СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ОБЩЕЙ ВЫЖИВАЕМОСТИ БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ ЛИМФОЛЕЙКОЗОМ В СТАДИИ А Российский патент 2015 года по МПК G01N33/50 

Настоящее изобретение относится к медицине, в частности к онкогематологии, и может быть использовано для прогнозирования общей выживаемости больных хроническим лимфолейкозом.

Хронический лимфолейкоз (ХЛЛ) - лимфопролиферативное заболевание, особенностью которого является непосредственное вовлечение в опухолевый процесс клеток иммунной системы. Заболевание характеризуется гетерогенным клиническим течением, неодинаковым ответом на терапию и разной продолжительностью жизни больных [1].

В последние годы в лечении ХЛЛ достигнуты значительные успехи, что связано с углубленным изучением биологии опухолевых клеток, расшифровкой патогенеза и открытием противоопухолевой активности новых лекарственных средств (аналогов пурина, моноклональных антител, иммуномодуляторов). При применении иммунохимиотерапии значительно увеличились частота и длительность полных ремиссий, а также продолжительность жизни больных ХЛЛ [2]. Следует отметить, что большинство используемых в настоящее время факторов и систем, прогнозирующих течение ХЛЛ, созданы в эру традиционной терапии, их прогностическое значение на сегодняшний день в условиях применения новых программ терапии нуждается в пересмотре. Вследствие этого стратификация больных ХЛЛ в зависимости от факторов прогноза в момент постановки диагноза в стадии А требует совершенствования, так как необходимо более точно идентифицировать больных на группы высокого и низкого риска и проводить выбор адекватного современного лечения с целью повышения его клинической эффективности у каждого конкретного больного. Известно, что среди больных ХЛЛ самую многочисленную группу составляют пациенты с ранней стадией заболевания (А стадия по Binet), которая встречается у 72% пациентов с впервые выявленным ХЛЛ. В связи с этим, прогнозирование продолжительности жизни больных ХЛЛ в момент постановки диагноза в стадии А на современном этапе представляется актуальным.

В последние годы большое значение в патогенезе ХЛЛ придается роли иммунных нарушений. На сегодняшний день еще не до конца определены все процессы, которые обеспечивают «ускользание» опухоли от иммунологического надзора. Предполагается, что одной из основных причин роста малигнизированных клеток при ХЛЛ является неэффективность противоопухолевых иммунологических механизмов. Первой линией защиты организма в случае появления трансформированных клеток, способных к неконтролируемой пролиферации, считаются натуральные киллерные клетки (NK-клетки). Основное свойство NK-клеток, обусловливающее их название, заключается в их способности к лизису клеток-мишеней без предварительной сенсибилизации и развития иммунного ответа. Нарушение их равновесного содержания и функций приводит к существенным изменениям иммунных реакций, что способствует распространению опухолевого клона [3, 4].

Ранее нами было установлено, что у больных ХЛЛ в момент постановки диагноза в зависимости от содержания NK-клеток в периферической крови можно определить быстропрогрессирующий или медленнопрогрессирующий варианты заболевания (RU 2490639 C1, G01N 33/50, 20.08.2013). Однако в ходе дальнейших исследований с помощью многофакторного анализа нами выявлено, что количество NK-клеток, к сожалению, не является независимым фактором прогноза общей выживаемости пациентов. Поскольку подсчет количества NK-клеток в целом в периферической крови не позволяет точно в 100% случаев предсказать продолжительность жизни больных ХЛЛ, представляется целесообразным для улучшения прогноза течения заболевания определять показатель соотношения NK-клеток к общему числу опухолевых элементов, так как данное соотношение в большей степени отражает патогенетическую связь прогрессирования опухолевого процесса с натуральными киллерными клетками.

В качестве прототипа предлагаемого изобретения использовали способ прогнозирования общей выживаемости больных ХЛЛ путем анализа полиморфизма -590С/Т гена интерлейкина-4 (IL-4), -174G/C гена интерлейкина-6 (IL-6) и выявления наличия цитопенических осложнений. Указано, что при выявлении аллеля -590Т IL-4, аллеля -174G IL-6 и наличия цитопенических осложнений прогнозируют снижение общей выживаемости больных ХЛЛ (RU 2498313 C1, G01N 33/68, 10.11.2013). Несмотря на определенную степень информативности этого способа, имеется ряд недостатков:

- в описании патента нет сведений о доказательстве точности, специфичности и чувствительности данного способа;

- способ не обладает превентивностью оценки на ранних стадиях заболевания - в стадии А;

- выполнение методики характеризуется значительной трудоемкостью;

- цитопенические осложнения у отдельных больных могут быть не связаны с опухолевым ростом, что снижает специфичность способа.

Вышеперечисленные недостатки могут быть устранены в предлагаемом способе.

Задача, на решение которой направлено заявляемое изобретение, заключается в создании информативного способа прогнозирования общей выживаемости больных ХЛЛ в стадии А.

Поставленная задача решается за счет того, что в момент постановки диагноза определяют показатель соотношения абсолютного содержания NK-клеток к абсолютному содержанию клеток ХЛЛ. При значении показателя соотношения NK-клетки/клетки ХЛЛ равном 0,07 и более прогнозируют благоприятный (выживаемость 5 лет и более), а при значении показателя менее 0,07 - неблагоприятный прогноз жизни больного (выживаемость менее 5 лет).

Технический результат, достигаемый при осуществлении изобретения: повышение точности прогнозирования общей выживаемости больных ХЛЛ, получение дополнительного критерия определения продолжительности жизни пациентов.

Новизна и изобретательский уровень заключаются в том, что из уровня техники не известна возможность прогноза продолжительности жизни больных ХЛЛ в стадии А по показателю соотношения NK-клетки/клетки ХЛЛ.

Предлагаемый способ осуществляется следующим образом. У больных ХЛЛ в стадии А в момент первичного обследования проводят забор периферической венозной крови в количестве 5 мл. Выделение лимфоцитов из крови осуществляют стандартным методом центрифугирования в градиенте плотности фиколл-верографина. На проточном цитофлюориметре с использованием моноклональных антител в лимфоцитарном гейте определяют абсолютное содержание CD3^- CD16/CD56⁺ NK-клеток и абсолютное содержание клеток ХЛЛ (CD19⁺/CD5⁺/CD23⁺/каппа-цепьb+ или СD19⁺/СD5⁺/СD23⁺/лямбда-цепь+). Далее рассчитывают показатель соотношения абсолютного содержания NK-клеток к абсолютному содержанию клеток ХЛЛ (NK-клетки/клетки ХЛЛ) и прогнозируют общую выживаемость больных ХЛЛ.

Предлагаемый способ был разработан на основе результатов исследования группы больных ХЛЛ в стадии А. В группу обследованных вошли 50 пациентов, наблюдавшихся в гематологической клинике ФГБУН КНИИГиПК ФМБА России. У всех больных определяли показатель соотношения абсолютного содержания NK-клеток к абсолютному содержанию клеток ХЛЛ. В качестве порогового значения показателя соотношения NK-клетки/клетки ХЛЛ использовали уровень, равный его медиане, - 0,07. Статистическую обработку полученных данных проводили с применением пакета программ STATISTICA 6.0. При анализе кривых выживаемости применяли метод Каплана-Мейера. Влияние факторов на общую выживаемость больных ХЛЛ изучали с применением регрессионной модели Кокса.

В табл. 1 приведены данные, которые получены в результате исследования, в табл. 2 представлен расчет точности, чувствительности и специфичности предлагаемого способа.

Изобретение поясняется фиг. 1, на которой представлены кривые общей выживаемости больных ХЛЛ в стадии А в зависимости от показателя соотношения NK-клетки/клетки ХЛЛ. У пациентов с показателем соотношения NK-клетки/клетки ХЛЛ равным 0,07 и более медиана общей выживаемости не достигнута за период наблюдения, тогда как у больных с показателем соотношения менее 0,07 медиана общей выживаемости равнялась 49 месяцам (р=0,014).

С помощью однофакторного анализа (регрессионная модель Кокса) общей выживаемости больных ХЛЛ были определены факторы, имеющие неблагоприятное прогностическое значение на ранней стадии заболевания. Установлено, что мужской пол (р=0,024), общее число лимфоцитов более 20×10⁹/л (р=0,015) и показатель соотношения NK-клетки/клетки ХЛЛ менее 0,07 (р=0,010) ассоциируются с короткой продолжительностью жизни больных. Поскольку прослеживается взаимосвязь факторов, влияющих на общую выживаемость больных ХЛЛ, был проведен многофакторный анализ, который показал, что показатель соотношения NK-клетки/клетки ХЛЛ является независимым прогностическим критерием продолжительности жизни больных ХЛЛ (р=0,021).

Для иллюстрации приводим клинические примеры.

Клинический пример 1. Больной Ш., 59 лет. В сентябре 2008 г. установлен диагноз: хронический лимфолейкоз, А стадия. На момент постановки диагноза больной предъявлял жалобы на слабость, быструю утомляемость. При обследовании: общее состояние удовлетворительное. Периферические лимфатические узлы, печень и селезенка не увеличены. В общем анализе крови: эритроциты - 4,81×10¹²/л, гемоглобин - 146 г/л, лейкоциты - 21,3×10⁹/л, зрелые лимфоциты - 63% (абсолютное количество - 13,4×10⁹/л), тромбоциты - 243×10⁹/л. При исследовании миелограммы инфильтрация костного мозга зрелыми лимфоцитами составила 47%. Иммунофенотип лимфоидных элементов: CD19+, CD5+, CD23+, лямбда-цепь+, CD10-, CD20+, CD79b+/-, FMC7-.

В момент первичного обследования по заявленному способу определено абсолютное содержание NK-клеток и клеток ХЛЛ в периферической крови и вычислен показатель соотношения NK-клетки/клетки ХЛЛ, который составил 0,11, что выше заявляемого уровня (0,07). На основании полученных данных у представленного пациента прогноз течения заболевания был расценен как благоприятный. Данный факт был подтвержден результатами диспансерного наблюдения. Последний осмотр пациента состоялся в апреле 2014 г. Общая выживаемость составила 67 месяцев. Таким образом, способ прогнозирования общей выживаемости больных ХЛЛ в стадии А по предложенному методу подтвердился.

Клинический пример 2. Больной Л., 55 лет. Обратился к врачу-гематологу в августе 2009 г. с жалобами на слабость. При обследовании: общее состояние удовлетворительное. Размеры периферических лимфатических узлов, печени и селезенки были в норме. В общем анализе крови: эритроциты - 4,40×10¹²/л, гемоглобин - 138 г/л, лейкоциты - 22,3×10⁹/л, лимфоциты - 63% (абсолютное количество - 14,0×10⁹/л), тромбоциты - 235×10⁹/л. По данным миелограммы инфильтрация костного мозга лимфоидными элементами составила 50%. Иммунофенотип лимфоидных элементов: CD19+, CD5+, CD23+, каппа-цепь+, CD10-, CD20+, CD79b+/-, FMC7-. На основании клинико-лабораторных данных был поставлен диагноз хронического лимфолейкоза, А стадия.

В момент первичного обследования по заявленному способу определено абсолютное содержание NK-клеток и клеток ХЛЛ в периферической крови, вычислен показатель соотношения NK-клетки/клетки ХЛЛ, который составил 0,04, что ниже заявляемого уровня (0,07). Прогноз заболевания у данного больного определен как неблагоприятный. Пациент умер в августе 2011 г. на фоне рецидива заболевания. Общая выживаемость составила 24 месяца. Таким образом, способ прогнозирования общей выживаемости больных ХЛЛ в стадии А по предложенному методу подтвердился.

Преимущества способа:

1. Патогенетический подход к оценке характера развития и прогноза заболевания.

2. Возможность применения на ранней стадии заболевания - стадии А. Прогнозирование продолжительности жизни больных ХЛЛ на ранней стадии заболевания дает возможность повысить точность стратификации пациентов на группы риска и оптимизировать дифференциальный подход к их терапии.

3. Предлагаемый способ имеет точность, равную 96,0%, высокую чувствительность - 96,3% и специфичность - 95,7%.

4. Заявляемый способ не требует больших временных затрат и осуществляется в течение 1 часа.

5. Представленный способ отличается простотой интерпретации результатов обследования.

Таким образом, предложенный высокочувствительный информативный способ позволяет своевременно прогнозировать общую выживаемость больных ХЛЛ на ранней стадии опухолевого процесса, оптимизировать терапию и увеличить продолжительность и качество жизни данной категории пациентов.

Литература

1. Клиническая онкогематология: руководство для врачей / под ред. М.А. Волковой. - 2-е изд., перераб. и доп. - М.: Медицина, 2007. - 1120 с.

2. Novel and emerging drugs for chronic lymphocytic leukemia / S. Isfort, P. Cramer, M. Hallek // Curr Cancer Drug Targets. - 2012. - Vol. 12, №5. - P. 471-483.

3. Абакушина, E.B. Основные свойства и функции NK-клеток человека / Е.В. Абакушина, Е.Г. Кузьмина, Е.И. Коваленко // Иммунология. - 2012. - Т. 33, №4. - С. 220-224.

4. Human natural killer cells in health and disease / E. Shereck, P. Satwani, E. Morris, M.S. Cairo // Pediatr Blood Cancer. - 2007. - Vol. 49, №5. - P. 615-623.

Изобретение относится к медицине, в частности к онкогематологии. Предложен способ прогнозирования общей выживаемости больных хроническим лимфолейкозом в стадии A, включающий определение в момент постановки диагноза показателя соотношения абсолютного содержания NK-клеток к абсолютному содержанию клеток ХЛЛ, где при значении показателя соотношения NK-клетки/клетки ХЛЛ равном 0,07 и более прогнозируют благоприятный (выживаемость 5 лет и более), а при значении показателя менее 0,07 - неблагоприятный прогноз жизни больного (выживаемость менее 5 лет). Техническим результатом изобретения является повышение точности прогнозирования общей выживаемости больных ХЛЛ, получение дополнительного критерия определения продолжительности жизни больных. 1 ил., 2 табл., 2 пр.

Способ прогнозирования общей выживаемости больных хроническим лимфолейкозом в стадии A, включающий определение в момент постановки диагноза показателя соотношения абсолютного содержания NK-клеток к абсолютному содержанию клеток ХЛЛ, отличающийся тем, что при значении показателя соотношения NK-клетки/клетки ХЛЛ равном 0,07 и более прогнозируют благоприятный (выживаемость 5 лет и более), а при значении показателя менее 0,07 - неблагоприятный прогноз жизни больного (выживаемость менее 5 лет).