НОВЫЕ БИОМАРКЕРЫ ДЛЯ ОЦЕНКИ БОЛЕЗНЕЙ ПОЧЕК Российский патент 2015 года по МПК G01N33/50 

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к новым биомаркерам, предназначенным для оценки болезней почек, которые являются более чувствительными к патологическим изменениям почек, прежде всего на ранней стадии заболевания или поражения. Кроме того, настоящее изобретение относится к способу оценки болезней почек у млекопитающего и к набору, предназначенному для осуществления способа.

Предпосылки создания изобретения

Метаболомика представляет собой инструмент всестороннего систематического количественного изучения низкомолекулярных соединений, представляющих собой имеющие решающее значение метаболиты, которые охватывают весь диапазон путей промежуточного обмена. При системном биологическом подходе к изучению этот метод позволяет получать функциональные выходные данные, касающиеся изменений, которые определяются генетическим «чертежом», регуляцией, количеством и модификацией белков, а также воздействием окружающей среды. Возможность анализировать крупные массивы метаболитов позволяет получать биохимическую информацию, которая отражает истинные функциональные конечные точки происходящих биологических событий, в то время как другие функциональные геномные технологии, такие как транскриптомика и протеомика, хотя являются очень ценными, только указывают на возможную причину фенотипического ответа. Следовательно, они не позволяют прогнозировать с достаточной точностью воздействия лекарственных средств, токсикологический ответ или состояние болезни на фенотипическом уровне без дополнительной функциональной валидации.

Метаболомика заполняет эту информационную «брешь», позволяя получать, в частности, такую функциональную информацию, поскольку различия в метаболитах в биологических жидкостях и тканях наиболее тесно связаны с различными фенотипическими ответами. Очевидно, что указанные изменения биохимического фенотипа представляют собой непосредственный интерес для фармацевтики, биотехнологических и связанных с здравоохранением отраслей промышленности, поскольку соответствующая технология позволяет повышать рентабельность и объединять эту информацию.

В целом, фенотип не обязательно предопределяется генотипом. «Брешь» между генотипом и фенотипом зависит от целого ряда биохимических реакций, на каждую из которых оказывают влияние различные факторы, включая такие, как лекарственные средства, пища и окружающая среда. В этой цепи биомолекул, участвующих в пути от генов к проявлению фенотипа, метаболиты представляют собой поддающие количественной оценке молекулы, которые наиболее тесно связаны с фенотипом. Целый ряд фенотипических и генотипических состояний, таких как токсикологический ответ на лекарственное средство или распространение заболевания, можно прогнозировать по различиям в концентрациях функционально значимых метаболитов в биологических жидкостях или тканях.

Хроническая болезнь почек (ХБП) представляет собой прогрессирующую, как правило, необратимую, потерю функции почек, затрагивающую канальца и клубочки. ХБП представляет собой проблему для общественного здравоохранения, широко распространенную в мире, она сопровождается осложнениями, такими как почечная недостаточность, сердечно-сосудистое заболевание и преждевременная смерть. ХБП может возникать из-за различных причин, но одной из основных причин является осложнение сахарного диабета типа 2, называемое диабетической нефропатией (ДН). В Европе примерно 22,3 миллиона людей страдает диабетом и 94,9% из них страдает диабетом типа 2, что является причиной терминальной стадии заболевания почек (ESRD) в большинстве индустриальных стран в Европе (На Н. и др., 2008). Одна треть пациентов с ESRD страдает диабетом (WolfG. и Ritz E., 2003), и согласно современным данным у пациентов с диабетом типа 2 наблюдается эпидемиологическое повышение частоты ESRD, наиболее вероятно вследствие улучшенного лечения гипертензии и коронарной болезни сердца, что приводит к тому, что большее количество пациентов выживает в течение периода времени достаточного для того, чтобы развилась нефропатия и ESRD (Sampanis Ch., 2008). Ожидается, что в США ежегодные затраты на лечение ESRD в период с 1995 г. по 2010 г. возрастут более чем в два раза, от 11,8 до 28,3 миллиардов долларов США. В Европе экономические факторы не изучены в достаточной степени (Massi-Benedetti M и CODE-2 Advisory Board, 2002), но была проведена оценка затрат на лечение диабета типа 2 (CODE-2) с учетом влияния связанных с диабетом осложнений на стоимость лечения диабета. Исследование продемонстрировало, что на лечение пациента, у которого отсутствуют осложнения, затраты на ежегодное медицинское обслуживание составляют примерно 1505 евро, а на лечение пациента с микрососудистыми нарушениями ежегодные затраты на медицинское обслуживание составляют 2563 евро, то есть увеличение составляет 70% (Williams R. и др., 2002). В широко известном во всем мире независимом медицинском журнале представлены данные современного длительного исследования, включающего опрос почти 0,5 миллиона взрослых людей, которые продемонстрировали, что почти все люди не знали о наличии у них нарушения вплоть до последних стадий ХБП. Поскольку ХБП, по-видимому, можно лечить и предупреждать на более ранних стадиях (Wen С.Р. и др., 2008), то более раннее выявление должно препятствовать развитию осложнений у пациентов, страдающих диабетом типа 2, и снижать затраты на медико-санитарную помощь, как для систем общественного здравоохранения, так и самих пациентов.

Почки обладают несколькими функциями, обеспечивающими поддержание требуемой функции организма, например, способностью отфильтровывать продукты жизнедеятельности и токсины, способностью поддерживать гомеостаз и продуцировать гормоны. Для поддержания указанной требуемой почечной функции должна регулироваться скорость фильтрации крови через клубочковую мембрану в почке. Высокая скорость клубочковой фильтрации (GFR) необходима для сохранения стабильных и оптимальных внеклеточных уровней воды и растворенных веществ (Boron W.F. и Boulpaep E.L., 2003). GFR рассчитывают на основе клиренса сывороточного креатинина с учетом возраста, этнической принадлежности и пола и используют для подразделения ХБП на пять стадий, из которых последняя представляет собой терминальную стадию заболевания почек (ESRD) и при ней для выживания необходимы диализ или трансплантация. В настоящее время хорошо известно, что чем раньше диагностирована почечная дисфункция и начато ее лечение, тем больше имеется шансов для сохранения оставшихся нефронов, и в результате для замедления развития болезни.

Общепринятыми маркерами, применяемыми для выявления и диагностирования болезни почек, являются GFR, креатинин и альбумин.

Уровень GFR после повышения на самой ранней стадии снижается перед проявлением любого симптома. Недостатками, связанными с измерением GFR, являются высокая стоимость и его несовместимость с рутинным лабораторным мониторингом. Указанный выше сывороточный креатинин является наиболее широко применяемым маркером для расчета GFR, однако в качестве более чувствительного маркера предложен цистатин С, который позволяет обнаруживать даже слабое снижение GFR (Herget-Rosenthal S. и др., 2007). В данном случае недостатком является отсутствие применяемого для сравнения (референс-) метода или однородного материала для калибровки для цистатина С, а также дополнительные ограничения, связанные с тем, что на уровни цистатина С оказывают воздействие дисфункция щитовидной железы, прием глюкокортикоидов в высоких дозах и возможно наличие сердечно-сосудистых заболеваний. Из-за ограничений, связанных с применением указанных индивидуальных маркеров, при выводе точных клинических заключений не рекомендуется основываться только на оценке GFR. Помимо болезни почек вторым наиболее значительным фактором, оказывающим воздействие на GFR, является возраст. Таким образом, небольшое снижение GFR не всегда может являться следствием повреждения почек, но может быть связано с возрастом. Кроме того, не всегда снижение GFR связано с хронической болезнью почек. Кроме того, измерение GFR рассматривается как неудобный метод и поэтому функцию почек, как правило, оценивают по концентрации сывороточного креатинина.

Сывороточный креатинин в течение длительного времени использовали для обнаружения почечной недостаточности, а также для расчета GFR (Star R. и др., 2002). Креатинин является продуктом расщепления креатининфосфатата в результате метаболизма в мышцах (Barr D.B. и др., 2005), и его количество, образующееся каждый день, зависит от мышечной массы, но концентрации в плазме являются практически постоянными у конкретного индивидуума. На концентрацию сывороточного креатинина влияют такие факторы, как возраст, пол, раса и размер тела, и поэтому, как правило, осуществляют измерение клиренса креатинина. Клиренс креатинина из организма происходит посредством клубочковой фильтрации в почках, но креатинин активно секретируется также из крови с помощью канальцев. Эта скорость зависит от генетических и биологических факторов, таких как пол и возраст, и приводит к завышенной на 15-20% оценке GFR. Таким образом, креатинин рассматривается как нечувствительный маркер, прежде всего для имеющих небольшой размер тела и престарелых людей. Кроме того, еще одним недостатком оценки на основе креатинина является тот факт, что он позволяет определять повреждение почек только на более поздних стадиях.

Альбумин является наиболее широко распространенным белком плазмы (Basi S. и др., 2008), и о структурном повреждении почки может свидетельствовать повышенная экскреция альбумина с мочой, составляющая 30-300 мг/24 ч, так называемая микроальбуминурия. Микроальбуминурия развивается через несколько лет после возникновения диабета, и после развития в течение 15-20 лет превращается в макроальбуминурию, при которой концентрация альбумина в моче превышает 300 мг/24 ч. Наличие альбуминурии является отличительным признаком диабетической нефропатии, и ее оценивают, как правило, с помощью тест-полосок (dipstick-тест). Альбумин в качестве маркера повреждения почек имеет ряд недостатков. Во-первых, еще несколько лет назад считалось, что присутствующий в моче альбумин, который не реабсорбировался проксимальными трубчатыми клетками, экскретируется в интактном виде, но фактически альбумин экскретируется в виде смеси интактного альбумина и образовавшихся из альбумина пептидов, которые не выявляются с помощью dipstick-теста, а также в сочетании с другими видами интактного альбумина, которые тоже нельзя обнаружить. Это является основанием для получения ошибочных отрицательных результатов теста (Comper W.D. и Osicka T.M., 2005). Во-вторых, альбуминурия является признаком уже развившейся нефропатии, что делает альбумин недостаточно эффективным прогностическим биомаркером. Если диабетическая нефропатия обнаружена перед появлением микроальбуминурии, то с помощью терапии можно предупреждать или обращать развитие ХБП. Количественная оценка альбуминурии не позволяет идентифицировать всех пациентов с почечным повреждением.

Было проведено интенсивное изучение двух метиларгининовых изомеров, а именно, симметричного диметиларгинина (SDMA) и асимметричного диметиларгинина (ADMA) с точки зрения их применения при заболевании почек (обзор Fleck С. и др., 2001). Они образованы остатками аргинина, модифицированными после трансляции протеин-аргининметилтрансферазами (PRMT). В то время как SDMA является физиологически практически инертным, по меньшей мере, как правило, не метаболизируется в организме, ADMA является важным с биологической точки зрения из-за его потенциала в качестве эндогенного ингибитора синтазы оксида азота (NOS), т.е. повышенные концентрации ADMA приводят к снижению синтеза N0 и, как следствие, приводят к нарушению эндотелиальной функции. В последние десятилетия высказано предположение о том, что накопление ADMA принимает участие в гипертензии, дефиците иммунитета и в характерных для ХБП признаках, и в опытах на животных установлено, что экспериментально индуцированное хроническое ингибирование NOS вызывает системную и клубочковую (гломерулярную) гипертензию, клубочковую ишемию, гломерулосклероз, тубулоинтерстициальное повреждение и протеинурию (Zatz R. и Baylis С., 1998). Установлено также, что уровень SDMA значительно возрастает, даже в большей степени, чем уровень ADMA, у пациентов, страдающих ХБП.

Кроме того, с ХБП связаны ацилкарнитины (Fougue D. и др., 2006). Повышение уровня свободных ацилкарнитинов обнаружено в сыворотке страдающих ХБП пациентов из-за снижения экскреторной функции поврежденной почки.

Кроме того, в течение многих лет окислительный стресс связывали с прогрессирующим заболеванием почек (Loughrey С.М. и др., 1994, На Н. и др., 1995). В нескольких исследованиях установлено, что повышенный окислительный стресс, возникающий в результате гипергликемии, является причиной как микрососудистых, так и макрососудистых осложнений диабета (Sakane N. и др., 2008). Причиной окислительного стресса является повышенный уровень глюкозы и жирных кислот и, когда эти субстраты поставляются в митохондрии для метаболизма, то может происходить исчезновение электронов из цепи электронного транспорта. Метионинсульфоксид является одним из наиболее прямых индикаторов окисления реактивными видами кислорода (ROS, Mashima R и др., 2003), но ранее его не использовали в качестве биомаркера заболевания почек. Кроме того, была изучена роль промежуточных продуктов цикла превращения лимонной кислоты (цикл Кребса) при почечной недостаточности, при этом было установлено, что у больных, страдающих ХБП, значительно повышались концентрации цитрата, фумарата, оксалацетата и малата.

У пациентов, страдающих ХБП, на изменения почечного метаболизма, вероятно, влияют изменения метаболизма всего организма и почечных аминокислот. В нормальных условиях с мочой экскретируется только ограниченное количество аминокислот. Обнаружено нарушение превращения фенилаланина в тирозин, что приводит к накоплению фенилаланина у таких пациентов. Кроме того, нарушение функции почек оказывает влияние на производство аргинина, что продемонстрировано по снижению синтеза аргинина в почках, как в клинических исследованиях, так и в опытах на животных. Кроме того, у пациентов с запущенной формой ХБП обнаружено снижение поглощения почками цитруллина и высвобождения таурина, орнитина, аланина, тирозина и лизина. Кроме того, вероятно, снижено превращение цитруллина в аргинин.

Кроме того, было высказано предположение о том, что метаболизм триптофана играет роль в патогенезе ХБП. Лимитирующим скорость ферментом в этом пути в почке является индоламин-2,3-диоксигеназа (IDO), которая катализирует превращение триптофана в N-формилкинуренин, который в свою очередь, катаболизируется с образованием кинуренина, а затем гидроксикинуренина. В предыдущих исследованиях обнаружена повышенная активность IDO, объясняющая истощение триптофана.

Обнаружено повышение уровней маркеров воспаления, таких как С-реактивный белок, интерлейкин 6, интерлейкин 18, фактор некроза опухолей (TNF)-альфа, и снижение уровня фетуина в сыворотке пациентов, страдающих диабетом и ДН. Это имеет место на очень ранней стадии заболевания и коррелирует со степенью альбуминурии.

Известные биомаркеры, которые применяют для диагностики ХБП или ДН, включают, например, несколько полипептидных маркеров (US 2006286602 A1, СА 2473814 A1, EP 1972940 A1, US 2009081713 A1), которые имеют различную молекулярную массу и продолжительность миграции, например, полипептид гена-1 а хронической почечной недостаточности (CRFG-1a) (JP 11069985 A, JP 11069984 А), а также полинуклеотидные маркеры (JP 2003235573 А, JP 2004187620 А).

Как отмечалось выше, цистатин С представляет собой один из целого ряда белков-маркеров, которые применяют для диагностирования заболевания почек (JP 11064333 А), наряду с таким маркерами, как голо- и апоретинолсвязывающий белок (RBP), белок Тамма-Хорсфолла (ТНР, (DE 10327773 A1), калбидин D-28k (кальцийсвязывающий белок, являющийся представителем большого семейства EF-hand), молекула-1 почечного повреждения (Kim-1, мембранный белок типа 1, содержащий внеклеточный, несущий шесть остатков цистеина иммуноглобулиновый домен), белок, родственный альфа-2u-глобулину (альфа-2u), известный также как липокалин 2 (LCN2) или ассоциированный с нейтрофил-желатиназой липокалин (NGAL) у человека (запасается в гранулах нейтрофилов), остеопонтин (OPN), известный также как секретируемый фосфопротеин 1 (SPP1, секретируемый сильнокислый и гликозилированный фосфопротеин, содержащий мотив клеточной адгезии аргинина-глицина-аспарагиновой кислоты (RGD)), сосудистый эндотелиальный фактор роста (VEGF, который, как известно, усиливает ангиогенез, повышает проницаемость сосудов, служит в качестве хемотаксического фактора для моноцитов и играет роль при диабете, заживлении ран, воспалительных ответах и ремоделировании ткани (WO 2008116867 А1), предшественник амидазы N-ацетилмурамоил-L-аланина, адипонектин, белок-предшественник АМВР (альфа-1-микроглобулин), предшественник альфа-цепи C4b-связывающего белка, предшественник церулоплазмина, предшественник компонента C3 комплемента, предшественник компонента С9 комплемента, предшественник фактора D комплемента, альфа-1B-гликопротеин, предшественник бета-2-гликопротеина I, предшественник кофактора II гепарина, белок области цепи С, предшественник богатого лейцином альфа-2-гликопротеина, предшественник выведенного из пигментного эпителия фактора, предшественник плазматического ретинолсвязывающего белка и субъединица 10 фактора инициации трансляции 3 (ЕР 1905846 А2).

В качестве биомаркеров можно применять антигены, цитотоксины и ингибиторы роста клеток (WO 2008101231 А2). Фактор роста фибробластов 23 (FGF-23) и адипонектин выявлены в качестве обладающих очень высокой прогностической способностью маркеров развития хронической болезни почек, как при их индивидуальном применении, так и при использовании в комбинации (WO 2008089936 А1). Другой метод, применяемый для диагностирования и мониторинга заболевания почек или предрасположенности к нему, представляет собой выявление в образце, полученном из организма индивидуума, супрессора опухоли фон Гиппеля-Линдау (pVHL), рецептора 4 хемокина СХС (CXCR4), интегрина β-1, полипептида тромбоцитарного фактора роста альфа (PDGF-A), индуцируемого гипоксией фактора 1 альфа (HIF1α) и/или трансформирующего ростового фактора-бета (TGFβ) (US 2008/0038269 А1). Заболевание почек можно диагностировать также путем измерения уровня лактоферрина, миелопероксидазы и карциноэмбрионального антигена (СЕА) (JP 9072906 А) и фибронектина (JP 9274036 А).

Другой описанный метод предусматривает оценку в образце уровня фактора роста соединительной ткани (CTGF) с целью принятия решения о присутствии и развитии фиброза почек и ассоциированных с ним почечных нарушений, в частности, осложнений, которые связаны с диабетом, гипергликемией и гипертензией (US 2004/0224360 A1).

В области геномики также известно несколько биомаркеров, предназначенных для оценки заболевания почек. В одном из изобретений описана идентификация генов, которые экспрессируются только в клетках, представляющих интерес с клинической или научной точки зрения, таких как подоциты или клетки проксимального отдела канальцев (CN 1863928 А). Генетические маркеры, относящиеся к главному комплексу гистосовместимости человека (HLA), такие как HLA-A11, HLA-DR9 и HLA-DQA1*0302, все представляют собой гены, характерные для диабета и нефропатии (CN 101294215 А). Установлено, что дисинтегрин и металлопротеианазу с мотивом-4 тромбоспондина типа 1, аггреканазу-1 (ADAMTS4) можно применять в качестве присутствующего в крови биомаркера ХБП (WO 2009002451 А2), а также гены калбиндина-D28k, KIM-1, OPN, EGF, клустерина, VEGF, ОАТ-К1, альдолазы А, альдолазы В, подоцина, альфа-2u, С4 (ЕР 1925677 А2) и церамидглюкозилтрансферазы (CGT) (WO 03057874 A1).

В качестве маркеров заболевания почек можно применять также РНК-маркеры (ЕР 2058402 (A1). Например, почечный РНК-маркер выбирают из группы, включающей специфический для почек регулируемый андрогеном белок (КАР), который экспрессируется в эпителиальных клетках проксимального отдела извитых канальцев, повреждающую почки молекулу-1 (KIM-1), мембранный белок, который экспрессируется в эпителиальных клетках проксимального отдела канальцев, экспрессию гепаринсвязывающего эпидермального фактора роста (HB-EGF), которая индуцируется в почке после ишемического повреждения и попадания нефротоксиканта, фактор роста фибробластов-1 (FGF-1), фактор роста кератиноцитов (FGF-7) и рецептор FGF-7, такой как FGFR2 IIIb, индукция которого происходит в почке после попадания нефротоксиканта, белки водного канала, аквапорин 1, 2 и 3, для которых характерен высокий уровень экспрессии в почке, гликопротеин Тамма-Хорсфалла, который экспрессируется в эпителиальных клетках почки и локализован в непосредственной близости от колена петель Генле и дистальных извитых канальцев почки, и, наконец, экспрессию гена раннего ростового ответа (Egr-1), протоонкогена (c-fos) и гена стрессового ответа (hsp 70), которая. активируется после ишемического повреждения почки.

Другие методы оценки заболевания почек, известные из существующего уровня техники, предусматривают количественное определение протеазной активности в моче с помощью двух или большего количества субстратов и анализа схем протеазной активности в отношении этих субстратов (WO 2008001840 А1) или количественное определение каталитического железа в организме человека (US 2007238760 А1).

Несмотря на то, что существует несколько биомаркеров, которые, как предполагается, можно применять для оценки заболевания почек, те из них, которые описаны, и прежде всего те, которые применяются для клинических целей в настоящее время, являются недостаточно чувствительными и их можно выявлять только на поздних стадиях заболевания. Таким образом, в медицине все еще существует выраженная необходимость в более чувствительных маркерах патологических изменений в почках, прежде всего на ранней стадии заболевания или повреждения.

Хотя упомянутые выше маркеры, такие как альбумин и креатинин, применялись для выявления страдающих диабетом пациентов, имеющих риск развития нефропатии, наиболее важной задачей является открытие новых и более чувствительных метаболических биомаркеров, с помощью которых можно прогнозировать или выявлять диабетическую нефропатию на более ранней стадии, что позволяет использовать терапию для предупреждения или по меньшей мере замедления развития повреждения почки, приводящего в конечном итоге к ESRD, и контроля соответствующих осложнений.

В свете вышеуказанных проблем, известных из существующего уровня техники, задача, положенная в основу настоящего изобретения, состоит в разработке новых биомаркеров для оценки заболеваний почек, которые являются более чувствительными маркерами патологических изменений в почке, прежде всего на ранней стадии заболевания или повреждения. В оптимальном варианте маркер должен быть легко выявляемым в биологическом образце, таком как кровь и/или моча, его уровень должен согласоваться со степенью повреждения почки и его уровень должен изменяться. Кроме того задачей настоящего изобретения состоит в разработке способа оценки заболеваний почек с использованием биологического образца.

Для решения задач, положенных в основу настоящего изобретения, были проведены исследования на основе метаболомики, поскольку она позволяет проникать в суть биохимических изменений, происходящих в почке в процессе болезни, и позволяет получать несколько новых и более эффективных биомаркеров. Фактически почка представляет собой орган, обладающий очень высокой метаболической активностью, в котором метаболиты экскретируются и вновь абсорбируются в зависимости от их функции в организме. Таким образом, большим достижением должно являться наличие метаболических биомаркеров заболевания почек, которые должны также давать информацию о функции почки и происходящих в ней биохимических реакциях. При создании изобретения было установлено, что более исчерпывающую картину всех участвующих путей и механизмов можно получать при использовании панели метаболитов, которые изменяются при развитии заболевания почек, чем при использовании только индивидуальных маркеров, что известно из существующего уровня техники.

Краткое изложение сущности изобретения

Таким образом, настоящее изобретение, объем которого определен прилагаемой формулой изобретения, относится к новым биомаркерам (а именно, к новому набору биомаркеров), пригодным для оценки заболеваний почек, которые являются более чувствительными к патологическим изменениям в почке, прежде всего на ранней стадии заболевания или повреждения. Кроме того, настоящее изобретение относится также к способу оценки болезни почек у млекопитающего, а также к набору, пригодному для осуществления способа. Краткое описание чертежей

В приложении к описанию настоящего изобретения представлены следующие чертежи 1-14. На них проиллюстрированы представленные в изобретении примеры повышения или снижения уровня метаболического биомаркера в процессе развития заболевания почек.

На чертежах показано:

на фиг.1 - уровень симметричного диметиларгинина (SDMA) на стадиях 3-5 ХБП у страдающих и не страдающих диабетом пациентов и продемонстрировано, что у пациентов с 5 стадией заболевания имеет место высоко достоверное (р<<0,01) повышение уровня по сравнению с пациентами с 3 стадией и 4 стадией, это позволяет предположить, что SDMA является хорошим маркером развития ХБП;

на фиг.2 - уровень SDMA на стадиях 3-5 ХБП и продемонстрировано, что у пациентов с 5 стадией заболевания имеет место высоко достоверное (р<<0,01) повышение уровня по сравнению с пациентами с 3 стадией и 4 стадией;

на фиг.3 - коробчатые диаграммы уровня соотношения SDMA/аргинин на стадиях 3-5 ХБП у страдающих и не страдающих диабетом пациентов и продемонстрировано, что у пациентов с 5 стадией заболевания имеет место высоко достоверное (р<<0,01) повышение уровня соотношения по сравнению с пациентами с 3 стадией и 4 стадией, это позволяет предположить, что уровень соотношения SDMA/аргинин также является хорошим маркером развития ХБП. Уровень соотношения SDMA/Arg является хорошим прогностическим маркером и отражает повышение активности протеин-аргинин-N-метилтрансферазы II;

на фиг.4 - коробчатые диаграммы уровня соотношения SDMA/аргинин на стадиях 3-5 ХБП и продемонстрировано, что у пациентов с 5 стадией заболевания имеет место высоко достоверное (р<<0,01) повышение уровня соотношения по сравнению с пациентами с 3 стадией и 4 стадией. SDMA является хорошим прогностическим маркером и отражает повышение активности протеин-аргинин-N-метилтрансферазы II;

на фиг.5 - коробчатые диаграммы уровня ацилкарнитинглютарилкарнитина на стадиях 3-5 ХБП у страдающих и не страдающих диабетом пациентов и продемонстрировано, что уровни глютарилкарнитина повышены на более поздних стадиях ХБП;

на фиг.6 - коробчатые диаграммы уровня глютарилкарнитина на стадиях 3-5 ХБП;

на фиг.7 - коробчатые диаграммы уровня соотношения цитруллин/аргинин на стадиях 3-5 ХБП у страдающих и не страдающих диабетом пациентов и продемонстрировано, что у пациентов с 5 стадией заболевания имеет место высоко достоверное (p<<0,01) повышение уровня соотношения по сравнению с пациентами с 3 стадией, и уровень соотношения свидетельствует об измененной ферментативной активности в цикле мочевины;

на фиг.8 - коробчатые диаграммы уровня соотношения цитруллин/аргинин на стадиях 3-5 ХБП;

на фиг.9 - коробчатые диаграммы уровня соотношения орнитин/аргинин на стадиях 3-5 ХБП у страдающих и не страдающих диабетом пациентов и продемонстрировано, что у пациентов с 5 стадией заболевания имеет место высоко достоверное (p<<0,01) повышение уровня по сравнению с пациентами с 3 стадией только у не страдающих диабетом пациентов, это свидетельствует о важности этого биомаркера для дифференциального диагностирования различных типов заболевания почек;

на фиг.10 - коробчатые диаграммы уровня соотношения метионинсульфоксид/метионин на стадиях 3-5 ХБП у страдающих и не страдающих диабетом пациентов и продемонстрировано, что имеет место высоко достоверное (p<<0,01) повышение уровня указанного маркера окислительного стресса у пациентов с 5 стадией заболевания по сравнению с пациентами с 3 стадией;

на фиг.11 - коробчатые диаграммы уровня соотношения метионинсульфоксид (Ме180)/метионин (Met) на стадиях 3-5 ХБП и продемонстрировано, что у пациентов с 5 стадией заболевания имеет место высоко достоверное (p<<0,01) повышение уровня соотношения по сравнению с пациентами с 3 стадией, это позволяет предположить, что уровень соотношения MetSO/Met является хорошим биомаркером развития ХБП;

на фиг.12 - коробчатые диаграммы уровня фумарата на стадиях 3-5 ХБП и продемонстрировано, что поскольку фумарат отсутствует на ранних стадиях, то фумарат может служить качественным маркером;

на фиг.13 - коробчатые диаграммы уровня альфа-кетоглутарата на стадиях 3-5 ХБП у страдающих и не страдающих диабетом пациентов и продемонстрировано, что у страдающих диабетом пациентов с 5 стадией заболевания имеет место высоко достоверное (p<<0,01) повышение уровня по сравнению со страдающими диабетом пациентами с 3 стадией;

на фиг.14 - коробчатые диаграммы уровня альфа-кетоглутарата на стадиях 3-5 ХБП.

Описание предпочтительных вариантов осуществления изобретения

Путем применения специфических биомаркеров (набора биомаркеров) и способа, предлагаемого в настоящем изобретении, становится возможным более точно и надежно оценивать заболевание почек. В контексте настоящего изобретения понятие «оценивать» означает диагностировать и осуществлять мониторинг развития болезни, в частности выявлять и характеризовать болезнь на различных стадиях. Настоящее изобретение дает возможность прогнозировать и диагностировать заболевание почек улучшенным образом и на ранней стадии заболевания и позволяет с большей чувствительностью выявлять патологические изменения в почке. Фактически биомаркеры, предлагаемые в изобретении, легче выявлять в биологических образцах, в частности в крови и/или моче, их уровни согласуются со степенью заболевания/повреждения почки и их уровни изменяются.

Кроме того, при оценке следует учитывать тот факт, что указанные маркеры можно применять для определения нефротоксичности либо на созданных на животных моделях, либо на фазе I клинических исследований. Другими словами, их можно применять также для оценки доклинической и клинической нефротоксичности, т.е. применять также и на очень ранней стадии разработки фармацевтических средств, а именно в опытах на созданных на животных моделях или на фазе I клинических исследований.

В целом, биомаркер представляет собой ценный инструмент благодаря возможности с его помощью отличать два или большее количество биологических состояний друг от друга, при этом он выполняет роль индикатора нормального биологического процесса, патологического процесса или реакции на фармацевтическое вмешательство. Метаболит представляет собой низкомолекулярное соединение (<1 кДа), размер которого меньше размера большинства белков, ДНК и других макромолекул. Небольшие изменения активности белков приводят к значительным изменениям биохимических реакций и их метаболитов (т.е. метаболических биомаркеров, отслеживающих метаболизм организма), концентрации, потоки и механизмы транспорта которых чувствительны к заболеванию и применению лекарственных средств. Это дает возможность получать индивидуальный профиль физиологических и патофизиологических субстанций, отражающий как генетические, так и связанные с.окружающей средой факторы, физическую активность, микробное содержимое кишечника и медикаментозное лечение. Таким образом, метаболический маркер позволяет получать более обширную информацию по сравнению, например, с белком или гормоном, которые являются биомаркерами, но не метаболическими биомаркерами.

В свете этого понятие «метаболический биомаркер» в контексте настоящего описания относится к соединению, пригодному в качестве индикатора состояния болезни почек, в частности ХБП, который является метаболитом или метаболическим соединением, образующимся при метаболических процессах в организме млекопитающего. Подразумевается, что понятие «метаболический биомаркер» относится также к соотношению продукт/субстрат, связанному с ферментативной реакцией.

Метаболический биомаркер (набор), который определяют количественно согласно настоящему изобретению, обязательно включает следующие классы метаболитов (т.е. аналитов): по меньшей мере две аминокислоты, по меньшей мере два ацилкарнитина и по меньшей мере два биогенных амина. Определения этих классов известны специалистам в данной области, однако предпочтительные представители этих классов обобщены ниже в таблицах 1-3. Кроме того, под биогенными аминами подразумевают группу встречающихся в естественных условиях биологически активных соединений, полученных в результате ферментативного декарбоксилирования встречающихся в естественных условиях аминокислот. Биогенная субстанция представляет собой субстанцию, полученную в результате процесса жизнедеятельности, и биогенные амины содержат аминогруппу. Большинство из них являются нейромедиаторами, но они обладают также определенной активностью в отношении регулирования, например, кровяного давления и температуры тела.

При создании изобретения неожиданно было установлено, что количественное определение набора биомаркеров, включающего указанные классы метаболитов, позволяет прогнозировать и диагностировать заболевание почек улучшенным образом и на ранней стадии заболевания. В частности, позволяет с большей чувствительностью выявлять патологические изменения в почке. Если отсутствует один из классов метаболитов указанной группы или уменьшено их количество, то оценка заболевания почек становится менее чувствительной и менее надежной. Это относится прежде всего к ранней стадии болезни, которую не удавалось надежно выявлять с помощью известных методов с использованием любых известных биомаркеров. Таким образом, одновременное количественное определение по меньшей мере двух аминокислот, по меньшей мере двух ацилкарнитинов и по меньшей мере двух биогенных аминов позволяет более надежно диагностировать заболевание почек и, в частности, ХБП и ДН, уже на стадиях 1-3, но также на стадиях 4 и 5. Такие результаты не описаны и не являются очевидными из существующего уровня техники.

Предпочтительно набор биомаркеров дополнительно включает соотношение продукт/субстрат, связанное с ферментативной реакцией, более предпочтительно соотношение SDMA/аргинин, соотношение цитруллин/аргинин, соотношение орнитин/аргинин и соотношение метионинсульфоксид/метионин (см. прилагаемые чертежи). Соотношение SDMA/аргинин зависит от фермента протеин-аргинин-N-метилтрансферазы (PRMT), соотношение цитруллин/аргинин зависит от синтазы оксида азота (NOS), соотношение орнитин/аргинин зависит от аргиназы, а соотношение метионинсульфоксид/метионин зависит от окисления реактивными видами кислорода (ROS). Посредством дополнительного количественного определения указанного(ых) соотношения(ий) можно еще больше повышать диагностическую эффективность набора биомаркеров и способа, предлагаемого в изобретении.

Более предпочтительно набор биомаркеров, предлагаемый в изобретении, содержит также один или несколько метаболитов, выбранных из группы, включающей полиамины, фосфатидилхолины, восстанавливающие моно- и олигосахариды (сахара), сфингомиелины, эйкозаноиды, желчные кислоты и промежуточные продукты энергетического метаболизма. Предпочтительные примеры представителей этих классов представлены ниже в таблицах 4-9. И в этом случае путем количественного определения дополнительных метаболитов из указанных классов можно еще больше повышать диагностическую эффективность набора биомаркеров и способа, предлагаемого в изобретении.

Наиболее предпочтительным набором биомаркеров является набор, в котором аминокислоты выбраны из Cit, Phe, Asn, Trp, His, Orn, Tyr, Met, Ala, Arg, Thr, Lys, Gln, Ser, Val, Glu и Pro, ацилкарнитины выбраны из С0, C5-DC (C6-ОН), C5:1-DC, С8, С9, С10, С10:1, С14:1 и С18:1, биогенные амины выбраны из MetSO, креатинина, SDMA, ADMA, общего DMA и серотонина, а соотношения выбраны из соотношения SDMA/аргинин, соотношения цитруллин/аргинин, соотношение орнитйн/аргинин и/или соотношения метионинсульфоксид/метионин.

Как отмечалось выше, заболевание, подлежащее оценке, представляет собой болезнь почек. Предпочтительно оно представляет собой хроническую болезнь почек (ХБП), более предпочтительно диабетическую нефропатию (ДН).

Биологический образец получают из организма млекопитающего, предпочтительно из организмы мыши, крысы, морской свинки, собаки, минипига или человека. Биологический образец предпочтительно представляет собой образец крови или мочи, однако можно применять также любой другой известный специалисту в данной области биологический образец, в котором можно осуществлять измерения, предлагаемые в изобретении. Таким образом, способ, предлагаемый в изобретении, представляет собой способ in vitro. Для определения концентраций метаболитов в биологическом образце применяют количественный аналитический метод, такой как хроматография, спектроскопия и масс-спектрометрия, при этом наиболее предпочтительной является масс-спектрометрия. Хроматография может представлять собой газовую хроматографию (ГЖ), жидкостную хроматографию (ЖХ), жидкостную хроматографию высокого разрешения (ЖХВР) и сверхпроизводительную жидкостную хроматографию (UPLC); спектроскопия может представлять собой спектроскопию в уф-/видимом, ИК-спектральном диапазоне (УФ/Vis, ИК) и ЯМР; а масс-спектрометрия может представлять собой ESI-QqQ, ESI-QqTOF, MALDI-QqQ, MALDI-QqTOF и MALDI-TOF-TOF. Предпочтительным является применение ИФА (иммунофлуоресцентный анализ) и ЖХВР в сочетании с тандемной масс-спектрометрией. Эти аналитические методы в целом известны специалисту в данной области.

Для определения уровней метаболитов в биологическом образце применяют целенаправленную метаболомику для количественного определения метаболитов, используя в качестве аналита такие классы, как аминокислоты, биогенные амины, полиамины, ацилкарнитины, фосфатидилхолины, восстанавливающие моно- и олигосахариды, сфингомиелины, эйкозаноиды, желчные кислоты и промежуточные продукты энергетического метаболизма. Под промежуточными продуктами энергетического метаболизма понимают фосфорилированные сахара, одно- двух и трехвалентные органические кислоты и нуклеотиды. Однако согласно изобретению является необходимым, чтобы среди метаболитов, количество которых определяют, присутствовали по меньшей мере в качестве аналита такие классы, как аминокислоты, ацилкарнитины и биогенные амины. Для осуществления количественной оценки применяют изотопномеченные внутренние стандарты и осуществляют определение с помощью описанных выше методов. Перечень аналитов, включая их сокращения (двоичные коды (ВС-коды)), пригодных в качестве подлежащих количественному определению метаболитов согласно изобретению, представлен в приведенных ниже таблицах.

Таблица 1 Аминокислоты (мкМ) ВС-код Аналит Ala Аланин Arg Аргинин Asn Аспарагин Asp Аспартат Cit Цитруллин Gln Глутамин Glu Глутамат Gly Глицин His Гистидин He Изолейцин Leu Лейцин Lys Лизин Met Метионин Orn Орнитин Phe Фенилаланин Pro Пролин Ser Серин Thr Треонин Trp Триптофан Tyr Тирозин Val Валин

Таблица 2 Ацилкарнитин (мкМ) ВС-код Аналит C0 Карнитин (свободный) С2 Ацетилкарнитин C3 Пропионилкарнитин С3:1 Пропеноилкарнитин C3-DC Малонилкарнитин C3-DC-M Метилмалонилкарнитин С3-ОН Гидроксипропионилкарнитин ВС-код Аналит С4 Бутирилкарнитин/изобутирилкарнитин С4:1 Бутеноилкарнитин C4:1-DC (C10) Фумарилкарнитин (деканоилкарнитин) С4-ОН 3-Гидроксибутирилкарнитин С5 Изовалерилкарнитин/2-метилбутирилкарнитин/валерилкарнитин С5:1 Тиглилкарнитин/3-метилкротонилкарнитин C5:1-DC (C11) Глютаконилкарнитин/мезаконилкарнитин (ундеканоилкарнитин) C5-DC (С6-ОН) Глютарилкарнитин C5-M-DC Метилглютарилкарнитин С5-ОН 3-Гидроксиизовалерилкарнитин/3-гидрокси-2-метилбутирил С6 Гексаноилкарнитин [капроилкарнитин] С6:1 Гексеноилкарнитин С6-ОН Гидроксигексаноилкарнитин [гидроксикапроилкарнитин] С7 Гептаноилкарнитин [энантилкарнитин] C7-DC Пиметилкарнитин С8 Октаноилкарнитин [каприлилкарнитин] С8:1 Октеноилкарнитин C8-DC Октандиоилкарнитин [суберилкарнитин] С9 Нонаноилкарнитин [пеларгонилкарнитин] C10 (C4:1-DC) Деканоилкарнитин [каприлкарнитин](Фумарилкарнитин) С10:1 Деценоилкарнитин С10:2 Декадиеноилкарнитин C10-DC Декандиоилкарнитин [себацилкарнитин] С11 (C5:1-DC) Ундеканоилкарнитин (глутаконилкарнитин/мезаконилкарнитин) С12 Додеканоилкарнитин [лаурилкарнитин] С12:1 Додеценоилкарнитин C12-DC Додекандиоилкарнитин С14 Тетрадеканоилкарнитин [миристилкарнитин] С14:1 Тетрадеценоилкарнитин [миристолеилкарнитин] С14:1-ОН 3-Гидрокситетрадеценоилкарнитин [3-гидроксимиристолеилкарнитин] С14:2 Тетрадекадиеноилкарнитин С14:2-ОН 3-Гидрокситетрадекадиеноилкарнитин С14-ОН 3-Гидрокситетрадеканоилкарнитин [гидроксимиристилкарнитин] С16 Гексадеканоилкарнитин [пальмитоилкарнитин] С16:1 Гексадеценоилкарнитин [пальмитолеилкарнитин] С16:1-ОН 3-Гидроксигексадеценоилкарнитин [3-гидроксипальмитолеилкарнитин] С16:2 Гексадекадиеноилкарнитин С16:2-ОН 3-Гидроксигексадекадиеноилкарнитин С16-ОН 3-Гидроксигексадеканоилкарнитин [3-гидроксипальмитоилкарнитин] С18 Октадеканоилкарнитин [стеарилкарнитин] С18:1 Октадеценоилкарнитин [олеилкарнитин] С18:1-ОН 3-Гидроксиоктадеценоилкарнитин [3-гидроксиолеилкарнитин] С18:2 Октадекадиеноилкарнитин [линолеилкарнитин] С18:2-ОН 3-Гидроксиоктадекадиеноилкарнитин [3-гидроксилинолеилкарнитин]

Таблица 3 Биогенные амины (мкМ) ВС-код Аналит ADMA Асимметричный диметиларгинин SDMA Симметричный диметиларгинин общий DMA Общий диметиларгинин Гистамин Гистамин MetSO Метионинсульфоксид Кинуренин Кинуренин Гидроксикинуренин Гидроксикинуренин Путресцин Путресцин Спермидин Спермидин Спермин Спермин Серотонин Серотонин Креатинин Креатинин

Таблица 4 Фосфатидилхолины (мкМ) ВС-код Аналит lysoPC a C14:0 Лизофосфатидилхолин с ацильным остатком С14:0 lysoPC a C16:0 Лизофосфатидилхолин с ацильным остатком C16:0 lysoPC a C16:1 Лизофосфатидилхолин с ацильным остатком C16:1 lysoPC a C17:0 Лизофосфатидилхолин с ацильным остатком C17:0 lysoPC a C18:0 Лизофосфатидилхолин с ацильным остатком C18:0 lysoPC a C18:1 Лизофосфатидилхолин с ацильным остатком C18:1 lysoPC a C18:2 Лизофосфатидилхолин с ацильным остатком C18:2 lysoPC a C20:3 Лизофосфатидилхолин с ацильным остатком C20:3 lysoPC a C20:4 Лизофосфатидилхолин с ацильным остатком C20:4 lysoPC a C24:0 Лизофосфатидилхолин с ацильным остатком C24:0 lysoPC a C26:0 Лизофосфатидилхолин с ацильным остатком C26:0 lysoPC a C26:1 Лизофосфатидилхолин с ацильным остатком C26:1 lysoPC a C28:0 Лизофосфатидилхолин с ацильным остатком C28:0 lysoPC a C28:1 Лизофосфатидилхолин с ацильным остатком C28:1 lysoPC a C6:0 Лизофосфатидилхолин с ацильным остатком C6:0 PC aa C24:0 Фосфатидилхолин с суммой диацильных остатков C24:0 PC aa C26:0 Фосфатидилхолин с суммой диацильных остатков C26:0 PC aa C28:1 Фосфатидилхолин с суммой диацильных остатков C28:1 PC aa C30:0 Фосфатидилхолин с суммой диацильных остатков C30:0 PC aa C30:2 Фосфатидилхолин с суммой диацильных остатков C30:2 PC aa C32:0 Фосфатидилхолин с суммой диацильных остатков C32:0 PC aa C32:1 Фосфатидилхолин с суммой диацильных остатков С32:1 PC aa C32:2 Фосфатидилхолин с суммой диацильных остатков C32:2 PC aa C32:3 Фосфатидилхолин с суммой диацильных остатков C32:3 PC aa C34:1 Фосфатидилхолин с суммой диацильных остатков С34:1 PC aa C34:2 Фосфатидилхолин с суммой диацильных остатков C34:2 PC aa C34:3 Фосфатидилхолин с суммой диацильных остатков C34:3 PC aa C34:4 Фосфатидилхолин с суммой диацильных остатков C34:4 PC aa C36:0 Фосфатидилхолин с суммой диацильных остатков C36:0 PC aa C36:1 Фосфатидилхолин с суммой диацильных остатков С36:1 PC aa C36:2 Фосфатидилхолин с суммой диацильных остатков C36:2 PC aa C36:3 Фосфатидилхолин с суммой диацильных остатков C36:3 PC aa C36:4 Фосфатидилхолин с суммой диацильных остатков C36:4 PC aa C36:5 Фосфатидилхолин с суммой диацильных остатков C36:5 PC aa C36:6 Фосфатидилхолин с суммой диацильных остатков C36:6 PC aa C38:0 Фосфатидилхолин с суммой диацильных остатков С38:0 PC aa С38:1 Фосфатидилхолин с суммой диацильных остатков С38:1 РС аа С38:3 Фосфатидилхолин с суммой диацильных остатков C38:3 PC aa С38:4 Фосфатидилхолин с суммой диацильных остатков С38:4 PC aa C38:5 Фосфатидилхолин с суммой диацильных остатков C38:5 PC aa C38:6 Фосфатидилхолин с суммой диацильных остатков C38:6 РС аа С40:1 Фосфатидилхолин с суммой диацильных остатков С40:1 PC aa C40:2 Фосфатидилхолин с суммой диацильных остатков C40:2 PC aa C40:3 Фосфатидилхолин с суммой диацильных остатков C40:3 PC aa C40:4 Фосфатидилхолин с суммой диацильных остатков C40:4 PC aa C40:5 Фосфатидилхолин с суммой диацильных остатков C40:5 PC aa C40:6 Фосфатидилхолин с суммой диацильных остатков C40:6 PC aa C42:0 Фосфатидилхолин с суммой диацильных остатков C42:0 РС аа С42:1 Фосфатидилхолин с суммой диацильных остатков С42:1 PC aa C42:2 Фосфатидилхолин с суммой диацильных остатков C42:2 PC aa C42:4 Фосфатидилхолин с суммой диацильных остатков C42:4 PC aa C42:5 Фосфатидилхолин с суммой диацильных остатков C42:5 PC aa C42:6 Фосфатидилхолин с суммой диацильных остатков C42:6 PC ae С30:0 Фосфатидилхолин с суммой ацилалкильных остатков С30:0 РС ае C30:1 Фосфатидилхолин с суммой ацилалкильных остатков С30:1 PC ae C30:2 Фосфатидилхолин с суммой ацилалкильных остатков C30:2 РС ае С32:1 Фосфатидилхолин с суммой ацилалкильных остатков С32:1 PC ae C32:2 Фосфатидилхолин с суммой ацилалкильных остатков C32:2 PC ae C34:0 Фосфатидилхолин с суммой ацилалкильных остатков C34:0 РС ае С34:1 Фосфатидилхолин с суммой ацилалкильных остатков С34:1 PC ae C34:2 Фосфатидилхолин с суммой ацилалкильных остатков C34:2 PC ae C34:3 Фосфатидилхолин с суммой ацилалкильных остатков C34:3 PC ae C36:0 Фосфатидилхолин с суммой ацилалкильных остатков C36:0 РС ае C36:1 Фосфатидилхолин с суммой ацилалкильных остатков С36:1 PC ae C36:2 Фосфатидилхолин с суммой ацилалкильных остатков C36:2 PC ae C36:3 Фосфатидилхолин с суммой ацилалкильных остатков C36:3 PC ae C36:4 Фосфатидилхолин с суммой ацилалкильных остатков C36:4 PC ae C36:5 Фосфатидилхолин с суммой ацилалкильных остатков C36:5 PC ae C38:0 Фосфатидилхолин с суммой ацилалкильных остатков C38:0 РС ае С38:1 Фосфатидилхолин с суммой ацилалкильных остатков С38:1 PC ae C38:2 Фосфатидилхолин с суммой ацилалкильных остатков C38:2 PC ae C38:3 Фосфатидилхолин с суммой ацилалкильных остатков C38:3 PC ae С38:4 Фосфатидилхолин с суммой ацилалкильных остатков С38:4 PC ae C38:5 Фосфатидилхолин с суммой ацилалкильных остатков C38:5 PC ae C38:6 Фосфатидилхолин с суммой ацилалкильных остатков C38:6 PC ae C40:0 Фосфатидилхолин с суммой ацилалкильных остатков C40:0 PC ae C40:1 Фосфатидилхолин с суммой ацилалкильных остатков С40:1 PC ae C40:2 Фосфатидилхолин с суммой ацилалкильных остатков C40:2 PC ae C40:3 Фосфатидилхолин с суммой ацилалкильных остатков C40:3 PC ae C40:4 Фосфатидилхолин с суммой ацилалкильных остатков C40:4 PC ae C40:5 Фосфатидилхолин с суммой ацилалкильных остатков C40:5 PC ae C40:6 Фосфатидилхолин с суммой ацилалкильных остатков C40:6 PC ae C42:0 Фосфатидилхолин с суммой ацилалкильных остатков C42:0 PC ae C42:1 Фосфатидилхолин с суммой ацилалкильных остатков С42:1 PC ae C42:2 Фосфатидилхолин с суммой ацилалкильных остатков C42:2 PC ae C42:3 Фосфатидилхолин с суммой ацилалкильных остатков C42:3 PC ae C42:4 Фосфатидилхолин с суммой ацилалкильных остатков C42:4 PC ae C42:5 Фосфатидилхолин с суммой ацилалкильных остатков C42:5 PC ae C44:3 Фосфатидилхолин с суммой ацилалкильных остатков C44:3 PC ae C44:4 Фосфатидилхолин с суммой ацилалкильных остатков C44:4 РС ае С44:5 Фосфатидилхолин с суммой ацилалкильных остатков С44:5 PC ае С44:6 Фосфатидилхолин с суммой ацилалкильных остатков С44:6

Таблица 5 Сфингомиелины (мкМ) ВС-код Аналит SM (OH) C14:1 Гидроксисфингомиелин с суммой ацильных остатков С14:1 SM (OH) C16:1 Гидроксисфингомиелин с суммой ацильных остатков C16:1 SM (OH) C22:1 Гидроксисфингомиелин с суммой ацильных остатков С22:1 SM (ОН) С22:2 Гидроксисфингомиелин с суммой ацильных остатков С22:2 SM (OH) C24:1 Гидроксисфингомиелин с суммой ацильных остатков С24:1 SM C14:0 Сфингомиелин с суммой ацильных остатков С14:0 SM C16:0 Сфингомиелин с суммой ацильных остатков C16:0 SM C16:1 Сфингомиелин с суммой ацильных остатков C16:1 SM C18:0 Сфингомиелин с суммой ацильных остатков C18:0 SM C18:1 Сфингомиелин с суммой ацильных остатков C18:1 SM C20:2 Сфингомиелин с суммой ацильных остатков C20:2 SM C22:3 Сфингомиелин с суммой ацильных остатков C22:3 SM C24:0 Сфингомиелин с суммой ацильных остатков C24:0 SM C24:1 Сфингомиелин с суммой ацильных остатков С24:1 SM C26:0 Сфингомиелин с суммой ацильных остатков C26:0 SM C26:1 Сфингомиелин с суммой ацильных остатков С26:1

Таблица 6 Простагландины (нМ) ВС-код Аналит 9S-HODE (±)9-гидрокси-10E,12Z-октадекадиеновая кислота 13S-HODE 13(S)-гидрокси-9Z,11E-октадекадиеновая кислота 14(15)-ЕрЕТЕ (±)14(15)-эпокси-5Z,8Z,11Z,17Z-эйкозатетраеновая кислота 12S-HETE 12(S)-гидрокси-5Z,8Z,10E,14Z-эйкозатетраеновая кислота 15S-HETE 15(S)-гидрокси-5Z,8Z,11Z,13Е-эйкозатетраеновая кислота 15S-HpETE 15(S)-гидроперокси-5Z,8Z,11Z,13Е-эйкозатетраеновая кислота LTB4 Лейкотриен В4 5S-HpETE 5(S)-гидроперокси-6Е,82,11Z,14Z-эйкозатетраеновая кислота ТХВ2 Тромбоксан В2 LTD4 Лейкотриен D4 DHA Докозогексаеновая кислота PGE2 Простагландин Е2 8-изо PGF2a 8-изо-простагландин F2альфа PGF2a Простагландин F2альфа 6-кето-PGF1a 6-кето-простагландин F1альфа PGD2 Простагландин D2 AA Арахидоновая кислота

Таблица 7 Сахара (мкМ) ВС-код Аналит (HNAcS-UA)2-HNAc ди(N-ацетилгексозаминсульфат-уроновая кислота)-(N-ацетилгексозамин) (HNAc-UA)2 ди(N-ацетилгексозамин-уроновая кислота) (HNAc-UA)2-S ди(N-ацетилгексозамин-уроновая кислота)сульфат (UA-HNAcS)2-UA ди(уроновая кислота-Т4-ацетилгексозаминсульфат)уроновая кислота: dH дезоксигексоза Глюкозой глюкозой (2-кетоглюкоза) H1 (глюкоза и т.д.) гексоза [глюкоза и т.д.] Н2 дигексоза [мальтоза, лактоза и т.д.] H2-dH дигексоза-дезоксигексоза H2-dH2 дигексоза-дидезоксигексоза H2-HNAc2 дигексоза-ди(N-ацетилгексозамин) H2-HNAc3 дигексоза-три(N-ацетилгексозамин) H2-NANA дигексоза-(N-ацетилнейраминовая кислота)(= сиалилактоза) Н3 тригексоза [мальтотриоза и т.д.] H3-HNAc2 и UA-HN-UA-HNAc-UA тригексоза-ди(N-ацетилгексозамин) и уроновая кислота-гексозамин-уроновая кислота-(N-ацетилгексоза)-уроновая кислота H3-HNAc2-NANA* тригексоза-ди(N-ацетилгексозамин)-(Н-ацетилнейраминовая кислота) H3-HNAc3 тригексоза-три(N-ацетилгексозамин) H3-HNAc4 тригексоза-тетра(Н-ацетилгексозамин) H3-HNAc5 тригексоза-пента(N-ацетилгексозамин) H4 тетрагексоза [мальтотетраоза и т.д.] H4-HNAc2 тетрагексоза-ди(N-ацетилгексозамин) H4-HNAc2-NANA тетрагексоза-ди(N-ацетилгексозамин)-(N-ацетилнейраминовая кислота) H4-HNAc3 тетрагексоза-три(N-ацетилгексозамин) H5 пентагексоза [мальтопентаоза и т.д.] H5-HNAc3 пентагексоза-три(N-ацетилгексозамин) H6 гексагексоза [мальтогексаоза и т.д.] H7 гептагексоза [мальтогептаоза и т.д.] H-dH гексоза-дезоксигексоза H-HNAc-NANA гексоза-(N-ацетилгексозамин)(N-ацетилнейраминовая кислота) HNAc N-ацетилгексозамин HNAc(S)-UA (N-ацетилгексозамин)сульфат-уроновая кислота HNAc(S2) (N-ацетилгексозамин)дисульфат HNAc2-H-dH ди(N-ацетилгексозамин)-гексоза-дезоксигексоза HNAc-dH (N-ацетилгексозамин)-дезоксигексоза HNAc-H (N-ацетилгексозамин)-гексоза HNAc-H2 (N-ацетилгексозамин)-дигексоза HNAc-H2-dH* (N-ацетилгексозамин)-дигексоза-дезоксигексоза HNAc-H2-dH2 (N-ацетилгексозамин)-дигексоза-дидезоксигексоза HNAc-Н3 (Н-ацетилгексозамин)-тригексоза HNAc-H3-dH (N-ацетилгексозамин)-тригексоза-дезоксигексоза HNAc-H3-dH2 (N-ацетилгексозамин)-тригексоза-дидезоксигексоза HNAC-H4 (N-ацетилгексозамин)-тетрагексоза HNAc-H4-dH (Н-ацетилгексозамин)-тетрагексоза-дезоксигексоза HNAc-H4-dH2 (N-ацетилгексозамин)-тетрагексоза-дидезоксигексоза HNAC-H5 (N-ацетилгексозамин)-пентагексоза HNAc-H5-dH (N-ацетилгексозамин)-пентагексоза-дидезоксигексоза HNAc-Н6 (N-ацетилгексозамин)-гексагексоза HNAc-H-dH (N-ацетилгексозамин)-гексоза-дидезоксигексоза HNAcS N-ацетилгексозаминсульфат HNAc-UA (N-ацетилгексозамин)-уроновая кислота HNAc-UA-HNS-UA N-ацетилгексозамин-уроновая кислота-(гексозаминсульфат)-уроновая кислота HNAc-UA-HNS-UA(S) N-ацетилгексозамин-уроновая кислота-(гексозаминсульфат)-уроновая кислота-сульфат HNS-UA N-уронозилгексозамин-сульфат HN-UA N-уронозилгексозамин H-P гексозо-пентоза Neu5Gc-HNAc-H3 (N-гликолилнейраминовая кислота)-(N-ацетилгексозамин)-тригексоза Пентоза (рибоза и т.д) пентоза [рибоза и т.д.] фосфо-Н фосфогексоза, гексозо-6-фосфат UA уроновая кислота UA-HN уроновая кислота-гексозамин UA-HNAc уроновая кислота-(N-ацетилгексозамин) UA-HNAc-S уроновая кислота-(N-ацетилгексозамин)сульфат UA-HNAc-UA уроновая кислота-(N-ацетилгексозамин)-уроновая кислота UA-HNAc-UA(S) уроновая кислота-(N-ацетилгексозамин)-(уроновая кислота-сульфат) UA-HNAc-UA(S2) уроновая кислота-(N-ацетилгексозамин)-(уроновая кислота-дисульфат) UA-HNAc-UA-HNAc(S2) уроновая кислота-(N-ацетилгексозамин)-уроновая кислота-(N-ацетилгексозаминдисульфат) UA-HNS уроновая кислота-(гексозаминсульфат) UA-HNS-UA уроновая кислота-(гексозаминсульфат)-уроновая кислота UA-HNS-UA-HNAc-UA уроновая кислота-(гексозамин-6-сульфат)-уроновая кислота-(N-ацетилгексозамин)-уроновая кислота UA-HN-UA(S2) уроновая кислота-гексозамин-(уроновая кислота-дисульфат) UA-HN-UA-HNAc-UA уроновая кислота-гексозамин-уроновая кислота-(N-ацетилгексозамин)-уроновая кислота *) артефакт, связанный с количественным определением гексозы

Таблица 8 Желчные кислоты (нМ) ВС-код Аналит СА Холевая кислота CDCA Хенодезоксихолевая кислота DCA Дезоксихолевая кислота GCA Гликохолевая кислота GCDCA Гликохенодезоксихолевая кислота GDCA Гликодезоксихолевая кислота GLCA Гликолитохолевая кислота GLCAS Сульфат гликолитохолевой кислоты GUDCA Гликоурсодезоксихолевая кислота LCA Литохолевая кислота ТСА Таурохолевая кислота TCDCA Таурохенодезоксихолевая кислота TDCA Тауродезоксихолевая кислота TLCA Тауролитохолевая кислота TLCAS Сульфат тауролитохолевой кислоты TUDCA Тауроурсодезоксихолевая кислота UDCA Урсодезоксихолевая кислота

Таблица 9 Метаболиты пути энергетического метаболизма (мкМ) ВС-код Новый ВС-код Аналиты 3-PG 3-PG 3-Фосфоглицерат альфа-KGA альфа-KGA альфа-кетоглутаровая кислота AMP AMP Аденозин-5'-монофосфат Arg Arg Аргинин Asp Asp Аспарагиновая кислота DHAP+3-PGA DHAP+3-PGA Дигидроксиацетонфосфат +3-фосфоглицеральдегид Fum Fum Фумаровая кислота Glt-6-P Glt-6-P Глюконат-6-фосфат Glu Glu Глутаминовая кислота Hex Hex Гексоза (например, глюкоза) Fru-1,6-BP Hex-BP Гексозобисфосфат (например, фруктозе-1,6-бисфосфат) Glc-1-P+Glc-6-P+Fru-6-P Hex-P Гексозофосфат (например, глюкозе-1-фосфат + глюкозо-6-фосфат + фруктозо-6-фосфат) Lac Lac Лактат Rib-5-P+Ribul-5-P Pent-P Пентозофосфат (например, рибозо-5-фосфат + риболозо-5-фосфат) PEP PEP Фосфоенолпируват Pyr+OAA Pyr+OAA Пируват + оксалоацетат Sue Sue Янтарная кислота Ery-4-P Tetr-P Тетрозофосфат (например, эритозо-4-фосфат)

Кроме того, изобретение относится также к набору, пригодному для осуществления способа, при этом набор содержит устройство, включающее одну или несколько лунок и одну или несколько вставок, импрегнированных по меньшей мере одним внутренним стандартом. Указанное устройство подробно описано в WO 2007/003344 и WO 2007/003343, которые обе включены в настоящее описание в качестве ссылки.

Представленные ниже примеры, предназначенные для дополнительной иллюстрации изобретения и никоим образом не направленные на ограничение его объема.

Примеры

Осуществляли сравнение между различными стадиями болезни почек, а также сравнение диабетической нефропатии с другими хроническими болезнями почек.

Общая информация:

Из госпиталя Университета Монпелье получали 6 групп следующих образцов мочи (57) и плазмы (76): образцы, взятые у страдающих диабетом пациентов со стадией 3-5 ХБП (официальные стадии 1-3 все обозначены в настоящем описании как стадия 3), и у не страдающих диабетом пациентов со стадией 3-5 ХБП. Применяли целенаправленную метаболомику для количественной оценки примерно 320 метаболитов из плазмы и 300 метаболитов из мочи, включая классы аминокислот, биогенных аминов, полиаминов, ацилкарнитинов, фосфатидилхолинов, восстанавливающих моно- и олигосахаридов, сфингомиелинов, эйкозаноидов, желчных кислот и промежуточных продуктов энергетического метаболизма (как они определены выше), в присутствии изотопномеченных внутренних стандартов и осуществляли определение с помощью ИФА и ЖХВР в сочетании с тандемной масс-спектрометрией в режиме мониторинга нескольких реакций (MRM), используя устройство Sciex 4000 QTrap с ионизацией электроспреем. Кроме того, осуществляли количественную оценку 160 жирных кислот в плазме с помощью ЖХ-МС/МС. Наборы данных анализировали методом главных компонент (РСА) «без обучения» и методом частичных наименьших квадратов - дискриминационным анализом (PLS-DA) с «обучением» с помощью программы MarkerView (фирма Life Technologies).

Анализ P/U (плазма/моча) и U (моча):

Анализ осуществляли как для пациентов, у которых были доступны образцы и плазмы, и мочи (т.е. 57; «Анализ P/U»), так и для пациентов, у которых были доступны только образцы плазмы (т.е. 76; «Анализ Р»), демонстрируя тем самым, что маркер может «работать» при использовании комбинации образцов плазмы и мочи, но что его можно также количественно определять только в образцах плазмы. Осуществляли различные сравнения для оценки биомаркеров ХБП, а также и для того, чтобы решить вопрос о том, можно ли с их помощью выявлять различия между диабетической нефропатией и другими болезнями почек. Поэтому осуществляли сравнение более ранних и поздних стадий ХБП у всех пациентов, но также и дополнительное сравнение страдающих и не страдающих диабетом пациентов.

Определение понятий:

(1) Повышающая (позитивная) и понижающая (негативная) регуляция: Позитивная регуляция означает повышение концентрации метаболита, например, повышение скорости, с которой происходит указанная биохимическая реакция, например, в результате изменения ферментативной активности. В случае негативной регуляции все происходит наоборот.

(2) t-критерий: t-критерий представляет собой критерий для проверки статистических гипотез, и одним его применений является использование в сочетании с программой MarkerView, и его применяют для каждой переменной в таблице и для решения вопроса о том, существует ли значимое различие среднего значения при данном среднеквадратичном отклонении и количестве образцов, например, для решения вопроса о том, существует ли реальное различие между средними величинами (средними значениями) для двух различных групп.

(3) р-значение: р-значение означает вероятность получения результата по меньшей мере максимально соответствующего фактически существующему, принимая, что нулевая гипотеза (гипотеза об отсутствии изменения или действия) является верной. Р-значение всегда является положительным и чем оно более-ниже, тем больше вероятность того, что имеет место изменение. Р-значение, равное 0,05 или ниже, отражает нулевую гипотезу на уровне 5%, что означает, что только в 5% случаев изменение является случайным. Этот уровень представлен ниже в таблицах.

(4) Изменение в логарифмическом масштабе (log-изменение): Изменение в логарифмическом масштабе определяют как разницу между средними преобразованными в log концентрациями в каждой случае. Это является средством описания того, насколько выше или ниже рассматриваемое значение в одной группе по сравнению с другой. Например, изменение в логарифмическом масштабе, составляющее 0,3, является «эквивалентом» ехр(.3)=1,34-кратного изменения повышения по сравнению с контролем (группа более здоровых людей). Кроме того, изменение в логарифмическом масштабе, составляющее - 0,3, является «эквивалентом» ехр(-.3)=0,74=(1/1,34)-кратного изменения повышения по сравнению с контролем или снижения изменения в 1,34-раза касательно заболевания.

Результаты:

Результаты указанных выше количественных оценок обобщены ниже в таблицах 10-27. В таблицах 10-18 описаны результаты, полученные при «Анализе P/U», а в таблицах 19-27 описаны результаты, полученные при «Анализе Р». Указанные в таблицах р-значения получали с помощью t-критерия, определяемого с использованием программы MarkerView. Положительное значение log относится к позитивной регуляции метаболита на более поздней стадии и наоборот. Сокращения: D, страдающий диабетом; ND, не страдающий диабетом; АС, ацилкарнитин; SU, сахар; BN, биогенный амин; SM, сфингомиелин; TFA, общие жирные кислоты; FFA, свободная жирная кислота; PC, фосфатидилхолин; ОА, органическая кислота.

«Анализ P/U»

Таблица 10 Метаболиты, отличающиеся высоко достоверной и достоверной позитивной и негативной регуляцией, при сравнении стадии 4 и 3 ХБП Метаболит Класс Плазма/моча р-значение log-изменение (стадия 4/стадия 3) C5-DC (C6-OH) АС Р 5,65Е-05 0,57 ADMA BN U 1,70Е-04 -0,44 Cit/Arg Соотношение Р 2,20Е-04 0,16 Phe АА Р 0,0005 0,10 Серотонин BN U 0,0009 -0,44 Общий DMA BN U 0,0011 -0,32 Cit АА Р 0,0013 0,19 С4 АС U 0,0018 -0,31 РС аа С42:4 PC Р 0,0029 0,08 С18:2 АС Р 0,0042 0,16 SDMA BN U 0,0056 -0,27 ею АС Р 0,0085 0,19 Gly АА U 0,0105 -0,32 C4:1-DC (C6) АС U 0,0110 -0,34 С9 АС Р 0,0138 0,26 С5-ОН (C3-DC-M) АС U 0,0138 -0,18 Met-SO BN Р 0,0140 0,15 С9 AC U 0,0140 -0,30 РС ае С32:1 PC P 0,0143 0,08 C5:1-DC AC U 0,0147 -0,29 С2 AC P 0,0154 0,13 Креатинин BN U 0,0162 -0,22 dH SU U 0,0164 -0,33 Orn/Arg Соотношение P 0,0172 0,10 Кетоглутаровая кислота OA P 0,0214 0,31 His AA U 0,0217 -0,28 Asn AA P 0,0253 0,06 PC ае С32:2 PC P 0,0277 0,07 PC ае С44:6 PC P 0,0299 0,09 Orn AA P 0,0306 0,10 C10 AC U 0,0311 -0,20 С10:1 AC U 0,0325 -0,20 Креатинин BN P 0,0338 0,17 PC aa С30:2 PC P 0,0338 0,06 С5 AC U 0,0340 -0,26 Ser AA U 0,0342 -0,19 SM (OH)C16:1 SM P 0,0354 0,07 His AA P 0,0362 0,05 цис-C18:1w7 FFA P 0,0368 0,09 SM C16:0 SM P 0,0369 0,05 H5 SU U 0,0369 -0,25 SDMA BN P 0,0388 0,14 Цис-C18:1w9 FFA P 0,0412 0,11 SM C16:1 SM P 0,0441 0,05 C5:1 AC U 0,0443 -0,16 C8:1 AC P 0,0450 0,22 Trp AA U 0,0465 -0,21 SM (OH)C14:1 SM P 0,0492 0,07 Met AA U 0,0493 -0,29

Таблица 11 Метаболиты, отличающиеся высоко достоверной и достоверной позитивной и негативной регуляцией, при сравнении стадии 5 и стадии 4 ХБП Метаболит Класс Плазма/моча р-значение Log-изменение (стадия 5/стадия 4) Креатинин BN Р 3,41Е-05 0,35 SDMA BN Р 8,22Е-05 0,26 SDMA/Arg Соотношение Р 0,0001 0,34 Общий DMA BN Р 0,0001 0,27 C5-DC (C6-OH) АС Р 0,0004 0,30 Cit/Arg Соотношение Р 0,0006 0,20 СО АС Р 0,0006 -0,22 PC ае С38:3 PC Р 0,0013 -0,12 Orn AA U 0,0018 0,89 Pro AA U 0,0028 0,50 SM (ОН) С22:2 SM P 0,0038 -0,12 PC aa C36:3 PC P 0,0040 -0,14 Trp AA P 0,0055 -0,22 C3 AC P 0,0055 -0,22 PC aa C36:4 PC P 0,0076 -0,14 Tyr AA P 0,0077 -0,19 SM C22:3 SM P 0,0080 -0,12 C9 AC P 0,0086 0,24 SM C20:2 SM P 0,0097 -0,18 C9:0 TFA P 0,0099 0,40 C2 AC P 0,0104 -0,16 PC aa C34:3 PC P 0,0114 -0,20 PC aa C34:4 PC U 0,0114 -0,19 SM C18:1 SM P 0,0115 -0,14 Val AA P 0,0121 0,52 PC aa C38:3 PC U 0,0125 -0,11 Xle AA P 0,0131 0,50 Глюкозой SU P 0,0136 0,35 PC aa C38:4 PC P 0,0143 -0,12 GUDCA BA P 0,0150 -0,68 PC aa C32:2 PC U 0,0164 -0,15 Спермин BN P 0,0186 1,78 PC ae C38:2 PC P 0,0238 -0,10 Gly AA P 0,0239 0,29 SM C18:0 SM P 0,0243 -0,11 PC aa C38:5 PC P 0,0246 -0,11 PC ae C40:4 PC P 0,0251 -0,10 Phe AA P 0,0259 -0,11 UA(1) SU U 0,0280 0,35 PC aa C40:4 PC U 0,0290 -0,13 CO AC U 0,0292 -0,31 Tyr/Phe Соотношение U 0,0296 -0,11 PC aa C32:3 PC P 0,0315 -0,12 PC ae C38:4 PC U 0,0322 -0,09 цис-C18:3w6 TFA P 0,0326 -0,15 PC aa C40:3 PC P 0,0354 -0,08 (HNAc-UA)2 SU U 0,0362 0,28 PC ae C40:3 PC U 0,0376 -0,09 H-dH SU U 0,0384 0,33 He AA P 0,0400 1,08 Leu AA U 0,0402 0,62 lysoPC a C16:1 PC P 0,0403 -0,14 PC ae C32:1 PC P 0,0424 -0,09 PC aa C34:2 PC P 0,0424 -0,10 C18:1 AC P 0,0436 0,92 C10-DC AC P 0,0446 0,38 C5:1-DC AC P 0,0471 0,19 цис-C22:1w9 TFA P 0,0495 0,12

Таблица 12 Метаболиты, отличающиеся высоко достоверной и достоверной позитивной и негативной регуляцией, при сравнении стадии 5 и стадии 3 ХБП Метаболит Класс Плазма/моча р-значение log-изменение (стадия 5/стадия 3) C5-DC (C6-OH) AC P 2.77E-09 0,88 Креатинин BN P 3,20E-08 0,51 Cit/Arg Соотношение P 5,24E-08 0,37 SDMA BN P 7,89E-08 0,41 Общий DMA BN P 7,32E-07 0,32 Кетоглутаровая кислота OA P 1,91E-06 0,38 Pro AA U 3,08E-06 0,85 SDMA/Arg Соотношение P 6,60E-06 0,51 C9 AC P 7,93E-06 0,50 Cit AA P 4,83E-05 0,28 Trp AA P 0,0002 -0,27 Допамин BN U 0,0002 -1,06 ADMA BN U 0,0003 -0,73 C6:1 AC P 0,0004 1,18 C10:1 AC U 0,0005 -0,55 Tyr/Phe Соотношение P 0,0007 -0,15 Серотонин BN U 0,0008 -0,76 C5:1 AC U 0,0008 -0,38 Cit AA U 0,0014 0,66 CO AC P 0,0017 -0,21 C5:1-DC AC P 0,0024 0,37 C4 AC U 0,0026 -0,50 SM C20:2 SM P 0,0027 -0,17 C5-OH (C3-DC-M) AC U 0,0027 -0,29 lysoPC a C20:3 PC P 0,0027 -0,16 SM C22:3 SM P 0,0029 -0,14 PC aa C34:4 PC P 0,0035 -0,22 PC aa C34:3 PC P 0,0044 -0,17 Лактат OA P 0,0049 -0,16 lysoPC a C14:0 PC P 0,0062 -0,31 PC aa C36:4 PC P 0,0066 -0,14 Общий DMA BN U 0,0077 -0,36 lysoPC a C16:1 PC P 0,0079 -0,18 Глюкозой SU U 0,0081 0,31 Orn/Arg Соотношение P 0,0082 0,13 UA(1) SU U 0,0083 0,33 C8 AC P 0,0122 0,49 DH SU U 0,0143 -0,49 P SU U 0,0152 -0,39 C8:1 AC P 0,0159 0,31 Pro AA P 0,0172 0.13 PC aa C32:1 PC U 0,0176 1,60 C0 AC U 0,0185 -0,47 C4:1-DC (C6) AC U 0,0196 -0,51 Спермин BN U 0,0209 1,01 lysoPC a C20:4 PC P 0,0212 -0,15 PC aa C38:5 PC P 0,0212 -0,11 TDCA BA P 0,0220 0,55 PC aa C38:4 PC P 0,0231 -0,12 SM C24:0 SM U 0,0236 1,38 HNAc-Н6 SU U 0,0245 0,70 PC ae C38:0 PC P 0,0248 -0,11 Met-SO BN P 0,0249 0,15 РС аа С34:1 PC U 0,0255 1,50 PC аа С36:6 PC P 0,0261 -0,14 C5:1-DC AC U 0,0288 -0,40 SM C20:2 SM U 0,0295 1,20 SM C24:1 SM U 0,0301 1,45 lysoPC a C16:0 PC P 0,0310 -0,09 С9 AC U 0,0344 -0,35 GCA BA P 0,0360 0,28 SDMA BN U 0,0361 -0,27 Val АА U 0,0371 0,35 H5-HNAc3 SU U 0,0406 0,82 lysoPC a C18:1 PC P 0,0419 -0,09 цис-C18:1w7 FFA P 0,0422 0,11 HNAc SU U 0,0422 -0,31 цис-C22:1w9 TFA P 0,0449 0,11 Tyr АА P 0,0471 -0,14 SM C22:3 SM U 0,0493 1,31

Таблица 13 Метаболиты, отличающиеся высоко достоверной и достоверной позитивной и негативной регуляцией, при сравнении страдающих диабетом пациентов со стадией 4 и стадией 3 ХБП Метаболит Класс Плазма/моча p-value log-изменение (D4/D3) Cit/Arg Соотношение P 0,0046 0,18 ADMA BN U 0,0048 -0,35 C5-DC (C6-OH) AC P 0,0079 0,49 С4 AC U 0,0084 -0,35 С4:1 AC P 0,0097 0,30 Серотонин BN U 0,0178 -0,37 Цис-C17:2w6 TFA P 0,0205 -0,23 PC аа С42:4 PC P 0,0227 0,09 Gly АА U 0,0254 -0,39 Cit АА P 0,0288 0,18 Общий DMA BN U 0,0299 -0,27 Цис-C22:3w3 FFA P 0,0326 -0,18 Цис-C22:6w3 (DHA) TFA P 0,0407 0,11 Ser АА U 0,0435 -0,20 Цис-C22:5w3 TFA P 0,0499 0,10

Таблица 14 Метаболиты, отличающиеся высоко достоверной и достоверной позитивной и негативной регуляцией, при сравнении страдающих диабетом пациентов со стадией 5 и стадией 4 ХБП Метаболит Класс Плазма/моча р-значение Log-изменение (D5/D4) Креатинин BN Р 5,30Е-06 0,48 C5-DC (C6-OH) АС Р 0,0002 0,42 UA(1) SU Р 0,0009 1,06 С9:0 TFA Р 0,0026 0,41 общий DMA BN Р 0,0026 0,32 СО АС Р 0,0034 -0,19 Pro АА U 0,0050 0,64 ADMA BN Р 0,0053 0,13 SDMA BN Р 0,0076 0,26 Спермин BN U 0,0443 1,51 Gly АА Р 0,0127 0,11 Фумаровая кислота ОА Р 0,0160 0,76 Pro АА Р 0,0219 0.17 С9 АС Р 0,0247 0,28 Gln АА Р 0,0249 0,07 SDMA/Arg Соотношение Р 0,0276 0,20 Asn АА Р 0,0287 0,14 С0 АС U 0,0439 -0,47

Таблица 15 Метаболиты, отличающиеся высоко достоверной и достоверной позитивной и негативной регуляцией, при сравнении страдающих диабетом пациентов со стадией 5 и стадией 3 ХБП Метаболит Класс Плазма/моча р-значение log-изменение (D5/D3) C5-DC (C6-OH) AC Р 4,24Е-07 0,92 Креатинин BN Р 8,35Е-07 0,51 Кетоглутаровая кислота ОА Р 4,60Е-05 0,46 SDMA BN Р 0,0004 0,40 общий DMA BN Р 0,0004 0,27 С9 AC Р 0,0005 0,44 TDCA BA Р 0,0007 1,02 ТСА BA Р 0,0008 1,11 С5:1 AC U 0,0009 -0,39 ADMA BN U 0,0009 -0,76 С10:1 AC U 0,0010 -0,63 Cit/Arg Соотношение Р 0,0016 0,29 GCA BA Р 0,0020 0,61 Pro АА U 0,0021 0,73 Допамин BN U 0,0025 -1,28 Pro АА Р 0,0028 0,23 Серотонин BN U 0,0040 -0,98 С5-ОН (C3-DC-M) AC U 0,0043 -0,31 Cit АА Р 0,0043 0,27 СО AC Р 0,0087 -0,22 цис-С17:2w6 FFA Р 0,0145 -0,13 общий DMA BN U 0,0152 -0,49 С4 AC U 0,0165 -0.62 Asn АА Р 0,0170 0,17 Gln АА Р 0,0220 0,09 DH SU U 0,0229 -0,51 С9 AC U 0,0252 -0,45 SDMA/Arg Соотношение Р 0,0265 0,36 His АА Р 0,0334 0,11 C5:1-DC AC Р 0,0349 0,29 SDMA BN U 0,0366 -0,42 SM C20:2 SM Р 0,0382 -0,12 PC аа С34:3 PC P 0,0394 -0,15 С AC U 0,0400 -0,65 С6:0 FFA P 0,0415 -0,07 C4:1-DC (C6) AC U 0,0420 -0,61 GDCA BA P 0,0436 0,41 HNAc SU U 0,0482 -0,41 Tyr/Phe Соотношение P 0,0484 -0,11

Таблица 16 Метаболиты, отличающиеся высоко достоверной и достоверной позитивной и негативной регуляцией, при сравнении не страдающих диабетом пациентов со стадией 4 и стадией 3 ХБП Метаболит Класс Плазма/моча р-значение log-изменение (ND4/ND3) Phe АА P 0,0008 0,14 Orn/Arg RATIO P 0,0017 0,18 Met-SO BN P 0,0023 0,25 Orn АА P 0,0030 0,18 Креатинин BN P 0,0033 0,35 C5 AC P 0,0036 0,24 C5-DC (C6-OH) AC P 0,0040 0,68 Asn АА P 0,0044 0,11 ADMA BN P 0,0067 0,13 Cit АА P 0,0067 0,18 общий DMA BN U 0,0086 -0,44 C9 AC P 0,0098 0,42 SDMA BN U 0,0101 -0,38 Креатинин BN U 0,0104 -0,28 H5 SU U 0,0110 -0,56 ADMA BN U 0,0131 -0,62 SM C26:1 SM P 0,0144 0,07 H4 SU U 0,0151 -0,33 PC ae C44:6 PC P 0,0162 0,14 C14:2 AC U 0,0180 -0,97 C18:1 AC P 0.0182 0,10 Pro АА P 0,0185 0,09 Цис-С20:2w6 FFA P 0,0193 0.11 C10 AC P 0,0200 0,23 Cit/Arg RATIO P 0,0204 0,14 Серотонин BN U 0,0216 -0,60 SM C16:1 SM P 0,0243 0,08 Допамин BN U 0,0254 -0,44 P SU U 0,0255 -0,47 Кетоглутаровая кислота OA P 0,0256 0,21 общий DMA BN P 0,0262 0,16 Цис-C18:2w6 FFA P 0,0263 0,12 PC аа С42:0 PC P 0,0298 0,13 PC ae C32:2 PC P 0,0308 0,10 Glu АА P 0,0308 0,30 Цис-C18:2w6 TFA P 0,0313 0,08 C5:1 AC U 0,0323 -0,33 HNAc SU U 0,0332 -0,45 Цис-С18:1w7 FFA P 0,0337 0,14 SM C16:0 SM P 0,0369 0,07 РС ае С32:1 PC P 0,0376 0,09 С5-ОН (C3-DC-M) AC U 0,0383 -0,26 His AA P 0,0391 0,06 Gln AA P 0,0411 0,03 DH SU U 0,0417 -0,64 PC aa C42:1 PC P 0,0424 0,12 C12 AC U 0,0430 -0,34 PC aa C30:2 PC P 0,0443 0,09 C7-DC AC P 0,0460 0,78 C8 AC P 0,0472 0,79 C9 AC U 0,0482 -0,51 PC aa C42:4 PC P 0,0489 0,08

Таблица 17 Метаболиты, отличающиеся высоко достоверной и достоверной позитивной и негативной регуляцией, при сравнении не страдающих диабетом пациентов со стадией 5 и стадией 3 ХБП Метаболит Класс Плазма/моча р-значение log-изменение (ND5/ND4) С14:2 AC U 0,0001 1,07 Cit/Arg RATIO P 0,0006 0,31 SDMA/Arg RATIO P 0,0011 0,45 PC ае С38:3 PC P 0,0014 -0,18 Phe AA P 0,0024 -0,21 Arg AA U 0,0030 0,43 Asn AA P 0,0033 -0,17 SM C20:2 SM P 0,0039 -0,22 C14:1 AC U 0,0042 0,93 PC aa С38:3 PC P 0,0048 -0,19 Trp AA P 0,0050 -0,33 PC aa C36:3 PC P 0,0050 -0,17 SDMA BN P 0,0054 0,27 HI SU U 0,0058 0,64 PC aa C40:3 PC P 0,0059 -0,15 PC aa C34:3 PC P 0,0060 -0,23 Met AA P 0,0063 -0,24 Tyr AA P 0,0089 -0,31 цис-C18:4w3 TFA P 0,0092 -0,92 H2-dH2 SU U 0,0097 0,41 Gln AA P 0,0100 -0,12 PC ае C44:3 PC P 0,0101 -0,14 SM (OH) C22:2 SM P 0,0101 -0,18 His AA P 0,0102 -0,19 PC ае C40:3 PC P 0,0112 -0,14 Arg AA P 0,0128 -0,19 PC aa C40:5 PC P 0,0130 -0.20 lysoPC a C16:0 PC P 0,0133 -0,17 C10-DC AC U 0,0162 0,77 C3 AC P 0,0163 -0,30 SM C18:1 SM P 0,0182 -0,18 PC aa C38:5 PC P 0,0184 -0,18 PC aa C32:3 PC P 0,0189 -0,17 C12 AC U 0,0203 0,46 Orn AA U 0,0208 1,36 PC аа С32:2 PC P 0,0221 -0,19 PC аа С38:4 PC P 0,0223 -0,19 PC аа С34:4 PC P 0,0235 -0,28 PC аа С42:5 PC P 0,0237 -0,11 РС ае С32:1 PC P 0,0246 -0,11 Glu АА U 0,0254 0,74 цис-C16:1wl3 TFA P 0,0255 -0,38 UA-HNAc-S SU P 0,0259 -0,52 PC ae C40:4 PC P 0,0269 -0,14 Xle АА U 0,0293 0,81 CO AC P 0,0299 -0,26 общий DMA BN P 0,0302 0,22 PC аа C40:4 PC P 0,0329 -0,23 Thr АА P 0,0332 -0,21 SM C22:3 SM P 0,0333 -0,13 Ala АА P 0,0338 -0,20 Val АА U 0,0343 0,74 PC аа C42:4 PC P 0,0353 -0,11 PC ae C38:2 PC P 0,0354 -0,17 PC аа C36:2 PC P 0,0363 -0,15 PC ae C44:6 PC P 0,0364 -0,20 PC аа C36:4 PC P 0,0365 -0,15 Глюкозой SU U 0,0401 0,49 цис-C18:3w3 TFA P 0,0439 -0,20 Lys АА U 0,0459 0,58 PC aa C36:1 PC P 0,0467 -0,11 C4-OH (C3-DC) AC U 0,0472 0,28 H3 SU U 0,0472 0,51

Таблица 18 Метаболиты, отличающиеся высоко достоверной и достоверной позитивной и негативной регуляцией, при сравнении не страдающих диабетом пациентов со стадией 5 и стадией 3 ХБП Метаболит Класс Плазма/ моча р-значение log-изменение (ND5/ND3) Cit АА U 1,15E-06 0,89 Cit/Arg Соотношение P 1,26E-05 0,44 Orn/Arg Соотношение P 2,63E-05 0,28 SDMA/Arg Соотношение P 4,36E-05 0,62 Креатинин BN P 8,73E-05 0,53 SDMA BN P 0,0001 0,42 C5-DC (C6-OH) AC P 0,0002 0,83 общий DMA BN P 0,0002 0,38 C8 AC P 0,0005 1,06 lysoPC a C14:0 PC P 0,0006 -0,78 Pro АА U 0,0006 1,10 Trp АА P 0,0007 -0,41 C9 AC P 0,0032 0,61 Cit АА P 0,0033 0,29 LysoPC a C16:0 PC P 0,0037 -0,16 H1 SU U 0,0045 0,52 Lys АА U 0,0062 0,80 Tyr/Phe Соотношение P 0,0084 -0,19 цис-C18:1w7 FFA P 0,0086 0,22 цис-C18:1w9 FFA P 0,0088 0,27 LysoPC a C20:3 PC P 0,0097 -0,23 Arg AA P 0,0100 -0,18 Кетоглутаровая кислота ОА P 0,0108 0,29 Met-SO BN P 0,0109 0,20 PC aa C34:4 PC P 0,0131 -0,38 LysoPC a C20:4 PC P 0,0135 -0,26 Tyr AA P 0,0156 -0,25 MetSO/Met Соотношение P 0,0160 0,32 Ala AA P 0,0166 -0,18 Val AA U 0,0175 0,64 C18:1 AC P 0,0176 0,13 LysoPC a C16:1 PC P 0,0183 -0,25 SM C20:2 SM U 0,0216 2,12 His AA P 0,0218 -0,13 Gln AA P 0,0230 -0,09 Thr AA P 0,0231 -0,19 Thr AA U 0,0235 0,37 Asp AA P 0,0237 1,16 SM C22:3 SM P 0,0252 -0,19 Met AA P 0,0257 -0,16 Допамин BN U 0,0268 -0,83 C16:2 AC P 0,0281 0,32 SM C16:0 SM U 0,0294 2,56 PC aa C38:4 PC P 0,0299 -0,20 C5:1-DC AC P 0,0303 0,49 цис-C20:1w9 TFA P 0,0310 0,13 PC aa C38:5 PC P 0,0319 -0,16 Ala AA U 0,0320 0,28 H3 SU U 0,0336 0,41 Глюкозой SU U 0,0345 0,41 SM C20:2 SM P 0,0356 -0,21 цис-C16:1w7 FFA P 0,0375 0,39 цис-C20:1w9 FFA P 0,0391 0,21 цис-C17:1w9 FFA P 0,0395 0,28 PC aa C36:4 PC P 0,0406 -0,19 Лактат ОА P 0,0407 -0,19 LysoPC a C28:1 PC P 0,0435 -0,28 LysoPC a C18:1 PC P 0,0463 -0,12 цис-C11:1w5 FFA P 0,0495 -0,68 PC ae C38:0 PC P 0,0498 -0,18 «Анализ P»

Таблица 19 Метаболиты, отличающиеся высоко достоверной и достоверной позитивной и негативной регуляцией, при сравнении стадии 4 и стадии 3 ХБП   log-изменение (стадия 4/стадия 3) Метаболит Класс р-значение C5-DC (C6-OH) AC 1,51E-05 0,59 Cit/Arg Соотношение 0,0004 0,15 Cit AA 0,0019 0,17 С18:2 AC 0,0019 0,16 Phe AA 0,0024 0,08 C10 AC 0,0026 0,20 PC aa C42:4 PC 0,0044 0,08 PC ae C32: PC 0,0049 0,08 PC ae C32:2 PC 0,0076 0,08 Met-SO BN 0,0088 0,14 PC ae C44:6 PC 0,0103 0,09 SM (OH)C16:1 SM 0,0105 0,08 PC aa C30:2 PC 0,0128 0,07 Креатинин BN 0,0142 0,17 2цис-C18:1w7 FFA 0,0152 0,10 SDMA BN 0,0155 0,16 SM C16:0 SM 0,0158 0,05 PC ae C40:3 PC 0,0194 0,07 C10:1 AC 0,0205 0,41 C2 AC 0,0210 0,11 C9 AC 0,0216 0,23 Asn AA 0,0218 0,06 цис-C18:1w9 FFA 0,0220 0,12 Кетоглутаровая кислота OA 0,0220 0,28 цис-C18:1w7 TFA 0,0224 0,07 PC aa C40:1 PC 0,0225 0,19 SM C16:1 SM 0,0252 0,06 C8:1 AC 0,0254 0,23 Orn/Arg Соотношение 0,0278 0,09 C18:1 AC 0,0313 0,08 Trp AA 0,0317 -0,08 C14:1 AC 0,0320 0,06 SDMA/Arg Соотношение 0,0325 0,19 C8 AC 0,0338 0,38 PC aa C42:0 PC 0,0366 0,08 PC aa C42:1 PC 0,0381 0,08 SM (OH) C14:1 SM 0,0385 0,07 SM C18:1 SM 0,0400 0,06 SM C26:1 SM 0,0403 0,05 C16:0 TFA 0,0405 0,06 PC ae C30:2 PC 0,0407 0,07 GDCA BA 0,0410 0,28 TDCA BA 0,0411 0,80 PC aa C40:2 PC 0,0422 0,06 His AA 0,0439 0,05 PC ae C34:1 PC 0,0477 0,07 PC ae C30:1 PC 0,0481 0,07 Orn AA 0,0493 0,09

Таблица 20 Метаболиты, отличающиеся высоко достоверной и достоверной позитивной и негативной регуляцией, при сравнении стадии 5 и стадии 4 ХБП Метаболит Класс р-значение log-изменение (стадия 5/стадия 4) UA(1) SU 7,28Е-09 1,35 Креатинин BN 2,60Е-08 039 C5-DC (C6-OH) АС 2,48Е-07 0,38 SM (ОН) С22:2 SM 7,04Е-07 -0,16 SDMA/Arg Соотношение 1,10E-06 0,34 Глюкозой SU 1,49E-06 1,16 SDMA BN 1,84E-06 0,26 Trp AA 1,45E-05 -0,25 общий DMA BN 1,86E-05 0,24 Cit/Arg Соотношение 2,07E-05 0,20 PC ae C38:2 PC 2,33E-05 -0,15 CO AC 2,62E-05 -0,23 PC ae C38:3 PC 3,58E-05 -0,13 SM (OH)C22:1 SM 4,31E-05 -0,15 C9 AC 0,0001 0,28 PC ae C42:3 PC 0,0001 -0,14 PC ae C38:1 PC 0,0002 -0,15 PC ae C40:4 PC 0,0002 -0,12 PC ae C34:2 PC 0,0002 -0,14 PC ae C36:3 PC 0,0002 -0,12 Tyr AA 0,0003 -0,18 C16 AC 0,0003 -0,12 PC ae C42:2 PC 0,0004 -0,14 PC ae C42:4 PC 0,0005 -0,12 Met AA 0,0007 -0,16 Ala AA 0,0008 -0,16 PC ae C32:1 PC 0,0009 -0,10 C3 AC 0,0009 -0,24 C14:1 AC 0,0010 -0,11 SM (OH)C16:1 SM 0,0010 -0,11 PC ae C40:3 PC 0,0010 -0,10 PC ae C36:4 PC 0,0013 -0,12 SM C18:1 SM 0,0014 -0,12 PC ae C34:3 PC 0,0015 -0,15 Arg AA 0,0017 -0,13 C23:0 TFA 0,0017 -0,14 SM (OH) C14:1 SM 0,0017 -0,11 PC ae C44:4 PC 0,0019 -0,12 SM C16:1 SM 0,0019 -0,09 PC ae C36:2 PC 0,0024 -0,11 PC ae C44:5 PC 0,0026 -0,11 PC ae C32:2 PC 0,0026 -0,10 C21:0 TFA 0,0026 -0,11 C14:2 AC 0,0027 -0,09 lysoPC a C16:0 PC 0,0030 -0,12 SM (OH)C24:1 SM 0,0031 -0,10 PC ae C36:5 PC 0,0033 -0,12 PC ae C42:5 PC 0,0034 -0,09 PC ae C38:4 PC 0,0037 -0,10 lysoPC a C18:2 PC 0,0040 -0,18 PC ae C44:6 PC 0,0044 -0,11 Tyr/Phe Соотношение 0,0050 -0,10 PC ae C30:1 PC 0,0051 -0,10 lysoPC a C18:0 PC 0,0052 -0,15 C18:1 AC 0,0056 -0,11 PC ae C40:1 PC 0,0057 -0,11 PC аа С36:2 PC 0,0057 -0,10 PC ае С40:5 PC 0,0057 -0,09 PC аа С36:3 PC 0,0058 -0,11 С18:2 AC 0,0060 -0,15 С18 AC 0,0060 -0,11 PC аа С38:3 PC 0,0063 -0,10 PC аа С34: PC 0,0066 -0,10 Phe АА 0,0067 -0,09 PC аа С40:2 PC 0,0068 -0,07 PC аа С42:0 PC 0,0070 -0,10 Thr АА 0,0071 -0,13 PC аа С32:3 PC 0,0075 -0,11 PC аа С42:4 PC 0,0077 -0,09 lysoPC a C17:0 PC 0,0078 -0,15 PC ae С40:2 PC 0,0085 -0,09 PC ае С44:3 PC 0,0085 -0,10 PC ае С38:6 PC 0,0088 -0,11 SM С26:0 SM 0,0090 -0,07 транс-C18:1w9 FFA 0,0090 0,19 SM C14:0 SM 0,0090 -0,09 SM C24:1 (Р) SM 0,0091 -0,07 PC ае С38:5 PC 0,0096 -0,09 PC аа С32:2 PC 0,0100 -0,11 LysoPC а С20:3 PC 0,0101 -0,15 Lys АА 0,0116 -0,11 С2 AC 0,0118 -0,14 LysoPC а С20:4 PC 0,0131 -0,15 РС аа С28:1 PC 0,0134 -0,09 Gln АА 0,0144 -0,06 8Ме-С18:0 FFA 0,0145 -0,43 Ser АА 0,0153 -0,10 LysoPC a C14:0 PC 0,0165 -0,24 РС аа С42:1 PC 0,0172 -0,08 PC ае С30:2 PC 0,0178 -0,09 PC ae C36:1 PC 0,0189 -0,08 цис-С11:1w5 FFA 0,0193 -0,48 PC ae C30:0 PC 0,0194 -0,10 Фумаровая кислота OA 0,0198 0,43 цис-C22:1w9 TFA 0,0200 0.11 lysoPC a C28:1 PC 0,0216 -0,19 PC aa C38:1 PC 0,0232 -0,08 SM C24:0 SM 0,0237 -0,07 Val АА 0,0254 -0,11 lysoPC a C18:1 PC 0,0263 -0,11 lysoPC a C16:1 PC 0,0272 -0,12 PC аа C40:3 PC 0,0273 -0,07 Цис-C17:2w7 TFA 0,0276 -0,13 PC аа C38:4 PC 0,0284 -0,10 Цис-C11:1w5 TFA 0,0308 -0,37 SM C16:0 SM 0,0320 -0,05 транс-C18:1w9 TFA 0,0332 0,09 Цис-C17:2w7 FFA 0,0351 -0,12 цис-C18:2w6 TFA 0,0355 -0,07 17Ме-С18:0 FFA 0,0355 -0,27 цис-C20:3w6 TFA 0,0390 -0,11 цис-C15:1w5 FFA 0,0402 -0,09 PC ae C40:6 PC 0,0411 -0,08 PC aa C34:3 PC 0,0442 -0,12 C9:0 TFA 0,0469 0,24 PC ae C42:1 PC 0,0469 -0,08 MetSO/Met Соотношение 0,0471 0,11 His AA 0,0472 -0,07 PC ae C36:0 PC 0,0486 -0,07 PC aa C40:1 PC 0,0489 -0,15 Glu AA 0,0490 -0,26

Таблица 21 Метаболиты, отличающиеся высоко достоверной и достоверной позитивной и негативной регуляцией, при сравнении стадии 5 и стадии 3 ХБП Метаболит Класс р-значение log-изменение (стадия 5/стадия 3) C5-DC (C6-OH) AC 3,78E-13 0,98 Креатинин BN 2,67E-11 0,57 SDMA BN 1,52E-10 0,42 Cit/Arg Соотношение 8,77E-10 0,34 SDMA/Arg Соотношение 1,34E-09 0,53 Trp AA 2,93E-09 -0,33 Кетоглутаровая кислота OA 9,96E-09 0,41 С9 AC 2,75E-08 0,51 общий DMA BN 1,04E-07 0,30 C7-DC AC 1,37E-06 0,98 Tyr/Phe Соотношение 1,61E-06 -0,15 lysoPC a C20:3 PC 2,35E-05 -0,20 СО AC 2,71E-05 -0,22 Cit AA 7,49E-05 0,22 lysoPC a C14:0 PC 0,0002 -0,33 lysoPC a C20:4 PC 0,0004 -0,18 Orn/Arg Соотношение 0,0008 0,14 SM (OH)C22:1 SM 0,0008 -0,11 lysoPC a C16:0 PC 0,0011 -0,13 lysoPC a C18:2 PC 0,0012 -0,19 Tyr AA 0,0012 -0,16 PC ae C42:3 PC 0,0013 -0,11 С23:0 TFA 0,0014 -0,14 SM (ОН) С22:2 SM 0,0014 -0,10 Ala AA 0,0018 -0,13 lysoPC а С18:0 PC 0,0022 -0,14 lysoPC а С18:1 PC 0,0022 -0,14 MetSO/Met Соотношение 0,0023 0,25 транс-C18:1w9 FFA 0,0026 0,24 GCA BA 0,0028 0,42 PC ae C44:4 PC 0,0028 -0,09 Val AA 0,0033 -0,12 PC ae C42:2 PC 0,0037 -0,11 C5:1-DC AC 0,0043 0,28 PC ae C34:3 PC 0,0045 -0,13 PC ae C38:2 PC 0,0047 -0,10 Arg AA 0,0051 -0,11 C21:0 TFA 0,0055 -0,11 Met AA 0,0061 -0,13 PC ae C36:3 PC 0,0066 -0,09 LysoPC a C16:1 PC 0,0070 -0,15 PC ae C38:1 PC 0,0074 -0,10 Lys AA 0,0089 -0,10 Pro AA 0,0097 0,12 PC aa C34:4 PC 0,0112 -0,17 цис-C17:2w7 TFA 0,0114 -0,13 PC ae C36:5 PC 0,0121 -0,10 TDCA BA 0,0138 0,60 цис-C17:2w9 TFA 0,0139 -0,10 цис-C18:1w7 FFA 0,0142 0,12 цис-C17:2w7 FFA 0,0145 -0,11 Thr AA 0,0152 -0,12 PC ae C42:4 PC 0,0153 -0,07 C8:1 AC 0,0158 0,39 PC ae C40:1 PC 0,0159 -0,08 lysoPC a C28:1 PC 0,0173 -0,19 lysoPC a C17:0 PC 0,0179 -0,12 Met-SO BN 0,0185 0,11 цис-C22:1w9 TFA 0,0187 0,10 ADMA BN 0,0190 0,08 цис-C15:1w5 TFA 0,0191 -0,09 PC ae C36:4 PC 0,0192 -0,08 PC ae C34:2 PC 0,0194 -0,08 PC ae C38:3 PC 0,0210 -0,08 Ser AA 0,0218 -0,09 Glu AA 0,0260 0,16 TCA BA 0,0266 0,58 C3 AC 0,0268 -0,17 PC ae C40:4 PC 0,0283 -0,07 цис-C15:1w5 FFA 0,0287 -0,08 цис-C17:2w9 FFA 0,0289 -0,10 PC ae C44:5 PC 0,0291 -0,07 C8 AC 0,0331 0,34 PC aa C36:5 PC 0,0333 -0,13 SM C22:3 SM 0,0342 -0,09 SM (OH)C24:1 SM 0,0385 -0,07 Leu AA 0,0413 -0,12 8Me-C18:0 FFA 0,0429 -0,36 PC ae C38:0 PC 0,0441 -0,10 цис-C18:1w9 FFA 0,0443 0,13

Таблица 22 Метаболиты, отличающиеся высоко достоверной и достоверной позитивной и негативной регуляцией, при сравнении страдающих диабетом пациентов со стадией 4 и стадией 3 ХБП Метаболит Класс р-значение log-изменение (D4/D3) C4:1 AC 0,0063 0,29 Cit/Arg Соотношение 0,0074 0,15 PC aa C42:4 PC 0,0084 0,11 C5-DC (C6-OH) AC 0,0114 0,49 Cit AA 0,0134 0,19 цис-C22:6w3 (DHA) TFA 0,0188 0,13 Phe AA 0,0398 0,08 HUC-C22:5w3 TFA 0,0438 0,10 GDCA BA 0,0460 0,47 цис-C17:2w6 TFA 0,0471 -0,19 PC ae C38:4 PC 0,0488 0,08 SDMA BN 0,1692 0,14 Креатинин BN 0,7538 0,03

Таблица 23 Метаболиты, отличающиеся высоко достоверной и достоверной позитивной и негативной регуляцией, при сравнении страдающих диабетом пациентов со стадией 5 и стадией 4 ХБП Метаболит Класс р-значение log-изменение (D5/D4) Креатинин BN 4,23E-06 0,49 UA(1) SU 3,40E-05 1,18 SDMA/Arg Соотношение 5,12E-05 0,40 С0 AC 5,61E-05 -0,23 C5-DC (C6-OH) AC 8,10E-05 0,48 Глюкозой SU 9,48E-05 1,19 SDMA BN 0,0004 0,27 общий DMA BN 0,0010 0,26 C3 AC 0,0024 -0,27 Trp AA 0,0025 -0,26 SM (ОН) С22:2 SM 0,0037 -0,12 С14:1 AC 0,0068 -0,12 17Ме-С18:0 FFA 0,0077 -0,50 Tyr AA 0,0100 -0,18 SM (OH)C14:1 SM 0,0115 -0,11 С16 AC 0,0121 -0,14 С9 AC 0,0145 0,25 Фумаровая кислота OA 0,0151 0,75 SM (OH)C16:1 SM 0,0159 -0,11 транс-C18:1w9 TFA 0,0159 0,14 SM (OH)C22:1 SM 0,0163 -0,10 Tyr/Phe Соотношение 0,0187 -0,12 цис-C16:1wl3 TFA 0,0202 0,19 Cit/Arg Соотношение 0,0206 0,16 C9:0 TFA 0,0224 0,28 транс-C18:1w9 FFA 0,0236 0,25 Arg AA 0,0255 -0,14 PC ae C42:3 PC 0,0283 -0,11 PC ae C42:4 PC 0,0297 -0,12 PC ae C44:5 PC 0,0315 -0,11 PC ae C38:2 PC 0,0320 -0,10 PC ae C44:4 PC 0,0322 -0,12 Ala AA 0,0323 -0,16 PC ae C42:5 PC 0,0332 -0,10 PC ае С38:3 PC 0,0353 -0,09 H1 SU 0.0353 -0,15 PC ае С40:4 PC 0,0361 -0,09 PC ае С42:2 PC 0,0368 -0,11 PC ае С34:2 PC 0,0406 -0,10 цис-С17:2w7 TFA 0,0444 -0,15 цис-C11:1w5 FFA 0,0455 -0,57 Orn AA 0,0465 -0,12 GUDCA BA 0,0483 -0,48

Таблица 24 Метаболиты, отличающиеся высоко достоверной и достоверной позитивной и негативной регуляцией, при сравнении страдающих диабетом пациентов со стадией 5 и стадией 3 ХБП Метаболит Класс р-значение log-изменение (D5/D3) C5-DC (C6-OH) AC 2,89E-07 0,97 Креатинин BN 1,03E-06 0,52 SDMA BN 5,67E-06 0,41 Кетоглутаровая кислота OA 1,14E-05 0,46 SDMA/Arg Соотношение 3,09E-05 0,51 С0 AC 7,11E-05 -0,25 Cit/Arg Соотношение 0,0001 0,31 С9 AC 0,0002 0,38 Trp AA 0,0004 -0,29 общий DMA BN 0,0004 0,22 GCA BA 0,0013 0,71 цис-C17:2w7 FFA 0,0014 -0,15 Tyr/Phe Соотношение 0,0018 -0,14 цис-C17:2w7 TFA 0,0028 -0,16 цис-C15:1w5 TFA 0,0083 -0,13 цис-C17:2w9 TFA 0,0083 -0,15 C6:0 FFA 0,0085 -0,07 lysoPC a C20:3 PC 0,0129 -0,16 цис-C17:2w9 FFA 0,0143 -0,13 C3 AC 0,0146 -0,25 цис-C15:1w5 FFA 0,0158 -0,11 цис-С16:1w13 TFA 0,0158 0,23 PC ае C34:3 PC 0,0162 -0,14 цис-C17:2w6 TFA 0,0175 -0,23 Cit AA 0,0180 0,19 PC ае C44:4 PC 0,0221 -0,10 Pro AA 0,0241 0,14 TCA BA 0,0257 1,32 TDCA BA 0,0337 1,11 PC ае C42:3 PC 0,0352 -0,10 C23:0 TFA 0,0378 -0,14 lysoPC a C14:0 PC 0,0455 -0,24 C8:1 AC 0,0462 0,24 lysoPC а C18:1 PC 0,0468 -0,14

Таблица 25 Метаболиты, отличающиеся высоко достоверной и достоверной позитивной и негативной регуляцией, при сравнении не страдающих диабетом пациентов со стадией 4 и стадией 3 ХБП Метаболит Класс р-значение log-изменение (ND4/ND3) C5-DC (C6-OH) AC 0,0005 0,72 Креатинин BN 0,0005 0,38 С18:2 AC 0,0009 0,30 Met-SO BN 0,0009 0,24 C10 AC 0,0024 0,30 С9 AC 0,0038 0,41 Orn/Arg Соотношение 0,0039 0,16 PC ае С44:6 PC 0,0049 0,15 С8 AC 0,0060 0,98 С18:1 AC 0,0075 0,13 общий DMA BN 0,0077 0,19 С10:1 AC 0,0087 0,66 PC aa С42:0 PC 0,0104 0,13 PC ае С32:2 PC 0,0117 0,11 12S-HETE BA 0,0123 -0,84 РСааС42:1 PC 0,0138 0,14 цис-C18:1w7 TFA 0,0144 0,11 Cit/Arg Соотношение 0,0144 0,14 SM C26:1 SM 0,0180 0,07 РС ае С32:1 PC 0,0187 0,09 Кетоглутаровая кислота OA 0,0188 0,21 С5 AC 0,0189 0,19 C5:1-DC AC 0,0197 0,40 SM C16:0 SM 0,0208 0,07 цис-C20:2w6 FFA 0,0211 0,10 Cit AA 0,0229 0,15 цисс-C18:1w7 FFA 0,0243 0,15 Orn AA 0,0269 0,14 Asn AA 0,0302 0,08 Лактат OA 0,0306 -0,14 цис-C18:2w6 FFA 0,0313 0,11 PC aa C30:2 PC 0,0313 0,09 SM C16:1 SM 0,0320 0,08 MetSO/Met Соотношение 0,0325 0,24 Phe AA 0,0340 0,09 SDMA/Arg Соотношение 0,0352 0,27 PC aa C42:2 PC 0,0359 0,11 SDMA BN 0,0375 0,19 PC aa C38:0 PC 0,0396 0,12 цис-C18:2w6 TFA 0,0396 0,07 C8:1 AC 0,0402 0,37 Trp AA 0,0412 -0,13 ADMA BN 0,0430 0,10 SM (OH)C16:1 SM 0,0491 0,08 Tyr/Phe Соотношение 0,0491 -0,09

Таблица 26 Метаболиты, отличающиеся высоко достоверной и достоверной позитивной и негативной регуляцией, при сравнении не страдающих диабетом пациентов со стадией 5 и стадией 4 ХБП Метаболит Класс р-значение log-изменение (ND5/ND4) SM (ОН) С22:2 SM 8,21E-05 -0,20 Cit/Arg Соотношение 0,0002 0,24 PC ае С38:3 PC 0,0002 -0,17 PC ае С38:2 PC 0,0003 -0,21 PC ае С36:3 PC 0,0005 -0,17 Глюкозой SU 0,0005 1,13 С18:2 AC 0,0007 -0,29 C5-DC (C6-OH) AC 0,0008 0,29 РС ае С38:1 PC 0,0012 -0,21 SM (OH)C22:1 SM 0,0013 -0,19 Креатинин BN 0,0014 0,30 PC ае С40:4 PC 0,0016 -0,14 PC ае С34:2 PC 0,0017 -0,17 PC ае С42:3 PC 0,0020 -0,18 SDMA BN 0,0022 0,25 PC aa С38:3 PC 0,0024 -0,16 PC aa С36:3 PC 0,0024 -0,15 Trp AA 0,0025 -0,24 Met AA 0,0026 -0,19 РСаеС32:1 PC 0,0026 -0,12 PC aa C34:3 PC 0,0032 -0,18 PC ае С40:3 PC 0,0033 -0,12 PC ае С44:3 PC 0,0036 -0,16 SM С20:2 SM 0,0039 -0,17 С9 AC 0,0040 0,30 С21:0 TFA 0,0042 -0,15 PC aa C34:4 PC 0,0044 -0,24 PC ае С36:2 PC 0,0050 -0,14 PC aa C32:2 PC 0,0051 -0,16 SDMA/Arg Соотношение 0,0052 0,28 His AA 0,0053 -0,14 PC aa С36:2 PC 0,0058 -0,15 PC ае С42:2 PC 0,0058 -0,17 SM C16:1 SM 0,0060 -0,12 PC aa C40:2 PC 0,0063 -0,11 PC ае C36:4 PC 0,0067 -0,14 PC ае C42:4 PC 0,0073 -0,13 SM C24:1 SM 0,0074 -0,11 Ala AA 0,0077 -0,16 PC aa С34:2 PC 0,0077 -0,12 общий DMA BN 0,0084 0,21 SM C18:1 SM 0,0084 -0,15 PC aa С40:3 PC 0,0094 -0,12 PC ае C34:3 PC 0,0096 -0,19 PC ае C44:6 PC 0,0102 -0,14 PC ae C40:1 PC 0,0106 -0,15 PC aa C36:1 PC 0,0108 -0,12 PC aa C36:0 PC 0,0109 -0,12 SM (OH)C24:1 SM 0,0113 -0,13 PC ае C40:2 PC 0,0116 -0,13 Gln AA 0,0116 -0,09 lysoPC a C18:2 PC 0,0129 -0,24 PC ae C32:2 PC 0,0133 -0,11 Phe AA 0,0135 -0,13 C16 AC 0,0136 -0,10 PC ae C40:5 PC 0,0137 -0,12 PC aa C38:4 PC 0,0140 -0,15 PC ae C36:1 PC 0,0145 -0,11 PC aa C38:5 PC 0,0159 -0,14 Tyr AA 0,0164 -0,18 PC ae C38:0 PC 0,0168 -0,18 C23:0 TFA 0,0172 -0,16 PC aa C32:3 PC 0,0180 -0,14 CO AC 0,0182 -0,22 lysoPC a C16:0 PC 0,0184 -0,15 PC aa C36:6 PC 0,0185 -0,21 lysoPC a C18:0 PC 0,0187 -0,19 Glu AA 0,0191 -0,34 PC ae C38:6 PC 0,0193 -0,14 PC ae C38:4 PC 0,0199 -0,12 PC aa C28:1 PC 0,0218 -0,13 PC aa C36:4 PC 0,0228 -0,13 PC ae C36:5 PC 0,0233 -0,13 zцис-C18:4w3 TFA 0,0239 -0,51 PC aa C42:0 PC 0,0246 -0,11 C14:2 AC 0,0255 -0,10 PC ae C40:6 PC 0,0265 -0,14 SM (OH)C16:1 SM 0,0266 -0,10 PC ae C34:1 PC 0,0272 -0,10 Arg AA 0,0274 -0,11 C18 AC 0,0276 -0,11 PC ae C36:0 PC 0,0281 -0,09 SM C14:0 SM 0,0289 -0,12 PC aa C38:1 PC 0,0291 -0,12 SM C24:0 SM 0,0294 -0,10 SM C18:0 SM 0,0297 -0,10 PC ae C44:4 PC 0,0298 -0,12 SM C26:1 SM 0,0302 -0,09 Lys AA 0,0303 -0,11 PC ae C38:5 PC 0,0304 -0,11 PC aa C42:4 PC 0,0330 -0,10 lysoPC a C17:0 PC 0,0332 -0,18 PC aa C42:1 PC 0,0344 -0,12 Thr AA 0,0347 -0,13 lysoPCaC16:1 PC 0,0368 -0,19 PC ae C44:5 PC 0,0384 -0,11 PC ae C30:1 PC 0,0387 -0,12 SM C22:3 SM 0,0392 -0,11 SM C26:0 SM 0,0395 -0,09 PC ae C34:0 PC 0,0405 -0,09 PC aa C42:5 PC 0,0440 -0,08 PC ae C30:0 PC 0,0443 -0,10 цис-C20:3w6 TFA 0,0457 -0,12 lysoPC a C28:1 PC 0,0466 -0,28 H4 SU 0,0466 0,28 C18:0 TFA 0,0473 -0,08 Asn AA 0,0482 -0,09 C18:1 АС 0,0482 -0,12 С14:1 АС 0,0482 -0,10 PC ae С42:5 PC 0,0492 -0,08 PC ae C30:2 PC 0,0499 -0,11

Таблица 27 Метаболиты, отличающиеся высоко достоверной и достоверной позитивной и негативной регуляцией, при сравнении не страдающих диабетом пациентов со стадией 5 и стадией 3 ХБП Метаболит Класс р-значение log-изменение (ND5/ND3) C5-DC (C6-OH) AC 1,42E-07 1,00 Креатинин BN 1,67E-06 0,67 Trp AA 2,03E-06 -0,38 Cit/Arg Соотношение 2,65E-06 0,38 SDMA BN 1,59E-05 0,43 Orn/Arg Соотношение 2,40E-05 0,22 SDMA/Arg Соотношение 2,94E-05 0,55 С9 AC 4,56E-05 0,72 общий DMA BN 6,36E-05 0,40 Кетоглутаровая кислота OA 0,0002 0,36 PC aa С34:4 PC 0,0003 -0,38 Tyr/Phe Соотношение 0,0005 -0,16 lysoPC a C20:3 PC 0,0009 -0,24 Cit AA 0,0010 0,27 lysoPC a C14:0 PC 0,0012 -0,44 MetSO/Met Соотношение 0,0016 0,32 lysoPC a C20:4 PC 0,0021 -0,24 C8 AC 0,0028 0,96 Ala AA 0,0030 -0,16 SM C22:3 SM 0,0031 -0,18 C5:1-DC AC 0,0034 0,50 Met-SO BN 0,0034 0,18 SM (OH)C22:1 SM 0,0037 -0,16 Tyr AA 0,0042 -0,19 lysoPC a C18:2 PC 0,0048 -0,21 Met AA 0,0049 -0,15 PC aa C36:6 PC 0,0057 -0,23 PC aa C36:4 PC 0,0057 -0,18 lysoPC a C28:1 PC 0,0057 -0,35 SM (OH) C22:2 SM 0,0063 -0,14 PC aa C38:4 PC 0,0063 -0,18 Arg AA 0,0064 -0,13 цис-C11:1w5 FFA 0,0066 -0,61 lysoPC а C16:0 PC 0,0069 -0,15 PC ae C40:1 PC 0,0075 -0,13 PC ae C38:2 PC 0,0078 -0,14 PC ae C38:1 PC 0,0079 -0,16 PC ae C38:0 PC 0,0080 -0,18 Lys AA 0,0091 -0,13 lysoPC а C16:1 PC 0,0097 -0,22 SM C20:2 SM 0,0104 -0,18 Thr AA 0,0118 -0,14 ADMA BN 0,0120 0,11 lysoPC a C18:0 PC 0,0126 -0,17 His AA 0,0126 -0,10 PC ae C36:4 PC 0,0126 -0,14 Val AA 0,0153 -0,16 PC ae C38:3 PC 0,0167 -0,15 PC ae C38:4 PC 0,0172 -0,13 PC aa C38:5 PC 0,0176 -0,14 C23:0 TFA 0,0190 -0,14 PC ae C42:2 PC 0,0191 -0,13 C21:0 TFA 0,0194 -0,11 PC ae C42:3 PC 0,0203 -0,11 12S-HETE BA 0,0205 -0,64 PC aa C34:3 PC 0,0212 -0,17 Лактат OA 0,0228 -0,15 цис-C22:1w9 TFA 0,0241 0,13 PC ae C36:3 PC 0,0247 -0,12 lysoPC a C18:1 PC 0,0249 -0,14 транс-C18:1w9 FFA 0,0264 0,29 цис-C18:4w3 TFA 0,0277 -0,59 PC ae C40:4 PC 0,0291 -0,11 PC ae C44:3 PC 0,0298 -0,12 PC aa C36:3 PC 0,0322 -0,13 SM (OH)C24:1 SM 0,0339 -0,10 CO AC 0,0342 -0,19 PC aa C36:5 PC 0,0366 -0,18 Leu AA 0,0367 -0,16 PC ae C36:5 PC 0,0376 -0,13 цис-C20:5w3 (EPA) TFA 0,0392 -0,21 цис-C18:1w7 FFA 0,0402 0,17 PC aa C38:3 PC 0,0406 -0,14 Xle AA 0,0413 -0.15 PC ae C42:4 PC 0,0431 -0,09 Цис-C20:3w6 TFA 0,0450 -0,16

Практическая применимость

Настоящее изобретение делает возможным осуществлять прогнозирование и диагностирование болезни почек улучшенным образом и на более ранней стадии заболевания и позволяет выявлять с большей чувствительностью патологические изменения в почке. Фактически биомаркеры, предлагаемые в изобретении, легко выявлять в биологических образцах, в частности, в крови и/или моче, их уровни в значительной степени связаны со степенью заболевания/повреждения почки и их уровни изменяются. Кроме того, биомаркеры, предлагаемые в изобретении, ценны также для решения фундаментальной задачи, поскольку с их помощью можно правильно оценивать нефротоксичность либо на созданных на животных моделях, либо на фазе I клинических исследований. Другими словами, их можно применять также для оценки доклинической и клинической нефротоксичности, т.е. применять также на очень ранней стадии разработки фармацевтических средств, а именно на созданных на животных моделях или на фазе I клинических испытаний.

На их основе можно приготавливать наборы, пригодные для того, чтобы способствовать более надежному диагностированию начала болезни почек, в частности ХБП и ДН, и мониторинга их развития.

Перечень ссылок

Boron W.F., Boulpaep E.L., Medical Physiology: A Cellular and Molecular Approach, 1-ое изд., изд-во Philadelphia: Elsevier Science; 2003 cc.737-747, 757-765, 769-772, 793-795.

Star R., Hostetter Т., Hortin G.L., New Markers for Kidney Disease, Clin Chem., 48(9), 2002, cc.1374-1376.

Barr D.B., Wilder L.C., Caudill S.P., Gonzalez A.J., Needham L.L., Pirkle J.L., Urinary creatinine concentrations in the U.S. population: implications for urinary biologic monitoring measurements. Environ Health Perspect. 13(2), 2005, cc.192-200.

Herget-Rosenthal S., van Wijk J.A., Brocker-Preuss M., Bokenkamp A., Increased urinary cystatin С reflects structural and functional renal tubular impairment independent ofglomerular filtration rate, Biochem. 40(13-14), 2007, cc.946-951.

Basi S., Fesler P., Mimran A., Lewis J.B., Microalbuminuria in Type 2 Diabetes and Hypertension: A marker, treatment, or innocent bystander? Diabetes Care, 31(2), 2008, cc.194-201.

WolfG., Ritz E., Diabetic Nephropathy in Type 2 Diabetes Prevention and Patient Management, J Am Soc Nephrol, 14(5), 2003, cc.1396-1405.

Comper W.D., Osicka T.M. Detection of urinary albumin. Adv Chronic Kidney Dis., 12(2), 2005, cc.170-176.

Vallance P., Leone A., Calver A., Collier J., Moncada S., Accumulation of an endogenous inhibitor of nitric oxide synthesis in chronic renal failure. Lancet, 339(8793), 1992, cc.572-575.

Wahbi N., Dalton R.N., Turner C., Denton M., Abbs I., Swaminathan R., Dimethylarginines in chronic renal failure, J Clin Pathol., 54(6), 2001, cc.470-473.

Fleck С., Janz A., Schweitzer F., Karge E., Schwertfeger M., Stein G., Serum concentrations of asymmetric (ADMA) and symmetric (SDMA) dimethylarginine in renal failure patients, Kidney Int Suppl., 78, 2001, cc.14-18.

Martens-Lobenhoffer J., Bode-Boger S.M., Chromatographic-mass spectrometric methods for the quantification of L-arginine and its methyled metabolitrs in biological fluids, J Chromatogr В Analyt Technol Biomed Life Sci., 15, 851(1-2), 2007, cc.30-41.

Zatz R., Baylis C., Chronic nitric oxide inhibition model six years on, Hypertension, 32(6), 1998, cc.958-964.

Fouque D., Holt S., Guebre-Egziabher F., Nakamura K., Vianey-Saban C., Hadj-Aïssa A., Hoppel C.L., Kopple J.D., Relationship between serum carnitine, acylcarnitines, and renal function in patients with chronic renal disease, J Ren Nutr., 16(2), 2006, cc.125-131.

Loughrey C.M., Young I.S., Lightbody J.H., McMaster D., McNamee P.Т., Trimble E.R., Oxidative stress in haemodialysis, QJM, 87(11), 1994, cc.679-683.

На Н., Kim K.H., Role of oxidative stress in the development of diabetic nephropathy. Kidney Int Suppl., 51, 1995, cc.18-21. Обзор.

Mashima R., Nakanishi-Ueda Т., Yamamoto Y. Simultaneous determination of methionine sulfoxide and methionine in blood plasma using gas chromatography-mass spectrometry. Anal Biochem., 313(1), 2003, cc.28-33.

Yokoyama Т., Kamijo-Ikemori A., Sugaya Т., Hoshino S., Yasuda Т., Kimura K., Urinary excretion of liver type fatty acid binding protein accurately reflects the degree oftubuloinerstitial damage. Am J Pathol. 2009; Epub ahead of print (электронная версия до печати).

Komaba Н., Fukagawa M., Disturbance of phosphorus metabolism in chronic kidney disease, Clin Calcium, 19(2), 2009, cc.166-172.

Friedman D.J., Talbert M.E., Bowden D.W., Freedman B.I., Mukanya Y., Enjyoji K., Robson S.C., Functional ENTPD1 polymorphisms in African Americans with diabetes and end-stage renal disease. Diabetes, 58(4), 2009, cc.999-1006.

Atamer A., Kocyijit Y., Ecder S.A., Seiek S., Ilhan N., Ecder Т., Atamer Y., Effect of oxidative stress on antioxidant enzyme activities, homocysteine and lipoproteins in chronic kidney disease, J Nephrol., 21(6), 2008, cc.924-930.

Reich H.N., Oudit G.Y., Penninger J.M., Scholey J.W., Herzenberg A.M., Decreased glomerular and tubular expression of ACE2 in patients with type 2 diabetes and kidney disease. Kidney Int., 74(12), 2008, cc.1610-1616.

Gutiérrez O.M., Mannstadt M., Isakova Т., Rauh-Hain J.A., Tamez Н., Shah A., Smith K., Lee Н., Thadhani R., Jüppner Н., WolfM., Fibroblast growth factor 23 and mortality among patients undergoing hemodialysis, N Engi J Med., 359(6), 2008, cc.584-592.

Zhou H., Cheruvanky A., Matsumoto Т., Hiramatsu N., Cho M.E., Berger A., Leelahavanichkul A., Doi K., Chawla L.S., Illei G.G., Kopp J.B., Balow J.E., Austin H.A. 3-ий, Yuen P.S., Star R.A., Urinary exosomal transcription factors, a class of biomarkers for renal disease. Kidney Int., 74(5), 2008, сс.613-621.

Honda H., Oureshi A.R., Heimbiirger О., Barany P., Wang K, Pecoits-Filho R., Stenvinkel P., Lindholm В., Serum albumin, C-reactive protein, interleukin 6, and fetuin a as predictors of malnutrition, cardiovascular disease, and mortality in patients with ESRD, Am J Kidney Dis., 47, 2006, сс.139-148.

National Kidney Foundation, K/DOQI clinical practice guidelines for chronic kidney disease.

http://www.kidney.org/professionals/KDOQI/guidelines_ckd/toc.htm Online 2009-05-15.

Sakane N., Fujiwara S., Domichi M., Tsuzaki K., Matsuoka Y., Hamada Т., Saiga Y., Kotani K., Oxidative stress, inflammation, and atherosclerotic changes in retinal arteries in the Japanese population; results from the Mima study, Endocr J., 55(3), 2008, сс.485-488.

Rolo A.P., Palmeira C.M., Diabetes and mitochondrial function: role of hyperglycemia and oxidative stress, Toxicol Appi Pharmacol. 212(2), 2006, сс.167-178.

На H., Hwang I.A., Park J.H., Lee H.B., Role of reactive oxygen species in the pathogenesis of diabetic nephropathy. Diabetes Res Clin Pract, 82(1), 2008, сс.42-45. Обзор.

Sampanis Ch., Management of hyperglycemia in patients with diabetes mellitus and chronic renal failure, Hippokratia. 12(1), 2008, сс.22-27.

Williams R., Van Gaal L., Lucioni C., CODE-2 Advisory Board. Assessing the impact of complications on the costs of Type II diabetes, Diabetologia, 45(7), 2002, S13-7.

Wen С.P., Cheng T.Y., Tsai M.K., Chang Y.C., Chan H.T., Tsai S.P., Chiang P.H., Hsu C.C., Sung P.K., Hsu Y.H., Wen S.F., All-cause mortality attributable to chronic kidney disease: a prospective cohort study based on 462 293 adults in Taiwan, Lancet, 371(9631), 2008, сс.2173-2182.

Massi-Benedetti M., CODE-2 Advisory Board. The Cost of Diabetes Type II in Europe The CODE-2 Study, Diabetologia, 45(7), 2002, сс.1-4.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к нефрологии и относится к применению комбинации метаболитов, включающей по меньшей мере две аминокислоты, по меньшей мере два ацилкарнитина и по меньшей мере два биогенных амина, в качестве массива биомаркеров, предназначенного для оценки хронической болезни почек в образце крови. Также предложены способ и набор биомаркеров для оценки хронической болезни почек у млекопитающего. Группа изобретений обеспечивает точную и раннюю диагностику почечных заболеваний путем исследования указанных специфических биомаркеров в образце крови, полученном от пациента. 3 н. и 6 з.п. ф-лы, 14 ил., 27 табл., 1 пр.

1. Применение комбинации метаболитов, включающей по меньшей мере две аминокислоты, по меньшей мере два ацилкарнитина и по меньшей мере два биогенных амина, в качестве массива биомаркеров, предназначенного для оценки хронической болезни почек в образце крови.

2. Способ оценки хронической болезни почек у млекопитающего, включающий измерение в образце крови, полученном от пациента, количества метаболитов по меньшей мере двух аминокислот, по меньшей мере двух ацилкарнитинов и по меньшей мере двух биогенных аминов, причем повышение или уменьшение их количества при сравнении между образцами пациентов с различными стадиями болезни почек свидетельствует об изменении их метаболитической активности, т.е. о развитии процесса заболевания почек.

3. Способ по п. 2, дополнительно включающий измерение в биологическом образце соотношения продукт/субстрат, связанное с ферментативной реакцией, предпочтительно соотношение SDMA/аргинин, соотношение цитруллин/аргинин, соотношение орнитин/аргинин и/или соотношение метионинсульфоксид/метионин.

4. Набор биомаркеров, как определено в п. 1 или 2, в котором аминокислоты выбирают из группы, включающей аланин Ala, аргинин Arg, аспарагин Asn, аспартат Asp, цитруллин Cit, глутамин Gln, глутамат Glu, глицин Gly, гистидин His, изолейцин Ile, лейцин Leu, лизин Lys, метионин Met, орнитин Orn, фенилаланин Phe, пролин Pro, серин Ser, треонин Thr, триптофан Trp, тирозин Tyr, валин Val; ацилкарнитины выбирают из группы, включающей карнитин (свободный) C0, ацетилкарнитин C2, пропионилкарнитин C3, пропеноилкарнитин C3:1, малонилкарнитин C3-DC, метилмалонилкарнитин C3-DC-M, гидроксипропионилкарнитин C3-OH, бутирилкарнитин/изобутирилкарнитин C4, бутеноилкарнитин С4:1, фумарилкарнитин (деканоилкарнитин) C4:1-DC (С10), 3-гидроксибутирилкарнитин C4-OH, изовалерилкарнитин/2-метилбутирилкарнитин/валерилкарнитин C5, тиглилкарнитин/3-метилкротонилкарнитин C5:1, глютаконилкарнитин/мезаконилкарнитин (ундеканоилкарнитин) C5:1-DC (C11), глютарилкарнитин C5-DC (С6-OH), метилглютарилкарнитин C5-M-DC, 3-гидроксиизовалерилкарнитин/3-гидрокси-2-метилбутирил С5-ОН, гексаноилкарнитин [капроилкарнитин] С6, гексеноилкарнитин С6:1, гидроксигексаноилкарнитин [гидроксикапроилкарнитин] С6-ОН, гептаноилкарнитин [энантилкарнитин] C7, пиметилкарнитин C7-DC, октаноилкарнитин [каприлилкарнитин] С8, октеноилкарнитин С8:1, октандиоилкарнитин [суберилкарнитин] C8-DC, нонаноилкарнитин [пеларгонилкарнитин] С9, деканоилкарнитан [каприлкарнитин](фумарилкарнитин) C10 (C4:1-DC), деценоилкарнитин C10:1, декадиеноилкарнитин C10:2, декандиоилкарнитин [себацилкарнитин] C10-DC, ундеканоилкарнитин (глутаконилкарнитин/мезаконилкарнитин) C11 (C5:1-DC), додеканоилкарнитин [лаурилкарнитин] С12, додеценоилкарнитин C12:1, додекандиоилкарнитин C12-DC, тетрадеканоилкарнитин [миристилкарнитин] C14, тетрадеценоилкарнитин [миристолеилкарнитин] С14:1, 3-гидрокситетрадеценоилкарнитин [3-гидроксимиристолеилкарнитин] С14:1-OH, тетрадекадиеноилкарнитин С14:2-OH, 3-гидрокситетрадекадиеноилкарнитин С14:2-ОН, 3-гидрокситетрадеканоилкарнитин [гидроксимиристилкарнитин] C14-OH, гексадеканоилкарнитин [пальмитоилкарнитин] С16, гексадеценоилкарнитин [пальмитолеилкарнитин] C16:1, 3-гидроксигексадеценоилкарнитин [3-гидроксипальмитолеилкарнитин] С16:1-OH, гексадекадиеноилкарнитин С16:2, 3-гидроксигексадекадиеноилкарнитин С16:2-OH, 3-гидроксигексадеканоилкарнитин [3-гидроксипальмитоилкарнитин] C16-OH, октадеканоилкарнитин [стеарилкарнитин] C18, октадеценоилкарнитин [олеилкарнитин] C18:l, 3-гидроксиоктадеценоилкарнитин [3-гидроксиолеилкарнитин] С18:1-OH, октадекадиеноилкарнитин [линолеилкарнитин] С18:2, 3-гидроксиоктадекадиеноилкарнитин [3-гидроксилинолеилкарнитин] C18:2-OH, и биогенные амины выбирают из группы, включающей асимметричный диметиларгинин ADMA, симметричный диметиларгинин SDMA, общий диметиларгинин общий DMA, гистамин, метионинсульфоксид Metso, кинуренин, гидроксикинуренин, путресцин, спермидин, спермин, серотонин, креатинин.

5. Способ по п. 2 или 3, дополнительно включающий измерение в биологическом образце количества одного или нескольких метаболитов, выбранных из группы, включающей полиамины, фосфатидилхолины, восстанавливающие моно - и олигосахариды, сфингомиелины, эйкозаноиды, желчные кислоты и промежуточные продукты энергетического метаболизма.

6. Способ по п. 2 или 3, в котором аминокислоты выбирают из Cit, Phe, Asn, Trp, His, Orn, Tyr, Met, Ala, Arg, Thr, Lys, Gln, Ser, Val, Glu и Pro, ацилкарнитины выбирают из C0, C5-DC(C6-OH), C5:1-DC, C8, C9, С10, C10:l, C14:l и C18:l, биогенные амины выбирают из MetSO, креатинина, SDMA, ADMA, общего DMA и серотонина, а соотношения выбирают из соотношения SDMA/аргинин, соотношения цитруллин/аргинин, соотношения орнитин/аргинин и/или соотношения метионинсульфоксид/метионин.

7. Способ по п. 2 или 3, в котором измерение основано на количественном аналитическом методе, предпочтительно хроматографии, спектроскопии и масс-спектрометрии.

8. Способ по п. 7, в котором хроматография представляет собой газовую хроматографию (ГЖ), жидкостную хроматографию (ЖХ), жидкостную хроматографию высокого разрешения (ЖХВР) и сверхпроизводительную жидкостную хроматографию (UPLC); спектроскопия представляет собой спектроскопию в УФ/видимом, ИК спектральном диапазоне (УФ/Vis, ИК) и ЯМР; а масс-спектрометрия представляет собой ESI-QqQ, ESI-QqTOF, MALDI-QqQ, MALDI-QqTOF и MALDI-TOF-TOF.

9. Способ по п. 2 или 3, в котором хроническая болезнь почек (ХБП) представляет собой диабетическую нефропатию (ДН).