СПОСОБ ФЕРРИМАГНИТО-ТЕРМОХИМИОТЕРАПИИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ ОПУХОЛЕЙ КОМБИНАЦИЯМИ МАГНИТОУПРАВЛЯЕМЫХ НАНОПРЕПАРАТОВ С ВИЗУАЛИЗАЦИЕЙ ОНКОГЕНЕЗА, ОПРЕДЕЛЕНИЕМ ТЕРАПИИ, ПРЕДПОЧТИТЕЛЬНОЙ В РЕЖИМЕ РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ, И МОНИТОРИНГОМ РЕЗУЛЬТАТОВ ЛЕЧЕНИЯ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ Российский патент 2015 года по МПК G09B23/28 B82B1/00 

Способ ферримагнитно-термохимиотерапии (ФТ) злокачественных опухолей комбинациями магнитоуправляемых нанопрепаратов (КМН) с визуализацией онкогенеза, определением терапии, предпочтительной в режиме реального времени (ТП), и мониторингом результатов лечения в эксперименте включает

- получение контрастных магнитно-резонансных томографических изображений онкогенеза (КМ-РТИ);

- определение ТП;

- подавление пролиферации опухолевых клеток в процессе ФТ;

- долечивание инфильтративных опухолей комбинациями цитостатических препаратов (КЦП).

Изобретение относится к экспериментальной медицине и может быть использовано при диагностике онкологических заболеваний контрастной магнитно-резонансной томографией (МРТ) с применением комбинаций МРТ негативных контрастных нанопрепаратов (МРТ-НКН) с контрастными МРТ позитивными препаратами и ФТ опухолей различной локализации активированными КМН с долечиванием инфильтративных опухолей КЦП.

Одним из способов ранней диагностики опухолей является получение КМ-РТИ системным введением комбинаций декстранферрита (ДФ) или цитратферрита (ЦТФ) с магневистом [1] (аналог).

Недостатки аналога:

- наночастицы ДФ и ЦТФ, введенные системно, концентрируются в органах сердечнососудистой системы (ССС) и ретикуло-эндотелиальной системы (РЭС);

- в процессе ФТ из-за высокой удельной абсорбции энергии (УАЭ) наночастицы ДФ и ЦТФ нагреваются переменным магнитным полем (ПеМП) и разрушают органы ССС и РЭС, это приводит к уменьшению противоопухолевого эффекта [2-8].

Известны способы терапии опухолей с применением цитостатических препаратов: аденокса (АО), метокса (МО), мелфалана (МФ), сарколизина (СЛ), цисплатина (ЦП), митоксантрона (МК), дакарбазина (ДК), доцетаксела (ДТ) и циклофосфана (ЦФ) [9-12] (аналог).

Недостатки аналога:

- отсутствие контроля распределения КЦП в организме животного в реальном времени (выжидательная тактика), приводящее к накоплению КЦП в ССС и РЭС, к уменьшению противоопухолевого эффекта [9-12];

- неполный клиренс организма от опухолевых клеток, приводящий к метастазированию и рецидивам;

- МФ и СЛ гидролизуются в водных средах [9];

- слабо действуют на солидные формы опухолей; карциномы, меланомы, гепатомы, лейкозы [10-12];

- неконцентрированные и нефиксированные в опухоли (рассеянные в организме) АО, МО, МФ, СЛ, ЦП, МК, ДК, ДТ и ЦФ концентрируются в ССС и органах РЭС от 20 до 40%, вызывают токсикоз, миелодепрессию и понижают терапевтический эффект [11, 12].

Известен способ индукционной гипертермии злокачественных опухолей [5-7] (аналог).

Недостатки аналога:

- неконтролируемое распределение КМН в организме животных, невозможность объективного определения ТП понижают терапевтический эффект.

Известен способ термохимиотерапии злокачественных опухолей [4, 8] (аналог).

Недостатки аналога:

- неконтролируемое распределение КМН в организме животных и невозможность объективного определения ТП понижают терапевтический эффект.

Наиболее близким к предлагаемому способу является способ магнитогидродинамической термохимиотерапии злокачественных опухолей нанопрепаратами с магнитно-резонансным мониторингом, при котором температура внутри опухоли повышается от +47 - до +70°C. После завершения нагрева содержимое опухоли удаляют. Через 6 сеансов магнито-гидродинамической термохимиотерапии опухоли не пальпируются. Применение прототипа приводит к полной регрессии опухолей у 40% животных с увеличением продолжительности жизни до 310% [2, 3] (прототип).

Недостатки прототипа:

- неконтролируемое распределение КМН в организме животных и невозможность объективного определения ТП, понижают терапевтический эффект;

- в опухолевых тканях наблюдается неуправляемое распределение КМН, приводящее к перегреву одних и недостаточному нагреву других участков опухоли и лишь к частичному некрозу опухолевых клеток, проникших глубоко в здоровые ткани, это понижает терапевтический эффект;

- на поздних стадиях онкогенеза, после 2-3 месячной ремиссии, у большинства мышей наблюдают рецидивы лимфолейкоза Р388, карциномы Эрлиха, карциномы легких Льюис, аденокарциномы молочной железы Ca 755 и меланомы В 16, как результат инвазии и метастазирования инфильтративных опухолей [2, 3];

- цитостатические средства, сарколизин и мелфалан, гидролизуются при нагревании в заявленных условиях, поэтому не во всех опухолевых клетках происходит алкилирование ДНК [11];

- некротические массы и остатки препаратов, отсасывают не полностью, этим вызывают токсикоз, нарушают гомеостаз, снижают иммунитет, повышают острую и хроническую токсичность, это приводит к понижению терапевтического эффекта, после 3-6 месячной ремиссии наступает смерть, как результат нарушения гомеостаза, снижения иммунитета, инвазии, метастазирования и рецидивов опухолей [2, 3].

Задачей изобретения является устранение указанных недостатков: оптимизация диагностики, повышение терапевтического эффекта и обеспечение безопасности при лечении млекопитающих.

Указанная задача решается следующим образом:

- на 3-8 день после имплантации опухолевых клеток в хвостовую вену мышам вводят от 30 до 350 мкл 0,5% золя МРТ-НКН общей формулы,

где 0<y<1, 0<x<1, 0<z<1, L³⁺ - лантаноид [13, 14], (диаметр частиц 6-600 нм, в качестве покрытия используют цитрат ионы), удельная намагниченность (M_s) до 0,2 А·м²/кг при температуре +45°C в поле 28,3 мТл, с УАЭ 0,1-20 Вт/г Fe при температуре +45°C в поле (частота 0,01-1,0 МГц, напряженность 7,2 кА/м-12,0 кА/м, мощность 0,15-1,5 кВт) для раннего выявления опухолей, метастазов и границ инвазии опухолевых клеток;

- место введения препарата промывают теплой водой, протирают досуха, животное содержат при температуре +25-+28°C в стандартных условиях от 30 минут до 30 часов, внутривенно вводят 10-20 мкл магневиста, через 6 минут животное размещают в биоспектротомографе BIOSPEC ВС 70/30 USR (Bruker) и проводят КМ-РТ сканирование тела в режимах Т₁-взвешенных {500/15 [время повторения, мсек/время эхо, мсек] и Т₂ взвешенных (1900/80) спин-эхо и Т₂ взвешенных градиент-эхо (500/15)} последовательностей. Измеряют интенсивность сигнала и проводят визуальный анализ структуры опухоли и внутренних органов (лимфатические сосуды, дренирующие опухоль, лимфатические узлы, позвоночник, кости, легкие, почки, мочевой пузырь, селезенка и печень), которые обычно поражаются метастазами лимфолейкоза Р388; карциномы Эрлиха, карциномы легких Льюис, аденокарциномы лочной железы Са 755 и меланомы В 16. Получают КМ-РТИ, отражающие развитие опухоли, (Фиг. 1_{1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10}) и Фиг. 1′ (а, b, с, d, е, f); 4 (а, б, в); 5 (а, б); 11 (а, б); 12 (а, б); 13 (а, б); 14 (а, б, в).

Перемещают животное в ПеМП электронно-сенсорного устройства (ЭССУ) [17, 18]. Проводят электронно-сенсорное сканирование тела животного (ЭСС), перемещают сенсор по поверхности опухоли, и всего тела, от органа к органу, в режимах последовательного взаимного проецирования сенсора с тканями опухоли и с тканями исследуемых органов (Фиг. 2, 3). В процессе сканирования тела животного сенсор излучает ПеМП и принимает на комбинаторных частотах электромагнитные отклики в непрерывном режиме. Операторы контролируют время приема каждого отклика от опухоли, органов, биологических жидкостей и тканей. По величинам откликов, регистрируемых компьютером от 2 секунд до 120 секунд, определяют содержание КМН в опухоли, органах, биологических жидкостях и тканях в условных единицах (уе). Полученные результаты используют в формуле (3) при определении ТП [19].

где - КМН_{опухоли} - отклик КМН уе опухоли;

- _суммаКМН_{органов} - суммарный отклик КМН уе _{органов};

- ТП - терапия предпочтительная для данного животного в режиме реального времени;

- при ТП≥10 - ферримагнитно-термохимиотерапия. Например, по результатам ЭСС тела животного электромагнитные отклики опухоли ~9540 уе, печени ~42 уе, селезенки ~45, почек ~23, мочевого пузыря ~30, суммарный отклик КМН_{органов} 140 уе, по формуле (3) получают величину ТП=~647, которая указывает на предпочтительное применение ФТ для данного животного в режиме реального времени, поскольку в опухоли содержится КМН в 647 раз больше, чем в печени (Фиг. 2, 3, 9).

Для уточнения объема предстоящего сеанса ФТ проводят КМ-РТ сканирование в режимах: T₁ - взвешенное (TR/ТЕ=500/15 мс), Т₂ - взвешенное (TR/ТЕ=6000/63 мс) на основе спинового эха и Т₂ - взвешенного градиентного эха (TR/ТЕ=500/15 мс, угол поворота 15°).

Отсасывают содержимое опухоли, вводят от 30 до 350 мкл 40% золя КМН общей формулы,

где 0<y<1, 0<х<1, 0<z<1, L³⁺-Gd³⁺, La³⁺, Ce³⁺, Eu³⁺, Dy³⁺, Er³⁺, Yb³⁺ [15, 16], (диаметр частиц от 5 до 900 нм, в качестве покрытия используют декстран молекулярной массы от 10 до 70 кД, содержание феррита 130 мг, M_s 8,5 кА/м, рН 6,4, ζ +15 мВт, УАЭ 270-330 Вт/г Fe), которые получают непосредственно перед введением в опухоль смешиванием комбинантов ДФ, АО, МО, СЛ, МФ, ЦП, МК, (феррит от 2,6 до 150 мг; АО от 0,2 до 2,0 мг, МО от 0,05 до 0,2 мг, СЛ или МФ от 0,001 до 0,002 мг, ЦП от 0,01 до 0,04 мг, МК от 0,005 до 0,02 мг, M_s 40% золя КМН 8,5 кА/м, рН 7,0, ζ +13 мВт, УАЭ 300 Вт/г Fe). Место введения препарата промывают теплой водой и протирают досуха. Ориентируют животное так, чтобы опухоль была коаксильна силовым линиям неоднородного постоянного магнитного поля (НПМП) индукцией 0,15-4,0 Тл, и выдерживают 3-6 минут для концентрации и фиксации КМН в опухоли. Опухоль ориентируют в ПеМП (частота 0,01-1,0 МГц, напряженность 7,2 кА/м - 12,0 кА/м, мощность 0,15-1,5 кВт), прошедшем через слой воды толщиной 0,01-2,0 мм с постоянной температурой, по мере магнитного нагрева КМН активируются цитостатические препараты. Одновременно с нагревом непрерывно измеряют температуру опухоли и тела животного. Через 3-15 минут температура внутри опухоли повышается до +44 - +48°С, выдерживают 30 мин. Сразу после нагрева содержимое опухоли удаляют, полость, образовавшуюся на месте опухоли, промывают раствором антисептического средства, животное размещают в ПеМП ЭССУ, определяют величину электромагнитных откликов образовавшейся полости и вводят КЦП.. КМ-РТ изображения тканей, имеющих недостаточно быстрый кровоток, длительное время остаются светлыми из-за медленной диффузии феррита (Фиг. 4 а, б, в; Фиг. 5 а, б). Измеряют интенсивность сигнала и проводят компьютерный и визуальный анализ остатков опухоли изменений в макро- и микро-метастазах лимфолейкоза Р388; карциномы Эрлиха, карциномы легких Льюис, аденокарциномы молочной железы Са 755 и меланомы В 16. Результаты ФТ (Фиг. 4 б, в) сравнивают с КМ-РТИ, полученными до ФТ (Фиг. 4а). Через каждые 3-48 часов, в зависимости от соматического состояния животного (ФСЖ) процедуры ЭСС, контрастного магнитно-резонансного томографического сканирования (КМ-РТС) и ФТ повторяют от 2 до 8 сеансов в зависимости от ФСЖ.

Опухоль на этой стадии ФТ обычно не прощупывается (Фиг. 6). В полость и подкожные метастазы вводят КЦП. При выявлении асцита и метастазов внутренних органов КЦП вводят внутрибрюшинно. Параллельно делают биопсию и микропрепараты (Фиг. 7 а, б, в, г) (Фиг. 8).

Оценку противоопухолевой активности и качества долечивания проводят в соответствии с результатами ЭСС и КМ-РТ сканирования, заключение делают с учетом рекомендаций по химиотерапии злокачественных опухолей [12]. Все полученные данные обрабатывают статистически, за достоверные принимают различия при ρ<0,05 [20].

Заявленный способ иллюстрируется примерами 1-7

Пример 1. Противоопухолевый эффект заявленного способа на подкожную форму лимфолейкоза Р388, в зависимости от вида и числа терапевтических процедур, выраженный в полной регрессии опухолей и увеличении средней продолжительности жизни (УПЖ) мышей.

70 самцам мышей BDF₁ под кожу правой лопатки вводят суспензию 10⁶ клеток лимфолейкоза Р388, отбирают 60 мышей и делят на 5 групп: в 1 группе 20 мышей, во 2, 3, 4 и 5 по 10 мышей. ЭСС, КМ-РТ сканирование и ФТ начинают, когда средний объем опухоли достигает 30-145 мм³. Мышам 1 группы под наркозом по периметру опухоли вводят 350 мкл 0,9% раствора NaCl и проводят ЭСС. Электромагнитные отклики тканей у мышей первой (контрольной) группы соответствуют фоновому уровню содержания КМН (~11 уе), по которым на калибровочном графике (Фиг. 9) количество КМН не определяется. На КМ-РТИ, при T₁ взвешенных изображениях (ВИ) (TR/ТЕ=500/15 мс), Т₂ ВИ (TR/ТЕ=6000/63 мс) на основе спинового эха и Т₂-взвешенного градиентного эха (TR/ТЕ=500/15 мс, угол поворота 15°). В местах введения 0,9% раствора NaCl изображения не выявляют.

Мышам 2 группы отсасывают содержимое опухоли, по периметру опухоли вводят КЦП: МК 0,01 мг, СЛ 0,002 мг, 0,9% NaCl до 350 мкл. Мышам 3 группы отсасывают содержимое опухоли, по периметру опухоли вводят золь: ДФ 150 мг, вода до 350 мкл. При ЭСС отклики тканей у мышей третьей группы соответствуют содержанию КМН 15260 уе, сумма откликов печени и других органов при этом 150 уе, по которым на калибровочном графике определяют содержание КМН в мг (Фиг. 9). По формуле 3 получают величину ТП=102, подтверждающую предпочтительность ФТ для данного животного в режиме реального времени. На КМ-РТИ тела мыши, выявляют темные пятна КМН. Мышам 4 группы отсасывают содержимое опухоли. По периметру опухоли вводят КМН: ДФ 150,0 мг, МК 0,01 мг, СЛ 0,002 мг, вода до 350 мкл. При ЭСС мышей четвертой группы получают электромагнитные отклики: опухоли 10890, сумма откликов печени и других органов соответствует 210. По формуле 3 получают величину, ТП=52, подтверждающую предпочтительность ФТ для данного животного в режиме реального времени. На КМ-РТИ тела мыши, при тех же параметрах сканирования, выявляют изображения темных пятен, соответствующие местам нахождения КМН.

Мышам 5 группы отсасывают содержимое опухоли. По периметру опухоли вводят КМН: ДФ 150 мг, МК 0,01 мг, СЛ 0,002 мг, вода до 350 мкл (M_s 7,5 кА/м, рН 6,6, ζ +15 мВт, УАЭ 330 Вт/г Fe). Электромагнитные отклики тканей у мышей пятой группы: опухоли 15630, суммы откликов печени и других органов 50 (Фиг. 9). По формуле 3 получают величину ТП=313.

Мышей 1, 2, 3, 4 и 5 групп помещают в постоянное магнитное поле индукцией 0,2 Тл, градиент 0,015 Тл/см и выдерживают 5 минут. Опухоль каждой мыши 1, 2, 3, 4 и 5 групп ориентируют в ПеМП (частота 0,01-1,0 МГц, напряженность 12,0 кА/м, мощность 0,15 кВт), прошедшем через слой воды толщиной 2,0 мм с постоянной температурой (магнито-термостатирование), введенный КМН нагревают в ПеМП. Температура опухоли у мышей 1 и 2 групп под действием ПеМП в течение 5 мин не поднимается выше +38°С. Температура в прямой кишке и опухоли мышей 1 и 2 групп в течение 30 минут находится между +37 - +38°С. При ЭСС и КМ-РТ сканировании КМН не выявляют.

У мышей 3 и 4 групп температура опухоли в ПеМП за 5 мин поднимается выше +43°С (температуру измеряют спиртовым термометром). Далее температура внутри опухоли продолжает повышаться и через 15 мин достигает +47°С, температура прямой кишки +38°С. На КМ-РТИ выявляют изображения темных пятен, соответствующие местам введения КМН. После окончания нагрева опухоли удаляют ее содержимое.

Под действием ПеМП температура опухоли у мышей 5 группы, в течение 5 мин поднимается выше +43°С. Температура внутри опухоли продолжает повышаться и через 15 мин достигает +47°С, прямой кишки +38°С. После окончания нагрева опухоли удаляют ее содержимое. Для удаления продуктов некроза опухолевых тканей и остатков КМН полость, образовавшуюся на месте опухоли, промывают 0,05% раствором формальдегида в 0,9% растворе NaC, в полость вводят КЦП. В 1, 2, 3, 4 и 5 группах проводят до 6 процедур ЭСС, до 8 процедур КМ-РТ сканирования и до 8 процедур ФТ (Табл. 1).

В результате КМ-РТ сканирования выявляют:

- в 1 группе мышей объем опухоли и метастазов у каждой мыши устойчиво увеличивается без признаков регрессии, в течение 6 процедур ФТ все мыши гибнут от прогрессирования опухолей;

- во второй группе рост опухолей тормозится, в подмышечный и паховый областях 4 мышей выявляют метастазы. В метастазы и опухоли вводят КЦП: ДТ 0,05 - ДК 0,1 - ЦФ 1,0 мг с целью их подавления. Полная регрессия опухоли 15%, увеличение продолжительности жизни 150%;

- в третьей группе средний объем опухолей значительно уменьшается, в паховой области 3 мышей выявляют метастазы, в метастазы и опухоли вводят КЦП: ДТ 0,05 - ДК 0,1 - ЦФ 1,0 мг, полная регрессия опухоли 15%, увеличение продолжительности жизни 160%;

- в четвертой группе средний объем опухолей с первого дня лечения резко уменьшается, в паховой области 2 мышей выявляют метастазы, в метастазы и опухоли вводят КЦП: ДТ 0,05

- ДК 0,1 - ЦФ 1,0 мг, полная регрессия опухоли 30%, увеличение продолжительности жизни 180%;

- в пятой группе средний объем опухолей с первого дня лечения уменьшается, но в паховой области 1 мыши выявляют метастазы, в метастазы и опухоли вводят КЦП: ДТ 0,05 - ДК 0,1 - ЦФ 1,0 мг, полная регрессия опухоли 40%, увеличение продолжительности жизни 250%, (Таблица 1).

Таким образом, КМ-РТ сканирование животных обеспечивает раннее выявление опухолей и метастазов при контрастировании опухолей и метастазов комбинацией ДФ-магневист.

При ЭСС электромагнитные отклики тканей у мышей пятой группы соответствуют повышенным уровням содержания КМН, по которым определяют содержания КМН в опухоли, печени и других органах РЭС в реальном времени: в опухоли 45000, сумма откликов печени и органов 150, по формуле 3 получают величину ТП=300, подтверждающую предпочтительность ФТ для данного животного в режиме реального времени, на калибровочном графике (Фиг. 9) получают содержание КМН в мг.

Магнитное нагревание тела животных в условиях превосходящего по скорости и величине нагрева тканей опухоли, содержащих КМН, удаление содержимого опухоли, последующее промывание образовавшейся полости, введение цитостатических средств в метастазы по мере их выявления, приводит к быстрому уменьшению объема опухолей, их полной регрессии и увеличению продолжительности жизни млекопитающих.

КМ-РТ сканирование полости образовавшейся после нагрева и отсасывания содержимого опухоли с последующим промыванием антисептиком, способствует выявлению остатков опухолей и метастазов, прицельному контролируемому введению КМН в оставшуюся часть опухоли и метастазы в процессе долечивания животных.

Предпочтительны:

- отсасывание содержимого опухоли для понижения давления перед введением КМН и антисептика;

- предварительные, промежуточные и заключительные магнитно-резонансные сканирования тела животного для визуального анализа опухолей и метастазов с индивидуальным заключением по результатам ФТ;

- ферримагнитная концентрация, фиксация и нагрев препаратов в опухоли;

- ФТ опухоли в зависимости от ФСЖ при +45-48°C 4×30 мин с интервалом 3 часа, с промыванием полости, образовавшейся на месте опухоли, от продуктов некроза и остатков КМН с введением в полость и метастазы КЦП при которой получают максимальный терапевтический эффект (Таблица 1).

Пример 2. Противоопухолевый эффект заявленного способа на подкожную форму лимфолейкоза Р388 в зависимости от вида и числа процедур.

80 самцам мышей BDF₁ под кожу правой лопатки вводят суспензию 10⁶ клеток лимфолейкоза Р388, отбирают 70 мышей и делят на 6 групп: в 1 группе 20 мышей, во 2, 3, 4, 5 и 6 по 10 мышей. На 3-4 сутки после имплантации, когда средний объем опухоли достигает 50-150 мм³ для понижения давления в опухоли отсасывают ее содержимое. Мышам 1 группы по периметру опухоли вводят 350 мкл 0,9% раствора NaCl.

Мышам 2 группы по периметру опухоли вводят АО 1,2 мг, 0,9% NaCl до 350 мкл. Мышам 3 группы по периметру опухоли вводят КЦП: АО 1,2 мг, МО 0,2 мг, 0,9% NaCl до 350 мкл. Мышам 4 группы по периметру опухоли вводят ДФ 150 мг, вода до 350 мкл. Мышам 4 группы по периметру опухоли вводят КМН: ДФ 150 мг, АО 1,2 мг, МО 0,2 мг, вода до 350 мкл. Мышам 5 группы по периметру опухоли вводят КМН: ДФ 150 мг, АО 1,2 мг, МО 0,2 мг, вода до 350 мкл. Мышам 6 группы по периметру опухоли вводят КМН: ДФ 150 мг, АО 1,2 мг, МО 0,2 мг, вода до 350 мкл (M_s 7,5 кА/м, pH 6,6, ζ+15 мВт, УАЭ 330 Вт/г Fe).

Процедуру ФТ мышей 1, 2, 3, 4, 5 и 6 групп проводят аналогично Примеру 1: ФТ 1 и 2 групп проводят по 6 раз, 3 и 4 групп проводят 8 раз, 5 группы - 6 раз, 6 группы - 8 раз с интервалом от 3 часов до 3 суток в зависимости от ФСЖ (табл. 2).

Результаты ФТ мышей 1, 2, 3, 4, 5 и 6 групп представлены в Табл. 2.

Таким образом, в соответствии с таблицей 2 максимальный терапевтический эффект дает ФТ опухоли при +48°C 8×30 мин с последующим промыванием опухоли от продуктов некроза и остатков КМН при введении КЦП в обнаруживаемые по ходу лечения метастазы.

Пример 3. Противоопухолевый эффект заявленного способа на подкожную форму карциномы Эрлиха, в зависимости от числа процедур.

80 самцам мышей BDF1 под кожу правой лопатки вводят суспензию 10⁶ клеток карциномы Эрлиха, отбирают 70 мышей и делят на 6 групп: в 1 группе 20 мышей, во 2, 3, 4, 5 и 6 по 10 мышей. Когда средний объем опухоли достигает 30-130 мм³ (от 3 до 5 суток), для понижения давления в опухоли отсасывают ее содержимое. У мышей измеряют температуру в прямой кишке. Мышам 1 (контрольной) группы в опухоль вводят 350 мкл 0,9% раствора NaCl. Мышам 2 группы по периметру опухоли вводят КЦП: МФ 0,002 мг, МК 0,02 мг, 0,9% NaCl до 350 мкл. Мышам 3 группы по периметру опухоли вводят ДФ 150 мг в 350 мкл воды. Мышам 4 группы по периметру опухоли вводят КМН: ДФ 150 мг, МФ 0,002 мг, МК 0,02 мг, вода до 350 мкл. Мышам 5 группы по периметру опухоли вводят КМН: ДФ 150 мг, МФ 0,002 мг, МК 0,02 мг, вода до 350 мкл. Мышам 6 группы по периметру опухоли вводят КМН: ДФ 150 мг, МФ 0,002 мг, МК 0,02 мг, вода до 350 мкл (M_s 7,5 кА/м, pH 6,6, ζ+15 мВт, УАЭ 330 Вт/г Fe). Мышей помещают на 5 минут в постоянное магнитное поле индукцией 0,2 Тл, градиент 0,015 Тл/см. Каждую мышь 2, 3, 4, и 5 групп помещают в ПеМП, как в 1 примере. В метастазы, по мере их выявления, вводят КЦП: ДТ 0,05 - ДК 0,1 - ЦФ 1,0 мг.

Процедуру ФТ проводят:

- мышам 1 и 3 групп 4 раза с интервалом от 3 часов до 3 суток в зависимости от ФСЖ (табл. 3);

- мышам 4 группы 3 раза с интервалом от 3 часов до 3 суток в зависимости от ФСЖ (табл. 3);

- мышам 2 и 5 групп 6 раза с интервалом от 3 часов до 3 суток в зависимости от ФСЖ (табл. 3);

- мышам 5 группы 8 раза с интервалом от 3 часов до 3 суток в зависимости от ФСЖ (табл. 3).

В результате получают:

- в 1 (контрольной) группе мышей объем опухоли у каждой мыши устойчиво увеличивается без признаков регрессии;

- во второй группе средний объем опухолей уменьшается медленно, у 3 мышей выявляют метастазы, внутрибрюшинно вводят КЦП, ДТ 0,05 - ДК 0,05 - ЦФ 1,0 мг, увеличение продолжительности жизни 180%;

- в третьей группе средний объем опухолей значительно уменьшается, у 3 мышей выявляют метастазы, долечивают внутриполостным и внутрибрюшинным введением КЦП, ДТ 0,05 - ДК 0,05 -ЦФ 1,0 мг, полную регрессию опухоли наблюдают у 10% мышей, увеличение продолжительности жизни мышей увеличение продолжительности жизни мышей 200%;

- от начала лечения в четвертой группе мышей наблюдают уменьшение среднего объема опухолей и у части мышей наблюдают полную регрессию опухолей;

- после завершения лечения признаки опухолей не проявляются в течение 3 месяцев, у 3 мышей выявляют метастазы в подмышечных лимфатических узлах, долечивают мышей внутриполостным и внутрибрюшинным введением КЦП, ДТ 0,05 - ДК 0,05 - ЦФ 1,0 мг, полную регрессию опухоли наблюдают у 30% мышей, увеличение продолжительности жизни мышей 320%;

- в пятой группе у 1 мыши выявляют метастазы, долечивание проводят внутриполостным и внутрибрюшинным введением КЦП, ДТ 0,05 - ДК 0,05 - ЦФ 1,0 мг, полную регрессию опухоли наблюдают у 30% мышей, увеличение продолжительности жизни мышей 320%;

- в шестой группе проводят 8 процедур ФТ, у 2 мышей выявляют метастазы, долечивание проводят внутриполостным и внутрибрюшинным введением КЦП, ДТ 0,05 - ДК 0,05 - ЦФ 1,0 мг, полную регрессию опухоли наблюдают у 50% мышей, увеличение продолжительности жизни мышей 350%;

Таким образом, в соответствии с примером 3, предпочтительна ФТ опухоли при +48°C 8×30 мин с интервалом от 3 часов до 3 суток в зависимости от ФСЖ, с последующим промыванием образовавшейся полости 0,05% раствором формальдегида в 0,9% растворе NaCl, и введением КЦП, при которой получают максимальный терапевтический эффект.

Экспериментальные результаты (примеры 1-3, таблицы 1-3) подтверждают высокий противоопухолевый эффект заявленного способа, включающего регионарное введение КМН при одновременном нагреве тела до 38°C с преимущественным по скорости и величине нагревом опухоли до +45-+48°C и последующим удалением содержимого опухоли, промыванием образовавшейся полости, с долечиванием внутриполостным и внутрибрюшинным введением КЦП: ДТ 0,05 - ДК 0,05 - ЦФ 1,0 мг.

Таким образом, ЭС определение ТП и КМ-РТ мониторинг результатов ФТ опухолей и метастазов при одновременном магнитном нагреве тела с преимущественным по скорости и величине нагревом тканей опухоли, содержащих КМН, с последующим промыванием полости на месте опухоли от продуктов некроза и остатков КМН, с дополнительным внутриполостным и внутрибрюшинным введением КЦП приводит к быстрому уменьшению объема опухолей, их полной регрессии и увеличению продолжительности жизни млекопитающих.

Предпочтительна ФТ опухоли при +45-+48°C 8×30 мин с интервалом от 3 часов до 3 суток в зависимости от ФСЖ, с долечиванием внутриполостным и внутрибрюшинным введением КЦП при которой получают максимальный терапевтический эффект (Таблица 3).

Пример 4. Противоопухолевый эффект заявленного способа на подкожную форму карциномы легких Льюис, в зависимости от вида и числа процедур.

80 самцам мышей C57Bl/6j в мышцу правого бедра вводят суспензию 10⁶ клеток карциномы легких Льюис, отбирают 70 мышей и делят на 6 групп: в 1 группе 20 мышей, во 2, 3, 4, 5 и 6 по 10 мышей. Когда средний объем опухоли достигает 30-130 мм (около 8 суток) для понижения давления в опухоли отсасывают ее содержимое. У мышей измеряют температуру в прямой кишке. Мышам 1 (контрольной) группы в опухоль вводят 350 мкл 0,9% раствора NaCl. Мышам 2 группы по периметру опухоли вводят КЦП: ЦП 0,03 мг, МК 0,01 мг, 0,9% NaCl до 350 мкл. Мышам 3 группы по периметру опухоли вводят ДФ 150 мг в 350 мкл воды. Мышам 4 группы по периметру опухоли вводят КМН: ДФ 150 мг, ЦП 0,03 мг, МК 0,01 мг, вода до 350 мкл. Мышам 5 группы по периметру опухоли вводят КМН: ДФ 150 мг, ЦП 0,03 мг, МК 0,01 мг, вода до 350 мкл. Мышам 6 группы по периметру опухоли вводят КМН: ДФ 150 мг, ЦП 0,03 мг, МК 0,01 мг, вода до 350 мкл (M_s 7,5 кА /м, pH 6,6, ζ+15 мВт, УАЭ 330 Вт/г Fe). Мышей помещают на 5 минут в постоянное магнитное поле индукцией 0,2 Тл, градиент 0,015 Тл/см. Каждую мышь 2, 3, 4, 5 и 6 групп помещают в ПеМП, как в 1 примере. Долечивают внутриполостным и внутрибрюшинным введением КЦП: ДТ 0,05 - ДК 0,1 - ЦФ 1,0 мг.

Процедуру ФТ проводят

- мышам 1, 2, 3 и 5 групп 6 раза с интервалом от 3 часов до 3 суток в зависимости от ФСЖ (табл. 4);

- мышам 4 группы 4 раза с интервалом от 3 часов до 3 суток в зависимости от ФСЖ (табл. 4);

- мышам 5 группы 8 раза с интервалом от 3 часов до 3 суток в зависимости от ФСЖ (табл. 4).

В результате получают

- в 1 (контрольной) группе мышей объем опухоли у каждой мыши устойчиво увеличивается без признаков регрессии;

- во второй группе средний объем опухолей уменьшается медленно, у 3 мышей выявляют метастазы, долечивают внутриполостным и внутрибрюшинным введением КЦП, ДТ 0,05 - ДК 0,1 - ЦФ 1,0 мг, увеличение продолжительности жизни 180%;

- в третьей группе средний объем опухолей значительно уменьшается, у 2 мышей выявляют метастазы, долечивают внутриполостным и внутрибрюшинным введением КЦП, ДТ 0,05 - ДК 0,1 - ЦФ 1,0 мг, полную регрессию опухоли наблюдают у 10% мышей, увеличение продолжительности жизни мышей увеличение продолжительности жизни мышей 160%;

- в четвертой группе средний объем опухолей, с первого дня лечения уменьшается и их признаки не проявляются в течение 3 месяцев, у 3 мышей выявляют метастазы в подмышечных лимфатических узлах, долечивают внутриполостным и внутрибрюшинным введением КЦП, ДТ 0,05 - ДК 0,1 - ЦФ 1,0 мг. Полную регрессию опухоли наблюдают у 10% мышей, увеличение продолжительности жизни мышей 220%;

- в пятой группе у 1 мыши выявляют метастазы, долечивают внутриполостным и внутрибрюшинным введением КЦП, ДТ 0,05 - ДК 0,05 - ЦФ 1,0 мг, полную регрессию опухоли наблюдают у 20% мышей, увеличение продолжительности жизни мышей 240%;

- в шестой группе проводят 8 процедур ФТ, у 2 мышей выявляют метастазы, долечивают внутриполостным и внутрибрюшинным введением КЦП, ДТ 0,05 - ДК 0,05 - ЦФ 1,0 мг, полную регрессию опухоли наблюдают у 25% мышей, увеличение продолжительности жизни мышей 260%;

Таким образом, в соответствии с примером 4, предпочтительна ФТ опухоли при +48°C 8×30 мин с интервалом от 3 часов до 3 суток в зависимости от ФСЖ, с последующим промыванием образовавшейся полости 0,05% раствором формальдегида в 0,9% растворе NaCl, и введением КЦП, при которой получают максимальный терапевтический эффект.

Экспериментальные результаты (примеры 1-4, таблицы 1-4) подтверждают высокий противоопухолевый эффект заявленного способа, включающего регионарное введение КМН при одновременном нагреве тела до 38°C с преимущественным по скорости и величине нагревом опухоли до +45-+48°C и последующим удалением содержимого опухоли, промыванием образовавшейся полости, с долечиванием внутриполостным и внутрибрюшинным введением КЦП: ДТ 0,05 - ДК 0,05 - ЦФ 1,0 мг.

Таким образом, ЭС определение ТП и КМ-РТ мониторинг результатов ФТ опухолей и метастазов при одновременном магнитном нагреве тела с преимущественным по скорости и величине нагревом тканей опухоли, содержащих КМН, с последующим промыванием полости на месте опухоли от продуктов некроза и остатков КМН, с дополнительным внутриполостным и внутрибрюшинным введением КЦП приводит к быстрому уменьшению объема опухолей, их полной регрессии и увеличению продолжительности жизни млекопитающих.

Предпочтительна ФТ опухоли при +45-+48°C 8×30 мин с интервалом от 3 часов до 3 суток в зависимости от ФСЖ, с долечиванием внутриполостным и внутрибрюшинным введением КЦП при которой получают максимальный терапевтический эффект (Таблица 4).

Пример 5. Противоопухолевый эффект заявленного способа на подкожную форму аденокарциномы молочной железы Ca 755, в зависимости от вида и числа процедур.

80 самкам мышей C57Bl/6j под кожу правой подмышечной области вводят суспензию 10⁶ клеток аденокарциномы молочной железы Ca 755, отбирают 70 мышей и делят на 6 групп: в 1 группе 20 мышей, во 2, 3, 4, 5 и 6 по 10 мышей. Когда средний объем опухоли достигает 30-130 мм³ (около 4 суток) у мышей измеряют температуру в прямой кишке. Для понижения давления в опухоли отсасывают ее содержимое. Мышам 1 (контрольной) группы в опухоль вводят 350 мкл 0,9% раствора NaCl. Мышам 2 группы по периметру опухоли вводят мелфалан (МФ) 0,002 мг и митоксантрон (МК) 0,02 в 350 мкл 0,9% NaCl. Мышам 3 группы по периметру опухоли вводят декстранферрит (ДФ) 150 мг, вода до 350 мкл. Мышам 4 группы по периметру опухоли вводят КМН: ДФ 150 мг, МФ 0,002, МК 0,02 мг, вода до 350 мкл. Мышам 5 группы по периметру опухоли вводят КМН: ДФ 150 мг, МФ 0,002, МК 0,02 мг, вода до 350 мкл. Мышам 6 группы по периметру опухоли вводят КМН: ДФ 150 мг, МФ 0,002, МК 0,02 мг, вода до 350 мкл. Мышей помещают на 5 минут в постоянное магнитное поле индукцией 0,2 Тл, градиент 0,015 Тл/см. Каждую мышь 2, 3, 4, и 5 групп помещают в ПеМП, как в примере 1. Температура опухоли у мышей 2, 3, 4, и 5 групп, под действием ПеМП в течение 5 мин поднимается выше +42°C, через 15 мин температура опухоли достигает +48°C, через 30 минут нагрев прекращают. В тоже время, температура в прямой кишке и опухоли мышей 1 группы остается между +37-+38°C. После окончания нагрева удаляют ее содержимое. Образовавшуюся на месте опухоли полость промывают 0,3% раствором формальдегида в 0,9% растворе NaCl.

Процедуру ФТ проводят

- мышам 1 и 5 групп 6 раза с интервалом от 3 часов до 3 суток в зависимости от ФСЖ (табл. 5);

- мышам 2, 3 и 4 групп 4 раза с интервалом от 3 часов до 3 суток в зависимости от ФСЖ (табл. 5);

- мышам 5 группы 6 раза с интервалом от 3 часов до 3 суток в зависимости от ФСЖ (табл. 5).

- мышам 6 группы 8 раза с интервалом от 3 часов до 3 суток в зависимости от ФСЖ (табл. 5).

В результате получают

- в 1 (контрольной) группе мышей объем опухоли у каждой мыши устойчиво увеличивается без признаков регрессии;

- во второй группе средний объем опухолей уменьшается медленно, у 3 мышей выявляют метастазы, долечивают внутриполостным и внутрибрюшинным введением КЦП, ДТ 0,05 - ДК 0,05 - ЦФ 1,0 мг, увеличение продолжительности жизни 160%;

- в третьей группе средний объем опухолей значительно уменьшается, у 3 мышей выявляют метастазы, долечивают внутриполостным и внутрибрюшинным введением КЦП, ДТ 0,05 - ДК 0,05 - ЦФ 1,0 мг, увеличение продолжительности жизни мышей 200%;

- в четвертой группе средний объем опухолей, с первого дня лечения уменьшается, их признаки не проявляются в течение 3 месяцев, у 2 мышей выявляют метастазы в подмышечных лимфатических узлах, долечивают внутриполостным и внутрибрюшинным введением КЦП, ДТ 0,05 - ДК 0,05 - ЦФ 1,0 мг, полную регрессию опухоли наблюдают у 30% мышей, увеличение продолжительности жизни мышей 220%;

- в пятой группе у одной мыши выявляют метастазирование опухоли в правый пах, долечивают внутриполостным и внутрибрюшинным введением КЦП, ДТ 0,05 - ДК 0,05 - ЦФ 1,0 мг, полную регрессию опухоли наблюдают у 30% мышей, увеличение продолжительности жизни мышей 280%;

- в шестой группе у одной мыши выявляют метастазы в правом паху, долечивают внутриполостным и внутрибрюшинным введением КЦП, ДТ 0,05 - ДК 0,05 - ЦФ 1,0 мг, полную регрессию опухоли наблюдают у 50% мышей, увеличение продолжительности жизни мышей 350%.

Таким образом, в соответствии с примером 5 определение вида терапии предпочтительной в реальном времени, предварительное, промежуточное и заключительное магнитно-резонансные сканирования опухолей и метастазов с индивидуальным заключением по результатам ФТ, одновременное магнитное нагревание тела с преимущественным по скорости и величине нагревом тканей опухоли, содержащих КМН, удаление некротических масс и промывание полости, образовавшейся на месте опухоли, введение комбинации цитостатических средств в метастазы приводит к быстрому уменьшению объема инфильтративных опухолей, их полной регрессии и увеличению продолжительности жизни мышей. При аденокарциноме молочной железы Ca 755 предпочтительна ФТ при +47-+48°C 8×30 мин с интервалом от 3 часов до 3 суток в зависимости от ФСЖ, с введением в метастазы и полость КЦП при которой получают максимальный терапевтический эффект (Таблица 5).

Пример 6. Противоопухолевый эффект заявленного способа на подкожную форму меланомы В 16 в зависимости от вида и числа процедур.

80 самкам мышей C57Bl/6j в правую подмышечную область вводят суспензию 10⁶ клеток меланомы В 16, отбирают 70 мышей и делят на 6 групп: в 1 группе 20 мышей, во 2, 3, 4, 5 и 6 по 10 мышей. Когда средний объем опухоли достигает 30-130 мм³ (около 6 суток) у мышей измеряют температуру в прямой кишке и отсасывают содержимое опухоли. Мышам 1 (контрольной) группы в опухоль вводят 350 мкл 0,9% раствора NaCl. У мышей 2 группы отсасывают содержимое опухоли, по периметру опухоли вводят бис (L-малато) IV оксованадий (БМОВ) 6,0 мг в 350 мкл воды. У мышей 3 группы отсасывают содержимое опухоли, по периметру опухоли вводят КЦП: БМОВ 6,0 мг и МК 0,02 мг в 350 мкл воды. У мышей 4 группы отсасывают содержимое опухоли, по периметру опухоли вводят ДФ 150 мг в 350 мкл воды. У мышей 5 группы отсасывают содержимое опухоли, по периметру опухоли вводят КМН: ДФ 150 мг, БМОВ 6,0 мг и МК 0,02 мг в 350 мкл воды. У мышей 6 группы отсасывают содержимое опухоли, по периметру опухоли вводят КМН: ДФ 150 мг, БМОВ 6,0 мг и МК 0,02 мг в 350 мкл воды.

Мышей помещают на 5 минут в постоянное магнитное поле индукцией 0,2 Тл, градиент 0,015 Тл/см. Каждую мышь 2, 3, 4, 5 и 6 групп помещают в ПеМП, как в примере 1. Температура опухоли у мышей 2, 3, 4, и 5 групп, под действием ПеМП в течение 5 мин поднимается выше +42°C, через 15 мин температура опухоли достигает +48°C, через 30 минут нагрев прекращают. В тоже время, температура в прямой кишке и опухоли мышей 1 группы остается между +37-+38°C. После окончания нагрева содержимое опухоли удаляю. Образовавшуюся на месте опухоли полость промывают 0,3% раствором формальдегида в 0,9% растворе NaCl.

Процедуру ФТ проводят

- мышам 1 и 5 групп 6 раза с интервалом от 3 часов до 3 суток в зависимости от ФСЖ (табл. 6);

- мышам 2, 3, 4 и 8 групп 8 раза с интервалом от 3 часов до 3 суток в зависимости от ФСЖ (табл. 6);

В результате получают

- в 1 (контрольной) группе мышей объем опухоли у каждой мыши устойчиво увеличивается без признаков регрессии;

- во второй группе средний объем опухолей уменьшается медленно, у 3 мышей выявляют метастазы, долечивают внутриполостным и внутрибрюшинным введением КЦП, ДТ 0,05 - ДК 0,05 - ЦФ 1,0 мг, полную регрессию опухоли наблюдают у 10% мышей, увеличение продолжительности жизни мышей 160%;

- в третьей группе средний объем опухолей уменьшается медленно, у 1 мыши выявляют метастазы, долечивают внутриполостным и внутрибрюшинным введением КЦП, ДТ 0,05 - ДК 0,05 - ЦФ 1,0 мг, полную регрессию опухоли наблюдают у 20% мышей, увеличение продолжительности жизни мышей 200%;

- в четвертой группе средний объем опухолей, с первого дня лечения уменьшается и, наконец, их признаки не проявляются в течение 3 месяцев,

- в пятой группе у 2 мышей выявляют метастазы в подмышечных лимфатических узлах, долечивают внутриполостным и внутрибрюшинным введением КЦП, ДТ 0,05 - ДК 0,05 - ЦФ 1,0 мг, полную регрессию опухоли наблюдают у 30% мышей, увеличение продолжительности жизни мышей 240%;

- в шестой группе у 2 мышей выявляют метастазы в подмышечных лимфатических узлах, долечивают внутриполостным и внутрибрюшинным введением КЦП, ДТ 0,05 - ДК 0,05 - ЦФ 1,0 мг, полную регрессию опухоли наблюдают у 40% мышей, увеличение продолжительности жизни мышей 250%;

Таким образом, в соответствии с примером 6 определение вида терапии предпочтительной в реальном времени, предварительное, промежуточное и заключительное магнитно-резонансные сканирования опухолей и метастазов с индивидуальным заключением по результатам ФТ, одновременное магнитное нагревание тела с преимущественным по скорости и величине нагревом тканей опухоли, содержащих КМН, удаление некротических масс и промывание полости, образовавшейся на месте опухоли, долечивание внутриполостным и внутрибрюшинным введением КЦП: ДТ 0,05 - ДК 0,05 - ЦФ 1,0 мг, приводит к быстрому уменьшению объема инфильтративных опухолей, их полной регрессии и увеличению продолжительности жизни мышей. При меланоме В 16 предпочтительна ФТ с КМН: ДФ 150 мг, БМОВ 6,0 мг и МК 0,02 мг в 350 мкл воды при +47-+48°C 8×30 мин с интервалом от 3 часов до 3 суток с внутриполостным и внутрибрюшинным введением КЦП, ДТ 0,05 - ДК 0,05 - ЦФ 1,0 мг, при которой получают максимальный терапевтический эффект (Таблица 6).

Пример 7. Противоопухолевый эффект заявленного способа на подкожную форму спонтанной аденокарциномы молочных желез у самок крыс Вистар, в зависимости от вида и числа процедур. Из 10 самок крыс Вистар со спонтанными опухолями, возникающими по мере старения, отбирают 8 крыс с инфильтративной карциномой молочных желез и делят на 4 равных группы: по 2 крысы в каждой группе. Возраст от 14 до 26 месяцев, вес от 250 до 450 г, объем опухоли от 40 до 450 мм³. У крыс измеряют температуру в прямой кишке. Крысам 1 (контрольной) группы отсасывают содержимое опухоли, в опухоль вводят 4000 мкл 0,9% раствора NaCl. У крыс 2 группы отсасывают содержимое опухоли, по периметру опухоли вводят КЦП: МФ 0,02 мг и МК 0,2 мг в 4000 мкл воды. У крыс 3 группы отсасывают содержимое опухоли, по периметру опухоли вводят ДФ 1500 мг, в 4000 мкл воды. У крыс 4 группы отсасывают содержимое опухоли, по периметру опухоли вводят КМН: ДФ 1500 мг МФ 0,02 и МК 0,2 мг в 4000 мкл воды.

Опухоли всех крыс выдерживают 5 минут в постоянном магнитном поле индукцией 0,2 Тл, градиент 0,015 Тл/см и размещают в ПеМП. Температура опухоли у крыс 3 и 4 групп, под действием ПеМП в течение 5 мин поднимается выше +42°C, через 15 мин температура опухоли достигает +48°C, через 30 минут нагрев прекращают. В тоже время, температура в прямой кишке и опухоли крыс 1 группы остается между +37-+38°C. После окончания нагрева содержимое опухолей удаляют. Образовавшуюся на месте опухоли полость промывают 0,3% раствором формальдегида в 0,9% растворе NaCl.

Процедуру ФТ проводят

- крысам 1, 2, 3 и 4 групп 8 раза с интервалом от 3 часов до 3 суток в зависимости от ФСЖ (табл. 7).

В результате получают:

- в 1 (контрольной) группе объем опухолей у крыс устойчиво увеличивается без признаков регрессии;

- во второй группе средний объем опухолей уменьшается медленно, у крыс выявляют метастазы, долечивают внутриполостным и внутрибрюшинным введением КЦП: ДТ 0,5 - ДК 0,5 - ЦФ 10,0 мг, увеличение продолжительности жизни крыс 150%;

- в третьей группе средний объем опухолей уменьшается быстро, у мышей выявляют метастазы, долечивают внутриполостным и внутрибрюшинным введением КЦП: ДТ 0,05 - ДК 0,05 - ЦФ 1,0 мг, увеличение продолжительности жизни крыс 200%;

- в четвертой группе средний объем опухолей, с первого дня лечения уменьшается и, наконец, их признаки не проявляются в течение 3 месяцев,

Таким образом, в соответствии с примером 7 определение вида терапии предпочтительной в реальном времени, предварительное, промежуточное и заключительное магнитно-резонансные сканирования опухолей и метастазов с индивидуальным заключением по результатам ФТ, преимущественное по скорости и величине нагревание тканей опухоли, содержащих КМН, удаление некротических масс и промывание полости, образовавшейся на месте опухоли, долечивание внутриполостным и внутрибрюшинным введением КЦП, ДТ 0,5 - ДК 0,5 - ЦФ 5,0 мг, приводит к быстрому уменьшению объема инфильтративных опухолей, их полной регрессии и увеличению продолжительности жизни крыс. При спонтанных инфильтративных опухолях молочных желез крыс предпочтительна ФТ с внутриопухолевым введением КМН: ДФ 1500 мг, МФ 0,02, МК 0,2 мг в 4000 мкл воды при +47-+48°C 8×30 мин с интервалом от 3 часов до 3 суток с внутриполостным и внутрибрюшинным введением КЦП: ДТ 0,5 - ДК 0,5 - ЦФ 5,0 мг, при этом получают максимальный терапевтический эффект (Таблица 7).

Приведенные экспериментальные результаты: примеры 1-7, таблицы 1-7 и фиг. 4 (а, б, в); 5 (а, б); 6; 7 (а, б, в, г) подтверждают высокий противоопухолевый эффект заявленного способа, включающего регионарное введение КМН, содержащих ЦФ, при одновременном нагреве тела до 38°C с преимущественным по скорости и величине нагревом опухоли до +45-+48°C, удалением содержимого опухоли и промыванием образовавшейся полости от продуктов некроза. Долечивание внутриполостным и внутрибрюшинным введением КЦП: ДТ 0,05 - ДК 0,05 - ЦФ 1,0 мг, приводит к быстрому уменьшению объема инфильтративных опухолей, их полной регрессии и увеличению продолжительности жизни мышей.

Заявленный способ иллюстрируется таблицами: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7.

Таблица 1

Противоопухолевый эффект заявленного способа на подкожную форму лимфолейкоза Р388 у самок мышей BDF₁, в зависимости от вида и числа терапевтических процедур, выраженный в полной регрессии опухолей и увеличении средней продолжительности жизни (УПЖ) мышей

Таблица 2.

Противоопухолевый эффект заявленного способа на подкожную форму лимфолейкоза Р388 у самок мышей BDF1, в зависимости от вида и числа терапевтических процедур, выраженный в полной регрессии опухолей и УПЖ мышей.

Таблица 3.

Противоопухолевый эффект заявленного способа на подкожную форму карциномы Эрлиха у самок мышей BDF1, в зависимости от вида и числа терапевтических процедур, выраженный в полной регрессии опухолей и УПЖ мышей.

Таблица 4.

Противоопухолевый эффект заявленного способа на подкожную форму карциномы легких Льюис у самок мышей C57Bl/6j, в зависимости от вида и числа терапевтических процедур, выраженный в полной регрессии опухолей и УПЖ мышей.

Таблица 5.

Противоопухолевый эффект заявленного способа на подкожную форму аденокарциномы молочной железы Са 755 у самок мышей C57Bl/6j в зависимости от вида и числа терапевтических процедур, выраженный в полной регрессии опухолей и УПЖ мышей.

Таблица 6

Противоопухолевый эффект заявленного способа на меланому В 16 у самок мышей C57Bl/6j в зависимости от вида и числа терапевтических процедур, выраженный в полной регрессии опухолей и УПЖ мышей.

Таблица 7

Противоопухолевый эффект заявленного способа на подкожную форму спонтанной аденокарциномы молочных желез у самок крыс Вистар в зависимости от вида терапевтических процедур, выраженный в полной регрессии опухолей и УПЖ крыс.

Заявленный способ иллюстрируется фигурами 1 (_{1, 2, -3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10}) и 1′ (а, b, с, d, е, f); 2, 3, 4 (а, б, в); 5 (а, б); 6, 7, 8, 9, 10, 11 (а, б), 12 (а, б), 13 (а, б), 14 (а, б, в); 15.

Фиг. 1 (_{1, 2, -3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10}). Контрастный магнитно-резонансный томографический (КМ-РТ) мониторинг онкогенеза трубчатой формы аденокарциномы молочной железы Ca 755, имплантированной под кожу правой подмышечной области самки мыши C57Bl/6j: (₁) имплантационный канал (стрелка) через 4-24 часа после имплантации опухоли; (₂) негатив; (₃) через 24-48 часов увеличиваются размеры трансплантационного канала и проявляется сеть ветвящихся боковых канальцев; (₄) негатив; (₅) через 48-96 час увеличиваются канальцы, границы инвазии опухолевых клеток в здоровые ткани проявляются в виде вуали, рост крупных канальцев, их утолщение и слияние направлены в основном в сторону соска; (₆) негатив; (_7,) через 96-192 час увеличивается объем сети канальцев и они сливаются в узелки, которые превращаются в крупные узлы; (₈) негатив; (₉) через 192-384 час наблюдается слияние отдельных крупных узлов и канальцев в плотные бугристые образования, которые сливаются с образованием солидной опухоли, инвазия опухолевых клеток в здоровые ткани, сосуды лимфатической и кровеносной системы и рост коллатеральных сосудов в районах пролиферации при этом увеличиваются; (₁₀) негатив. Фиг. 1′ (а, b, с, d, е, f). Контрастный магнитно-резонансный томографический (КМ-РТ) мониторинг онкогенеза дольковой формы аденокарциномы молочной железы Ca 755, имплантированной под кожу правой подмышечной области самки мыши C57Bl/6J: (а) имплантационный канал (стрелка) через 4-24 часа после имплантации опухоли; (b) через 24-48 часов увеличиваются размеры канала; (с) через 48-96 час увеличивается опухоль, проявляются границы инвазии опухолевых клеток в здоровые ткани в виде отдельных выростов (тонкие стрелки); (d) через 96-192 час увеличивается объем опухоли, проявляются инвазии в здоровые ткани (тонкие стрелки); (е) через 192-384 часа наблюдается увеличение объема солидной опухоли, видны многочисленные инвазии опухоли в здоровые ткани (тонкие стрелки); (f) частичный некроз опухоли и инвазия опухолевых клеток в здоровые ткани (тонкие стрелки). Фиг. 2. Крыса Вистар весом 450 г с подкожной формой спонтанной аденокарциномы молочных желез, наркоз: золетил 100, 10 мг/кг, (Zoletil 100, Virbac), для определения ТП электронно-сенсорным сканированием измеряют содержание КМН в опухоли и в органах РЭС, направления сканирования (стрелки). Фиг. 3. Крыса Вистар весом 350 г с подкожной формой спонтанной аденокарциномы молочных желез: внутривенный наркоз, "золетил 100", 20 мг/кг; для определения ТП электронно-сенсорным сканированием измеряют содержание КМН в опухоли и в органах РЭС, направления сканирования (стрелки). Фиг. 4 (а, б, в), (а, б, в) MP томограммы тела мыши с аденокарциномой молочной железы Ca 755: (а) опухолевые ткани до процедур ФТ (между стрелками); (б) опухолевые ткани после первой процедуры ФТ (между стрелками); (в) опухолевые ткани после третьей процедуры ФТ (между стрелками). Фиг. 5 (а, б), (а, б) MP томограммы участка тела мыши с аденокарциномой молочной железы Ca 755 в процессе ФТ. (а) опухолевые ткани после четвертой процедуры ФТ (между стрелками); (б) опухолевые ткани после шестой процедуры ФТ (между стрелками). Фиг. 6. Самка мыши BDF₁ с лимфолейкозом Р388 через 3 недели после получения 8 процедур ФТ, в результате которых первичная опухоль не прощупывается, метастазы в лимфатические узлы не выявляются. После отслоения корочки на месте расположения первичной опухоли образуется алопеция, которая постепенно зарастает седой шерстью. Фиг. 7 (а, б, в, г). Микрофотографии (увеличение ×200) тканей аденокарциномы молочной железы Ca 755: (а) опухолевые клетки эндоцитировавшие агрегаты КМН (агрегаты наночастиц окрашивают Берлинской лазурью в синий цвет); (б) агрегаты феррита концентрируют и фиксируют НПМП в тканях опухоли; (в) через 3 дня после первой процедуры ФТ наблюдают частичное замещение опухолевых тканей элементами соединительной ткани (светлые участки); (г) через 6 дней после шестой процедуры ФТ наблюдают замещение опухолевых тканей элементами соединительной ткани (светлые участки). Фиг. 8. Цифровое фото-изображение патолого-анатомических изменений в организме самки мыши C57Bl/6J на 15 день после имплантации аденокарциномы молочной железы Ca 755: (а) первичная бугристая опухоль Ca 755 объемом более 500 мм³ (между четырьмя длинными черными стрелками); (б) переполнение мочевого пузыря и почек, вызванное метастазами мочевого пузыря, перекрывающими уретру, (короткие белые стрелки); (в) метастазы сторожевых лимфатических узлов правого паха (короткая толстая белая стрелка), (г) метастазы в легких (три коротких черных стрелки); (д) селезенка увеличена (длинная белая стрелка); (ж) кишечник переполнен и вздут из-за перекрытия анального отверстия метастазами (короткие белые стрелки). Фиг. 9. Калибровочный график. Фиг. 10. Изображение мыши C57Bl/6j, у которой через 90 дней после завершения ФТ пальпированием выявляют вторичную опухоль карциномы легких Льюис, развивающуюся из метастазов лимфатических узлов шеи (стрелка). Фиг. 11 (а, б). КМ-РТИ самки мыши C57Bl/6J с карциномой легких Льюис объемом более 600 мм, усиливают МРТ-НКН при Т₂ взвешенном градиент-эхо (500/15) продольном сканировании тела мыши: (а) через 1 час после внутривенного введения МРТ-НКН (длинная стрелка и толстые стрелки указывают на пролиферирующие участки опухоли), распространение опухоли по внутренним органам, макро-метастазы (короткие стрелки); (б) негатив. Фиг. 12 (а, б). КМ-РТИ самки мыши C57Bl/6J с аденокарциномой молочной железы Ca 755 объемом более 800 мм³, усиливают внутривенным введением негативного МРТ контрастного препарата с дополнительным введением магневиста, который увеличивает яркость КМ-РТИ при Т₂ взвешенном градиент-эхо (500/15) продольном сканировании тела мыши: (а) через 6 мин после внутривенного введения препарата видна структура первичной опухоли и область инвазии опухоли через грудную клетку в печень (большая стрелка), метастазы (маленькая стрелка); (б) негатив. Фиг. 13 (а, б). КМ-РТИ самки мыши C57Bl/6J с аденокарциномой молочной железы Ca 755 объемом более 500 мм³, усиливают внутривенным введением МРТ-НКН с дополнительным введением магневиста, который увеличивает яркость КМ-РТИ при Т₂ взвешенном градиент-эхо (500/15) продольном сканировании тела мыши: (а) КМ-РТ изображение первичной опухоли (короткая стрелка); области пролиферации, распространение опухоли по лимфатическим сосудам, неоваскуляризация, макро-метастазы в здоровых тканях (длинные стрелки); (б) негатив. Фиг. 14 (а, б, в). КМ-РТИ получают продольным сканированием тела мыши с аденокарциномой молочной железы Ca 755 (диаметр опухоли >500 мм³), через 20 часов после внутривенного введения МРТ-НКН (цитратферрит) дополнительно вводят магневист, который увеличивает яркость КМ-РТИ: (а) инвазия опухоли в легкое (длинная стрелка), метастазы в почках и других внутренних органах (короткие стрелки); (б) негатив; (в) инвазия жгута, состоящего из скрученных патогенных канальцев, в здоровые ткани, головка жгута разрушает стенку капсулы и через образовавшееся отверстие (длинные черные стрелки) проникает в здоровые ткани, жгут распускается, канальцы растут во все стороны (длинные белые стрелки), сливаются, образуют метастатические узелки в здоровых тканях (короткие стрелки). Фиг. 15. Самка мыши C57Bl/6j после 8 процедур ФТ аденокарциномы молочной железы Ca 755: первичная опухоль не прощупывается, метастазы в лимфатические узлы не выявляются, после отслоения накожной корочки образуется алопеция, постепенно зарастающая седой шерстью (стрелка).

Технический результат

Заявленный способ является новым и эффективным при лечении злокачественных опухолей в эксперименте и включает:

- раннее выявление опухолей, метастазов и границ инвазии опухолевых клеток комбинациями МРТ негативных контрастных нанопрепаратов общей формулы (1) с МРТ позитивными препаратами, например, магневистом, которые увеличивают яркость КМ-РТИ в заявленных условиях;

- сочетанное противоопухолевое действие КМН, содержащей соединения общей формулы (2) и цитостатические средства, (феррит от 26 до 150 мг; АО от 0,2 до 2,0 мг, МО от 0,05 до 0,2 мг, СЛ или МФ от 0,001 до 0,002 мг, ЦП от 0,01 до 0,04 мг, МК от 0,005 до 0,02 мг) с долечиванием инфильтративных опухолей комбинациями цитостатических препаратов, дакарбазин-доцетаксел-циклофосфан (ДК-ДТ-ЦФ);

- понижение давления в опухоли перед введениями КМН или антисептика, путем отсасывания ее содержимого;

- определение содержания КМН в опухоли и внутренних органах в реальном времени перед каждой процедурой нагревания;

- определение терапии предпочтительной для данного животного в режиме реального времени по формуле (3),

где: - КМН_{опухоли} - отклик КМН ye опухоли;

- _суммаКМН_{органов} - суммарный отклик КМН ye _{органов};

- ТП - терапия предпочтительная для данного животного в режиме реального времени, (при ТП≥10 - ферримагнитно-термохимиотерапия при ТП≤1 - другие виды терапии);

- оценку полноты удаления КМН после каждого сеанса ФТ из образовавшейся на месте опухоли полости, оперативное определение размеров оставшейся части опухоли, содержания КМН в опухоли и в печени и индивидуальное планирование очередного сеанса ФТ;

- индивидуальный контроль концентрации КМН в опухоли, позволяющий оперативно оценивать результаты ФТ, планировать объем последующих сеансов ФТ и усилить терапевтический эффект, проявляющийся в быстром уменьшении объема злокачественных опухолей при отсутствии токсических проявлений и сокращении числа терапевтических процедур.

Применение заявленного способа приводит к полной регрессии опухолей у 55% мышей с увеличением продолжительности их жизни до 350% и обеспечивает безопасность млекопитающих.

Предлагаемый способ иллюстрируется примерами 1-7, таблицами 1-7 и фигурами 1, 1′-15.

Источники информации

1. Брусенцов Н.А., Брусенцова Т.Н., Куприянов Д.А., Пирогов Ю.А., Дубина А.И., Шумских М.Н., Способ диагностики онкологических заболеваний в эксперименте, Патент РФ №2343828, 20.01. (2009) Бюл. Изобр. 2.

2. Brusentsov N.A., Brusentsova T.N., et al. Magnetohydrodynamic thermochemotherapy and MRI of mouse tumors. J. Magn. Magn. Mat. 311, 176-180 (2007).

3. H.A. Брусенцов, Т.Н. Брусенцова, Е.Ю. Филинова, Ю.А. Пирогов, Д.А. Куприянов, А.И. Дубина и др., Магнитогидродинамическая термохимиотерапия злокачественных опухолей нанопрепаратами с магнитно-резонансным мониторингом, Хим.-фарм. Ж. 42 (4), 3-10 (2008).

4. Н.А. Брусенцов, Т.Н. Брусенцова, Е.Ю. Филинова, Л.И. Шумаков. Способ термохимиотерапии опухолей в эксперименте. Патент РФ №2348436, 10.03. (2009) Бюл. Изобр. №7.

5. Брусенцов Н.А., Брусенцова Т.Н., Шумаков Л.И., Барышников А.Ю. Способ индукционной гипертермии плотных опухолей в эксперименте. Патент РФ №2291677, 30.06. (2004) Бюл. Изобр. №2.

6. Н.А. Брусенцов, А.Ю. Барышников, Т.Н. Брусенцова и др., Способ индукционной гипертермии в эксперименте. Патент РФ №2203111, 27.04. (2003) Бюл. Изобр. №12.

7. N.A. Brusentsov, L.V. Nikitin, T.N. Brusentsova, et al. Magnetic fluid hyperthermia of the mouse experimental tumors. J. Mag. Magn. Mat. 252, 3, 378-380 (2002).

8. N.A. Brusentsov, T.N. Brusentsova, E.Yu. Filinova, et al. Magnetic Fluid Thermochemotherapy of the Murine Tumor. J. Mag. Magn. Mat. 253, 450-454 (2005).

9. Н.А. Брусенцов. От сарколизина к алкерану. Ж. Всес. хим. о-ва им. Д.И. Менделеева, 36, N3, 353-355 (1991).

10. Н.А. Брусенцов, Я.В. Добрынин, Т.Г. Николаева и др. Синтез и изучение цитотоксической и противоопухолевой активности нуклеозид-диальдегидов, Хим. -фарм. Ж. 29(5), 22-27 (1995).

11. Противоопухолевая химиотерапия, справочник, под ред. Н.И. Переводчиковой, Москва (1996).

12. Л.Ф. Ларионов. Химиотерапия злокачественных опухолей, Мед. лит. М. 1962.

13. T.N. Brusentsova, N.A. Brusentsov, V.D. Kuznetsov, et al. Synthesis and investigation of magnetic properties of Gd-substituted Mn-Zn ferrite nanoparticles as a potential low-Tc agent for Magnetic Fluid Hyperthermia. J. Mag. Magn. Mat. 253, 298-302 (2005).

14. Brusentsova T.N., Kuznetsov V.D., Synthesis and investigation of magnetic properties of substituted ferrite nanoparticles of spinel system Mn_1-XZn_X[Fe_2-YL_Y]O₄. J. Magn. Magn. Mater. 311, 22-25 (2007).

15. Верещагина Н.Ю., Брусенцова Т.Н., Кузнецов Д.В., Брусенцов Н.А., Синтез и изучение физико-химических свойств нанокристаллических ферритов. Сборник тезисов докладов участников "Второго Международного форума по нанотехнологиям" 6-8 октября 2009. 11. Химические технологии наноматериалов, с. 14-16.

16. Гуляев М.В., Пирогов Ю.А., Брусенцова Т.Н., Брусенцов Н.А., Синтез декстранферрита и раннее магнитно-резонансное томографическое обнаружение опухоли, капсулы и сосудов, питающих опухоль, в эксперименте in vivo, Сборник тезисов докладов участников Второго Международного форума по нанотехнологиям 6-8 октября 2009. 16. Нанотехнологии в медицине. Онкология и кардиология, с. 9-11.

17. P.I. Nikitin, P.M. Vetoshko, European Patent Application no. EP 1262766 (07.03.2001), Patent of Russian Federation no. RU 2166751 (09.03.2000).

18. M.P. Nikitin, P.M. Vetoshko, N.A. Brusentsov, P.I. Nikitin, Highly sensitive room-temperature method of non-invasive in vivo detection of magnetic nanoparticles, J. Magn. Magn. Mat. 321, 1658-1661 (2009).

19. Брусенцов H.A., Никитин П.И., Пирогов Ю.А., Брусенцова Т.Н., Никитин М.П., Юрьев М.В., Куприянов Д.А., Дубина А.И., Учеваткин А.А., Иванов А.В., СПОСОБ НЕИНВАЗИВНОГО КАЧЕСТВЕННОГО И КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ МАГНИТОУПРАВЛЯЕМЫХ НАНОПРЕПАРАТОВ И ОЦЕНКИ ИХ ФУНКЦИЙ В РЕАЛЬНОМ ВРЕМЕНИ У ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ЖИВОТНЫХ, Патент РФ 2427390, от 08.06.2009, бюлл. изобр. 24, 2011.

20. О.Ю. Реброва, Статистический анализ медицинских данных, Медиа Сфера, Москва (2002).

Изобретение относится к экспериментальной медицине и может быть использовано при ранней диагностике и лечении опухолей, индуцированных в эксперименте. Для раннего МРТ выявления опухолей, инвазий и метастазов животному вводят комбинации МРТ-негативных контрастных нанопрепаратов с позитивными МРТ контрастными препаратами. Диагностику проводят путем контрастной магнитно-резонансной томографии (КМ-РТ). Ферримагнитно-термохимиотерапию (ФТ) опухолей различной локализации проводят активированными комбинациями магнитоуправляемых нанопрепаратов. Долечивание животных с метастазами проводят комбинациями, включающими дакарбазин, доцетаксел и циклофосфан. Способ позволяет увеличить среднюю продолжительность жизни до 340% с полной регрессией опухолей у 55% животных. 6 пр., 7 табл., 15 ил.

Способ ферримагнитно-термохимиотерапии (ФТ) злокачественных опухолей в эксперименте, включающий введение комбинаций магнитоуправляемых нанопрепаратов (КМН), мониторинг результатов лечения и определение показаний к ФТ в режиме реального времени, отличающийся тем, что животным внутривенно вводят магнитно-резонансные томографические негативные контрастные нанопрепараты общей формулы

где 0<y<1, 0<х<1, 0<z<1, L³⁺ - лантаноид в комбинации с магневистом, которые визуализируют контрастные магнитно-резонансные томографические изображения (КМРТИ), отражающие развитие опухолей, инвазий и метастазов в динамике;
- содержание КМН в опухоли, печени, селезенке, почках и легких определяют электронно-сенсорным сканированием (ЭС) тела экспериментальных животных;
- показаниями к проведению ФТ для данного животного в режиме реального времени служат результаты определения терапии предпочтительной (ТП), которую определяют из отношения содержания КМН в опухоли к сумме КМН, содержащихся в печени, селезенке, почках и легких, по формуле

где
- ТП_{терапия предпочтительная} - терапия, предпочтительная для данного животного в режиме реального времени;
- КМН_{опухоли} - отклик КМН уе опухоли;
- _суммаКМН_{органов} - суммарный отклик КМН уе _{органов};
- при ТП≥10 проводят ферримагнитную термохимиотерапию;
- содержимое опухоли отсасывают;
- по периметру опухоли вводят комбинации, включающие по крайней мере два из перечисленных цитостатических препаратов, аденокс, метокс, мелфалан, митоксантрон, цисплатин и бис(L-малато) IV оксованадий с магнитоуправляемыми нанопрепаратами (КМН) общей формулы

где 0<y<1, 0<х<1, 0<z<1, L³⁺ - лантаноид, и нагревают перемагничиванием в переменном магнитном поле 30 минут при температуре +45 - +48°С;
- после завершения нагрева содержимое опухоли удаляют, оставшуюся часть опухоли, инвазии и метастазы определяют контрастным MP томографическим сканированием;
- перед проведением очередной процедуры ФТ определяют содержание КМН в опухоли, печени, почках и селезенке;
- долечивание животных с инфильтративными опухолями проводят композициями, включающими дакарбазин, доцетаксел и циклофосфан.