ, таких как интерферон в сочетании с заявленным комплексом аминокислот, что и предложено в нашем изобретении.

Как непосредственно после вакцинации, так и в отдаленные сроки (8 месяцев после вакцинации) вирусемию у обследованных больных методом ПЦР не обнаруживали.

При обследовании пациентов, которым вводили заявленную композицию, было установлено, что рецидивы заболевания полностью прекратились у 71% пациентов, у 26% их стало значительно меньше.

Пример 3

Лекарственная форма - суппозиторий вакцинной суспензии 20 мл,

α₂ - интерферона 3×10⁶ ME,

масло-какао - до 100 г.

Из массы получают 25 суппозиториев весом 4 г.

Определение жизнеспособных клеток в суппозиториях.

Один суппозиторий весом 4,0 г, содержащий заявленную композицию, размягчали при 37°C в фосфатном буфере до однородного состояния и готовили 10-ти кратные разведения суспензии. Из растворов делали высевы по 100 мкл на чашках Петри с L-агаром, содержащим 100 мкг/мл ампициллина, и термостатировали сутки при 37°C. По истечении времени проводят визуально подсчет количества колоний на чашках.

Определение показало сохранение активности в исследуемой форме.

Таким образом, нами разработана новая эффективная вакцина, которая может быть рекомендована для введения в клиническую практику.

Изобретение относится к области медицины, а именно к созданию поливакцины против вирусов герпеса простого и лекарственной формы в виде свечей на ее основе. Фармацевтическая композиция включает вирусный препарат, содержащий вирусы простого герпеса 1-го и 2-го типов, инактивированные формалином или гамма-излучением, и иммунокомпетентное вещество. В качестве иммунокомпетентного вещества применяют интерферон и комбинацию по крайней мере двух независимых аминокислот при следующем содержании компонентов: инактивированные вирусы простого герпеса 1-го и 2-го типов - по 5 млн бляшкообразующих единиц на 1 мл суспензии, интерферон - 150-250 тыс. МЕ/мл, аминокислоты - 0,27 мг/мл. Включение в состав композиции интерферона как адъюванта и комбинации двух незаменимых аминокислот позволяет создать высокоэффективную герпетическую вакцину, создать на ее основе лекарственную форму в виде свечей, что делает возможным рекомендовать использование данной вакцины в педиатрической практике. 3 з.п. ф-лы, 3 пр.

1. Фармацевтическая композиция для получения антигерпетической вакцины, включающая вирусный препарат, содержащий вирусы простого герпеса 1-го и 2-го типов, инактивированные формалином или гамма-излучением, и иммунокомпетентное вещество, отличающаяся тем, что в качестве иммунокомпетентного вещества содержит интерферон и комбинацию по крайней мере двух независимых аминокислот при следующем содержании компонентов:
инактивированные вирусы простого герпеса 1-го и 2-го типов - по 5 млн бляшкообразующих единиц на 1 мл суспензии;
интерферон - 150-250 тыс. МЕ/мл;
аминокислоты - 0,27 мг/мл.

2. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что вирусы простого герпеса 1-го и 2-го типов в указанных концентрациях выращиваются на клетках человеческого происхождения MRC-5.

3. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что содержит альбумин человеческий в количестве 0,22-0,24 г на 100 мл.

4. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что антигерпетическая вакцина выполнена в виде суппозитория.