ШТАММ LACTOBACILLUS HELVETICUS ВКПМ В-11175, ПОЛУЧЕННЫЙ НА ДОСТУПНЫХ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕДАХ Российский патент 2016 года по МПК C12N1/20 A23C9/127 A61K35/74 A23L1/29 C12R1/225 

Изобретение относится к биотехнологии и молочной промышленности и представляет собой новый штамм мезофильной палочки, предназначенный для производства кисломолочных продуктов и бактериальных препаратов.

Известен штамм Lactobacillus helveticus L-KS, депонирован в ВКПМ под номером В-10895, а также штаммы Lactobacillus helveticus CNCM I-3504, Lactobacillus helveticus CNCM I-3505 и Lactobacillus helveticus CNCM I-3508 не обладают способностью превращать лактозу в молочную кислоту, обладают хорошей сочетаемостью с другими штаммами лактобактерий и выраженными физиолого-биохимическими свойствами.

Недостатком данных штаммов являются более низкая антибиотическая активность.

Задача заявляемого изобретения - создание кисломолочного продукта с использованием лактобактерий на доступных питательных средах, обладающих высокой биологической и антагонистической активностью.

Задача решается путем использования питательных сред плотной и жидкой консистенции: стерильное обезжиренное молоко, гидролизованное молоко (pH 6,8-7,0), несоленая подсырная молочная сыворотка с содержанием не менее 4,0% сахара.

Местный штамм Lactobacillus helveticus выделен из сырого самоквасного молока.

Идентификацию штамма проводили по методике, приведенной в книге Л.А. Банниковой (1975).

Штамм депонирован во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов и имеет номер ВКПМ В-11175.

Штамм Lactobacillus helveticus ВКПМ B-11175 имеет следующие характеристики:

1. Культурально-морфологические:

- факультативный анаэроб;

- грамположительные палочки;

- длиной 3±0,02, шириной 0,6±0,01;

- неподвижные;

- расположенные в виде длинных переплетенных цепочек крупных палочек;

- эндоспор не образуют.

На поверхности агаризованной среды (гидролизованное молоко и MRS агаре) через 24 часа при температуре 37°C образуют:

- колонии округлой формы;

- размер средний;

- характер контура края ровный;

- рельеф плосковыпуклый;

- поверхность гладкая, блестящая;

- цвет сероватый;

- структура однородная;

- консистенция вязкая.

Изучение культуральных или морфологических свойств отобранного штамма молочнокислых микроорганизмов проводили на плотной питательной среде - агаризованном молоке и MRS агаре.

2. Физиолого-биохимические:

- скорость сквашивания молока - 6 часов;

- предел кислотообразования - 311°Т;

- штамм сбраживает глюкозу, лактозу, мальтозу;

- растет при температуре 45°C-48°C;

- растет в гидролизованном молоке, содержащем 2% и 4% NaCl;

- растет в гидролизованном молоке, содержащем 20% желчи;

- штамм выдерживает нагревание при температуре 60°C в течение 90 минут.

Продукт, синтезируемый штаммом, - молочная кислота, антибиотические вещества.

3. Антибиотическая активность:

- диаметр зоны подавления роста по отношению к представителю патогенной микрофлоры Staphylococcus aureus составил 28 мм;

- диаметр зоны подавления роста по отношению к представителю условно-патогенной микрофлоры Escherichia coli составил 28 мм.

Определение антибиотической активности штамма Lactobacillus helveticus ВКПМ В-11175 проводили на плотной питательной среде (МПА) методом диффузии в агар.

Способ, условия и состав сред для длительного хранения штамма - лиофилизация; хранение при температуре 4°C; среды MPS: Rogosa et.al.; молоко с мелом; молоко с дрожжевым автолизатом, глюкозой, лакмусом, печеночным экстрактом и СаСО₃; агаризованная молочная подсырная сыворотка.

Способ, условия и состав сред для размножения штамма - при температуре 37°C; среды: MPS; обезжиренное молоко.

Оптимальные условия и состав среды для ферментации - температура 37°C; среды: несоленая подсырная молочная сыворотка с содержанием не менее 4,0% сахара; молоко сельскохозяйственных животных.

Предлагаемый новый штамм Lactobacillus helveticus ВКПМ В-11175, выделенный из сырого самоквасного молока, хорошо приспособлен к местным условиям. Прост в культивировании и хранении, обладает высокой предельной кислотностью и скоростью свертывания молока, что позволяет повысить экономическую эффективность при производстве.

Штамм проявляет высокую антагонистическую способность по отношению к условно-патогенной и патогенной микрофлоре.

Штамм Lactobacillus helveticus ВКПМ В-11175 обладает высокой биологической активностью.

Благодаря своим выраженным биологическим и антибиотическим свойствам (способности образовывать вязкий молочный сгусток, диаметр зоны подавления роста Staphylococcus aureus - 28 мм, Escherichia coli - 28 мм) штамм представляет производственную ценность для молочной промышленности.

Пример 1

Молоко коровье цельное или обезжиренное до содержания 0,5 % молочного жира пастеризуется при температуре 75°С в течение 30 минут, охлаждается до 37°С и вносится в него закваска из чистой культуры Lactobacillus helveticus В-11175 в количестве 3% от объема сквашиваемого молока.

Сквашивание молока производится в термостате при температуре 37°С в течение 6-7 часов до образования плотного сгустка без разрывов, выпадения сыворотки и пузырьков газа. Кислотность свежего готового продукта составляет 85-90°Т .

В 1 мл готовой простокваши содержится 10⁸-10¹⁰ живых клеток Lactobacillus helveticus В-11175.

Срок хранения простокваши в холодильной камере при температуре 4-6°С до 7 суток.

Пример 2

Использование штамма Lactobacillus helveticus В-11175 для получения бактерийных препаратов.

Культуру штамма 1-го или 2-го пассажа вносят в питательную среду, культивируют при температуре 38-40°C до получения биомассы лактобактерий с содержанием живых клеток не менее 10⁸ в 1 мл. К полученной биомассе добавляют защитные среды высушивания (сахарозо-желатиновая среда, обезжиренное молоко). Полученную суспензию разливают в ампулы, флаконы и другие емкости, замораживают при температуре минус 35-45°C и лиофилизируют из замороженного состояния в вакуум-сушильных аппаратах. Полученный препарат содержит не менее 10⁷ живых клеток лактобактерий. Данное содержание лактобактерий согласуется с научно-технической документацией на аналогичный препарат с лактобактериями - "Лактобактерий" - и является достаточным для использования полученного средства в качестве препарата-пробиотика.

Изобретение относится к биотехнологии. Штамм Lactobacillus helveticus депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов под регистрационным номером ВКПМ В-11175 и может быть использован для производства кисломолочных продуктов и пробиотических препаратов. Изобретение позволяет сократить сроки сквашивания молока. 2 пр.

Штамм Lactobacillus helveticus ВКПМ В-11175, используемый при производстве кисломолочных продуктов и пробиотических препаратов.