РАСТИТЕЛЬНЫЕ ЭКСТРАТЫ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ НЕЙРОДЕГЕНЕРАТИВНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ Российский патент 2015 года по МПК A61K36/53 A61P25/28 

Уровень техники

Нейродегенеративные заболевания, сопровождающиеся образованием белковых отложений, охватывают широкий спектр клинических проявлений болезни. Они характеризуются патологически аномальными глобальными или локальными концентрациями белков или белковых фрагментов (пептидов) и возникающими в результате этого белковыми осаждениями или агрегациями, которые при известных условиях из-за предшествующей димеризации или олигомеризации образуют упорядоченные структуры (например, фибриллы) либо кристаллические белковые структуры (например, бета-амилоид в бляшках при болезни Альцгеймера).

Среди прочих, за данной патологией скрываются такие заболевания, как хорея Хантингтона, при которой в ядерных зонах головного мозга аккумулируется и откладывается белок хантингтин. Спиноцеребральная атаксия 2-го типа (СЦА2) - это нейродегенеративное заболевание, причиной которого является белок атаксин-2, обнаруженный в агломерированной форме. При деменции с тельцами Леви (ДТЛ) патофизиологически можно определить агломерированную форму белка альфа-синуклеина, который является причиной клинических проявлений таких заболеваний, как болезнь Паркинсона и мультисистемная атрофия (МСА), относящихся к «синуклеинопатиям». Еще одну группу нейродегенеративных заболеваний образуют тауопатии, при которых цитоскелетный белок тау-белок скапливается с образованием фибриллярных структур (содержащих белок волокон или клубков).

Большую группу подобных белковых осаждений наблюдают при амилоидозах. При этом образуется большое количество аномально измененных белков, которые откладываются в виде нерастворимых маленьких волокон (фибрилл). Например, такое заболевание, как амилоидоз обусловлено нарушением образования складчатой структуры белка, который обычно является растворимым. Из-за аномальной концентрации эти белки скапливаются, образуя более крупные бета-складчатые структуры и затем фибриллы.

Так как фибриллы относительно резистентны к аутогенным иммунным механизмам (фагоцитоз и протеолиз), они не могут полностью удаляться из пораженных органов. Впоследствии данные отложения разрушают архитектуру органа, что ведет к нарушению его функций вплоть до полного прекращения функционирования органа. Амилоидозы представляют собой патологический процесс образования отложений, который может вызываться различными нарушениями обмена веществ и, в зависимости от пораженного органа, становиться причиной различных хронических изменений или болезней.

Особой разновидностью амилоидоза является старческий амилоидоз, который поражает преимущественно сердце и головной мозг. В настоящее время с иммуногистохимической точки зрения эта форма описывается как AS-амилоидоз. Под ним понимают все амилоидные белки, вызывающие сенильный амилоидоз. Хотя белки, вызывающие эту патологию, во многом еще не охарактеризованы, их частое возникновение связывают с болезнью Альцгеймера.

Следующим периферическим дегенеративным заболеванием, которое вызывается белковыми отложениями, является, например, миозит с включениями телец (Inclusion Body Myositis). В данном случае скопления молекул/пептидов обнаруживаются внутри мышечных волокон, с которыми связывают также дегенеративные органические процессы и в других местах как, например, бета-амилоиды и прионные белки. Последние рассматриваются в качестве причины возникновения воспалительного процесса в мышцах при миозите с включениями телец (МВТ).

Болезнь Альцгеймера (англ. Alzheimer Disease), которую называют также деменцией Альцгеймера, известная во всем мире под аббревиатурой AD, является нейродегенеративным заболеванием, которое в своей самой частой форме проявляется у людей старше 65 лет. В 2007 году именно оно стало причиной примерно 29 миллионов случаев заболевания деменцией во всем мире [R.Brookmeyer u.a..: Forecasting the global burden of Alzheimer's disease. In: Alzheimer's and Dementia. 3/2007, Band 3, Seiten 186-191]. По мере прогресса заболевания ухудшаются когнитивные способности, что может привести к возникновению особенностей в поведении и изменениям характера. В головном мозге больного обнаруживаются так называемые бляшки, которые состоят из агрегированных бета-амилоидных пептидов (AG). До сих пор однозначная причина спорадического варианта заболевания не известна, однако была установлена связь генной мутации трех различных генов с бета-амилоидными пептидами. Предполагается, что за повышение риска возникновения болезни Альцгеймера ответственны специальные аллель-генотипы аполипротеина Е (АроЕ), а именно АроЕ4 [Corder, Е.Н. et al. (1993): Gene dose of apolipoprotein У type 4 allele and the risk of Alzheimer's disease in late onset families. In: Science. 261 (5123): 921-923] [Bu, G. (2009): Apoliprotein E and its receptors in Alzheimer's disease: pathways, pathogenesis and therapy. In. Nat. Rev. Neurosci. 10(5): 333-344]. Также, исходя из современных демографических процессов с тенденцией к старению населения, можно предположить, что все больше и больше людей будут заболевать болезнью Альцгеймера. Распространенность этой болезни возрастает от 2% у 65-летних до 20% у 85-летних. Как прогнозируется, в 2050 году болезнь Альцгеймера будет наблюдаться более чем у 100 миллионов пациентов, что представляет собой значительную нагрузку для общества. Замедление в патогенезе приблизительно на 5 лет позволило бы, с одной стороны, вплоть до естественной смерти отсрочить наступление периода времени, в течение которого пациент страдает от заболевания, а с другой стороны - значительно сократить прогнозируемые общественные расходы.

Если тщательнее рассмотреть механизм патологии, то в головном мозге пациентов с болезнью Альцгеймера можно обнаружить так называемые сенильные бляшки и фибриллярные клубки (НФК). Белковые отложения бляшек состоят в основном из бета-амилоидных пептидов. Расположенные внутри клеток нейрофибриллярные пучки состоят из тау-белка. Если данный белок фосфорилирует сильнее, чем обычно, т.е. к нему присоединяются остатки фосфорной кислоты («гиперфосфориляция»), то он объединяется в фибриллы. Не выяснено, является ли эта тау-фосфориляция второстепенной или же именно она вызывает заболевание. В процессе заболевания масса головного мозга из-за отмирания нейронов уменьшается; тогда говорят об атрофии головного мозга. Кроме того, нейромедиатор ацетилхолин уже не вырабатывается в достаточном количестве, что ведет к общему ухудшению функций головного мозга.

Бета-амилоидные пептиды образуются из белка-предшественника амилоида (БПА), который представляет собой интегральный мембранный белок. Этот белок является трансмембранным белком I типа -: его более крупный аминокислотный концевой участок находится на внешней стороне клетки, в то время как меньший карбоксиленовый концевой участок расположен внутри клетки. БПА расщепляется ферментами, расщепляющими белок, так называемыми секретазами (альфа-секретаза, бета-секретаза и гамма-секретаза), благодаря чему может произойти высвобождение бета-амилоидного пептида из белка-предшественника. Существуют два основных пути расщепления БПА. Неамилоидогенный путь: БПА расщепляется альфа-секретазой. Это расщепление происходит внутри той части БПА, которая содержит амилоид. Тем самым предотвращается образование бета-амилоида. Это приводит к высвобождению большой экстрацеллюлярной части, функция которой окончательно еще не выяснена. Амилоидогенный путь: БПА сначала расщепляется бета-секретазой, а затем гамма-секретазой.

Это расщепление, которое происходит внутри участка трансмембраны, ведет к высвобождению бета-амилоида. Оба процесса могут происходить в нервных клетках параллельно. Длина образованных бета- и гамма-секретазами бета-амилоидных пептидов варьирует. Главный тип (Аβ-40) состоит из 40 аминокислот, в то время как меньшая часть (Аβ-42) имеет в длину 42 аминокислоты. Длина бета-амилоида имеет центральное значение для развития патологии, так как более длинный Аβ-42 обнаруживает значительно более ярко выраженную тенденцию к агрегации, чем меньший по длине Аβ-40.

Некоторые генетические причины приводят к возникновению болезни Альцгеймера. Примерно у одного-пяти процентов больных заболевание обнаруживается в семейном анамнезе (familial alzheimer's disease (FAD) (СБА)), которая обуславливается мутацией пресенилин-1-гена хромосомы 14, пресенилин-2-гена хромосомы 1 или БПА-гена хромосомы 21. Синдром Дауна, при котором в 21-й хромосоме, на которой находится БПА-ген, имеется тройной набор наследственного материала, также повышает риск заболеть деменцией и болезнью Альцгеймера, причем психодиагностическое подтверждение диагноза у людей с этой геномной мутацией осложняется из-за имеющихся уже на ранних стадиях когнитивных нарушений.

При болезни Альцгеймера также нарушена функция митохондрий. Блокада дыхательной цепи комплекса IV ведет к чрезмерной выработке радикалов, которые повреждают клетку. Вопрос о том, является ли эта блокада следствием чрезмерной выработки бета-амилоида или бета-амилоид как антиоксидант борется с этим вновь возникшим стрессом, на сегодняшний день остается открытым. Для того чтобы избежать избыточной выработки бета-амилоида вследствие воздействия радикалов, можно применять экстракты, обладающие антиоксидантными свойствами.

АВС-транспортеры образуют большое семейство мембранных белков, которые активно транспортируют специфические субстраты через клеточную мембрану. Транспортеры витаминов принадлежат, с одной стороны, к первично активным транспортерам и, с другой стороны - к входящим в мембрану АТФазам. Суперсемейство АВС-транспортеров включает одно из крупнейших известных белковых семейств, представители которого обнаруживаются почти в каждом организме: в бактериях, растениях и млекопитающих. После того как в последние годы стало известно, что АВС-транспортеры имеют существенное медицинское, промышленное и экономическое значение, интерес к ним существенно возрос. Ежегодно десятки тысяч людей умирают от рака, так как химиотерапия потерпела неудачу по причине сильной экспрессии АВС-транспортеров в ткани опухоли. Мутации в гене, который закодирован для АВС-транспортера, могут вызвать у человека различные нарушения обмена веществ. Все эукариотические АВС-транспортеры являются экспортерами. Некоторые очень субстрат-специфичны, другие мультиспецифичны. АВС-транспортеры, среди прочего, переносят также бета-амилоид и рассматриваются как часть патомеханизма, который ведет к возникновению болезни Альцгеймера [Pahnke et al. 2008: Clinico-pathological function of cerebral ABC transporters - implications for the pathogenesis of Alzheimer's disease. Current Alzheimer Research 5, 396-406., Pahnke et al. 2009: Alzheimer's disease and blood-brain barrier function - Why have anti-p-amyloid therapies failed to prevent dementia progression? NeurosciBiobehavR 33:1099-1108].

В настоящее время в сфере фитофармацевтических лекарственных средств известно много растительных препаратов, оказывающих определенное воздействие на нервную систему. Для этого вещества, содержащиеся в растениях, должны обладать способностью преодолевать гемато-энцефалический барьер. Экстракты, способность которых оказывать воздействие на нервную систему была подтверждена в ходе клинических исследований, содержатся в таких растениях, как женьшень, гинкго, пассифлора, зверобой, валериана, хмель, лаванда, зеленый чай, шалфей и других.

Допущенные терапевтические методы лечения нейродегенеративных заболеваний, вызывающих деменцию, например, деменции Альцгеймера и деменции при болезни Паркинсона (PD), в настоящее время используются только для симптоматического лечения. Как правило, исходят из того, что при заболеваниях деменцией, клиническая симптоматика возникает из-за недостатка нейротрансмедиатора ацетилхолина (Ach). Поэтому терапия начинается с попытки подавления фермента, который отвечает за расщепление ацетилхолина (ингибиторы ацетилхолинэстеразы). Ach-ингибиторы, как, например, донепезил или галантамин, допущены в Германии для использования при лечении болезни Альцгеймера. Однако современные симптоматические методы лечения только в ограниченной степени способны замедлить прогресс заболевания; смягчение клинических проявлений в настоящее время вообще не представляется возможным.

В результате проверки, проведенной в августе 2009 года Немецким институтом по качеству и экономичности в здравоохранении [IQWiG-Berichte - Jahr: 2009 Nr. 67: Aktualisierungsrecherche zum Bericht A05-19A (Cholinesterasehemmer bei Alzheimer Demenz)], было установлено, что три разрешенных в Германии активных вещества -донепезил, галантамин и ривастигмин - у пациентов с легкой или средней степенью тяжести деменции Альцгеймера могут лишь незначительно замедлить деструкцию когнитивных способностей. К тому же, есть указания на то, что соответствующие препараты могут замедлить скорость, с которой пациенты с болезнью Альцгеймера теряют способность выполнять действия в повседневной жизни. Их польза для поддержания достойного качества жизни в отношении здоровья не подтверждена, и все три активных вещества частично обладают значительными побочными действиями.

Экстракты из гинкго билоба, которые, как считается, могут предупреждать возникновение заболевания деменцией или его прогрессирование, до сих пор не показали эффективности при лечении нейродегенеративных заболеваний, сопровождающихся белковыми отложениями. В ходе актуальных обширных перспективных двойных слепых плацебо-контролируемых исследований, в которых участвовало более 3000 привлеченных пациентов, не было найдено доказательств какого-либо эффекта относительно снижения количества вновь заболевших или замедления клинического течения при уже начавшемся заболевании деменцией [DeKosky et al.; Ginkgo biloba for Prevention of Dementia: A Randomized Controlled Trial. JAMA. 2008; 300(19): 2253-2262].

Растительные экстракты зверобоя (лат. Hypericum perforatum spp. зверобой продырявленный) известны как экстракты, оказывающие определенное воздействие на ЦНС; они применяются при депрессии легкой-средней степени тяжести в качестве «препаратов, улучшающих настроение». При этом в качестве активного фармацевтического ингредиента используются так называемые сборные экстракты из спирто-водных растворов. Suva et al. [Neurotoxicity Research, 2004, Vol.6 (2), pp.119-130] описывает нейропротективный эффект экстракта зверобоя, основанный на нейротоксичности, индуцируемой бета-амилоидом. Описанный здесь экстракт с 80%-ным содержанием этилового спирта в качестве экстрагирующего средства продемонстрировал хорошие свойства по защите клетки. В данной же публикации описан как токсический эффект фракции гиперфорина, так и защитный эффект фракций флавоноидов. Побочные действия экстрактов зверобоя, применяемых во всем мире как средство от легкой депрессии, хорошо исследованы. Были доказаны побочные действия именно гиперфорина и экстрактов, содержащих значительное количество гиперфорина (информация о данных побочных действиях была получена из соответствующих сообщений) [Johne et al. (2003) BGBL 46:1061-1067/DOI 10.1007/s00103-003-0742-y]. Описаны также побочные действия, обусловленные дозами принимаемого лекарства, и взаимодействие с цитохромоксидазами системы Р450 [Moore et al. (2000) St.Jonh's wort induces hepatic drug metabolism through activation of the pregnane X receptor. Proc Nail Acad Sci USA 97: 7500-7502].

Данное взаимодействие ведет к интеракции с метаболизмом ряда допущенных к применению медикаментов. Спорадические заболевания деменцией проявляются в возрасте старше 60 лет - к этому времени многие пациенты уже имеют опыт медикаментозной терапии гиперлипидемии, гипертонии или других воздействий метаболического синдрома.

Спектр побочных действий Р450 в особенной степени объясняется количеством гиперфорина в экстрактах, в то время как слишком высокое содержание гиперицина является причиной фототоксичных побочных действий.

Раскрытие изобретения

Задачей данного изобретения было создание средств, которые подходили бы для лечения нейрологических заболеваний - в частности, дегенеративного типа - и, по возможности, сочетали бы высокую эффективность с незначительно выраженными побочными действиями.

Данная задача решается путем применения растительных экстрактов, отобранных из экстрактов частей растений, которые могут быть получены путем экстракции с водой, водно-спиртовыми растворителями или их смесями в целях изготовления лекарственной формы для лечения или профилактики нейродегенеративных заболеваний.

Таким образом, предметом изобретения является применение экстрактов растений семейства яснотковых.

Из надземных частей растений при помощи водных или водно-спиртовых растворителей изготавливаются соответствующие экстракты.

Водно-спиртовой раствор представляет собой смесь воды и спирта. Как правило, в нем содержится от 10 до 90% спирта. Данные относительно концентрации алкоголя указаны в % (отношение объемов) для температуры 25°С.

Экстракция с водно-спиртовым раствором означает, что первичная экстракция из лекарственного растительного сырья производится с использованием данного растворителя.

Соответствующие лекарственные вещества пригодны для лечения или профилактики нейродегенеративных заболеваний. Предполагается, что эффективность экстрактов обусловлена активацией АВС-транспортеров; однако данная теория не считается единственно верной.

Последние публикации заявителей [Pahnke et al. 2008: Clinico-pathological function of cerebral ABC transporters - implications for the pathogenesis of Alzheimer's disease. Current Alzheimer Research 5,396-406; Pahnke et al. 2009: Alzheimer's disease and blood-brain barrier function - Why have anti-p-amyloid therapies failed to prevent dementia progression? NeurosciBiobehavR 33: 1099-1108] показывают, что АВС-транспортеры играют важную роль в выведении белковых отложений при заболеваниях деменцией, в особенности бета-амилоидных отложений при болезни Альцгеймера. Эти транспортеры находятся у естественных барьеров, как, например, гемато-энцефалический барьер. Активация данных транспортеров, из которых у человека известны 49, могла бы привести к снижению количества интрацеребральных белковых и пептидных агрегатов.

Таким образом, предметом изобретения является применение растительных экстрактов или комбинаций экстрактов в целях предотвращения патологической агрегации и аккумуляции белков in vivo либо полное или частичное растворение уже агрегированных скоплений белков (в том числе олигомерных) и последующее удаление из головного мозга/органов продуктов деградации. И, наконец, можно снизить как концентрацию токсических интермедиаторов, так и агрегацию в нейронах путем применения растительных экстрактов согласно изобретению.

Согласно изобретению активные вещества растений должны поспособствовать снижению количества как интра-, так и экстранейрональных растворимых и нерастворимых белковых агрегатов. Поскольку при многих заболеваниях, сопровождающихся слабоумием, требуется продолжительное пожизненное лечение, для достижения оптимального соотношения пользы и риска следует применять по возможности хорошо переносимые вещества с малым количеством побочных действий. Из опыта терапии других нарушений и заболеваний ЦНС известна хорошая переносимость и малое количество побочных действий растительных экстрактов.

Результаты исследований показывают, что их применение также приводит к уменьшению количества бляшек.

В ЕР 1054682 описывается in-vitro активность гиперфорина при использовании в рамках учебно-функциональной модели, связанной с деменцией. Собственные исследования in vivo на моделях болезни Альцгеймера у мышей все же удивительным образом показали, что активность протестированных экстрактов зверобоя не обнаружила никакой корреляции с содержанием гиперфорина (см. примеры 2 и 3). Экстракты с низким содержанием гиперфорина все же проявляют особую активность; более того, именно основа экстракта - свойства которой в значительной степени определяются используемым при изготовлении экстрагирующим средством- обосновывает отличие моделей болезни Альцгеймера у мышей (см. таблицу из примера 7).

Как правило, считается, что нейродегенеративные заболевания вызываются аккумулированными белками или пептидами - так называемые нейродегенеративные заболевания, сопровождаемые белковыми отложениями.

В данном случае речь может идти о синдроме Дауна, хорее Хантингтона (XX), спиноцеребральной атаксии (СЦА), в особенности СЦА2, или амилоидозах, в особенности болезни Альцгеймера (БА).

Возможны и такие формы проявления, как синуклеинопатии, в особенности мультисистематрофия (МСА), болезнь Паркинсона (БП) или деменции с тельцами Леви (ДТЛ).

Возможны также такие формы проявления, как тауопатии, лобно-височные лобарные дегенерации/деменции (ЛВЛД), амиотрофный латеральный склероз (АЛС) или миозит с включениями телец (МВТ).

Экстракты согласно изобретению могут также применяться для лечения начальных/ранних форм заболеваний, сопровождающихся деменцией, например, легкого когнитивного нарушения (ЛКН) при болезни Альцгеймера.

В одной из форм исполнения согласно изобретению применяется экстракт, полученный из зверобоя. Зверобой описан в Европейской фармакопее. В данном случае используется надземная часть зверобоя продырявленного. В качестве экстракционного средства хорошо проявил себя водный раствор этанола с содержанием этанола 80%.

В одной из форм исполнения экстракт изготавливается из растения Herba Sideritis spp. При изготовлении экстрактов из горного чая хорошо проявили себя растворители на водной основе, а также спиртовые смеси на водной основе, отобранные из числа метанола, этанола, 1-пропанола или 2-пропанола с содержанием 10-70 объемных частей алкоголя. Наилучшие свойства проявили растворы с концентрацией спирта от 20 до 40%.

Полученные экстракты могут применяться в подходящих лекарственных формах, особенно в виде таблеток, настоек, капсул, саше, ампул для перорального применения или таблеток для рассасывания.

Наиболее оптимальны нативные количества от 300 мг до 1200 мг в день.

Экстракты согласно изобретению могут применяться для изготовления лекарственных средств. Безусловно, возможно использование в пищевых продуктах или добавках к пище, а также включение экстрактов в дополняющую сбалансированную диету, которая применяется для поддержки медикаментозного лечения нейродегенеративного заболевания.

Осуществление изобретения

Изобретение рассматривается более подробно на основе нижеследующих примеров.

Пример 1. Тестовая модель

Эффективность протестированных экстрактов была исследована на следующей модели in vivo.

Генетически генерированный штамм мыши с предрасположенностью к болезни Альцгеймера (см., например, Oakley H. и др. 2006, Интранейрональные бета-амилоидные агрегаты, нейродегенерация и утрата нейронов у трансгенной мыши с пятью мутациями семейной болезни Альцгеймера: потенциальные факторы в образовании амилоидных бляшек. J.Neurosci 26(40):10129-40) как правило, начиная с 1,5-2 месяцев жизни обусловливает формирование первых отложений бета-амилоида. Начиная с 50 дня жизни мышам через глотку ежедневно активно вводится доза экстракта. После определенной общей продолжительности жизни в 75 или 100 дней животные умерщвляются, их головной мозг анализируется. Кроме того, молекулярно-биологическим способом при помощи метода ELISA измеряется концентрация растворимой Аβ42 фракции. Гистологически отложения бляшек исследуются по нескольким параметрам: количество и площадь (среднее значение; n≥3).

Пример 2. Сравнительный пример: зверобой 80% ЕtOН с низким содержанием гиперфорина

10,7 кг зверобоя (Европейская фармакопея) два раза мацерируются со 100 литрами этанола 80% (отношение объема к объему) при температуре 45°С. Элюат посредством фильтрации освобождается от взвесей и концентрируется в густой экстракт. Полученная таким способом суспензия была охлаждена при 4°С, и через 8 часов были сняты находящиеся на поверхности смолистые фазы. Остальная суспензия была высушена и перемолота в соотношении 70% нативного вещества, 14% мальтодекстрина, 14% силиконизированной микрокристаллической целлюлозы, 2% высокодисперсного диоксида кремния. В результате получили 4,5 кг экстракта, который содержал 0,09% гиперицина, 0,3% гиперфорина и 5,7% флавоноидов.

Полученный таким способом экстракт был протестирован на описанной в примере 1 модели in-vivo. Результаты приводятся в примере 7.

Пример 3. Сравнительный пример: зверобой 80% EtOH с обычным содержанием гиперфорина

10 кг зверобоя (Европейская фармакопея) тщательно экстрагируются со 150 литрами этанола 80% (отношение объема к объему) при температуре 50°С. Элюат после охлаждения до комнатной температуры посредством фильтрации освобождается от взвесей и осторожно концентрируется в густой экстракт. Полученная таким способом суспензия была высушена и перемолота в соотношении 98% нативного вещества, 2% высокодисперсного диоксида кремния. В результате получилось 2,2 кг экстракта, который содержал 0,21% гиперицина, 2,9% гиперфорина и 11,3% флавоноидов.

Полученный таким способом экстракт был протестирован на описанной в примере 1 модели in vivo. Результаты приводятся в примере 7.

Пример 4. образец из растения Herba Sideritis scardica согласно изобретению

10 кг частей растений (Sideritis scardica L.) были тщательно перколированы с 300 литрами этанола 20% (отношение объема к объему) при температуре 50°С. Элюат был отделен от высушенного лекарственного сырья и освобожден от его остатков. Перколат был осторожно выпарен под низким давлением и приготовлен без растворителя путем многократного добавления воды. Выход продукта составил 4,2 кг густого экстракта с долей сухого вещества 43,3%. Он был высушен при помощи вспомогательного высушивающего вещества мальтодекстрина в соотношении 70% нативного вещества: 30% мальтодекстрина.

Полученный таким способом экстракт был протестирован на описанной в примере 1 модели in vivo. Результаты приводятся в примере 7.

Пример 5. Образец из растения Herba Sideritis euboa согласно изобретению

10 кг частей растений (Sideritis euboa) были тщательно перколированы с 300 литрами этанола 20% (отношение объема к объему) при температуре 50°С. Элюат был отделен от высушенного лекарственного сырья и освобожден от его остатков. Перколат был осторожно выпарен под низким давлением и приготовлен без растворителя путем многократного добавления воды. Выход продукта составил 3,9 кг густого экстракта с долей сухого вещества 42,6%. Он был высушен при помощи вспомогательного высушивающего вещества мальтодекстрина в соотношении 70% нативного вещества:30% мальтодекстрина.

Полученный таким способом экстракт был протестирован на описанной в примере 1 модели in vivo. Результаты приводятся в примере 7.

Пример 6. Образец из растения Herba Sideritis spp. согласно изобретению

10 кг частей растений (смесь в соотношении 50/50 Sideritis cardica L. и S. euboa L.) были тщательно перколированы с 300 литрами этанола 20% (отношение объема к объему) при температуре 50°С. Элюат был отделен от высушенного лекарственного сырья и освобожден от его остатков. Перколат был осторожно выпарен под низким давлением и приготовлен без растворителя путем многократного добавления воды. Выход продукта составил 3,2 кг густого экстракта с долей сухого вещества 56%. Он был высушен при помощи вспомогательного высушивающего вещества мальтодекстрина в соотношении 70% нативного вещества:30% мальтодекстрина.

Полученный таким способом экстракт был протестирован на описанной в примере 1 модели in vivo. Результаты приводятся в примере 7.

Пример 7. Результаты образования бета-амилоида при испытании in vivo

Исследованный штамм мыши согласно примеру 1 генетически изменен таким образом, что типичные для болезни Альцгеймера амилоидные отложения ярко выражены примерно на 100-й день жизни. Лечение было начато после 50-го дня жизни.

  Количество растворимой фракции Ар42 (средняя величина в нг на мг общего белка головного мозга) Период лечения в днях (возраст в днях при анализе) Контрольный штамм (обработка Н₂O) 54,1 25 д. (75 д.) Гиперикум 80% ЕtOН с низким содержанием гиперфорина согласно примеру 2 23,9 25 д. (75 д.) Гиперикум 80% ЕtOН с высоким содержанием гиперфорина согласно примеру 3 35,3 25 д.(75 д.) Sideritis scardica согласно примеру 4 20,3 25 д. (75 д.) Sideritis euboa согласно примеру 5 18,3 25 д. (75 д.) Sideritis spp. согласно примеру 6 32,8 25 д. (75 д.)

Экстракты растений рода Sideritis, согласно примерам 4-6, снижают растворимую фракцию бета-амилоидов относительно контрольной обработки водой. В то время как S. scardica вызвала снижение растворимой Аβ42-фракции на 62,5%, в случае с S. Euboa было достигнуто снижение на 66,2% (n≥3). Тем самым снижение растворимой фракции Ар42 было более значительным, чем при использовании экстрактов зверобоя из 80% ЕЮН, которые известны из литературы (Silva, В. et al., Neurotoxicity Research 2004, 119-130), a также являются уровнем техники для примененной тестовой модели.

Таким образом, не содержащееся в экстракте вещество, а вся матрица экстракта - свойства которой определяются применяемым растительным сбором и используемым при изготовлении растворителем - является решающим признаком для успешного применения экстрактов растений рода Sideritis в области нейродегенеративных заболеваний.

Пример 8. Гистологическая оценка образования бляшек

Исследованный штамм мыши в соответствии с примером 1 является генетически измененным до такой степени, что типичные для болезни Альцгеймера амилоидные отложения явно проявились приблизительно на 100-й день жизни. Лечение было начато на 50-й день жизни.

Зависимость образования бляшек от продолжительности лечения после введения 4000 мг/кг экстракта зверобоя согласно примеру 2 (n≥5):

Продолжительность 75 дней 100 дней Количество бляшек (N) Контрольная группа 109,6 203,0 Экстракт зверобоя согласно примеру 2 64,5 129,5 Относительные изменения -41,1% -36,2% Средняя поверхность бляшек (А в мкм²) Контрольная группа 380,6 498,0 Экстракт зверобоя согласно примеру 2 337,4 367,5 Относительные изменения -11,3% -26,2%

Пример 9. Гистологическая оценка образования бляшек

Как и в примере 8, образование бляшек измерялось при приеме экстрактов растений рода Sideritis.

Изменение образования бляшек после приема 4000 мг/кг веса тела экстракта растений рода Sideritis согласно примеру 6 (n≥5):

Продолжительность 100 дней   Количество бляшек (N) Контрольная группа 203,0 Экстракт горного чая согласно примеру 6 103,6 Относительное изменение -49%       Средняя поверхность бляшек (А в мкм²) Контрольная группа 498,0 Экстракт горного чая согласно примеру 6 422,2 Относительное изменение -15,2%

Хотя поверхность бляшек практически не изменилась, количество их значительно уменьшилось.

Пример 10. Образец из растения Herba Sideritis scardica согласно изобретению

10,1 кг частей растений (Sideritis scardica L.) были тщательно перколированы с 384 литрами очищенной воды при температуре 80°С. Элюат был отделен от сухого лекарственного сырья и освобожден от его остатков методом фильтрации через целлюлозный фильтр (250 мкм). Прозрачный перколат был осторожно выпарен под низким давлением. Выход продукта составил 2,1 кг густого экстракта с долей сухого вещества 63,0%. Он был при помощи вспомогательного высушивающего вещества мальтодекстрина в соотношении 70% нативного вещества: 30% мальтодекстрина, рецептирован, пастеризован и высушен посредством вакуумной сушки при 55°С. Полученный таким способом экстракт был перемолот в гомогенный коричневый порошок через сито 0,75 мм.

Растворимый в воде порошок подходит для приготовления саше, быстрорастворимого средства для приготовления напитка, растворимых в воде таблеток, а также может использоваться в качестве добавки к растворимым напиткам.

Пример 11. Состав таблеток

Таблетка содержит 300 мг сухого экстракта растения рода Sideritis согласно примеру 6. К дополнительным ингредиентам относятся ускоритель распада натрий-карбоксиметилцеллюлоза, вспомогательное вещество для придания текучести диоксид кремния, связывающее вещество полиэтиленгликоль 4000, смазывающее вещество стеарат магния, а также кислый карбонат натрия.

Изобретение относится к применению экстракта железницы в качестве средства для лечения или профилактики болезни Альцгеймера или легкого когнитивного нарушения. Указанный экстракт получают путем экстрагирования растительного сырья водно-спиртовым раствором с концентрацией этилового спирта до 70%. Изобретение обеспечивает предотвращение патологической агрегации и аккумуляции белков, сопровождающей нейродегенеративные заболевания, а также растворение уже агрегированных скоплений белков с последующим удалением из мозга и органов продуктов деградации. 3 з.п. ф-лы, 3 табл., 11 пр.

1. Применение экстракта железницы, полученного экстракцией водно-спиртовым раствором с концентрацией этилового спирта до 70% в качестве средства для лечения или профилактики болезни Альцгеймера или легкого когнитивного нарушения.

2. Применение по п.1, при котором экстракт железницы получен из травянистого растения Sideritis spp.

3. Применение по п.1, при котором экстракт железницы представлен в виде лекарственного средства, пищевого продукта, биологически активной добавки к пище или обогащенной сбалансированной диеты.

4. Применение по пп.1-3, при котором экстракт железницы получен из травянистого растения Sideritis scardiaca, травянистого растения Sideritis euboa или их смеси.