ШТАММ Streptococcus salivarius ВКПМ В-11174, ПОЛУЧЕННЫЙ НА ДОСТУПНЫХ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕДАХ Российский патент 2015 года по МПК C12N1/20 A23C9/127 A61K35/74 A23L1/29 C12R1/46 

Изобретение относится к биотехнологии и молочной промышленности и представляет собой новый штамм мезофильного стрептококка, предназначенный для производства кисломолочных продуктов и бактериальных препаратов.

Известен штамм Lactobacillus salivarius CNCM I 1794, обладающий сильным иммуномодулирующим эффектом, а также штаммы Lactobacillus salivarius АН102, АН103, АН105, АН109 или АН110, которые обладают свойствами пробиотика, предназначены для приготовления пробиотического препарата, используемого, в частности, для применения в процедурах иммунизации и вакцинации.

Недостатком данных штаммов является низкая антибиотическая активность по отношению к условно-патогенной и патогенной микрофлоре.

Задачей заявляемого изобретения является создание кисломолочного продукта с использованием лактобактерий, на доступных питательных средах, обладающих высокой антагонистической активностью.

Задача решается путем использования питательных сред плотной и жидкой консистенции: стерильное обезжиренное молоко, гидролизованное молоко (рН 6,8-7,0), несоленая подсырная молочная сыворотка с содержанием не менее 4,0% сахара.

Местный штамм Streptococcus salivarius выделен из сырого самоквасного молока.

Идентификацию штамма проводили по методике, приведенной в книге Л.А. Банниковой (1975).

Штамм депонирован во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов и имеет номер ВКПМ В-11174.

Штамм Streptococcus salivarius ВКПМ В-11174 имеет следующие характеристики:

1. Культурально-морфологические:

- факультативный анаэроб;

- грамположительные кокки;

- диаметр 0,5-0,7 мкм;

- неподвижные;

- расположенные - цепочки клеток кокковидной формы;

- эндоспор не образуют.

На поверхности агаризованной среды (MRS агаре) через 24 часа при температуре 37°С образуют:

- колонии круглой формы;

- размер точечный;

- характер контура края - ровный;

- рельеф - выпуклый;

- поверхность - гладкая;

- цвет - белый;

- структура - однородная;

- консистенция - пастообразная.

Изучение культуральных или морфологических свойств отобранного штамма молочнокислых микроорганизмов проводили на плотной питательной среде - агаризованном молоке и MRS агаре.

2. Физиолого-биохимические:

- скорость сквашивания молока - 6 часов;

- предел кислотообразования - 119°Т;

- штамм сбраживает глюкозу, галактозу, лактозу, мальтозу, декстрин;

- растет в молоке при температуре 37-40°С;

- растет в гидролизованном молоке, содержащем NaCl (4%);

- растет в мясо-пептонном бульоне (при рН 9,2);

- растет в гидролизованном молоке с содержание желчи (20%, 30%, 40%);

- растет в молоке, содержащем метиленовый голубой (0,0005%, 0,005%);

- выдерживает нагревание в течение 30 мин при температуре 55°С.

Продукт, синтезируемый штаммом, - молочная кислота, антибиотические вещества.

3. Антибиотическая активность:

- диаметр зоны подавления роста по отношению к представителю патогенной микрофлоры Staphylococcus aureus составил 25 мм;

- диаметр зоны подавления роста по отношению к представителю условно-патогенной микрофлоры Escherichia coli составил 24 мм.

Определение антибиотической активности штамма Streptococcus salivarius ВКПМ В-11174 проводили на плотной питательной среде (МПА) методом диффузии в агар.

Способ, условия и состав сред для длительного хранения штамма - лиофилизация; хранение при температуре 4-6°С; среды: MPS; Rogosa et. al.; молоко с мелом; молоко с дрожжевым автолизатом, глюкозой, лакмусом, печеночным экстрактом и СаСО₃.

Способ, условия и состав сред для размножения штамма - при температуре 37°С; среды: MPS агар; обезжиренное молоко, несоленая подсырная молочная сыворотка с содержанием не менее 4,0% сахара.

Оптимальные условия и состав среды для ферментации - температура 37°С; среды: MPS агар, несоленая подсырная молочная сыворотка с содержанием не менее 4,0% сахара, обезжиренное коровье молоко.

Предлагаемый новый штамм Streptococcus salivarius ВКПМ В-11174, выделенный из сырого самоквасного молока, хорошо приспособлен к местным условиям, прост в культивировании и хранении, может использоваться в производстве кисломолочных продуктов, не является зоо- и фитопатогенным, не представляет опасности по другим причинам.

Пример. Приготовление кисломолочного напитка резервуарным способом с использованием бактериальной закваски, в состав которой входит предлагаемый штамм Streptococcus salivarius ВКПМ В-11174.

Для приготовления лабораторной закваски в 100 мл стерилизованного обезжиренного молока при 37°С вносят одну порцию закваски, состоящей из Streptococcus salivarius ВКПМ В-11174 и L.bulgaricus. Заквашенное молоко выдерживают при указанной температуре в течение 6-8 часов до образования сгустка.

Производственную закваску готовят путем внесения в 10 литров стерилизованного обезжиренного молока 100 мл лабораторной закваски. Заквашенное молоко выдерживают при 37°С в течение 6-8 часов до образования сгустка.

Производственная закваска характеризуется чистым, кисломолочным вкусом, однородной вязкой консистенции, титруемая кислотность закваски 85°Т, в микропрепарате цепочки кокков и единичные палочки.

Для приготовления кисломолочного напитка в подготовленное молоко вносят 3-5% производственной закваски. Процесс сквашивания проходит при 37°С в течение 6-8 часов до образования плотного сгустка. Полученный продукт перемешивают и подают на розлив.

Благодаря своим выраженным биологическим и антибиотическим свойствам (способности образовывать вязкий молочный сгусток, диаметр зоны подавления роста Staphylococcus aureus - 25 мм, Escherichia coli - 24 мм) штамм представляет производственную ценность для молочной промышленности.

Изобретение относится к биотехнологии. Штамм Streptococcus salivarius М-11, обладающий высокой антагонистической активностью, депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов под регистрационным номером ВКПМ В-11174 и может быть использован при производстве кисломолочных продуктов. Изобретение позволяет получить более вязкий молочный сгусток. 1 пр.

Штамм Streptococcus salivarius ВКПМ B-11174, используемый при производстве кисломолочных продуктов.